热疗对SW1990 胰腺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制

目的：探讨热疗对化疗诱导的人胰腺癌细胞株SW1990 细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其可能的作用机制。方法：分别 用不同浓度吉西他滨(0, 5, 10, 20,30 滋M)作用于SW1990 细胞不同时间(24, 48, 72 小时)及30 滋M 吉西他滨作用24h 联合热疗 43℃ 1h,观察细胞的形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT) 法检测细胞的增殖情况。采用Western blot 方法检测细胞内 E-cadherin 蛋白和剪切的Notch1 蛋白的表达。结果：①吉西他滨在一定浓度范围内可明显抑制SW1990细胞的增殖（P<0.05）,并 呈浓度和时间依赖性。吉西他滨作用前24 h 给予43℃ 1h热疗预处理可显著增强吉西他滨对SW1990细胞的抑制作用（P<0.05） ②吉西他滨作用SW1990 细胞24 小时后,细胞数目减少,细胞形态变大,细胞呈梭形,且细胞间连接减少;而热疗预处理的联合 能够逆转此种形态学变化。③吉西他滨作用24 小时后,细胞内E-cadherin蛋白的表达下调、Cleaved Notch1 的蛋白表达上调,热 疗预处理可明显上调吉西他滨诱导的E-cadherin 蛋白表达下调、并下调Cleaved Notch1 蛋白表达的上调。结论：热疗预处理显著 逆转吉西他滨所诱导的人胰腺癌细胞株SW1990 细胞的EMT 现象,其机制可能与Notch 信号通路有关。     

放疗与吉西他滨治疗对肺癌A549细胞自噬相关基因Beclin1表达的影响

目的:探讨放疗与吉西他滨(Gemcitabine,GEM)治疗对人肺腺癌A549细胞中自噬相关基因Beclin1表达的影响。方法:使用60Coγ照射(6Gy)人肺腺癌A549细胞,细胞继续培养6、12和24h。使用人剂量吉西他滨处理人肺腺癌A549细胞,细胞继续培养24 h后,以未处理的A549细胞为对照,用RT-PCR和Western blotting法检测A549细胞中Beclin1 m RNA和蛋白的表达。结果:经过放射线照射后,三组A549细胞内Beclin1 m RNA和蛋白的表达量均增加,且在24小时末表达量达到最大。经过吉西他滨处理后,吉西他滨处理组A549细胞内Beclin1 m RNA和蛋白的表达量均增加。结论:放射治疗与吉西他滨治疗均可导致A549细胞内自噬相关基因Beclin1表达上调。     

miR-451a促进胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性

目的:探究miR-451a在胰腺癌吉西他滨耐药中的功能。方法:通过低浓度梯度递增法建立胰腺癌吉西他滨耐药细胞株,microRNA(miRNA)测序筛选耐药相关miRNA;细胞存活曲线、克隆形成实验及流式凋亡实验分析miR-451a对胰腺癌细胞耐药的影响;裸鼠成瘤实验检测在动物体内模型中miR-451a对胰腺癌吉西他滨耐药的调控作用;调取TCGA数据分析miR-451a表达水平与胰腺癌病人预后的相关性。结果:胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中miR-451a表达水平明显下调;miR-451a过表达增加胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性,增强了吉西他滨抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用;miR-451a诱导了裸鼠皮下肿瘤对吉西他滨敏感;miR-451a低表达与胰腺癌患者不良预后相关。结论:miR-451a增强了胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性。     

苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药细胞化疗敏感性的影响

目的 探索苦参碱在胰腺癌吉西他滨(GEM)耐药中的作用,以期为恢复胰腺癌化疗敏感性提供新的治疗手段。方法 选择胰腺癌细胞系AsPC-1,使用吉西他滨诱导构建胰腺癌吉西他滨耐药细胞株AsPC-1-GEM,通过CCK-8实验测试其耐药性,检测细胞活力分析苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药细胞株的作用;进一步通过RT-PCR和Western Blot检测耐药前后多药耐药蛋白2(ABCG2)的表达变化以及苦参碱对ABCG2的影响;利用裸鼠建立胰腺癌吉西他滨耐药细胞系异种移植模型,观察使用苦参碱治疗后肿瘤体积的变化;通过免疫组化检测苦参碱对ABCG2表达的影响。结果 耐药细胞AsPC-1-GEM中ABCG2表达增高(P<0.01),苦参碱可有效降低耐药细胞ABCG2的表达(P<0.01),提高胰腺癌吉西他滨耐药细胞的敏感性(P<0.01)。体内实验进一步验证了苦参碱治疗可降低ABCG2的表达(P<0.01),并减缓肿瘤生长(P<0.01)。结论 苦参碱通过降低ABCG2的表达,提高胰腺癌吉西他滨耐药细胞株的敏感性。     

幽门螺杆菌致炎症微环境促进结肠癌SW620细胞发生EMT

该文探讨了幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)炎症微环境对结肠癌SW620细胞发生上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响。使用ELISA方法检测HP干预U937细胞后上清中炎症因子MIF、IL-1β等的变化;采用RT-PCR方法检测MIF、IL-1β、NF-κB基因水平的变化;细胞划痕实验检测炎症上清处理SW620细胞后SW620细胞的侵袭迁移能力; CCK-8方法检测HP处理U937细胞后炎症上清对SW620细胞增殖活性的影响;免疫荧光实验检测炎症上清处理SW620细胞后SW620细胞EMT相关蛋白Vimentin的荧光变化; Western blot实验检测脂多糖(LPS)上清干预SW620细胞后EMT相关蛋白Vimentin、E-cadherin和N-cadherin的变化; Western blot实验检测HP干预U937细胞后NF-κB蛋白,炎症上清处理SW620细胞后EMT相关蛋白Vimentin、E-cadherin和N-cadherin的变化。结果显示, HP干预U937细胞后引起巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、白细胞介素-1β(IL-1β)和NF-κB等相关炎症因子及基因表达升高; CCK-8结果表明HP干预U937细胞后, U937细胞毒性增强;划痕实验结果表明在12 h、24 h、36 h时,随着时间点的推移, SW620细胞的侵袭迁移能力有所增强;免疫荧光实验结果显示SW620细胞Vimentin绿色点状聚集显著增加; Western blot结果显示在16 h、24 h时间点U937细胞NF-κB蛋白表达明显升高; LPS上清干预SW620细胞后Vimentin蛋白表达无明显变化,N-cadherin蛋白24 h组表达减少, E-cadherin蛋白增多, HP炎症微环境上清干预SW620细胞后12 h、24 h、36 h时,随着时间点推移SW620细胞Vimentin蛋白表达显著增加, E-cadherin和N-cadherin蛋白表达显著减少。该实验研究结果表明,幽门螺杆菌致炎症微环境可以促进SW620细胞发生EMT。     

HSP27 特异性shRNA 表达载体的构建及在耐吉西他滨人胰腺癌细胞株 SW1990/Gem 中的表达

目的:构建HSP27基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体及观察其在耐吉西他滨人胰腺癌细胞株SW1990/Gem中的表达,为进一步探索肿瘤的基因治疗打下前期基础。方法:参考文献及shRNA设计原则,设计并合成2条能转录shRNA的DNA序列,退火连接后,插入含绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因和U6启动子的真核表达载体pRNAT-U6.3中,构建重组载体pRNAT-shHSP27。重组载体经鉴定后转染SW1990/Gem,倒置荧光显微镜观察转染情况,RT-PCR、Western Blot从mRNA及蛋白水平探讨转染对耐吉西他滨人胰腺癌细胞株SW1990/Gem的影响。结果:成功构建了针对HSP27基因的shRNA表达载体。倒置荧光显微镜下显示转染48h后SW1990/Gem细胞内存在GFP表达。RT-PCR、WesternBlot结果提示转染后HSP27的mRNA及蛋白表达水平较对照组有明显抑制(P<0.05)。结论:成功构建针对HSP27基因的特异性shRNA真核表达载体,转染细胞后可抑制HSP27表达,为进一步研究HSP27与胰腺癌生物学行为及化疗耐药等相关性奠定了基础。     

环状GMP-AMP合成酶高表达对乳腺癌细胞上皮间质转化的影响*

目的: 探讨环状GMP-AMP合成酶(cGAS)高表达对乳腺癌MCF7细胞发生上皮间质转化(EMT)的影响。方法: 构建稳定高表达cGAS的慢病毒载体并转染MCF7细胞;转染后细胞分别培养12 h,24 h,48 h,72 h,每组实验重复三次,采用MTT检测cGAS对MCF7细胞增殖的影响; transwell法检测高表达cGAS对MCF7细胞迁移能力的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)法分析EMT相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达情况。结果: 与对照组比较,cGAS上调后MCF7细胞增殖能力显著增强(P＜0.05);细胞形态学观察显示cGAS上调后诱导MCF7细胞EMT发生,细胞形态由鹅卵石样变为梭形;transwell实验结果显示,cGAS上调导致MCF7细胞迁移能力增强(P＜0.05);Western blot结果表明,cGAS上调后上皮标记蛋白E-cadherin表达下降(P＜0.05),间质标记蛋白N-cadherin表达增加(P＜0.05)。结论: cGAS上调可增强乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,诱导乳腺癌细胞EMT发生。     

基质交联分子1表达下调对人胰腺癌SW1990细胞周期及细胞凋亡的影响

目的探讨基质交联分子1(STIM1)表达下调对人胰腺癌细胞株SW1990细胞周期和细胞凋亡的影响,并研究其分子作用机制。方法构建携带STIM1基因si RNA的慢病毒载体转染SW1990细胞,分为对照组、空载体组和STIM1组。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot验证STIM1组SW1990细胞STIM1表达下调。通过MTT增殖实验和流式细胞术检测STIM1表达下调对细胞增殖、周期和细胞凋亡的影响,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞周期和细胞凋亡相关分子表达的变化。两组间比较采用t检验。结果STIM1组SW1990细胞中STIM1表达mRNA(0.261±0.029)、蛋白(0.120±0.032)低于空载体组mRNA(1.002±0.091)、蛋白(0.996±0.053),t=20.74、26.89,P均0.01。SW1990细胞24、48、72 h的增殖水平STIM1组分别为(0.122±0.008)、(0.252±0.031)、(0.373±0.028),相比空载体组(0.223±0.035)、(0.618±0.017)、(0.924±0.140),t=6.48、16.90、23.99,P0.01,受到抑制。STIM1组中SW1990细胞G2/M期细胞比例(41.47±0.66)﹪高于空载体组(10.30±2.24)﹪,t=23.14,P0.01。STIM1组中SW1990细胞凋亡率(25.21±1.96)﹪高于空载体组(3.71±1.23)﹪,t=16.03,P0.01。半定量RT-PCR和Western blot提示,STIM1组细胞周期蛋白B1(cyclin B1)表达mRNA(0.344±0.031)、蛋白(0.776±0.042)相比空载体组mRNA(1.011±0.060)、蛋白(1.034±0.036),t=40.06、8.51,P均0.01下调;STIM1组p21表达mRNA(1.970±0.107)、蛋白(1.315±0.093)相比空载体组mRNA(1.025±0.044)、蛋白(0.998±0.036),t=17.10、9.52,P均0.01上调;STIM1组Bcl-2表达mRNA(0.156±0.025)、蛋白(0.381±0.028)相比空载体组mRNA(1.010±0.072)、蛋白(0.980±0.057),t=15.46、14.63,P均0.01下调;STIM1组survivin表达mRNA(0.188±0.022)、蛋白(0.022±0.019)相比空载体组mRNA(1.016±0.090)、蛋白(0.994±0.047)t=58.08、442.58,P均0.01下调;STMI1组procaspase-3表达蛋白(0.389±0.030)相比空载体组蛋白(1.008±0.040)下调,差异有统计学意义(t=19.22,P0.01)。结论在胰腺癌SW1990细胞中,沉默STM1可阻滞细胞于G2/M期,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,有望成为胰腺癌治疗的分子靶点。     

脂蟾毒配基诱导人肝癌细胞凋亡作用的研究

目的 通过体外脂蟾毒配基对人肝癌细胞（Bel7402）的凋亡诱导作用,为研究其抑制肿瘤细胞生长的作用机制提供依据。方法 通过应用流式细胞光度术检测细胞凋亡;采用细胞免疫细胞化学显色检测和Western blotting分析凋亡相关基因蛋白的表达来研究脂蟾毒配基对人肝癌细胞（Bel7402）凋亡的诱导作用。结果 表明脂蟾毒配基能够诱导Bel7402细胞发生凋亡,凋亡率大于50%;脂蟾毒配基提取液(浓度1.0 μm）作用于Bel7402细胞24小时后,bc1-2蛋白的表达下调,到48、72小时后下调更明显;而Bax蛋白的表达从24小时后开始上调,到48、72小时后表达上调明显。使用方差分析法与对照组相比较,P<0.05 ,统计学有显著意义。结论 提示诱导肿瘤细胞凋亡可能是脂蟾毒配基抑制、杀伤人肝癌细胞的机制之一。     

LINC00472参与TGF-β1诱导的HK-2细胞系纤维化和上皮间充质转化

摘要 目的：探讨长链非编码RNA LINC00472在肾纤维化细胞模型中的表达及其在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化和上皮间充质转化（EMT）中的功能作用。方法：使用重组人TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）纤维化和EMT,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中纤维化相关基因和LINC00472的mRNA表达水平,通过Western blot免疫印迹法检测细胞中纤维化相关基因的蛋白表达水平,通过划痕实验评估LINC00472表达对HK-2细胞迁移能力的影响。结果：TGF-β1能成功诱导HK-2细胞发生纤维化和EMT,并剂量和时间依赖性地抑制LINC00472的表达（P<0.05）。抑制LINC00472进一步促进TGF-β1诱导的Fibronectin和Vimentin上调,以及E-cadherin下调（P<0.05）;而过表达LINC00472则能逆转TGF-β1对纤维化相关基因的诱导作用（P<0.05）。此外,抑制LINC00472能进一步增强TGF-β1诱导的HK-2细胞迁移（P<0.05）,而上调LINC00472则使细胞迁移受到抑制（P<0.05）。结论：LINC00472在TGF-β1诱导的肾纤维化细胞模型中呈低表达,其表达水平的降低能促进细胞纤维化和EMT过程。     

氰酸盐诱导氧化应激促进肾小管上皮细胞上皮–间充质转化

该研究探讨氰酸盐(cyanate)诱导肾小管上皮细胞氧化应激损伤和促进肾纤维化的作用。氰酸盐作用HK-2肾小管上皮细胞后, CCK8法检测其对细胞活力的影响;倒置显微镜观察细胞形态的改变; DCFH-DA法检测细胞ROS水平;细胞免疫荧光和Western blot分别检测E-cadherin、Fibronectin、α-SMA的表达; Western blot检测TGF-β的表达水平。结果显示, 2 mmol/L氰酸盐明显下调HK-2细胞的活力(P<0.05),细胞形态变为长梭形。氰酸盐作用24 h后, HK-2细胞内ROS水平呈浓度依赖性升高。免疫荧光和Western blot结果均显示,氰酸盐作用24 h后, HK-2的Fibronectin、α-SMA表达升高, E-cadherin表达下降; TGF-β的表达水平随氰酸盐浓度升高而上调(P<0.05)。以上结果表明,氰酸盐诱导肾小管上皮细胞产生过量ROS,上调TGF-β水平促进细胞上皮–间充质细胞转化(epithelia-mesenchymal transition, EMT)。     

沉默FOXQ1可逆转SW480细胞的上皮-间质转化

FOXQ1是FOX家族的的重要成员之一,其参与了多种人类肿瘤的上皮间质转化(epithelial- mesenchymal transition,EMT).本研究设计合成了FOXQ1基因的shRNA（short hairpin RNA）,用此转染SW480细胞,通过显微镜观察细胞形态,Transwell小室、细胞黏附试验检测转移能力及黏附能力,以探索FOXQ1与结直肠癌细胞EMT的关系.结果显示,沉默FOXQ1后,SW480细胞顶底极性及细胞间紧密连接增加,侵袭、迁移的细胞数目减少,同种黏附能力增加,异种黏附能力降低.进一步的机制研究表明,沉默FOXQ1基因可以导致SW480细胞的上皮标志因子E-cadherin表达显著增高,而间质细胞标志因子N-cadherin、Vimentin及MMP2表达均降低.以上结果表明,沉默FOXQ1基因可以逆转SW480细胞EMT,其机制可能与E-cadherin的上调和N cadherin、Vimentin、MMP2的下调有关,这为进一步研究FOXQ1在结直肠癌发生发展中的作用提供实验基础.     

TGF-β1对乳腺癌细胞系Snail表达的影响

目的通过TGF-β1诱导乳腺癌MCF-7发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)后检测锌指转录因子Snail表达的改变,探讨Snail在EMT及乳腺癌发生发展中的作用。方法常规培养乳腺癌细胞株MCF-7后,用TGF-β1诱导其发生EMT,用Transwell侵袭小室法进行细胞体外侵袭能力检测;用免疫组织化学方法及免疫荧光检测E-cadherin、Vi mentin、Snail的表达;用real ti me PCR检测E-cadherin、Vi mentin、Snail mRNA的表达。结果TGF-β1处理72h后的MCF-7细胞穿透能力明显增强。E-cadherin蛋白及mRNA表达减少,Vi mentin、Snail蛋白及mRNA表达增加。结论E-cadherin、Vi mentin是细胞发生EMT的重要生物学标志,Snail可能在转录水平上调控E-cadherin、Vi mentin蛋白的表达,Snail在EMT和乳腺癌的发生发展中起着重要的作用。     

硫化砷对Jurkat细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：研究硫化砷（As4S4）作用于人类急性T细胞白血病细胞株Jurkat细胞后对其增殖的影响及机制。方法：用不同浓度硫化砷（0,2．5,5,10,20txM）作用于Jurkat细胞不同时间（24,48,72小时）,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察对其增殖的抑制作用。倒置显微镜下观察不同浓度硫化砷（0,5,10,20txM）作用Jurkat细胞24小时后细胞数目和形态变化。利用Westemblot方法检测硫化砷（0,5,10uM）作用Jurkat细胞24小时后胞内CleavedNotchl蛋白和C．myc蛋白变化情况。结果：@MTT结果提示硫化砷在一定浓度范围内对Jurkat细胞有明显的抑制作用（P〈0．05）,并呈浓度和时间依赖性。②显微镜下观察到硫化砷处理Jurkat细胞24小时后,细胞数目随药物浓度增加而减少,而其细胞碎片随着药物浓度增加而增加。@Westernblot结果显示硫化砷处理24小时后,胞内CleavedNotchl蛋白、C-myc蛋白下调,并随浓度增加下降的更为明显。结论：硫化砷对Jurkat细胞生长具有抑制作用．其机制可能通过影响Notch信号通路起作用。     

西妥昔单抗联合低温热疗诱导CNE细胞凋亡的研究

目的:观察西妥昔单抗联合低温热疗诱导人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的效果,并初步探讨其可能的机制.方法:试验分对照组、单靶组、单热组及热靶组,MTT法测定西妥昔单抗对CNE细胞株48h20～30%抑制的药物浓度;以该浓度药物与低温热疗(43℃,30分钟)联合,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测24h、48h凋亡率;Western blot检测Bax、Bcl-2、EGFR蛋白的表达.结果:以48h20～30%抑制率的药物浓度(IC20～30)为试验的工作浓度,确定西妥昔单抗对CNE细胞株的工作浓度为10 ug/ml;荧光染色法观察到热靶组CNE细胞发生典型的凋亡形态学改变;流式凋亡检测显示24、48 h热靶组凋亡率显著高于相应单靶组、单热组及对照组(P＜0.05). western blot检测显示各处理组较之对照组都有上调Bax、下调Bcl-2、EGFR蛋白表达的作用,以热靶组最为显著(P＜0.05);热疗后EGFR蛋白表达逐渐下调.结论:西妥昔单抗联合低温热疗能显著增加CNE细胞的凋亡率,这可能与EGFR的下调与受抑,进而上调Bax、下调Bcl-2蛋白的表达促进凋亡有关.     

丙丁酚对oxLDL诱导血管内皮细胞增殖抑制的保护作用

目的:探讨丙丁酚(普罗布考)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用,以及时NF-κB和Iκ B-α表达的调节作用.方法:MTT法分别检测oxLDL不同浓度(1 g/ml、10 g/ml、100 g/ml)处理HUVEC不同时间(12h、24h、48h)细胞增殖情况;5 g/mL丙丁酚预处理HUVEC 24小时,MTT检测细胞增殖情况;western blot检测oxLDL处理细胞及丙丁酚预处理后NF-κB和Iκ B-α蛋白表达水平.结果:oxLDL处理HUVEC细胞24小时后,对细胞增殖具有抑制作用,Western blot结果显示NF-κB表达显著上调,Iκ B-α蛋白表达下调.而用5ug/mL丙丁酚预处理可以明显缓解细胞增殖抑制,NF-K B和Ig B-a蛋白的表达也恢复至正常水平.结论:丙丁酚可显著缓解oxLDL诱导的HUVEC细胞增殖抑制,并且NF-κ B和Iκ B-α表达的改变可能参与此过程.     

甲基化CpG结合域蛋白MBD2对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

该文探讨甲基化Cp G结合域蛋白2(methyl-Cp G-binding domain protein 2,MBD2)对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响。将干扰质粒MBD2 sh RNA转染入MBD2高表达的Pa Tu8988细胞和SW1990细胞中,运用CCK-8法检测细胞的增殖活性并绘制生长曲线,克隆形成实验检测细胞克隆形成率,Transwell检测细胞迁移率。结果显示,下调MBD2后,Pa Tu8988细胞中MBD2基因的表达量明显降低,细胞增殖减慢,克隆形成率降低,细胞迁移率减少;在SW1990细胞中下调MBD2基因后,得到类似结果。由此说明,沉默MBD2基因可以抑制胰腺癌细胞Pa Tu8988和SW1990的增殖和迁移,为进一步研究MBD2在胰腺癌细胞增殖与迁移中的作用机制奠定了基础。     

TGF-β1对话Hedgehog-Gli1信号调控肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积

该研究旨在探讨Hedgehog-Gli1(HH)信号在肾小管上皮细胞表型转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和胶原累积中的作用及与TGF-β1信号的对话机制。该实验通过体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以溶剂作为对照组,以1~50 ng/m L重组蛋白sonic hedgehog(Shh)或5 ng/m L TGF-β1作为诱导组,以加入或不加入HH信号特异性阻断剂环靶明(cyclopamine,Cyp)5μmol/L为干预组。细胞培养24 h,采用ELISA、q RT-PCR、免疫细胞荧光染色和Western blot等方法检测HH信号相关分子(Ptch1、Smo和Gli1)、TGF-β1、EMT相关分子(Rac1蛋白、肌成纤维细胞标志物α-SMA和上皮细胞标志物E-cadherin)、III型胶原m RNA或蛋白的表达。结果发现,外源性Shh上调Smo和Gli1表达,抑制Ptch1表达,继而激活HH信号;HH信号活化抑制肾小管上皮细胞E-cadherin的表达,上调α-SMA、III型胶原和TGF-β1的表达。环靶明干预后,Smo表达下调,进而抑制HH信号、EMT和胶原累积,并下调TGF-β1的表达。应用TGF-β1诱导小管上皮细胞EMT,同时也上调HH信号分子Smo和Gli1的表达,下调Ptch1的表达,提示TGF-β1可诱导HH信号活化。综上所述,HH信号和TGF-β1均参与了肾小管上皮细胞EMT和胶原累积过程。HH信号活化可促进TGF-β1的表达,同时TGF-β1能激活HH信号,推测TGF-β1与HH信号可能存在交叉对话以调控EMT和胶原累积。     

蛋白质精氨酸甲基转移酶1促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力（英文）

该文探讨了蛋白质精氨酸甲基转移酶1(protein arginine methyltranserase 1,PRMT1)对胰腺癌细胞迁移和增殖的影响。在数据库中分析了PRMT1在正常胰腺组织和胰腺癌组织中的表达。用Western blot和Real-time PCR实验检测不同胰腺癌细胞中PRMT1的基础表达量。在Pa Tu8988和Bx PC3细胞中干扰PRMT1,Western blot、q PCR检测sh RNA干扰效率;CCK-8检测细胞增殖活性;平板克隆法检测细胞克隆形成能力;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot检测细胞EMT(epithelial-mesenchymal transition)相关蛋白变化。相反,在SW1990细胞中过表达PRMT1,并做上述同样的实验进行检测。结果显示,PRMT1在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织。在胰腺癌细胞中下调PRMT1的表达,可以抑制细胞的增殖和迁移能力,增高上皮标志物E-钙黏蛋白的水平,降低间质标志物N-cadherin钙黏蛋白的水平。上调PRMT1的表达得到相反的结果。结果表明,PRMT1能促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力,并影响EMT标志物蛋白质水平。该研究为进一步研究体内PRMT1的作用提供基础。     

肝细胞生长因子诱导人肝癌细胞上皮间质化

上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）与肿瘤侵袭转移密切相关.虽然肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）已被证实为肿瘤EMT的主要诱导剂,但是HGF诱导肿瘤EMT发生的分子机制尚不完全清楚.本研究旨在探讨Snail在HGF诱导肝癌细胞上皮间质转化中的作用.用HGF处理肝癌HepG2和Hep3B细胞,显微镜观察细胞形态变化,划痕试验及Transwell试验检测细胞迁移能力,Western印迹检测Met,AKT的磷酸化及蛋白质表达的变化,Western印迹与real-time RT-PCR检测上皮细胞表面标志E-Cadherin和间质细胞表面标志N-Cadherin、Fibronectin的表达变化,以及EMT相关转录因子的表达变化.经HGF处理的HepG2、Hep3B细胞,Met和AKT的磷酸化水平显著增强;相差倒置显微镜下观察细胞形态向间质型细胞形态转化;细胞划痕和Transwell试验检测细胞的迁移能力较对照组显著增强;Real-time RT-PCR和Western印迹实验显示HGF的诱导能上调间质标记蛋白的表达及下调上皮型标志蛋白的表达.进一步发现,HGF能上调转录因子Snail的表达,干扰Snail能逆转HGF对HepG2和Hep 3B细胞EMT发生的诱导作用.由此可见,HGF可能通过诱导Snail的表达促进肝癌细胞EMT的发生.这为阐明肝癌细胞侵袭转移机制,以及肝癌的防治提供新线索.