U23细菌溶解酶性质的研究

我们对U23细菌溶解酶[1]溶解细菌细胞壁的产物进行了测定和分析,结果证明这是一种属于糖苷酶类型的细菌溶解酶。该酶不溶解几丁质。分子量27,000,等电点pH11.3。酶的结晶具有类似于蛋清溶菌酶结晶的多形性质,因结晶条件不同,获得三种不同形状的酶结晶。     

溶葡球菌酶的比色测定及某些性质的研究

溶葡球菌酶是一种专一地溶解葡萄球菌的溶菌酶。和蛋清溶菌酶一样,通常采用比浊法进行测定,底物或为葡萄球菌、或为该菌的细胞壁、或为该菌细胞壁的肽聚糖。本文报道一种简便灵敏的溶葡球菌酶比色测定法,以偶联了KNR艳蓝染料的葡萄球菌(死)细胞或偶联了KNR艳蓝染料的该菌细胞壁肽聚糖为色源底物,根据酶作用后释放出的可溶性KNR生成物计算酶活性。本文采用该比色测定法检定了溶葡球菌酶的某些动力学性质。     

蜗牛生物制品的提取方法

蜗牛生物制品的提取方法瞿伯以（浙江师范大学生物系金华３２１００４）在蜗牛消化液中有纤维素酶、蛋白质水解酶等３０余种酶的混合酶，统称为“蜗牛酶”，蜗牛酶能溶解植物细胞壁，在培育新植株的研究中有重要作用；有溶解酵母菌细胞壁，提取线粒体等细胞器的特异功效。...     

赤霉素产生菌藤仓赤霉原生质体的形成和再生

生长在含2%甘氨酸的G培养基上的藤仓赤霉菌菌丝体,经二硫苏糖醇作预处理,其细胞壁对纤维素酶和溶菌酶的混合酶液敏感,它们的适宜浓度是纤维素酶1.5%,溶菌酶0.7%。在高渗液中酶解3—4小时,细胞壁被逐渐溶解并大量释放原生质体(约10~7/ml),再生率在50%以上。观察了在PDS液体培养基中原生质体再生成菌丝体的方式,看到菌丝再生或者是单球直接生长或者是经过一次、两次或多次的细胞分裂。对原生质体进行X射线照射诱变和进行终代谢产物高抗性变种筛选,挑高产赤霉素菌株,获得了良好的结果。     

一种溶高等担子菌细胞壁酶的制备

我们试图以高等担子菌（主要是食用菌）为 材料进行原生质体融合,以期获得新型杂种菌 株。我们先后采用过制备植物原生质体的纤维 素酶（上海东风生化试剂厂生产和从日本进 口）、制备酵母菌原生质体的蜗牛酶（来源于中 国科学院生物物理研究所）、和制备细菌原生质 体的溶菌酶（上海禽蛋二厂生产）单独或混合酶 解担子菌菌丝,均难以获得担子菌原生质体。其 原因可能是它们的细胞壁的成分不同所致^[1]     

高等植物细胞壁的结构和功能（二）

（续１９９９年第１期第８页）１．５细胞壁酶类除苹果酸脱氢酶、磷酸酶、多种糖苷水解酶、纤维素酶在细胞壁上起作用外,还有过氧化物酶、木葡聚糖内转葡萄糖基酶,以不同方式增加细胞壁的交联。图４过氧化物酶在细胞壁中的生理功能此外,膨胀素（Ｅｘｐａｎｓｉｎ）在细...     

海参i型溶菌酶基因及其编码产物的结构特点

通过RT-PCR 和 RACE PCR技术,从海参(Stichopus japonicus)体壁中克隆得到一种溶菌酶基因(GenBank：EF036468).生物信息软件分析表明,其中全长cDNA为 713 bp,5′非编码区（UTR）246 bp,3′UTR 29 bp,开放阅读框438 bp,编码145个氨基酸,包括溶菌酶成熟肽124个氨基酸和信号肽21个氨基酸.对海参溶菌酶与多种无脊椎动物的c、g和i型溶菌酶进行分析比较,发现它与i型溶菌酶有较高的同源性,并具有i型溶菌酶高度保守的2个活性位点,即Glu34和Ser50.活性位点附近具有i型溶菌酶的一段特有的氨基酸保守序列MDVGSLSCG(P/Y)(Y/F)QIK,所以推断克隆的海参溶菌酶为i型.另外,通过搜索蛋白保守结构域数据库,发现海参溶菌酶与医用水蛭失稳酶相似性最高,并且这2个酶的三级结构模型也极其相似.因此推测,海参i型溶菌酶具有双功能特性,既能作用于细菌细胞壁的糖苷键使细胞裂解,又具有失稳酶的一些生化功能,能够水解纤维蛋白,这些特点在海参自溶过程中发挥重要的作用.     

人源溶菌酶结构与功能的研究进展

人溶菌酶是一类人体内天然存在的能够溶解细菌细胞壁的碱性蛋白的总称。其作用特征是能够裂解肽聚糖中的N-乙酰氨基葡萄糖与N-乙酰氨基甲酸之间的β-(1,4)-糖苷键。人溶菌酶具有抗菌、抗炎、抗病毒和增强免疫力等多种特性,因此在国内外市场上应用广泛。本文就人溶菌酶的结构特点、表达部位、功能表达以及应用情况进行综述。     

新型T_4溶菌酶的工业用途

T_4溶茵酶是从噬菌体T_4衍生而来的,能消化细胞壁。奶酪制造业中菌种培养物里有梭状芽孢杆菌污染,造成奶酪制品出现空洞,影响质量。但这类菌对卵清蛋白溶菌酶有抗性,而天然T_4溶菌酶在乳酪操作温度条件下不稳定,所以新型T_溶菌酶有诸多优点。     

蜗牛酶

蜗牛酶是蜗牛消化液中的一类混合酶,其中包括纤维素酶、蛋白水解酶、果胶酶等,有三、四十种之多。它能溶解酵母和植物的细胞壁,因此近年来日益广泛地应用于细胞生物学的研究。例如:用蜗牛酶溶解酵母细胞壁,从中提取线粒体;或用它去除植物细胞壁,使细胞互相融合,从而培育新的杂交植株。过去,蜗牛酶依赖进口。最近,由于工作需要,我们从我国南方的一种体形较大而分布普     

膨胀素——一个引人注目的细胞壁松弛酶候选者

植物的生长是植物生理学中一个最基本且重要的问题。细胞膨胀生长（扩大和伸长）的前提是使细胞壁松弛和不可逆伸展。生物物理和生物化学分析表明,细胞壁衬质是控制细胞壁生长的最重要的因素[4]。目前,人们普遍认为,衬质多糖作为“链”（tether）,把纤维素微纤丝结合在一起[9];或作为“填补物”（filler）,防止微纤丝聚集[15,22,30]。并进一步认为,细胞壁松弛的机理是衬质多糖被水解断裂[1,9,13,14]。据报道,多种修饰酶（如葡聚糖酶[1,9,19]、葡萄糖苷酶[19,27]、半乳糖苷酶[17,31]、果胶甲酯酶[11]、IAA氧化酶[2]、过氧…     

结核杆菌 D29 噬菌体几丁质酶基因的表达及功能研究

噬菌体一般通过表达内溶素来降解宿主菌细胞壁上的肽聚糖 . 用 PCR 技术从结核杆菌 D29 噬菌体基因组中克隆了 gene10 ,并使其在大肠杆菌中得到了高效表达,蛋白质 C 端带有 6×His. 用镍柱亲和纯化了大肠杆菌表达的 gp10 蛋白可溶性部分 . 活性测定表明, gp10 不但具有几丁质酶活性,还具有溶菌酶活性,是一种双功能的酶 . 耻垢杆菌经 gp10 作用后,其生长受到抑制,扫描电镜观察发现部分耻垢杆菌被降解 . 说明与其他种类噬菌体降解细胞壁的方式不同, D29 噬菌体可能利用 gp10 的溶菌酶活性使结核杆菌细胞壁降解 . 这有助于揭示结核杆菌噬菌体与其宿主的相互作用机制,是关于噬菌体几丁质酶的首次报道 .     

植物激素在植物细胞壁扩展中的作用

细胞壁不仅是植物细胞结构的重要组成部分,而且控制着细胞的大小、形状和生长。细胞经有丝分裂后,原生质体吸水膨胀,细胞壁重塑,新生壁物质合成,纤维素定向沉积等引发细胞壁生长。在这些过程中,乙烯（ethylene,ET）、生长素（auxin）、赤霉素（gibberellin,GA）、油菜素甾醇（brassinosteroids,BR）等植物激素调控细胞壁生长相关酶类如纤维素合酶复合体（cellulose synthase A,CESA）、扩展素（expansin,EXP）、木葡聚糖内糖基转移酶／水解酶（xyloglucan endotran glucosylase／hydrolase,XET／XTH）的表达活性,进而调控细胞壁扩展,促使细胞壁的生长。     

《Molecular Plant》文章中文摘要

题目：植物细胞壁基质（matrix）多糖的生物合成（综述） 摘要：伸长中的植物细胞的细胞壁主要由纤维素微纤丝和基质多糖（半纤维素和果胶）以及少量结构蛋白和酶蛋白组成。基质多糖在高尔基体中合成,通过胞吐作用输送到细胞壁,并与纤维素微纤丝相嵌。纤维素微纤丝在细胞膜上合成并直接沉积到细胞壁。已知在生长素诱导的伸长细胞中,高尔基体中存在多糖链合成,然而直到最近才鉴定出合成多糖链酶的相关基因。在基因鉴定研究中,     

反刍动物溶菌酶研究进展

目前,抗生素滥用带来的副作用日益凸显,寻找抗生素的有效替代品显得尤为迫切。溶菌酶能水解细菌细胞壁肽聚糖中的β-1,4糖苷键,具有消化分解细菌、抑制外源微生物生长、增强机体免疫力的作用,在动物尤其是反刍动物体内广泛存在。本文讨论了反刍动物溶菌酶的来源与分布、基因序列、蛋白结构和酶学性质、蛋白功能及活性,对其耐酸分子机理进行了归纳总结;同时阐述了反刍动物溶菌酶基因的进化研究,最后对反刍动物溶菌酶研究进行了展望。研究反刍动物溶菌酶对于基础科学,并应用其转变成现实生产力意义重大。     

蜗牛酶的制备和对酵母细胞壁的作用

1974年本刊第1期曾将蜗牛酶的制备方法做过简单介绍,几年来相继收到许多单位来信或来访索取详细资料,为此我们把有关蜗牛酶的制备方法及该酶对酵母细胞壁的溶解作用等方面的内容刊登出来,供有关科技人员参考。—编者     

真菌原生质体的分离与融合

细胞融合是近年来发展起来的一项微生物育种新技术,它是通过两种亲株的原生质体融合而达到杂交目的的。微生物细胞壁被人工制备的细胞壁溶解酶去除之后,裸露且成为球状的原生质即为原生     

新型大肠杆菌裂解系统在重组蛋白回收中的应用

溶菌酶通过降解细菌细胞壁的肽聚糖裂解细菌,利用此特性,构建温度敏感的内源裂解系统,达到高效释放和回收重组蛋白的目的。构建了温度敏感的Ｔ４溶菌酶基因表达质粒ｐＳＣ－ｌｙｓ（ｐＳＣ１０１复制子）和ｐ１５Ａ－ｌｙｓ（ｐ１５Ａ复制子）,质粒与工程菌构成了新型内源裂解系统,系统可以与高拷贝复制子（如ｐＭＢ１,ＣｏｌＥ１）的重组蛋白表达擀粒兼容。结果表明,裂解系统的量适裂解条件由三个要素构成：ｐＳＣ－ｌｙｓ－     

肺炎链球菌假想的溶菌酶样蛋白的活性分析和鉴定

目的 探索肺炎链球菌中一种假想的溶菌酶样蛋白的活性.方法 生物信息学分析该基因的功能结构域;利用长臂同源PCR对该基因进行敲除,观察D39野生菌和缺陷菌在生物学性状的改变;利用底物PNP-（GIcNAc）和溶壁微球菌,构建过表达载体,绘制生长曲线,对截断和全长蛋白的溶菌酶活性进行鉴定.结果 生物信息学分析结果显示该基因的编码产物为β-1,4-N-乙酰胞壁酸糖苷酶,属于糖基水解酶25家族;野生菌为长链生长,缺陷菌呈短链状;溶菌酶和假想的溶菌酶样蛋白均可使底物释放出游离的对硝基苯酚,A405nm吸光度值分别为1.166和0.792;同时也可使得溶壁微球菌发生溶解;含过表达质粒的肺炎链球菌较之野生菌,溶解较快.结论 假想的溶菌酶样蛋白具有溶菌酶活性,是一种新的溶菌酶.     

异育银鲫c型溶菌酶全长cDNA序列的生物信息学分析及其组织表达分析

利用RACE及克隆等方法获得了异育银鲫（Carassius auratus gibelio）c型溶菌酶基因全长cDNA序列．序列分析表明,所克隆的异育银鲫溶菌酶的cDNA全长751 bp,包括溶菌酶基因开放阅读框（ORF）438 bp,5′ 非编码区（UTR）为109 bp和3′ UTR为204 bp．438 bp ORF共编码146个氨基酸,其成熟肽的分子量预测值为14　543.6,理论等电点为8.86．通过ClustalW软件,将异育银鲫和其它多个物种c型溶菌酶的氨基酸序列进行多序列比对发现,所克隆的异育银鲫溶菌酶编码的氨基酸序列中存在c型溶菌酶的活性中心（Glu53和Asp69）,且与活性位点相邻的氨基酸序列高度保守．同时,8个保守的半胱氨酸残基也与其它物种的c型溶菌酶相一致．结合BLASTN分析的结果,可以确认所获得的异育银鲫溶菌酶cDNA序列属于c型溶菌酶．异育银鲫c型溶菌酶和人c型溶菌酶（pdb 1at6_）在蛋白质序列上有50%相似性,其三维（3-D）结构非常类似．通过氨基酸空间位置比较发现,两者具有类似的酶活中心,异育银鲫c型溶菌酶只能形成3个二硫键,比人少1个．荧光定量RT-PCR检测和溶菌酶活性测定显示,异育银鲫头肾和脾脏c型溶菌酶mRNA的表达量约为肝胰脏的2.9 倍和1.7 倍,异育银鲫头肾和脾脏的溶菌酶活性约为肝胰脏的6.2 倍和4倍．