从土壤中提取DNA方法比较

设计并比较了3种直接从土壤中提取DNA的方法。试验结果表明:3种方法都可以从土壤中提取到分子量大于23.13 kb的DNA的片段,每克干土DNA的提取量为2.5~31μg,不同方法间在DNA产量、纯度等方面存在较大差异。     

小麦叶片中Na,K提取方法的比较

Comperis0n0fExtrattiveMeh0dsofNaandKinWhodbovesWAN0Ba0-Shan,ZHA0Ke-Fu(boofhobo,WeforLbo~,Jbo2500l4)在植物抗盐和营养生理研究中,经常需要测定组织中Na、K等无机离子。无机离子的测定通常使用原子吸收光谱法。但是,如何从植物组织中提取Na、K等离子,不同的研究者使用的方法不同,总计不下十几种［1～8］。这些方法所用的提取介质不同,提取时间各异,是否会导致实验结果不同,尚无人研究。另一方面这些方法操作的难易程度相差悬殊,时间从几分钟到几天,实验费用不等。因此,能否找出一种简便快速、准确可靠且又经济的…     

胡椒叶片基因组DNA提取方法比较

目的：研究建立胡椒叶片中提取高质量DNA的方法。方法：采用各种CTAB法和SDS法的改良方法,提取胡椒叶片中的总DNA,并对DNA进行紫外和电泳检测。结果：改良CTAB法4和5提取的DNA经电泳检测,有一条明亮主带,且无拖尾现象,样品槽无荧光出现,说明抽出的DNA纯度较高,一致性好;测定其OD260和OD280值,并计算其比值,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,提取率在51.667-60.000μg/g之间,获得的基因组DNA质量高。结论：改良CTAB法4和法5可从胡椒幼叶中提取高质量DNA。     

一种从苏铁叶片中有效提取RNA的方法

由于苏铁（ Cycas revoluta） 叶片中含有大量的多糖多酚等次生代谢物, 常规RNA 提取方法很难获得优质的RNA。在常规的CTAB 法中加入了硼砂和β- 巯基乙醇来消除多酚和多糖的干扰, 得到了一个从苏铁叶片中有效提取RNA 的方法, 每克鲜叶片可获得约930μg RNA。A260 280 和A260 230 的纳米波长的吸收比值都约为2 , 表明RNA 的质量较好。获得的RNA 可用于Northern blot 和反转录PCR 等分析, 也说明RNA 的质量比较好。此外, 改进的提取方法也适合于含有次生代谢产物的其它植物, 同样可以获得优质RNA。     

巨桉叶片总RNA提取方法比较

本研究以巨桉嫩叶为材料,通过试剂盒法、改良CTAB法和改良SDS法,进行巨桉嫩叶总RNA提取方法的比较试验,探讨适合巨桉嫩叶总RNA提取的方法。通过超微量分光光度计、凝胶电泳和RT-PCR对总RNA提取质量进行检验,结果表明:改良CTAB和改良SDS法均能获得高质量的总RNA,条带清晰,纯度高,效果稳定,均适用于桉树叶片总RNA提取。     

茶树叶片总RNA提取方法的比较研究

针对茶树叶片中富含多酚类物质的特点,以陕西地方茶树代表种质紫阳槠叶种的叶片为材料,比较了Trizol法、异硫氰酸胍法和改良SDS-酸酚法三种不同的总RNA提取方法。结果表明改良SDS-酸酚法能够从新鲜叶片、冷冻叶片和干燥叶片中提取到质量高、完整性好的总RNA,经检测28SrRNA亮度为18SrRNA的2倍,A260/A280值介于1.83～2.01之间。以鲜叶、冻叶和干燥叶片的总RNA为材料,进一步用于DDRT-PCR分析,均可获得清晰稳定的多态性结果。说明改良的SDS-酸酚法能抑制茶树叶片中多酚类物质对总RNA提取的影响,是一种适于茶树叶片总RNA提取的有效方法。     

从棉花种子中提取ATP的最佳条件探讨

本文专就棉花种子产中ATP的提取和测定的最佳条件进行探讨。材料为棉花“中棉12”品种,ATP的提取和测定按王维光等人的方法(植物生理学通讯1986[5]:54),测定仪器为FG-300型发光光度计(中科院上海植物生理所生产)。我们的经验是: 1 提取液以沸重蒸水(内含2 mmol/LMgSO_4)为好,效果优于20mmol/LpH 7.6     

两种从土壤中提取DNA方法的比较

为土壤微生物多样性研究选取理想的DNA提取方法,该文比较了直接法和间接法从土壤中提取微生物总DNA的效果。结果表明：直接法提取量大,每克土壤提取到DNA约10．26μg,而间接法仅提取到0．55μg,直接法DNA提取量约为间接法的19倍。直接法得到的DNA包含细菌种群较间接法丰富,DGGE分析结果显示,二者的条带数分别为35条和28条,占检测条带总数的92．1%和78．9%。间接法提取到DNA纯度较直接法高,不需纯化即可用于PCR扩增和BamHⅠ酶切反应。     

柑橘叶片总RNA的两种提取方法比较

为了简便、快速提取高质量的柑橘(Citrus reticulata Banco)叶片总RNA,采用TRlzol法,对北京天根公司RNAplant Reagent和日本TaKaRa公司RNAiso Reagent两种RNA提取试剂进行比较并适当改进.结果表明:通过琼脂糖凝胶电泳,使用TaKaRa公司试剂提取的总RNA28S和18S条带清晰,紫外分光光度计检测分析A260/A280为1,820,A260,A230为2.088,RNA的浓度为2.840 μg μl-1,用于RT-PCR反应可成功克隆柑橘β-actin看家基因228 bp片段;采用天根公司试剂,琼脂糖凝胶电泳显示RNA带型较模糊,紫外分光光度计检测分析A260/A280为1.464,A260/A230为1.603,RNA的浓度为2.020 μg μl-1,达不到RNA的标准.TaKaRa公司RNAiso Reagent试剂提取的柑橘叶RNA纯度和完整性较好,能用于Northern杂交、cDNA文库的建立及基因克隆等分子生物学实验,为柑橘的进一步分子生物学研究奠定了基础.     

红树植物叶片总RNA提取方法比较与优化

分别采用三种植物RNA提取试剂盒、改良的CTAB-LiCl法和CTAB-异丙醇法五种方法提取四种红树植物叶片总RNA,并用紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳、cDNA合成和real-time PCR等手段对提取效果进行鉴定.反复试验表明:五种方法对白骨壤Aricennia marina叶片总RNA提取均有良好的效果.Tiangen RNA提取试剂能够成功提取秋茄Kandelia candel、桐花树Aegiceras corniculatum、白骨壤的总RNA,提取的木榄Bruguiera gymnorrhiza总RNA浓度低、杂质较多,且稳定性较差,在对该方法改良后则能够成功提取木榄的总RNA.Invitrogen试剂盒对木榄和秋茄叶片均有良好的提取效果,但是对桐花树提取的RNA易受到蛋白的污染.CTAB-LiCl法和CTAB-异丙醇法提取的RNA总产量偏低,提取时间较长,且实时定量结果表明,两种方法反转录效率较试剂盒方法也偏低.     

顽拗植物澳洲坚果成熟叶片DNA提取方法比较

目的:针对澳洲坚果成熟叶片中富含多糖、多酚等杂质的特点,建立澳洲坚果成熟叶片中提取高质量 DNA 的方法.方法:采用改良CTAB法和改良SDS法提取澳洲坚果样品的总DNA,并对产物进行紫外、电泳及PCR扩增检测.结果:改良CrAB法的平均产率为13.6μg/g,略低于改良SDS法18.5μg/g,但改良CTAB法可有效去除多糖等杂质,获得的基因组DNA质量高.OD260/OD280均在1.7～1.9之间.进行ISSR扩增可获得清晰、多态性好的条带.结论:改良CrAB法较之改良SDS法更适合于从澳洲坚果成熟叶片中提取高质量DNA.     

泡桐叶片蛋白质提取方法的研究

２４个提取泡桐叶片蛋白质组合的试验结果表明,用ＵＫＣ（９．５ｍｏｌ／Ｌ尿素,５ｍｍｏｌ／ＬＫ２ＣＯ３,１．２５％ＣＴＡＢ,０．５％二硫苏糖醇,２％两性载体电解质ｐＨ３．５～１０,５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００）提取由１０％冷（－４０℃）三氯醋酸（丙酮配制,内含０．０７％的巯基乙醇）处理的泡桐叶片干粉提取出的蛋白质总量和种类最多。这表明该方法可用于泡桐叶片蛋白质的提取。     

土壤样品中DNA提取方法的比较

对土壤样品中提取DNA方法的有效性进行了比较研究。如果以细胞有效裂解和DNA产率为标准,用冻融进行预处理再结合SDS和溶菌酶的化学裂解方法,是效果最佳的DNA抽提方法,细胞裂解率为82%,DNA产率达20.8μg/g。为了去除PCR抑制物,将DNA样品进一步用柱纯化,回收率为80%。纯化后的DNA样品可用于16SrDNA扩增及其他分子操作。     

发酵液中曲酸的提取方法比较

190 7年斋滕在蒸米发酵物中发现曲酸(Ｋｏｊｉｃａｃｉｄ)。 1 92 4年 ,薮田测定了曲酸的结构[1,2 ] ,化学名称为 5 -羟基——— 2 -羟甲基- 1 ,4吡喃酮 ,相对分子质量 1 42 .1。曲酸具有抑菌能力、抗氧化性、与金属离子螯合作用等性质 ,因此在食品中可作为防腐剂、保鲜剂、护色剂 ;曲酸具有抑制黑色素生成酶———酪氨酸酶活性的功能 ,有显著的增白作用 ,现已在美白化妆品、浴剂及牙膏等日化工业中应用[2 ,3] ;它还可作为香料合成的中间体 ,故此国内外近来对曲酸开展了广泛的研究。目前 ,采用发酵法生产曲酸的方法较多 ,对发酵液中曲酸的提…     

泡桐叶片蛋白质提取方法的研究

24个提取泡桐叶片蛋白质组合的试验结果表明,用UKC(9.5 mol／L尿素,5 mmol／L K2CO3,1.25％ CTAB,0.5％二硫苏糖醇,2％两性载体电解质pH3.5～10,5％ Triton X-100)提取由10％冷(-40℃)三氯醋酸(丙酮配制,内含0.07％的巯基乙醇)处理的泡桐叶片干粉提取出的蛋白质总量和种类最多。这表明该方法可用于泡桐叶片蛋白质的提取。     

直接从土壤中提取DNA的方法

研究微生物的多样性 ,即微生物的种类和数量的多少是评价土壤质量的重要指标。由于土壤微生物种类繁多 ,数量巨大 ,加上土壤中 99%的种类难以通过传统的平板分离技术来进行培养[1],人们必须借助其他技术来解决。近年发展的非培养技术 ,如ＢＩＯＬＯＧ微量板分析技术[2 ]、细胞壁磷脂酸分析技术[3]和分子生物学方法[4 - 6 ],克服了培养的环节 ,对微生物生态学研究产生极大的推动作用。其中分子生物学是应用最广、最有发展潜力的技术。它的主要步骤是通过直接提取土壤中的ＤＮＡ ,经纯化处理后 ,利用合适的引物扩增 1 6ＳｒＲＮＡ基因 ,通过分…     

ATP酶组织化学染色孵育方法比较

目的比较经典的ATP酶组织化学染色法中几种孵育方法优缺点,以用于临床诊断中肌纤维分型研究和肌肉疾病病理诊断。方法新鲜的肌肉组织用异戊烷-液氮冷冻,冰冻切片厚度7μm,组织化学染色采用ATP酶滴染法和浸染法两种,采用的两种孵育条件分别为37℃恒温箱(120~180)min和4℃冰箱过夜。结果 4℃过夜滴染的染色效果比37℃滴染的效果好;37℃浸染比4℃过夜浸染效果好。浸染过夜虽然容易有沉淀,但是使用前过滤ATP酶孵育液,染色效果仍然好。结论各种方法和实验条件的改变导致染色结果的不同,临床工作者可根据实际情况,在减少人力和试剂成本前提下,选择使用不同的ATP酶组织化学染色技术,使其得到更广泛的应用。     

利用不同方法从深加工牦牛肉产品中提取基因组DNA效果的比较

为了从深加工牦牛肉产品中获得片段较大、数量较多的基因组DNA,以用于分子追溯的检测,尝试并系统地比较了异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法的提取效果。通过定量分析、凝胶电泳和PCR片段大小梯度扩增等手段,对利用3种方法提取的基因组DNA的数量和质量进行了比较。结果显示,利用酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA质量不佳,异硫氰酸胍法和试剂盒提取法的提取效果相当,PCR可以扩增出730 bp左右的核外基因细胞色素b,而核内基因只能扩增出300bp左右的核基因DNA片段(内乳铁蛋白基因,271 bp;BoLA-DRB3基因,302 bp)。综合考虑提取时间、费用、数量和质量等各方面的因素,认为异硫氰酸胍法操作简便、快速、廉价、有效,是较好的从动物深加工肉产品中提取基因组DNA的方法。     

胡杨叶片表面角质提取方法的建立

以内蒙古额济纳地区的胡杨叶片为材料,建立了一种从角质层较厚的植物叶片中分离提取角质成分的方法。该方法能够最大限度除去胡杨叶片上的蜡质及其他脂类杂质成分干扰,结果准确,产率高,得到的角质可以直接用于气谱、质谱仪进行含量和成分的鉴定分析。