外源载体高效转化肺炎克雷伯菌的新途径

研究介绍了提高Klebsiella pneumoniae电转化效率的新途径,即直接从固体平板上收集K.pneumoniae菌落制备电转化感受态细胞,完全不同于传统的试验方法。试验菌株为野生型K.pneumoniae NTUH-K2044和magA—突变型菌株。将大小不同的质粒pIP843T、pIP843TdhaB、pIP843TdhaT电转化K.pneumoniae,计算电转化效率。电转化试验结果表明:K.pneumoniaeNTUH-K2044固体菌电转化效率高达2×105±300转化子/μgDNA,而其液体菌电转化效率仅为150±10转化子/?gDNA;其magA—突变株固体菌的转化效率最高,可以达到3.4×107±500转化子/μgDNA,比液体菌电转化效率提高了104倍。同时发现质粒大小对电转化效率并没有明显影响。此外,激光共聚焦显微镜观察发现固体平板和液体培养基中的菌体存在形态学方面差异,推测固体培养菌电转化效率的显著提高和形态学方面的表现可能具有一定的相关性。     

玉米秸秆水解液发酵联产氢气与2,3-丁二醇的初步研究

选用实验室自行筛选的Klebsiella pneumoniae ECU-15,进行了玉米秸秆水解液发酵联产氢气和2,3-丁二醇的初步研究。结果表明:以葡萄糖为碳源时,两目标产物随培养条件的改变呈现相同的变化趋势,且最佳发酵温度为37℃,最佳pH为6.0,最佳初始糖浓度为30 g/L;不同比例葡萄糖/木糖为混合碳源时,均能实现氢气和2,3-丁二醇的联产过程,但随着木糖含量的增加,细胞产量、氢气产量和2,3-丁二醇的产量都有所下降,并且木糖的存在会降低葡萄糖的消耗速率;实验最后以玉米秸秆水解液和同比例模拟合成培养基为底物,初步探明了该菌株利用水解液发酵联产氢气和2,3-丁二醇的可行性,最终氢气产量为0.65 v/v,产氢得率为0.43 mol/mol sugar;2,3-丁二醇产量为5.05 g/L,得率为0.82 mol/mol sugar。     

肺炎克雷伯菌生物被膜豚鼠肺感染模型建立的实验研究

目的采用吸入法建立肺炎克雷伯菌生物被膜（BF）肺感染模型,探讨肺内肺炎克雷伯菌BF的发生发展变化及其BF菌周围炎性细胞的变化。方法40只豚鼠随机分为两组：A组和B组动物分别通过喷雾器接种灭菌生理盐水及肺炎克雷伯菌菌悬液,取材日进行活菌计数、光学及电子显微镜检查。结果肺炎克雷伯菌BF在肺内以特异的肉芽肿结节的形式存在,有体内炎性细胞的参与。扫描电镜可见结节内有多糖蛋白复合物包绕的细菌,菌体之间相互以粘液丝相连。结论吸入法BF肺感染模型方法简单、重复性好,可用于BF菌相关肺感染的研究。     

在Klebsiella pneumoniae醛脱氢酶失活菌中构建NADH再生系统

生物法生产1,3-丙二醇（1,3-Propanediol,1,3-PD）是当前工业生物技术研究的热点之一,生产过程中,需要消耗还原当量NADH,NADH的有效供给决定了1,3-PD的产量和得率。本文采用PCR的方法从Candida boidinii基因组中克隆编码fdh的基因,将该基因片段插入载体pMALTM-p2X,构建表达载体pMALTM -p2X-fdh,并转入醛脱氢酶失活菌Klebsiella pneumoniae DA-1HB,获得重组菌Klebsiella pneumoniae DAF-1。在IPTG浓度0.5 mmol/L时,诱导3 h后甲酸脱氢酶表达明显;发酵过程中甲酸脱氢酶比酶活达到4.82 U/mg;与出发菌株K. pneumoniae DA-1HB相比,重组菌DAF-1合成1,3-丙二醇的浓度提高了19.2%?。     

肺炎克雷伯菌研究进展

近年来由于各种抗菌药物的广泛使用,导致肺炎克雷伯菌多重耐药现象普遍存在,给临床治疗带来极大的困扰,造成医院获得性肺炎感染严重的现状。着重论述了肺炎克雷伯菌流行现状、耐药机制、致病因子及防治措施。     

碳青霉烯酶在碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯杆菌的分布及分子流行病学

目的了解碳青霉烯酶在碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯杆菌的分布及其分子流行病学。方法收集我院2010年1月至2012年12月分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯杆菌120株,采用改良Hodge试验及EDTA协同试验进行碳青霉烯酶表型的确认,用PCR方法扩增碳青霉烯酶基因(KPC、IMP、NDM、VIM、OXA-48),经电泳检测扩增产物后纯化测序。通过MLST及ERIC-PCR进行分子流行病学分析。结果120株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯杆菌中,95株CRKP菌株改良Hodge试验阳性,64株菌株EDTA协同试验阳性。经PCR及测序确认,83株主要携带KPC-2型碳青霉烯酶,占69.2%;其次为IMP-4型金属酶,占28.3%(34/120),NDM-1型金属酶15株,占12.5%,未发现VIM和OXA-48碳青霉烯酶。ERICPCR及MLST分型显示出20个基因分型,其中ST395-A型和ST11-B型主要流行于产KPC-2型菌株中,占43.88%;ST263-B型和ST15-C型主要流行于产NDM-1菌株中,占13.27%;而ST11-B型主要分布于产IMP-4和KPC-2菌株中,占24.49%。结论我院碳青霉烯酶耐药肺炎克雷伯杆菌存在多种碳青霉烯酶,主要以KPC-2为主,产不同种类碳青霉烯酶菌株存在不同的流行基因型。     

Identification of the cell surface receptor for FC3-2, FC3-3 and FC3-6 bacteriophages from Klebsiella pneumoniae

FC3-2, FC3-3 and FC3-6 are different Klebsiella-specific bacteriophages isolated on Klebsiella pneumoniae strain C3. The common bacteriophage receptor for these phages was shown to be the lipopolysaccharide (LPS), specifically the high-molecular-weight polysaccharide fraction (O-antigen). Mutants resistant to these phages were isolated and found to be devoid of lipopolysaccharide O-antigen by several criteria. We concluded that no other outer membrane (OM) molecules were involved in phage binding. At least 2 different types of lipopolysaccharide-core mutant were obtained.     

仙居县儿童下呼吸道感染肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的分析仙居人民医院住院下呼吸道感染患儿临床分离肺炎克雷伯菌的耐药特征,为临床合理用药提供依据。方法选择2012年7月至2013年7月该院下呼吸道感染肺炎克雷伯菌阳性患儿81例。对患儿的临床一般资料进行分析,对临床分离菌株进行细菌鉴定,用18种抗生素进行药敏试验,采用WHONET5．4分析软件进行统计。结果2012年7月至2013年7月共分离出81株肺炎克雷伯菌,ESBLs阳性42株,检出率为51．85％。所有菌株对亚胺培南、厄他培南、左旋氧氟沙星、丁胺卡那100％敏感。对氨苄西林耐药率为100％。ESBLs阴性菌株对氨曲南、头孢曲松、头孢他啶、头孢唑啉、头孢吡肟100％敏感,而ESBLs阳性菌株则100％耐药。ESBLs阴性菌株对其他抗生素的耐药率为氨苄西彬舒巴坦（12．82％）、环丙沙星（2．56％）、头孢替坦（O％）、呋喃妥因（20．51％）、庆大霉素（5．13％）、复方新诺明（17．85％）、妥布霉素（2．56％）、哌拉西林／他唑巴坦（2．56％）;ESBLs阳性菌株对其他抗生素的耐药率为氨苄西林／舒巴坦（73．80％）、环丙沙星（2．38％）、头孢替坦（16．67％）、呋喃妥因（61．90％）、庆大霉素（28．57％）、复方新诺明（54．76％）、妥布霉素（7．14％）、哌拉西林／他唑巴坦（7．14％）。结论本地区患儿中肺炎克雷伯菌耐药性较高,临床应重视病原菌的检测。     

大熊猫感染性泌尿生殖道血尿症病原-肺炎克雷伯氏杆菌

对一只长期在秋冬季节交替或炎热夏季发生血尿症大熊猫的尿液进行细菌的分离、培养,并对分离株进行了小白鼠毒性试验和药敏试验。通过对分离菌株的染色镜检和生化试验,最后确定为肺炎克雷伯氏杆菌。作者对肺炎克雷伯氏杆菌引发大熊猫的疾病类型进行了探讨,指出肺炎克雷伯氏杆菌除可引发大熊猫肠炎和败血症外,还可导致大熊猫发生以排血样尿液为主要临床表现的泌尿生殖道感染。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的了解碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌及耐药机制。方法对2012-2013年临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌共计12株进行分析,药敏采用MIC方法检测,用WHONET 5.6软件进行分析,KPC表型检测采用改良Hodge试验,基因检测采用PCR方法。结果 12株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验阴性,基因测序为KPC-2型。结论 KPC-2基因是引起本院肺炎克雷伯菌耐药的主要原因。     

临床分离肺炎克雷伯菌Ⅰ整合子分布及其与qnr基因关系研究

目的 了解临床分离肺炎克雷伯菌中qnr基因和Ⅰ类整合子基因的分布及其耐药特征.方法 采用PCR法对45株耐环丙沙星肺炎克雷伯菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查并测序,用PCR法检测qnr阳性菌株Ⅰ类整合子基因,并采用SPSS 13.0和Whonet 5.4软件分析药敏结果及比较.结果 45株肺炎克雷伯菌中,24株(51.1％)细菌检出qnrS基因,未检出qnrA和qnrB基因.20株qnr阳性菌株同时携带Ⅰ类整合子基因.qnr阳性菌株Ⅰ类整合子基因携带率显著高于阴性菌株,qnr阳性菌株对阿米卡星、妥布霉素、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦及头孢哌酮舒巴坦的敏感性较高.结论 肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类抗菌药物耐药主要由qnrS引起,qnr阳性株同时携带Ⅰ类整合子,导致呈现多重耐药性,加强临床耐药监测对控制多重耐药传播有着重要的意义.     

肺炎克雷伯菌表面成分对小鼠细菌感染的保护作用

观察肺炎克雷伯菌 (Klebsiellapneumoniae,Kp)表面成分在小鼠体内对细菌感染的保护作用。经肺炎克雷伯菌培养液经溶菌酶、NP40溶菌后 ,再经去脂、去蛋白和有机溶剂沉淀 ,干燥获取Kp表面成分干粉。用不同剂量的Kp表面成分免疫小鼠 ,分别用大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌攻击小鼠 ,记录小鼠死亡情况 ,并测定循环抗体效价。结果 :Kp表面成分低剂量组 (30 μg/g体重 )和高剂量组 (40 μg/g体重 )对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染有显著保护作用 ,能降低感染小鼠的死亡率。免疫后小鼠的抗体效价明显高于对照组小鼠 (P <0 0 1 )。应用Kp表面成分的小鼠对细菌感染有一定的保护作用。     

甲酸脱氢酶在Klebsiella pneumoniae中的表达和功能分析

在甘油厌氧发酵生产1,3-丙二醇的过程中,需要消耗还原当量NADH,NADH的有效供给决定了1,3-丙二醇的产量和得率。采用PCR方法从Candidaboidinii基因组中克隆编码甲酸脱氢酶基因fdh,将fdh基因片段插入载体pMALTM-p2X中,构建表达载体pMALTM-p2X-fdh,并转入1,3-丙二醇生产菌Klebsiella pneumoniae YMU2,获得重组菌Klebsiella pneumoniae F-1。研究了重组质粒的稳定性和IPTG诱导fdh基因过量表达的条件。结果表明,重组质粒具有良好的稳定性;fdh基因表达的蛋白分子量为40.2kDa;IPTG诱导表达研究表明,在IPTG浓度为0.5mmol/L时,诱导4h后甲酸脱氢酶表达明显;发酵过程中甲酸脱氢酶比酶活达到5.47U/mg;与出发菌株K.pneumoniae YMU2相比,重组菌F-1合成1,3-丙二醇的浓度提高了12.5%。     

肺炎克雷伯菌临床分离株的庆大霉素耐药性和细菌铁载体的作用

目的 研究临床分离的肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素庆大霉素的耐药性与其产铁载体的关系。方法 采用K-B纸片法和肉汤稀释法确定70株临床分离的肺炎克雷伯菌对庆大霉素的药物敏感性;CAS琼脂实验检测肺炎克雷伯菌是否产铁载体;紫外可见分光光度法确定细菌产铁载体的量,根据中位数法将70株临床分离菌分为铁载体高产组（35株）和低产组（35株）;应用SPSS统计学软件分析抗生素耐药性与其产铁载体是否相关。结果 药物敏感性试验检测出菌株对庆大霉素的耐药率为50.00%（35/70）;铁载体检测实验确定70株肺炎克雷伯菌均产生铁载体,肺炎克雷伯菌对庆大霉素的耐药性与铁载体产量呈正相关关系（r=0.3154,P<0.05）,对庆大霉素耐药菌株铁载体产量明显高于敏感菌株（t=3.1650,P<0.05）,且铁载体高产组耐药率及lgMIC值明显高于低产组（χ2=9.6570,t=3.1360,P<0.05）。结论 70株临床分离的肺炎克雷伯菌均产生铁载体,铁载体可能参与肺炎克雷伯菌对庆大霉素的耐药,干扰庆大霉素的抑菌或杀菌过程。     

Structural Analysis of an Extracellular Polysaccharide Bioflocculant of Klebsiella pneumoniae

The glycoside composition and sequence of an extracellular polysaccharide flocculant of Klebsiella pneumoniae H12 was analyzed. GC and HPLC analysis of the acid-hydrolysate identified its constituent monosaccharides as D-Glc, D-Man, D-Gal, and D-GlcA in an approximate molar ratio of 3.9:1.0:2.3:3.6. To analyze the glycoside sequence, the polysaccharide was partially hydrolyzed by acid and enzyme treatment. GC, HPLC, TLC, MALDI-TOF/MS, and 1H- and 13C- NMR spectroscopy characterized the obtained oligosaccharides.

The results clarified the partial structure of H12 polysaccharide as a linear polymer of a unit of pentasaccharide with a side chain of one D-GlcA to D-Glc moiety (see below). Although the existence of other sequences or other constituent glycosides could not be fully excluded, H12 polysaccharide must be a novel types as such a complicated unit for a polymer has not so far been reported. The partial structure of a H12 polysaccharide flocculant is also discussed in this report.

→4)- α-D-Glcp-(1→2)-α-D-Manp-(1→3)-4,6-Pyr-β-D- 3 Galp-(1→4)-β-D-Galp-(1→ ↓

1 β-D-GlcpA     

非产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌的耐药性分析

目的了解临床分离肺炎克雷伯杆菌中非产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株对18种常见抗菌药物的耐药性。方法CLSI表型确证试验-纸片增强法检测非产ESBLs肺炎克雷伯菌,K-B法测定非产ESBLs肺炎克雷伯杆菌对18种常见抗菌药物的敏感性。结果非产ESBLs肺炎克雷伯杆菌株对头孢唑啉、头孢呋辛的耐药率〉50．0％,对其余抗生素的耐药率均低于25．0％,对亚胺培南、美罗培南非常敏感,耐药率分别为2．3％和2．0％;痰标本的分离株对头孢唑啉、头孢呋辛的耐药率明显高于血、尿液标本分离株,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论非产ESBLs肺炎克雷伯杆菌对第一、二代头孢菌素耐药显著,对第三代头孢菌素、亚胺培南、美罗培南等抗生素比较敏感。     

多重耐药肺炎克雷伯菌肺部感染的抗感染治疗新策略

目的 尝试使用新的抗感染治疗策略治疗多重耐药肺炎克雷伯菌肺部感染。方法 选择10例转入ICU的院内获得性肺部感染患者,入选患者使用抗生素治疗效果不佳,多次痰培养结果提示多重耐药的肺炎克雷伯菌生长。患者先予以头孢美唑抗感染治疗,在48~72 h后痰培养结果均提示对亚胺培南等敏感的铜绿假单胞菌生长,然后根据患者肺部感染是否好转选择继续使用头孢美唑或调整为对铜绿假单胞菌有效的抗生素。结果 10例患者治疗7 d后C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、临床肺部感染评分（CPIS）均显著下降（P＜0.05）,所有患者均顺利脱机拔管转出ICU。结论 根据肺部微生态特点,利用菌群之间存在的拮抗作用,可以使用抗生素来调节微生态失衡。对于合适的患者,这种新的抗感染策略可以有效治疗多重耐药肺炎克雷伯菌肺部感染,可作为临床抗感染策略之一。     

肺炎克雷伯菌血流感染的临床回顾性分析

目的 探讨肺炎克雷伯菌血流感染的临床特点、治疗方案和预后。方法 对诸暨市人民医院2014年3月-2015年9月诊断为肺炎克雷伯菌血流感染的住院患者临床资料进行回顾性分析。结果 66例肺炎克雷伯菌血流感染患者平均年龄64.6岁,检出前平均住院5.7 d。13例（19.7%）合并有其他细菌感染,49例（74.2%）合并其他系统感染。肺炎克雷伯菌血流感染多见于糖尿病（33.3%）、实体肿瘤（30.3%）等免疫力低下疾病,最常见于肝胆外科（24.2%）、内分泌科（16.7%）等科室。患者预后好转47例（71.2%）,APACHEⅡ评分为13.78±4.33;死亡19例（28.8%）,APACHEⅡ评分为21.10±7.45,两组评分差异有统计学意义（P<0.05）。合并其他感染状况与合并神经系统疾病状况病死率更高（P<0.05）。结论 肺炎克雷伯菌血流感染多见于糖尿病、实体肿瘤等免疫力低下的危重疾病患者,多发生在医院内环境的外科手术操作的科室,容易合并其他系统感染。APACHEⅡ评分可作为判断肺炎克雷伯菌血流感染预后的重要指标。控制其他感染情况可有助于临床防控肺炎克雷伯菌血流感染,改善其预后。