西瓜胚乳吸器的发育及ATP酶的超微细胞化学定位

报道了西瓜（Citrullus lanatus)胚乳吸器发育过程,并对胚乳吸器细胞中的ATP酶进行了超微细胞化学定位,球形胚早期,胚囊合点端的壁伸长发育成一管状胚乳吸器,进而吸器靠近乳本体端膨大为囊状,球形胚晚期吸器自珠孔端向合点端逐渐细胞化,胚分化出子叶时,胚乳吸器自合点端向珠孔端退化,在刚形成的胚乳吸器细胞中,ATP酶活性反应主要分布在细胞的核膜,内质网上,胞间连丝和吸器细胞壁内的小球状物上也有较强的ATP酶活性反应;在开始退化的吸器细胞中,核膜上的ATP酶性的反应减弱较早,内质网稍晚,进一步退化的胚乳吸器细胞中,ATP酶主要集中分布在细胞壁,细胞间隙内,核上几乎没有ATP酶性反应,内质网上仅有微弱的ATP酶反应。     

荞麦柱头、花柱的结构及ATP酶的超微细胞化学定位

利用超薄切片结合ATP酶定位技术,研究了荞科柱头及花柱的结构。结果表明,成熟的荞麦柱头表面无乳突细胞,柱头细胞的细胞壁存在发达的壁内突,花柱为实心型无引导组织,柱头表面的细胞壁根据电子密度的不同可划分为3层,最外一层电子密度最大,最内一层电子近透明,并形成壁内突的结构,柱头表面和花柱细胞的质膜上ATP酶的活性较高,表明成熟的柱头和花柱细胞物质代谢和运输十分活跃,成熟的柱头和花柱细胞中有丰富的蛋白质和多糖类物质。     

花椒珠心胚的超微结构及珠心细胞ATP酶的细胞化学定位

应用透射电镜对花椒（Xanthoxylum bungeanum Maxim)珠心胚原始细胞,多细胞原胚和此时期的珠心细胞及其ATP酶的分布进行了详细的观察,珠心胚原努细胞具厚的细胞壁,明显分为电子致密的外层和电子透明的内层,无胞间连丝,大的核中未见核仁,细胞质富含细胞器,多细胞原胚的壁比原始细胞的薄,电子透明,均质,具胞间连丝,核体积增大,核仁1至2个,细胞质中细胞数的数量明显增加,珠孔端的珠心细胞比胚性细胞体积大,细胞液泡化程度高,细胞质稀薄而呈现衰退趋势,ATP酶分布于液泡膜及液泡液中,与胚性细胞相接触的最内层珠心细胞胞质降解,核严重变形,最终细胞解体,此时无ATP酶活性反应。     

西瓜花粉壁超微结构与花粉ATP酶细胞化学定位

研究了西瓜花粉壁超微结构以及单核花粉液泡化时期ATP酶活性超微细胞化学定位。花粉壁的外壁分为外层和内层,外层包括覆盖层、基粒棒和基足层等三层,内层只包含一层。外层电子密度相对较小,内层电子密度相对较大;外层与内层之间有缝隙。ATP酶活性反应产物主要分布在细胞质基质、质体、内质网和花粉内壁中。     

西瓜花粉壁超微结构与花粉ATP酶细胞化学定位

研究了西瓜花粉壁超微结构以及单核花粉液泡化时期ATP酶活性超微细胞化学定位。花粉壁的外壁分为外层和内层 ,外层包括覆盖层、基粒棒和基足层等三层 ,内层只包含一层。外层电子密度相对较小 ,内层电子密度相对较大 ;外层与内层之间有缝隙。ATP酶活性反应产物主要分布在细胞质基质、质体、内质网和花粉内壁中     

小麦珠心细胞衰退过程中ATP酶的超微细胞化学定位

采用磷酸铅沉淀技术对小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ ）珠心细胞衰退过程进行了ＡＴＰ酶的超微细胞化学定位。初始衰退的珠心细胞,ＡＴＰ酶只定位于细胞膜上,其它部位未见有ＡＴＰ酶活性。衰退中期的珠心细胞,细胞膜上ＡＴＰ酶活性减弱并逐渐消失;细胞核染色质和细胞质中一些细胞器上存在ＡＴＰ酶活性。在严重衰退的珠心细胞中,只在细胞核染色质上存在ＡＴＰ酶活性。珠心细胞的细胞核以两种方式衰退。衰退的细胞核染色质碎片仍存在ＡＴＰ酶活性,并向胚囊方向转移。推测小麦珠心细胞衰退过程中细胞膜上ＡＴＰ酶变化反映了珠心细胞生理状态转变;细胞核染色质上ＡＴＰ酶与其形态变化和运动等有关     

植物组织和细胞的玻璃化冻存研究

利用液氮超低温(-196℃)冻存是进行植物组织和细胞长期、稳定保存的有效方法。它不仅在常规育种中可以克服各种珍稀、濒危植物资源自然繁衍的困难,而且能在现代生物技术研究中保存各种培养细胞和优良中间实验材料,从而为实验细胞库的建立创造条件。     

枸杞果实ATP酶超微细胞化学定位研究

运用常规ATP酶超微细胞化学定位技术,对宁夏枸杞果实发育不同阶段的韧皮部和果肉库薄壁细胞ATP酶分布进行了观察研究.结果显示,在果实发育过程中SE/CC复合体与周围韧皮薄壁细胞间存在共质体隔离,韧皮薄壁细胞及果肉库薄壁细胞的胞间连丝较少,但是与果肉库薄壁细胞相邻的韧皮薄壁细胞的胞间连丝较多.囊泡和膜泡在筛管、韧皮薄壁细胞和库薄壁细胞中很丰富,并且质膜、囊泡膜、液泡膜上ATP酶沉淀物在韧皮部各细胞分布较少,在果肉库薄壁细胞分布较多,特别是在果实第二次快速生长期,果肉库薄壁细胞膜系统、细胞壁和胞间隙的ATP酶活性剧烈增强.此外,果肉库薄壁细胞的质膜ATP酶具极性分布特点.由此得出,枸杞果实韧皮部卸载是一种需要能量驱动的过程,其卸载途径主要以质外体途径为主,在从韧皮部向果肉库薄壁细胞卸出时可能为共质体和质外体途径共存.膜泡运输是枸杞果实同化物卸出和转运的重要方式,而韧皮薄壁细胞在同化物卸出和转运过程中承担了主要转运角色;果肉库薄壁细胞进行主动和定向卸载、积累同化物的能力很强.     

蒜鳞片薄壁细胞衰退过程中酶的细胞化学定位及DNA生化分析

蒜在储藏过程中。鳞茎薄壁细胞衰退。其营养物质供给幼芽萌发生长。采用细胞化学方法,对蒜休眠进程中的鳞茎薄壁细胞进行了ATPase以及APase的细胞化学定位,结果显示在薄壁细胞的质膜、细胞壁和胞间连丝上的酶活性随着蒜自休眠至萌发的不同发育进程而呈现增强的趋势,且在萌芽期酶活性表现最为强烈。表明细胞内物质的降解、转化与输出的加强有助于细胞内含物向新生芽的彻底转移。配合采用琼脂糖凝胶电泳对衰退薄壁细胞的DNA进行了分析,实验结果表现出典型的DNA Ladder．为蒜鳞茎薄壁细胞的衰退属于受基因控制的程序性死亡范畴补充了生化证据。     

甜菊愈伤组织中的质膜内陷:超微结构和酸性磷酸酶细胞化学定位

对在分化条件下的甜菊 (Stevia rebaudiana)愈伤组织分生区域细胞的质膜内陷进行了超微结构和酸性磷酸酶细胞化学研究。结果表明 ,在不同液泡化状态的细胞中均有质膜内陷存在。在原生质浓密的细胞中 ,质膜呈起伏的波纹状 ,某些部位发生明显内陷 ,大小不等 ,多呈圆球状。在部分液泡化细胞中 ,质膜内陷体积增大 ,内含物增多且结构复杂。在液泡化细胞中 ,质膜内陷嵌入中央液泡 ,但彼此间以一膜间隙隔开。质膜内陷中的内含物以小泡和卷绕的膜结构形式存在。酸性磷酸酶活性定位结果显示 ,质膜及其内陷含高的酶活性。推测质膜内陷在功能上与液泡相似 ,构成了这些细胞水解空间的一部分。     

In situ hybridization comes of age

Dr Coulton is a lecturer in the Department of Biochemistry at Charing Cross and Westminster Medical School, London W6 8RF. His principal research interest is in the molecular and cellular basis of inherited disease of skeletal muscle.     

In situ measurements of enzyme activities in the brain

Summary The present review focusses on enzymes involved in the metabolism of amino acid neurotransmitters and the microphotometric determinations of their activities in various layers of the rat hippocampus. The enzymes are NAD-linked isocitrate dehydrogenase (NAD-ICDH), glutamate dehydrogenase (GDH), and GABA transaminase (GABAT), all of which are localized in mitochondria. GDH seems to be restricted to astrocytes, whereas NAD-ICDH and GABAT are localized in neurons as well as in astrocytes. NAD-ICDH is an important enzyme of the tricarboxylic acid cycle and may deliver -ketoglutarate for the formation of glutamate and GABA, which serve as neurotransmitters in the hippocampus. GDH catalyses the interconversion of -ketoglutarate and glutamate, whereas GABAT is the important GABA-degrading enzyme and requires -ketoglutarate for its activity. While differing in their cellular distribution and activity levels, NAD-ICDH, GDH and GABAT are significantly correlated in their hippocampal distribution. Furthermore, developmental and pharmacohistochemical studies suggest that the distribution and activity of astrocytic GDH is correlated with amino-acidergic neurotransmission in the hippocampus. The data reported give further evidence for a metabolic relationship between neurons and astrocytes in the turnover and metabolism of glutamate and GABA.     

Light and electron microscopy study of the salivary glands of the carnivorous opisthobranch Philinopsis depicta (Mollusca, Gastropoda)

Cephalaspideans are a group of opisthobranch gastropods that comprises carnivorous and herbivorous species, allowing an investigation of the relationship between these diets and the morphofunctional features of the salivary glands. In this study, the salivary glands of the carnivorous cephalaspidean Philinopsis depicta were observed by light and electron microscopy. The secretory epithelium of these ribbon-shaped glands is formed by ciliated cells, granular cells and cells with apical vacuole. In ciliated cells the nucleus and most cytoplasmic organelles are located in the wider apical region and a very thin stalk reaches the base of the epithelium. These cells possess significant amounts of glycogen. Granular cells are packed with electron-dense secretory granules and also contain several cisternae of rough endoplasmic reticulum and Golgi stacks. The other type of secretory cell is mainly characterized by the presence of a large apical vacuole containing secretion. These cells possess high amounts of rough endoplasmic reticulum cisternae and several Golgi stacks. Vesicles with peripheral electron-dense material are also abundant, and seem to fuse to form the apical vacuole. The available data point out to a significant difference between the salivary glands of carnivorous and herbivorous cephalaspidean opisthobranchs, with an intensification of protein secretion in carnivorous species.     

无细胞系统原位制备蛋白质芯片及其应用

主要介绍了目前在生物芯片表面进行蛋白质无细胞表达与定向制备蛋白质芯片的研究进展,包括各种基因植入芯片的方法、蛋白质体外不同表达的途径、蛋白质固定的策略以及可能的应用发展前景等．蛋白质芯片以其高通量、高灵敏和检测迅速等优点正成为蛋白质组学研究中的重要工具之一．蛋白质的高效表达与纯化、蛋白质在芯片表面的有效固定与蛋白质活性的保持等内容是蛋白质芯片技术发展的关键．采用纳米生物技术与无细胞表达系统,已经可以在生物芯片表面通过植入基因的方式制备相关的蛋白质芯片,从而为蛋白质芯片的原位制备开辟了新的方向．     

棉花细菌人工染色体的荧光原位杂交(BAC-FISH)技术

细菌人工染色体荧光原位杂交(BAC-FISH)技术是植物染色体识别、物理作图等分子细胞遗传学研究的重要工具,但对于某些物种尤其是多倍体植物,由于大量重复序列的存在等问题,使得该技术应用受到很大的限制.通过选择棉花分子遗传图中高重组区的微卫星位点(simple sequence repeats,SSR)标记的策略,筛选到不含或含有少量重复序列的细菌人工染色体(BAC)克隆,同时,在通用FISH技术程序基础上,通过改进发根、变性、洗脱条件等步骤,构建出适合于棉花的BAC-FISH技术,简化了操作流程的同时,获得稳定的杂交结果及较高的检出率;并通过将一随机获得的BAC进行染色体的物理定位,进一步引入双探针、双色及重复杂交技术,显示了该技术的成熟与良好的应用前景和价值.     

应用原位双膜法快速筛选人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合的蛋白.利用此法筛选到人Flt3配体（hFL）的甲醇酵母高表达转化子,液体诱导表达量约20 mg/L.ELISA结果证明,原位双膜法所得的菌落染色强度与该菌落液体诱导表达水平正相关.蛋白质印迹结果显示,培养上清在25 ku处有明显杂交条带,而对照组杂交呈阴性,且表达量随诱导天数增加.原位双膜法是一种良好的筛选方法,可以快捷、准确地筛选高表达酵母转化子.     

金钗石斛生物碱的组织化学定位研究

利用组织化学定位方法对金钗石斛不同生长年限和不同营养器官的生物碱分布和积累进行比较分析。结果表明,金钗石斛茎生物碱主要分布于基本组织,三年生金钗石斛的生物碱含量高于一年生和二年生金钗石斛。金钗石斛根部生物碱含量同样较多,主要分布于皮层薄壁细胞中;金钗石斛叶片生物碱含量较低,存在于上下表皮细胞中,与铁皮石斛和铜皮石斛完全不同。说明三年生金钗石斛作为最适宜采收期,而且金钗石斛根部具有很好的开发利用价值。金钗石斛叶片表皮细胞中呈现生物碱的原因尚未清楚,需要进一步研究。     

体外遗传学方法及应用

体外遗传学是利用核酸分子本身一定的表型（如结合、催化等）在试管中分离筛选特定核酸分子序列进行研究的方法．由于体外遗传学方法改变了自然界缓慢的进化过程,使人为的进化得以简单地实现,同时也使许多核酸功能区的识别和确定由被动变为主动,为进一步探索基因的调控规律及主动地调节生化反应过程提供了有效的手段,近年来体外遗传学方法及在分子生物学方面的应用得到了很大的发展．