As2O3干预口腔鳞癌A431 细胞EGFR 表达的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人口腔鳞癌A431细胞生长的抑制作用,探讨其抗肿瘤的机制。方法：合成特异性靶向到肿 瘤细胞表面表皮生长因子受体（EGFR）的近红外荧光分子对比剂EGF-Cy5.5,验证试剂合成的靶向特异性。口腔鳞状细胞癌 A431 细胞系暴露于浓度分别为0 滋M,0.5 滋M,2.5 滋M和5.0 滋M的三氧化二砷溶液中0,24 h,48 h和72 h。共聚焦显微镜、流式 细胞仪及免疫组化证实EGFR的表达水平,上述实验均测量三次,结果取平均值。结果：EGF-Cy5.5 靶向荧光对比剂的标记率为 68%~70 %。对比对照组,越高浓度的三氧化二砷处理的肿瘤细胞其获得的细胞荧光信号强度越小,这与药物浓度越高细胞表面表 达EGFR 的量越少相一致。流式细胞仪显示,在72 小时,作用于细胞的三氧化二砷药物浓度分别为0.5 滋M,2.5 滋M,和5.0 滋M, 其相对应获得的细胞EGFR 表达量分别为57.28± 3.2 %(P<0.05), 29.91± 2.2 %(P<0.01) 和10.73± 2.4 %(P<0.01),明显低于对照 组的细胞EGFR 表达量74.42± 1.8 %,（P <0.05)。结论：本研究应用近红外荧光分子成像的方法体外检测口腔鳞状细胞癌A431 的 EGFR表达水平,实验证明三氧化二砷对其EGFR 具有明显的抑制作用,且抑制作用具有时间- 剂量依赖性。     

异型增生上皮和口腔鳞癌组织EGFR和PCNA表达意义及相关性研究

采用免疫组化S－P法研究表皮生长因子受体（EGFR）、增殖核抗原（PCNA）在口腔粘膜上皮异型增生及口腔鳞癌组织中的表达意义及其相互关系。结果表明,EGFR及PCNA的正常口腔粘膜上皮为阴性或仅在上皮基底层有少量阳性表达。上皮异型增生时,随病变程度加重,阳性表达呈递增趋势（P＜0.01）,至重度异型增生时,PCNA表达与鳞癌无显性差异（P＞0.05）,EGFR表达甚至超过高分化鳞癌。口腔鳞癌组织随分化程度降低,阳性表达率相应增加（P＜0.01）。EGFR表达与PCNA表达有明显相关性（P＜0.01）。EGFR和PCNA可作为评估和监测口腔粘膜上皮恶变潜能,判断口腔鳞癌恶性度的有用标记物。     

口腔鳞状细胞癌中VEGF、Bcl-2的表达及意义

目的研究血管内皮细胞生长因子VEGF、Bcl-2在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及意义。方法应用免疫组化SP法检测。结果在OSCC不同分化及TNM分期病例中VEGF阳性表达率无显著差异,但Ⅳ期VEGF阳性表达级别比Ⅰ期病例有显著增高。颈淋巴结转移组的VEGF比无颈淋巴结转移组阳性率高(P<0.05)。OSCC高分化组中Bcl-2的表达率比中低分化组明显低(P<0.05)。VEGF阳性级别越高的病例组,Bc-l2的表达率越高。结论在口腔鳞癌中VEGF、Bcl-2的表达有显著的正相关关系。     

紫铆因靶向EGFR和AuroraA/B信号通路抑制非小细胞肺癌的研究

紫铆因抗多种肿瘤的生物学活性已被广泛研究,但其抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的分子机制还不清楚。研究中,通过MTS和软琼脂集落实验检测紫铆因对非小细胞肺癌细胞停泊依赖和停泊非依赖增殖的影响,利用免疫印迹检测紫铆因处理后非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路的磷酸化状态,同时采用流式细胞术检测紫铆因对非小细胞肺癌细胞周期演进的影响。研究发现紫铆因剂量依赖性抑制A549和H1650细胞增殖,在抑制EGFR信号通路磷酸化活化的同时下调EGFR总蛋白及EGFR在胞膜和胞核的表达,而且紫铆因下调AuroraA/B和H3-S10磷酸化,促进A549细胞G2/M期阻滞。结果表明紫铆因可通过靶向EGFR和AuroraA/B信号通路抑制非小细胞肺癌。     

趋化因子CXCL2及其受体CXCR2在子宫颈鳞状细胞癌和子宫颈上皮内瘤变组织中的表达

目的 探讨子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)组织和子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中趋化因子(C-X-C基元)配体2[chemokine(C-X-C motif)ligand 2,CXCL2]...     

靶向HER2的CAR-T细胞构建与抗肿瘤活性的体外分析

CAR-T细胞疗法通过靶向识别肿瘤细胞表面抗原,特异性杀伤肿瘤细胞,近年来已经成为肿瘤免疫疗法的研究热点。通过基因工程方法构建靶向人类表皮生长因子受体2(HER2)的CAR慢病毒表达质粒,以磷酸钙沉淀辅助多质粒共转染HEK293T细胞包装,制备CAR慢病毒颗粒lenti-car,感染人外周血单核细胞获得HER2靶向的CAR-T细胞,并分析其对HER2阳性和阴性肿瘤细胞的特异性抑制效果。研究结果表明,构建的CAR-T细胞可被HER-2阳性的肿瘤细胞特异性激活,分泌大量炎症性细胞因子IFN-γ和IL-2。在同样效靶比等处理条件下,构建的HER2靶向CAR-T细胞对HER2阳性的人卵巢癌细胞株SK-OV-3的生长抑制率为(58.47±1.72)%,显著高于对照组(P0.05);而对HER2阴性的人慢性髓原白血病细胞株K562的生长抑制率为(11.74±2.37)%,与对照组无显著差异(P0.05)。进一步,在K562细胞中转染人HER2表达载体使其成为HER2阳性,则HER2靶向CAR-T细胞对其的生长抑制率上升为(30.41±7.59)%,较HER2阴性K562具有明显差异(P0.05)。研究结果表明,构建的HER2靶向的第二代CAR-T细胞可选择性地抑制高表达HER2蛋白的肿瘤细胞的生长,暗示了其对HER2阳性肿瘤进行细胞免疫治疗的临床应用前景。     

口腔鳞状细胞癌中hMSH2、PCNA和p53的表达及意义

目的:探讨hMSH2、PCNA和p53在OSCC中的表达及可能存在的临床意义.方法:运用免疫组织化学S-P法对56例OSCC组织中hMSH2、PCNA和p53的表达进行检测.结果:(1)3种基因产物在OSCC中的阳性率均高于正常口腔黏膜,中-低分化癌的阳性率高于高分化癌,有淋巴结转移的阳性率高于无淋巴结转移.(2)hMSH2与PCNA、p53,p53与PCNA的表达均呈正相关.(3)5年生存率与hMSH2蛋白表达和淋巴结转移有关.结论:hMSH2、PCNA和p53的异常表达及其相互之间的调节可能与OSCC的发生发展有关.     

表皮生长因子受体调控的人鼻咽癌细胞系CNE2分泌蛋白质的筛选

为筛选表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)调控的鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)细胞的分泌蛋白质,揭示EGFR在NPC发病中的作用机制,采用无血清培养法培养NPC细胞系CNE2,并用转化生长因子(transforminggrowthfactor-α,TGF-α)刺激CNE2细胞24h作为实验组,对照组CNE2细胞不用TGF-α刺激.超滤法脱盐并浓缩两组细胞的培养上清制备分泌蛋白,采用双向凝胶电泳技术(two-dimensionalelectrophoresis,2-DE)分离两组细胞的分泌蛋白,PDquest图像分析软件识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白.建立了实验组和对照组CNE2细胞分泌蛋白的2-DE图谱,图像分析识别了22个差异蛋白质点,质谱鉴定了8个非冗余蛋白质,其功能涉及肿瘤细胞侵袭转移、细胞凋亡和增殖,为进一步揭示EGFR在NPC发病中的作用及其机制奠定了基础.     

凋亡和周期基因芯片研究As2O3对NB4细胞凋亡相关基因表达谱的影响

目的:利用细胞凋亡和周期基因芯片研究As₂O₃作用前后NB4细胞基因表达谱的差异性,寻找As₂O₃诱导NB4细胞凋亡的相关基因并分析其可能机制。方法:流式细胞仪检测细胞凋亡率,抽提对照及诱导组细胞的mRNA,通过逆转录将As₂O₃处理前后的NB4细胞cDNA进行生物素标记,用含269个目的基因的细胞凋亡和周期基因芯片进行杂交,GEArray软件分析,筛选出As₂O₃诱导前后表达有差异的基因。芯片结果用荧光定量聚合酶链反应(realtimepolymerasechainreaction)进行验证。结果:筛选出As₂O₃作用前后表达有差异的基因共100条(占芯片基因总数的37.2%),其中97条(97/100,97%)基因表达上调,3条(3/100,3%)基因表达下调。表达上调的基因主要包括肿瘤坏死因子配体和受体家族、bcl2家族、半胱氨酸家族、DNA损伤检测和P53途径以及细胞分裂周期蛋白和激酶等基因。结论:As₂O₃主要通过上调促凋亡基因表达来诱导NB4细胞凋亡,其中TNFSF15、Apaf1、Caspase3和p16等基因可能参与As₂O₃诱导的NB4细胞凋亡,As₂O₃诱导NB4细胞凋亡的可能机制主要涉及TNF途径、线粒体途径、Caspase途径、细胞周期抑制途径和P53途径等。     

口腔鳞癌E钙粘连素表达与颈淋巴结转移相关性的研究

探讨E钙粘连素的表达与口腔鳞癌淋巴结转移的相关性。采用蛋白杂交技术 ,对病理确诊的 68例口腔鳞癌标本进行肿瘤组织总蛋白提取 ,然后行蛋白质免疫印迹检测 (Westernblot)。 68例口腔癌中的E钙粘连素表达显示 ,3 6例淋巴结转移标本与 3 2例未发生淋巴结转移的标本相比 ,E钙粘连素的表达明显降低(P <0 .0 1 )。此结果提示口腔鳞癌淋巴结转移与E钙粘连素的丧失密切相关 ,E钙粘连素的表达可以作为极有价值的判定肿瘤转移发生可能性以及愈后的判断指标。     

原发性口腔鳞癌组织及血清中内皮抑素表达的意义

目的：探讨原发性口腔鳞癌患者组织和血清中内皮抑素表达及与肿瘤分期、分级的关系。方法：采用免疫组化方法检测36例口腔鳞癌和12例正常口腔粘膜组织中内皮抑素表达情况。ELISA法检测36例口腔鳞癌患者术前血清内皮抑素水平,14例健康者血清做对照。结果：内皮抑素主要见于肿瘤组织细胞质。正常口腔粘膜中内皮抑素表达率为7.15%,口腔鳞癌组织中内皮抑素阳性率为76.44%,其中G1、G2、G3级阳性率分别为47.21%、79.17%、90.90%,病理分级间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。口腔鳞癌患者血清中内皮抑素水平（49.62±1.72）ng/mL显著高于健康对照者（5.60±0.37）ng/mL（P〈0.05）,TNM分期III、IV期肿瘤患者血清内皮抑素水平显著高于I和II期（P〈0.05）。结论：口腔鳞癌患者组织和血清中内皮抑素表达显著升高,并与肿瘤分期、分级相关,检测内皮抑素表达有助于判断口腔鳞癌恶性程度。     

VEGF-C 在口腔鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的:检测血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在口腔鳞状细胞癌(鳞癌)和癌旁组织中的表达情况,探讨VEGF-C在口腔鳞癌的增殖、浸润和淋巴转移中的作用。方法:采用免疫组化方法检测60例口腔鳞癌病人癌组织和癌旁组织中VEGF-C的表达,应用图像分析系统进行分析,用Spearman相关分析研究其与病变部位、肿瘤大小、病理分级、临床分期及颈淋巴结转移之间的关系。结果:口腔鳞癌组织VEGF-C的表达明显高于癌旁组织(u=7.747,P<0.01),其表达强度与临床分期及淋巴结转移密切相关(r=0.564、0.706,P<0.05),与病变部位、大小、病理分级无关。结论:口腔鳞癌细胞分泌VEGF-C诱导癌周淋巴管增生扩张是发生区域淋巴结转移的重要因素之一,VEGF-C有望作为早期临床判断和预测颈淋巴结转移的指标之一。     

CXXC4、EZH2在口腔鳞状细胞癌中表达及临床意义

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)中CXXC指蛋白4(CXXC finger protein 4,CXXC4)与Zeste基因增强子同源物2(Enhancer of zeste homolog 2,EZH2)的表达、相关性及与临床病理特征之间的关系,为OSCC的早期诊断、治疗、判断预后及预防等提供参考依据。方法:采用免疫组织化学S-P法检测CXXC4蛋白及EZH2蛋白在60例口腔鳞状细胞癌组织及20例非肿瘤患者正常口腔黏膜组织中的表达情况,分析二者与口腔鳞状细胞癌临床病理特征的相关性。结果:口腔鳞状细胞癌组织中CXXC4蛋白的表达率为35.0%(21/60),明显低于正常口腔黏膜组织的60.0%(12/20)(P0.05);口腔鳞状细胞癌中EZH2蛋白的表达率为70.0%(42/60),高于正常口腔黏膜组织的25%(5/20)(P0.05)。CXXC4蛋白与EZH2蛋白的表达与口腔鳞状细胞癌的病理分化程度、TNM分期及淋巴结转移等密切相关(P0.05),而与年龄、性别及肿瘤直径大小等无关。CXXC4蛋白与EZH2蛋白在OSCC中表达呈负相关(r=-0.511,P0.001)。结论:CXXC4蛋白的表达下调或缺失以及EZH2蛋白的表达上调或过表达与口腔鳞状细胞癌的发生、发展及侵袭转移有关,可能作为口腔鳞状细胞癌预后预测的参考指标。     

Rab23 在鳞癌细胞系中的表达及其对鳞癌细胞侵袭的影响*

目的:观察Rab23在鳞癌细胞系中的表达及其对鳞癌细胞侵袭的影响。方法:western blot检测Rab23在四个头颈部鳞癌细胞系中的表达,对鳞癌细胞系HSQ-89用脂质体转染小干扰RNA,对Sa3用脂质体转染Rab23质粒,分别干涉或过表达Rab23,用铺有基质胶的transwell小室检测细胞侵袭能力,细胞划痕试验检测迁移能力。结果:Rab23在四个鳞癌细胞系中均有表达,在Hacat中不表达,HSQ-89细胞经Rab23干涉后细胞侵袭能力减弱,而Sa-3细胞过表达Rab23后细胞侵袭能力增强。干涉或过表达Rab23后,鳞癌细胞的迁移能力无差异。结论:Rab23可促进鳞癌细胞侵袭。     

三氧化二砷对心肌细胞膜延迟整流钾通道蛋白表达的影响研究

目的:观察不同剂量的三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对心肌细胞膜上延迟整流钾电流蛋白表达的影响。方法:将豚鼠随机分为4组:正常对照组、As2O3小剂量组(0.4 mg/kg)、中剂量组(0.8 mg/kg)、大剂量组(1.6 mg/kg),给药后不同时间间隔记录心电图,测量QT间期和RR间期,计算QTc的值的变化,同时应用荧光免疫组化技术检测心肌延迟整流钾通道IKr、IKs通道蛋白的表达量。结果:1在不同剂量的As2O3作用下,0.8 mg/kg和1.6 mg/kg As2O3组的豚鼠QTc明显延长,并且这种延长作用与给药剂量和时间密切相关。在2 h的观察时间内,0.8 mg/kg和1.6 mg/kg As2O3分别使QTc从对照组的324±7 ms延长到368±11 ms(P0.01)和388±11 ms(P0.01)。2大剂量组豚鼠心肌缓慢型延迟整流钾通道Kv LQT1和GPERG蛋白表达与对照组相比显著降低(P0.01)。结论:As2O3对豚鼠心肌QT间期有明显延长效果,其机制可能与降低Kv LQT1和GPERG蛋白的表达,影响了钾通道的功能有关。     

Focal Adhesion Kinase Knockdown in Carcinoma‐Associated Fibroblasts Inhibits Oral Squamous Cell Carcinoma Metastasis via Downregulating MCP‐1/CCL2 Expression

Carcinoma‐associated fibroblasts (CAFs) have been demonstrated to play an important role in the occurrence and development of oral squamous cell carcinoma (OSCC). The aim of this study is to investigate the influence of CAFs on OSCC cells and to explore the role of focal adhesion kinase (FAK) in this process. The results showed that oral CAFs expressed a higher level of FAK than normal human gingival fibroblasts (HGFs), and the conditioned medium (CM) of CAFs could induce the invasion and migration of SCC‐25, one oral squamous carcinoma cell line. However, knockdown of FAK by small interfering RNA (siRNA) resulted in inhibition of CAF–CM induced cell invasion and migration in SCC‐25, probably by reducing the production of monocyte chemoattractant protein‐1 (MCP‐1/CCL2), one of downstream target chemokines. Therefore, our findings indicated that targeting FAK in CAFs might be a promising strategy for the treatment of OSCC in the future.     

ID09, A Newly-Designed Tubulin Inhibitor,Regulating the Proliferation,Migration, EMT Process and Apoptosis of Oral Squamous Cell Carcinoma

Microtubules, a major target in oral squamous cell carcinoma (OSCC) chemotherapy, contribute to multiple malignant biological behaviors, including proliferation, migration, and epithelial-mesenchymal transition (EMT). Surpassing traditional tubulin inhibitors, ID09 emerges with brilliant solubility, photostability, and drug-sensitivity in multidrug-resistant cells. Its anti-tumor effects have been briefly verified in lung adenocarcinoma and hepatocellular carcinoma. However, whether OSCC is sensitive to ID09 and the potential mechanisms remain ambiguous, which are research purposes this study aimed to achieve. Various approaches were applied, including clone formation assay, flow cytometry, wound healing assay, Transwell assay, cell counting kit-8 assay, Western blot, qRT-PCR, and in vivo experiment. The experimental results revealed that ID09 not only contributed to cell cycle arrest, reduced migration, and reversed EMT, but accelerated mitochondria-initiated apoptosis. Remarkably, Western blot detected diminishment in expression of Mcl-1 due to the deactivation of Ras-Erk pathway, resulting in ID09-induced apoptosis, proliferation and migration suppression, which could be offset by Erk1/2 phosphorylation agonist Ro 67-7476. This study initially explored the essential role Mcl-1 played and the regulatory effect of Ras-Erk pathway in anti-cancer process triggered by tubulin inhibitor, broadening clinical horizon of tubulin inhibitors in oral squamous cell carcinoma chemotherapy application.     

EGFR、HER2、CXCR4在tied,细胞肺癌中的表达及临床意义

目的：研究EGFR（epidermal growth factor receptor）、HER2（ human epidermalgrowth factor receptor-2）及CXCR4（chemokine（C-X-C motif） receptor 4）在NSCLC 中的表达,分析它们与NSCLC 临床病理特征的的关系。方法：选择我科2009 年7 月-2012年12 月收治的75 例非小细胞肺癌（NSCLC）患者为研究对象,支气管镜活检得到NSCLC肿瘤组织标本,免疫组织化学技术分别检测EGFR、HER2、CXCR4在NSCLC 组织中的表达,并分析EGFR、HER2、CXCR4 的表达与NSCLC 患者临床病理指标和生存期的相关性。结果：EGFR、HER2 及CXCR4在NSCLC中的表达与患者淋巴转移及远处转移有关（P〈0.05）。EGFR、HER2 及CXCR4在NSCLC 中的表达均呈正相关,EGFR 与HER2,EGFR 与CXCR4,HER2 与CXCR4 的相关系数分别为r=0.296（P〈0.01）,r=0.578（P〈0.01）,r=0.426（P〈0.01）。3 种基因表达越多,患者中位生存时间越短（P〈0.05）。结论：EGFR、HER2 及CXCR4 与NSCLC的发生发展关系密切,针对性的多个靶向抑制,可更好发挥抑癌作用。根据三者不同的表达情况初步筛选出针对靶向治疗的单一或联合靶点,有助于为NSCLC 患者提供个体化的治疗方案。为进一步治疗提供依据。