多管藻R-藻红蛋白的激光光敏作用对体外培养的肿瘤细胞生存率的影响

用１００μｇ／ｍｌ藻红蛋白联合激光处理８１１３人口腔上皮癌细胞,ＭＴＴ比色法测定癌细胞存活率。实验表明,先用藻红蛋白处理再经波长为４８８ｎｍ,２５．６Ｊ／ｃｍ２氩离子激光辐照,细胞存活率为２５％;而单用藻红蛋白,单用激光组分别为４３％和１０７％。结果证明,藻红蛋白的光敏作用对体外培养的肿瘤细胞具有较强的杀伤作用。     

海洋红藻多管藻R—藻红蛋白的体外聚集特性

将海洋红藻R 藻红蛋白 (R PE)吸附到刚揭开的高定向石墨 (HOPG)表面上 ,然后用扫描隧道显微镜 (STM)在纳米尺度上进行直接观察 ,发现纯化的R 藻红蛋白在体外自然聚集时 ,能够“面对面”的聚集在一起 ,形成非常规则的类似藻胆体的杆状结构。将R PE溶于 2 %酒精 /水的混合液中 ,然后滴加于空气 /水界面上 ,具有很好的成膜性能。STM观察结果表明 ,R PE的分子在Langmuir Blodgett膜中的排列方式与其在自然状态下的聚集方式类似 ,圆盘状的R PE分子面对面的聚集在一起形成类似藻胆体的杆状结构 ,这些“杆”状结构进一步聚集在一起形成膜。以上结果表明 ,藻胆蛋白分子在体内以藻胆体的形式存在 ,除了连接肽的作用之外 ,藻胆蛋白自身的结构特性而导致的分子与分子之间的相互作用 ,在藻胆体的组装过程中也起着重要的作用     

R—藻红蛋白三维结构研究

藻类的捕光系统是由棒状的藻胆体构成的,藻胆体又是由藻红蛋白、藻蓝蛋白和变藻蓝蛋白组成的。光能从藻红蛋白传递到藻蓝蛋白,再传递到变藻蓝蛋白,最后传递到光反应中心,其传递效率接近１００％。Ｒ－灌红蛋是藻红蛋白一种,它是多亚基,超大分子量的蛋白色素复合物。为了阐明光能传递的机理,我们使用Ｘ－射线晶体学的方法,对取自多管藻的Ｒ－藻红蛋白的三维结构进行了长期的研究并取得了一系列进展。首先,我们使用多对同晶转     

藻红蛋白光敏剂研究进展

光动力学治疗法作为一种新的肿瘤治疗方法,近年来发展十分迅速。从红藻中提取的藻红蛋白可以作为光动力学治疗法的一种新的光敏剂。本概述了我国红藻藻红蛋白资源概况、光疗法和光敏剂作用机理及其研究发展历史与现状,重点阐述了藻红蛋白光敏剂的应用现状、前景和发展趋势,并认为藻红蛋白是光动力学治疗法中一种非常有前景的光敏剂。藻红蛋白在490nm有吸收光谱,而发射光谱位于560nm;藻红蛋白能特异性地聚集在肿瘤细胞周围,吸收周围环境光能并传递给氧分子,使氧分子转化为具有强氧化性的多线态氧,从而可以大量杀死肿瘤细胞。     

几种海洋红藻中的R—藻红蛋白对胰鸟素抗体的免疫反…

本文利用点免疫结合测定法研究了条斑紫菜,红毛菜,多管藻,海萝和江蓠中两种不同分子量的Ｒ－和ｒ－藻红蛋白（ＰＥ）对胰岛素抗体的免疫反应性。这５种红藻中的Ｒ－藻红蛋白都可用蔗糖密度线性梯度超速离心法,得到分子量不同的两种Ｒ－ＰＥ。它们与胰岛素抗体都发生免疫结合反应,但用反射扫描色谱测定,在抗原量相同的比较实验中,反映它们免疫结合反应的棕色斑点的扫描峰面积有所不同。即它们与胰岛素抗体的结合率不同,其中海     

R-藻红蛋白介导的光敏反应对DNA分子的生物学效应

藻红蛋白(phycoerythrin, PE)是海藻中的重要捕光色素蛋白,具有强荧光性,易溶于水.在藻体内能将捕获的光能传递给光合反应中心; 在体外则能将光能传递给周围环境中的氧分子,产生如单线态氧等活性氧组分,可用来介导光动力效应治疗癌症.将纯化的藻红蛋白加入到瘤细胞培养基中,数小时后,采用488 nm波长的氩离子激光辐照,MTT法检测细胞存活数,计算细胞存活率. ³H-TdR掺入实验观察细胞DNA的合成.结果表明,藻红蛋白介导的光动力反应能够有效地抑制肿瘤细胞DNA合成并杀伤癌细胞.随着藻红蛋白浓度增加,DNA合成下降,瘤细胞存活率降低.将藻红蛋白加入到pUC18质粒溶液中,随之进行激光辐照,琼脂糖电泳结果可见pUC18构象由超螺旋（supercoiled）向带切口的环形构象(relax)转换.结果提示：通过改变或影响DNA构象,抑制细胞DNA合成可能是藻红蛋白介导肿瘤光动力治疗的途径之一.     

两种不同红藻的R—藻红蛋白激发强度相关的皮秒（10^…

本文研究了分别从红藻多管藻和条斑紫菜中提取的两种不同光谱类型的Ｒ－藻红蛋白Ｒ－ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ激发强度相关的皮秒（１０＾－１２秒）荧光衰减动力学过程。结果发现：随激光强增大,单重态－单重态激子湮灭发生（其衰减过程约为６０－８０皮秒）,并引起荧光量子产率下降。这两种Ｒ－藻红蛋白在相同光强激发下,表现出不同的单重态－单重态激子湮灭过程,主要因它们处于激发态的发色团数目不同所致。     

藻蓝蛋白亚基细胞渗透性及对肿瘤细胞光敏作用的研究

目的:研究藻蓝蛋白亚基对SP2/0、S180、COS7、C6的最佳渗透条件及由其介导的PDT对肿瘤细胞的抑制作用。方法:采用柱层析方法从藻蓝蛋白样品中分离得到藻蓝蛋白亚基,通过荧光显微镜观察其在细胞内的渗透特性,并以He-Ne激光器为激发光源,MTT法检测藻蓝蛋白亚基光敏作用对肿瘤细胞生长的抑制作用。结果:藻蓝蛋白α、α/β亚基在75μg/mL浓度下可以在4 h时充分地进入细胞,并可以在细胞内稳定2 h以上;藻蓝蛋白中的α,β亚基稳定性和作用不相同,β亚基荧光性强但易于降解,由α亚基介导的PDT作用比α/βPDT作用强;100μg/mLα亚基介导的PDT对SP2/0和S180两种悬浮细胞的抑制率可分别达到78.6%和39.8%,强于贴壁细胞C6和COS7的29.2%和17.8%。结论:藻蓝蛋白α亚基在合适的渗透条件下表现出较强的光动力学抗肿瘤效果,且PDT效果与光敏剂浓度、照射剂量及细胞类型相关。     

两种藻胆蛋白对人肝癌SMMC-7721细胞的光动力体外杀伤效应

用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定提取自条斑紫菜的R-藻红蛋白(R-PE)和C-藻蓝蛋白(C-PC)经激光介导对人肝癌SMMC-7721细胞的杀伤率,并检测细胞凋亡率。结果显示在120mg/L浓度下,R-PE在氩离子激光器100J/cm2辐照下对应的细胞存活率为27%,C-PC在He-Ne激光器35J/cm2辐照下对应的细胞存活率为47%;单用2种激光器辐照对应的细胞存活率分别为65%和70%;单用2种蛋白处理细胞在72h后出现对细胞生长的显著抑制,最大抑制率分别为31%(R-PE,120mg/L)和27%(C-PC,250mg/L)。120mg/L的2种藻胆蛋白在对应激光辐照下,于照后8h达到细胞凋亡率最大值,分别为31.54%(R-PE)和32.54%(C-PC)。本实验证明条斑紫菜R-PE和C-PC具有可开发成为光敏剂的应用前景。     

红藻条斑紫菜R—藻红蛋白晶体的时间分辩偏振荧光研究

本文在皮秒时域内研究红藻条斑紫菜Ｒ－藻红蛋白单晶在不同晶轴取向下的偏振荧光动力学过程。荧光衰减减表现为二指数过程,即与色素之间的能量传递和激平衡有关的快过程和色素荧光跃迁过程;由于色素间的能量传递,荧光明显退偏振;由于晶体中色素的光学跃迁距取向倾向于沿主晶轴方向分布,在不同的晶轴的取向下各向异性荧光衰减过程明显不同。     

R-藻红蛋白的结构、功能及其应用

R-藻红蛋白是最重要类型的藻红蛋白,为许多藻类的前级捕光色素蛋白,在光的激发下,能发出桔红色荧光。现对R-藻红蛋白的三维结构与功能的关系、R-藻红蛋白离体的光学活性在肿瘤光动力学治疗(PDT)中作为光敏剂和荧光免疫检测等领域作为荧光探针分子的应用进行综述。     

藻红蛋白介导光动力治疗的光化学机制研究

为探讨藻红蛋白介导的光动力治疗的光化学机制,观察藻红蛋白浓度和活性氧抑制剂对藻红蛋白光漂白作用的影响,研究藻红蛋白介导的光敏反应产生活性氧分子的途径和影响因素。表明：藻红蛋白浓度太高会降低光动力的效率,其活性氧产生的机制为Ⅰ和Ⅱ型,用Ⅰ型反应抑制使反应向Ⅱ型方向转变,产生更多的单线态氧,可显著提高光动力效率。     

用膨化柱填料的方法从红藻中规模分离纯化R—藻红蛋白

以Phenyl-sepharose作为柱填料,用streamline柱层析技术从红藻（Palmaria palmata(Lannaeus)Kuntze）中规模分离捕光色素蛋白-R-藻红蛋白。由于不是传统的从层析柱上方进样,而是用泵将样品从streamline层析柱的下方加样（从下至上）,因而解决了用一般层析柱分离R-藻红蛋白时海藻抽提液中大量的粘性多糖堵塞层析柱的难题。用P.palmata粗提液上样后,分别用0.2mol/L、0.1mol/L和0.05mol/L的（NH4）2SO4溶液从相反的方向（即从上到下）洗脱层析柱,发现这些洗脱液中的藻红蛋白纯度已经较高。然后将洗脱液透析去盐,用阴离子交换柱层析（Q-sepharose）进一步纯化。经过这两次柱层析后,R-藻红蛋白的纯度（OD565/OD280）超过3.5,高于一般认可的R-藻红蛋白的纯度标准3.2;产率为每克冷冻P.palmata可纯化0.122mg高纯度的R-藻红蛋白,比使用一般分离方法的产率要高10倍,这些结果表明,使用本报道的方法纯化藻红蛋白,将会使作为生化检测试剂的藻红蛋白市场价格大幅度下降。     

藻红蛋白亚基光敏剂对小鼠移植瘤作用的超微结构研究

目的：从形态学角度探讨藻红蛋白(R-PE)β亚基光动力学抗肿瘤效果及其作用机理。方法：用不同密度的波长为496nm的氩离子激光对S180小鼠移植瘤进行β亚基光动力学治疗,并对治疗后的瘤体进行透射电镜的形态学观察。结果：用100μg／m1的β亚基,在200J/cm2激光照射剂量条件下治愈了瘤体直径为0．5cm-0．7cm大小的小鼠移植瘤,发现瘤组织中引起细胞死亡的途经有差异,被PDT抑制的肿瘤内部细胞表现出典型的凋亡细胞特征。结论：R-PE β亚基具较强的光动力学抗肿瘤效果,光动力治疗机理可能涉及肿瘤内部细胞死亡主要是凋亡途径而瘤周为坏死,且与血管系统破坏及白细胞参与的抗炎症反应相关。     

条斑紫菜中R－藻红蛋白的生化特性

条斑紫菜的Ｒ－藻红蛋白（Ｒ－ＰＥ）,在ＣＭ－５２柱上用含８ｍｏｌ／Ｌ脲的０．０２ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵缓冲液（ｐＨ＝５．０５）洗脱,观察到３条色带,经吸收光谱测定表明,它们分别是α、β、γ亚基。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定的α、β和γ亚基分子量分别是１７．０ｋｄ,１８．０ｋｄ和３１．７ｋｄ。Ｒ－ＰＥ中亚基的摩尔比是６α：６β：１γ。条斑紫菜的Ｒ－ＰＥ最稳定的聚集态分子量是２２９ｋｄ。各亚基的发色团含量：α亚基含２个藻红胆素（ＰＥＢ）,β亚基含１个ＰＥＢ和０．５个藻尿胆素（ＰＵＢ）,γ亚基含２个ＰＥＢ和３个ＰＵＢ。结合Ｒ－ＰＥ和各亚基的氨基酸组成分析,条斑紫菜的Ｒ－ＰＥ亚基组成是（αβ）６γ。     

藻蓝蛋白复合物对酒精性肝损伤的保护作用

本文对藻蓝蛋白复合物保护化学性肝损伤的功效学进行了研究.以Wistar大鼠建立酒精性肝损伤模型,将藻蓝蛋白复合物分为高、中、低三个剂量组,以联苯双酯作为阳性对照组,灌胃给药42 d,分别测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(CSH)、肝匀浆丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量,并对肝脏切片进行病理检查.结果表明:藻蓝蛋白复合物对血清ALT、AST具有显著的抑制作用,显著拮抗肝脏MDA的升高,显著提高肝脏GSH-Px含量.出现肝细胞浊肿、脂肪变性、点状坏死的大鼠数目极少.从而表明藻蓝蛋白复合物具有显著的保护酒精性肝损伤的功效.     

8—MOP对体外培养人癌细胞的光敏灭活作用

本文根据MTT只能被活的增殖细胞中线粒体切断形成紫色甲(?)的原理,测定了8—甲氧基补骨脂素(8—MOP)对体外培养人癌细胞系HCT、KB和BEL细胞的光敏灭活作用。结果表明,8—MOP和UVA光照对这几种人癌细胞有肯定的灭活作用,该作用与8—MOP剂量和光照时间以及细胞种类有关;MTT法可以作为光敏剂活性检测的一种快捷方法。