不同强度电针刺激对失眠大鼠下丘脑orexinA的影响研究

目的 探讨电针对失眠大鼠下丘脑食欲素A（orexinA）的影响及不同强度电针对orexinA的效应差异。方法将SD大鼠随机分为正常对照组（normalcontrol,NC）、失眠模型组（insomniamodel,IM）、强刺激电针组（strongstimulativeeleetroacupuncture,SSEA）、弱刺激电针组（weakstimulativeelectroacupuncture,WSEA）。除正常对照组外,其余各组大鼠均用对氯苯丙氨酸（PCPA）建立大鼠失眠模型,选穴“百会”、“足三里”、“三阴交”,并用不同强度电针治疗。5d后,用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测下丘脑orexinAmRNA表达,采用免疫组织化学技术观察下丘脑orexinA阳性神经元表达。结果与正常对照组比较,失眠模型组大鼠下丘脑orexinAmRNA表达显著升高（P〈0．01）,orexinA阳性神经元染色较深,且表达量较多;与失眠模型组相比,两电针组大鼠下丘脑orexinAmRNA表达明显下降（P〈0．01）,orexi—nA阳性神经元染色较浅,表达量较少,强刺激电针组作用更为明显。结论电针可以改善失眠大鼠下丘脑异常增多的orexinA,调节睡眠-觉醒周期,且强刺激电针组效果较好。     

电针对帕金森病模型大鼠腹侧被盖区TH和nNOS表达的影响

目的观察不同频率电针对帕金森病（PD）模型大鼠腹侧被盖区（VTA）酪氨酸羟化酶（TH）和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）表达的影响。方法将30只SD大鼠,随机分为5组：正常对照组,假手术组、模型组,PD模型低频电针组和高频电针组。采用右侧纹状体内注射6-羟基多巴胺（6～OHDA）制备PD模型,取合谷和太冲穴,分别给予低频（2Hz）和高频（100Hz）电针治疗。免疫组织化学方法观察VTA的TH和nNOS表达。结果与正常对照组相比,PD模型大鼠vTA的TH表达减少、nNOS表达增加,高频电针可增加其TH表达和降低nNOS表达,低频电针对其没有影响。结论高频电针治疗PD的机制之一可能是通过降低PD模型大鼠VTAnNOS表达,从而减少因NO的产生引起的TH标记的DA能神经元的死亡。     

电针对氯胺酮成瘾大鼠内侧前额叶皮质酪氨酸羟化酶表达的影响

目的观察不同时辰电针“足三里”和“三阴交”穴对氯胺酮成瘾大鼠内侧前额叶皮质（mPFC）酪氨酸羟化酶（TH）表达的影响,探讨电针治疗氯胺酮滥用成瘾的作用机制。方法将56只SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水对照组、模型组、电针治疗组,电针治疗组再分为子时（23：00）、卯时（05：00）、午时（11：00）、酉时（17：00）4个电针组,每组8只。每天1次经腹腔注射氯胺酮复制氯胺酮成瘾模型,不同时辰电针组在给药7d后分别选取一侧“足三里”和“三阴交”穴给予低频（2Hz）电针治疗,每次30min,连续治疗7d。采用免疫组织化学染色方法检测mPFC内TH的表达。结果与正常对照组和生理盐水对照组相比较,模型组mPFC内TH免疫反应阳性神经元的数量明显增多（P〈0．01）,细胞平均灰度值降低（P〈0．01）,与模型组相比较,午时、酉时电针组TH免疫反应阳性神经元的数量明显减少（P〈0．01）,细胞平均灰度值升高（P〈0．01）;子时、卯时电针组则无明显变化（P〉0．05）。结论氯胺酮成瘾使mPFC内TH的表达明显增加;午时、酉时电针“足三里”和“三阴交”穴可明显下调mPFC内TH的表达,改善氯胺酮成瘾症状。     

电针足三里穴对糖尿病胃轻瘫大鼠延髓多巴胺能神经元和 星形胶质细胞活性的影响

目的:研究电针足三里穴对糖尿病胃轻瘫大鼠延髓多巴胺能神经元内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和星形胶质细胞内胶质原纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)表达的影响。方法:32只实验大鼠分为空白对照(空白)组、糖尿病胃轻瘫模型(模型)组、模型组+电针足三里穴(足三里)组和模型组+电针非经非穴(非经非穴)组(每组8只)。模型制备采用腹腔注射5%四氧嘧啶和熟地灌胃诱导的方法。实验3周后取大鼠延髓进行抗TH和抗GFAP的单一和双重免疫组化染色,观察并记数TH和GFAP在延髓内的表达。结果:与空白组比较,各实验组TH阳性多巴胺能神经元和GFAP阳性星形胶质细胞集中表达于延髓迷走孤束复合体内,有明显的定位特点;高倍镜下观察到TH阳性神经元周围有大量GFAP阳性星形胶质细胞包绕。各组TH和GFAP表达以模型组最高;而足三里组TH阳性多巴胺能神经元数量明显减少(31.3±4.4→16.8±3.2),GFAP阳性产物表达明显降低(113.8±7.6→95.4±8.4),且它们之间有统计学意义(P<0.01);非经非穴组与模型组之间差异没有统计学意义。结论:针刺调节糖尿病胃运动功能障碍大鼠与其调控延髓多巴胺能神经元及其周围的星形胶质细胞功能活动有关。     

电针联合天麻多糖对脑缺血大鼠海马CA3区Nesin、BDNF表达的影响 缪化春

目的 观察电针联合天麻多糖对脑缺血大鼠海马CA3区巢蛋白（Nestin）和脑源性神经营养因子（brain derivedneurotrophic factor,BDNF）表达的影响.方法 将40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组、天麻多糖组和针药结合组,每组8只.以单侧大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型.造模后2w,天麻多糖组和针药结合组大鼠给予天麻多糖100mg/kg灌胃,每天1次,连续2w;电针组和针药结合组大鼠给予“百会”“足三里”穴电针刺激,持续30 min,每天1次,连续2w.采用免疫组织化学染色法结合图像分析检测海马CA3区Nestin和BDNF的表达.结果 与正常对照组比较,模型组缺血侧海马CA3区Nestin和BDNF阳性表达增加（P＜0.05）;与模型组比较,电针组、天麻多糖组和针药结合组缺血侧海马CA3区Nestin和BDNF阳性表达显著增加（P＜0.05）;针药结合组阳性表达显著多于电针组或天麻多糖组（P＜0.05）.结论 电针与天麻多糖结合可显著增加脑缺血大鼠缺血侧海马CA3区Nestin和BDNF的表达,促进内源性神经干细胞激活,且作用优于单用电针或天麻多糖.     

眼镜蛇毒对大鼠脊髓乙酰胆碱酯酶表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠腰髓乙酰胆碱酯酶（AchE）表达的影响。方法 将蛇毒注射到大鼠左小腿下部,采用亚铁氰化铜法示AchE,观察大鼠腰髓前角AchE阳性神经元在眼镜蛇毒中毒组、生理盐水组、正常对照组的变化。结果 蛇毒组大鼠AchE阳性神经元比对照组表达增强。结论 眼镜蛇毒对腰髓的AchE阳性神经元表达有上调作用。     

灵芝多糖对AD模型大鼠海马组织Caspase-3和FasL表达的影响

目的研究灵芝多糖（GLP）对阿尔茨海默病（AD）大鼠海马组织半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白静3（caspase-3）和FasL基因以及空间学习记忆能力的影响。方法双侧海马内一次性注射淀粉样多肽25-35片段（Aβ25—35）制作大鼠AD模型,治疗组24h后腹腔注射灵芝多糖水溶液,1周后进行Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力变化。采用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链式反应法（RT-PCR）分别检测大鼠海马组织caspase-3蛋白的表达量和FasL基因的表达,以及灵芝多糖对上述各指标的影响。结果灵芝多糖能明显改善AD模型大鼠低下的空间学习记忆能力。显著降低模型大鼠海马组织caspase-3和FasL的表达,而且灵芝多糖能明显改善模型大鼠脑组织海马CAI区神经元的退行性变化。结论灵芝多糖能降低海马组织内FasL和caspase-3表达量,改善海马CAI区神经元的退行性变化。对老年性痴呆大鼠学习记忆能力可能有增强和提高作用。     

扬子鳄纹状体AChE、SOMmRNA阳性神经元的分布

目的 观察扬子鳄纹状体内乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）和生长抑素信使核糖核酸（somatostatin messenger ribonucleic acid,SOMmRNA）阳性神经元的形态和分布.方法 采用亚铁氰化酮法和原位杂交法观察扬子鳄纹状体内AChE和SOMmRNA阳性神经元的分布和特征.结果 扬子鳄纹状体内有AChE和SOMmRNA阳性神经元分布,两种神经元均有大、中、小型细胞,以中、小型细胞为主,神经元胞体呈圆形、椭圆形、三角形、梭形和多角形.结论 扬子鳄纹状体内有AChE和SOMmRNA阳性神经元分布.     

纳洛酮和阿托品翻转电针抑制关节炎大鼠束旁核神经元伤害性反应的作用

用急性佐剂性关节炎大鼠作为病理性疼痛的实验模型,以丘脑束旁核中对伤害性刺激发生兴奋反应的单位放电作为指标,观察电针的影响,并分析其机制。实验发现电针能明显抑制伤害性反应;脑室注射阿片受体阻断剂纳洛酮（４μｇ／１０μｌ）或Ｍ受体阻断剂阿托品（５μｇ／１０μｌ）均能翻转电针的这种抑制作用。实验还发现脑室注射纳洛酮或阿托品对关节炎大鼠束旁核神经元自发放电有增频作用。实验结果提示：电针对关节炎大鼠丘脑束旁核神经元伤害性反应的抑制,可能是通过脑内阿片系统和胆碱能系统而发挥作用的;这两个系统对关节炎大鼠丘脑束旁核神经元自发放电可能有紧张性抑制作用。     

电针对去卵巢大鼠学习记忆能力及海马神经元型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的研究电针对去卵巢大鼠学习记忆能力及海马神经元型一氧化氮合酶（nNOS）mRNA表达的影响。方法采用卵巢切除大鼠模型,造成低雌激素记忆障碍,去势2周后进行电针刺激,连续治疗3个月。Morris水迷宫测试空间学习记忆能力,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测血清雌二醇（E2）浓度,实时荧光定量PCR检测检测nNOSmRNA的相对表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期时间明显延长,跨越平台次数明显减少,血清E2浓度和海马nNOSmR—NA表达显著降低（P〈O．01）;与模型组比较,电针组和假电针组治疗后逃避潜伏期缩短,跨越平台次数增加,血清E2浓度和海马nNOSmRNA表达均显著升高,电针组升高更明显（P〈O．01）。结论电针能够提高去卵巢大鼠学习记忆能力,其机制可能与升高体内雌激素浓度上调海马nNOSmRNA的表达有关。     

大鼠背根神经节细胞—氧化氮合酶与乙酰胆碱酯酶共存的组织化学研究

用还原型尼克项胺腺嘌呤二核苷磷酸黄递酶反应,结合乙酸胆碱酯酶组织化学技术,观察了SD大鼠背根神经节,发现背根神经节内存在有四种不同显色的神经元。（1）AChE阳性神经元（8％）。（2）NADPH－d阳性神经元（2％）。（3）NADPH－d与AChE双显色神经元（90％）。（4）少数两种酶反应均为阴性神经元。其中双显色神经元胞质内含有蓝色和棕色两种颗粒。这证明背根节内存在许多NADPH－d与AChE共存的神经元。提示了背根节内NADPH－d与AChE双染神经元可能与痛感知的传递有关。     

大白鼠脊髓、脑干和海马乙酰胆碱脂酶活性的研究

采用乙酰胆碱酯酶（AChE）组织化学方法,观察了大白鼠脊髓、脑干和海马等脑区AChE阳性神经元的活性。结果显示：（1）脊髓;脊髓前角、后角神经元AChE均为中等阳性（＋＋）,脊髓中间外侧核AChE呈强阳性（＋＋＋）。（2）脑干：延髓中的三叉神经脊束核、舌下神经核AChE均呈强阳性（＋＋＋）,中缝大核AChE呈中等阳性（＋＋）;脑桥的蓝斑核AChE呈强阳性（＋＋＋）,而三叉神经中脑核等核团AChE呈中等阳性（＋＋）;中脑的非脑神经核团红核、黑质AChE呈阳性（＋）或中等阳性（＋＋）,脑神经核团动眼神经核和动眼神经副交感核AChE呈强阳性（＋＋＋）。（3）海马：海马CA3区AChE为强阳性（＋＋＋）,CA2和CA1区为中等阳性（＋＋）,本实验表明AChE阳性神经元广泛分布于中枢神经系统不同脑区,为进一步探讨ACh在中枢神经系统中的作用提供了形态学资料。     

β-细辛醚对AD大鼠海马神经元蛋白质组图谱的影响

目的：探讨β-细辛醚对痴呆大鼠海马神经元蛋白质表达谱的影响。方法：SD大鼠随机分为正常时照组、模型组和β-细辛醚治疗组。模型组和β-细辛醚治疗组大鼠行脑立体定位注射术,模型组从大鼠右侧海马注入β淀粉样蛋白（Aβ1-40）5μg;治疗组：将Aβ1-40和β-细辛醚（0.12%）混合后注入大鼠右侧海马。抽提各组大鼠海马神经元组织蛋白质,行双向电泳,采用PDQuest-7.1.1分析软件解析各组之间有明显差异表达的蛋白质。结果：β-细辛醚治疗组α-烯醇化酶（α-enolase）、钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶（Ca^2＋/Calmodulin-dependent protein kinase）的表达高于模型组,而尿激酶型纤溶酶原激活物（urokillasc plasminogen activator surface）、P53抑癌基因（P53 tumor suppressor）和未知蛋白（SSP6001）表达则低于模型组。结论：β-细辛醚可能通过上调或下调上述蛋白质的表达,参与促进大鼠海马受损神经元保护作用。     

银杏内酯对胚基底前脑NOS、AChE阳性神经元发育的影响

目的 探讨银杏内酯对胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育的影响。方法 实验分成银杏组,NGF组,BDNF组和单纯对照组。取孕17dSD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于96孔培养板和2块24孔培养板中,分别加入含银杏内酯,NGF,BDNF及不含上述成份的DMEM培养液,于体外培养18d后,96孔培养板行MTT比色分析测定光吸收值（OD值）,以检测培养的神经元活力,2块24孔培养板分别行NADPH-d和AChE组化染色,显微镜下计数各组每了忆中的NOS和AChE阳性神经元数,并用CMM-301图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理。数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理。结果 银杏组MTT比色分析的OD值和NOS,AChE阳性神经元数,细胞面积,细胞周长等指标均明显地好于单纯对照组,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。结论 银杏内酯在促进胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育方面具有类似NGF和BDNF的作用。     

MEK抑制剂抑制吗啡依赖及戒断大鼠脊髓神经元NOS的表达

目的：观察鞘内注射丝裂原活化蛋白激酶抑制剂U0126对吗啡依赖及戒断大鼠戒断症状和痛敏行为以及脊髓神经元NOS表达的影响。方法：采用吗啡依赖及戒断模型,分为正常对照组、依赖组、戒断组（戒断1h）、U0126组,分别作行为学评分（n=8）、免疫组织化学（n=6）和免疫印迹检测（n=4）。结果：①鞘内注射U0126可明显减轻吗啡依赖大鼠戒断症状,戒断组戒断症状评分为28．6±4．89,U0126组为22．5±4．09（P〈0．05）;戒断组TEA评分为13．5±2．55,U0126组为10．0±2．76（P〈0．05）;②鞘内注射U0126可明显减少L5节段脊髓背角Fos阳性神经元的数目,U0126组为287±54,低于戒断组（380±71,P〈0．05）;③U0126组nNOS和iNOS阳性神经元的数目分别为180±32、10．8±2．8,均低于戒断组（239±45,16．8±5．1,P〈0．05）,两给药组脊髓NOS蛋白的表达也显著减少。结论：MEK抑制剂能减轻吗啡依赖及戒断大鼠的戒断症状和在脊髓水平抑制NOS的表达,表明ERK可能参与调控NOS的表达。     

鞘内注射U0126对吗啡戒断大鼠脊髓神经元磷酸化CREB表达的影响

目的：研究鞘内注射细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂U0126对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断反应、脊髓磷酸化cAMP反应元件结合蛋白（p-CREB）表达的影响。方法：建立大鼠吗啡依赖和戒断模型,分为正常对照组、吗啡依赖组、吗啡戒断组、U0126组、溶媒（DMSO）组,采用行为学（n=8）、免疫组织化学（n=6）和Western blot（n=4）方法观察鞘内应用U0126对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断反应、脊髓p-CREB表达的影响。结果：①鞘内注射u0126可明显减轻吗啡依赖大鼠戒断症状,戒断组戒断症状评分为28．6±4．89,U0126组为22．5±4．09（P〈0．05）;戒断组促诱发痛评分（TEAscore）为13．5±2．55,U0126组为10．0±2．76（P〈0．05）。②鞘内注射U0126可明显减少胸腰段脊髓背角p-CREB阳性神经元的数目,U0126组为287±54,低于戒断组（380±71,P〈0．05）。 ③westem blot结果显示：鞘内注射U0126明显抑制吗啡戒断期间脊髓p-CREB表达的增加。结论：鞘内注射U0126能明显抑制吗啡戒断大鼠脊髓神经元p-CREB的表达。     

脊髓5-HT受体参与电针内关穴对大鼠心脏伤害性感受的调控

目的：观察脊髓水平5-羟色胺（5-HT）受体参与电针（EA）内关穴对大鼠心包内注射缓激肽（BK）诱发心脏伤害性感受的调控作用。方法：雄性SD大鼠随机分为5组：缓激肽（BK）组、BK+EA组、BK+麦角新碱（Methysergide）组、BK+EA+Methysergide组、BK+EA+溶媒（Vehicle）组,每组8只。各组大鼠均行心包内插管,BK组心包内间隔40 min注射0.2 ml BK共3次;BK+EA组心包内注射0.2 ml BK联合电针双侧内关穴;BK+Methysergide组心包内注射0.2 ml BK联合鞘内注射10 μl Methysergide;BK+EA+Methysergide组心包内注射0.2 ml BK联合电针双侧内关穴结合鞘内注射10 μl Methysergide;BK+EA+Vehicle组心包内注射0.2 ml BK联合电针双侧内关穴结合鞘内注射10 μl Vehicle。通过心包内注射BK建立大鼠心脏伤害性感受模型,以背斜方肌肌电（EMG）为痛反应的观测指标。结果：①心包内间隔40 min连续3次注射BK诱发背斜方肌EMG无显著性差异（P>0.05）。②与BK组相比,电针内关穴显著抑制EMG反应（P<0.05）;鞘内注射麦角新碱后,心包内BK诱发的EMG反应无显著性差异（P>0.05）。③与EA+BK组相比,鞘内注射麦角新碱后,部分反转电针内关穴对EMG的抑制作用（P<0.05）;然而,鞘内注射溶媒后,电针内关穴对EMG反应的抑制作用无显著性差异（P>0.05）。结论：脊髓水平的5-HT受体参与电针内关穴对大鼠心脏伤害性感受的抑制调控作用。     

电针对糖尿病大鼠学习记忆障碍及海马NT-3表达的影响

目的观察电针对糖尿病性认知功能障碍大鼠学习记忆的改善作用,及其对海马神经营养因子-3（NT-3）mRNA和免疫反应阳性细胞表达的影响。方法采用2％链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）构建糖尿病大鼠模型,将模型大鼠随机分为电针组（EA）、对照组（DM）与正常组（CN）进行比较。电针4周后糖尿病测定血糖水平,并用Morris水迷宫法观察电针对糖尿病大鼠学习记忆的影响,应用RT-PCR和免疫组化方法检测海马NT-3mRNA和免疫反应阳性细胞的表达水平。结果对照组血糖、上台潜伏期高于正常组和电针组（P〈0．01）,对照组NT-3mRNA和免疫反应阳性细胞的表达明显低于正常组和电针组（P〈0．01）;电针组NT-3表达明显高于对照组（P〈0．01）。结论电针能在一定程度上降低血糖,促进海马NT-3mRNA和免疫反应阳性细胞的表达,改善糖尿病认知功能障碍者的学习和认知功能。     

损毁或高频刺激丘脑底核对黑质神经元的保护作用

目的：探讨损毁或高频刺激丘脑底核（STN）对帕金森病（PD）大鼠黑质致密部神经元的保护作用及其可能的发生机制。方法：应用每羟基多巴胺（6-OHDA）制备偏侧PD大鼠模型,于丘脑底核（STN）区分别植入刺激电极给以高频电刺激,或注入鹅膏蕈氨酸（IA）进行损毁后,观察PD大鼠行为改变;运用尼氏（Nissl）染色、DNA原位末端标记技术（TUNEL）、免疫组化方法检测并分析黑质致密部（SNc）神经元存活及凋亡发生情况。结果：刺激组黑质致密部凋亡神经元的阳性率显著低于模型组与损毁组（P〈0．05）。与正常大鼠相比,刺激组Bel-2染色呈强阳性,Bel-2／Bax比值较高,模型组、损毁组SNc区的Bcl-2表达有所下调,Bax表达增加,Bcl-2／Bax比值降低（P〈0．05）,虽然损毁组SNc的凋亡阳性神经元少于模型组（P〈0．05）,但二者的Bel-2、Bax的表达及Bel-2／Bax比值无显著性差异（P〉0．05）。结论：损毁或高频刺激SIN对PD大鼠黑质SNc神经元存在保护作用,高频刺激的长期保护作用更为明显。     

电针联合天麻多糖对脑缺血大鼠海马CA3区Nesin、BDNF表达的影响

目的观察电针联合天麻多糖对脑缺血大鼠海马CA3区巢蛋白(Nestin)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响。方法将40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组、天麻多糖组和针药结合组,每组8只。以单侧大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型。造模后2w,天麻多糖组和针药结合组大鼠给予天麻多糖100mg/kg灌胃,每天1次,连续2w;电针组和针药结合组大鼠给予"百会""足三里"穴电针刺激,持续30min,每天1次,连续2w。采用免疫组织化学染色法结合图像分析检测海马CA3区Nestin和BDNF的表达。结果与正常对照组比较,模型组缺血侧海马CA3区Nestin和BDNF阳性表达增加(P0.05);与模型组比较,电针组、天麻多糖组和针药结合组缺血侧海马CA3区Nestin和BDNF阳性表达显著增加(P0.05);针药结合组阳性表达显著多于电针组或天麻多糖组(P0.05)。结论电针与天麻多糖结合可显著增加脑缺血大鼠缺血侧海马CA3区Nestin和BDNF的表达,促进内源性神经干细胞激活,且作用优于单用电针或天麻多糖。