小鼠嵌合体制作技术的研究

本研究采用人工聚合技术,将小鼠不同品系和同品系之间的8细胞胚聚合为一体,分别用PBS FCS、BWW和BMOC-Ⅲ培养20—24小时后观察了发育率。其结果在昆明白←→C57中分别有88.1％(59/67)、95.0％(115/121)和94.8％(73/77),在昆明白←→昆明白中分别有93.3％(28/30)、87.7％(121/138)和86.7％(52/60)的嵌合胚发育为桑椹胚或胚泡,各处理组之间无显著差异。将141枚嵌合胚分别移植给12只受体,结果有7只小鼠妊娠共产仔25只。在昆明白←→C57的17只嵌合体小鼠中毛色为黑、白和杂色的各有3、4和10只。     

激光辅助制作小鼠嵌合体胚胎的研究

目的：探索激光辅助体外制作小鼠嵌合体胚胎的方法。方法：激光辅助去除不同发育阶段体外受精胚胎的透明带,随机组合卵裂球体外培养,观察胚胎融合情况。结果：没有透明带的卵裂球体外能够“自发”融合,并且融合胚胎在体外培养环境中,能够发育至囊胚期,显微镜观察其形态基本与二倍体胚胎无差别。结论：激光辅助方法获得裸露的卵裂球能够在体外培养环境制作嵌合体胚胎。     

简易小鼠抓取器的制作

在抓取小鼠颈部过程中实验者易被小鼠转颈咬伤。曾有人设想过用一种类似于火钳的大夹夹取小鼠,但此举不容易掌握力度,小鼠易被用力夹持窒息。如果采用如下图的小鼠夹取器(用硬塑料或薄不锈钢制成),     

简易小鼠肝灌注手术台的制作

本文介绍一种简易鼠肝灌注手术台的制作和使用的方法,采用该手术台可节省人力和方便手术的操作。     

小鼠类胚胎干细胞分离培养及用于制作嵌合体小鼠的实验研究

目的探讨分离小鼠囊胚内细胞群类胚胎干细胞及用于制作嵌合体小鼠的方法及应用价值。方法分离3.5d小鼠囊胚内细胞群的类胚胎干细胞作为供体细胞,通过显微注射方法将分离的类胚胎干细胞注射到供体小鼠的囊胚腔中,再将注射后的囊胚移植到假孕雌鼠的子宫中制作嵌合体小鼠。结果分离36枚囊胚的内细胞群类胚胎干细胞,注射256只昆明小鼠囊胚中,移植32只假孕雌鼠子宫中,获产崽2窝,共12只,其中2只获毛色嵌合体小鼠。结论采用该技术分离所获得的类胚胎干细胞作为供体细胞制作嵌合体小鼠获得成功,该方法为ES细胞介导的转基因动物制作增添了一条新的途径,在同种不同品系的动物改良及遗传病基因治疗中有一定的应用价值,尤其是对未能建立ES细胞系的大动物的遗传工程操作具有一定意义。     

过塑制作昆虫标本的简易方法

过塑制作昆虫标本的简易方法《生物学通报））１９９３年第６期登载了林晓生的“过塑法制作鳞翅目昆虫标本”一文。在上述方法的启发下,我们改用电熨斗过塑制作昆虫标本,此方法简便、价廉,在标本的保存及展示上有同于上法的优点,现介绍如下：门）把采集来的昆虫按所需...     

小鼠ES细胞种系嵌合体的获得

种系嵌合体的获得是实现ＥＳ细胞介导的转基因途径的决定步骤,ＥＳ细胞种系分化能力的保持是决定种系嵌合的前提条件,而事体的主种系嵌合体的获得则是判定ＥＳ细胞系是否具有种系分化能力的唯一方法,为考察本室新近建立的３种小鼠ＥＳ细胞系ＭＥＳＰＵ２１．ＭＥＳＰＵ２２和ＭＥＳＰＵ２９的种系分化能力,选用近交系Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ及远交系ＫＭＷ和ＩＣＲ为受体胚胎提供者,分别通过囊胚注射法和８细胞期桑椹胚注射法进行了嵌     

遗传修饰小鼠胚胎干细胞种系嵌合体小鼠的研制

利用显微注射的方法,分别将三株不同类型的经过遗传修饰的中靶ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,通过胚胎移植将注射后的囊胚引入受体小鼠子宫中,分别获得了不同整合度的嵌合体小鼠,将高碳合度小鼠与C57BL/6J小鼠杂交,对这些仔鼠进行PCR及Southern鉴定的结果表明,三株修饰后的ES细胞均能整合入生殖系,得到了棕褐色子代鼠,表明获得了种系嵌合体小鼠。     

一种制作简易义眼的方法

剥制动物标本,都必须装义眼,才能显示出它的自然神态。如果没有现成的义眼,可用废灯泡玻璃制义眼,效果好。剥制动物皮毛前,仔细观察眼的形状、虹膜、瞳孔的颜色和大小,并用软尺测量,逐一作好记录。打碎灯泡玻璃,选取大小适当的碎片,拱面向下,凹面向上,在水中用剪刀按测定的尺寸剪好成形。在玻璃凹面内按记录下眼的各部     

一种制作石鳖标本的简易方法

针对红条毛肤石鳖(Acanthochiton rubrolinea-tus)标本制作过程中,鲜活材料容易出现卷曲和伸展不完全的问题,笔者以红条毛肤石鳖为材料,探究了置于不同温度梯度水浴中的石鳖的身体伸展度,从而提供一种简易标本制作方法。     

幻灯片的简易制作

在多年教学实践中,我摸索出一种简便易行的制片方法,适合当前中小学校较为普及的投影幻灯机用的大灯片。用本法,只要具备能洗印黑白照片的简单器材和暗室即可。画稿的取材,可选自书籍、报刊、杂志上的插图,不管插图是黑白、彩色、线条或照相网纹版,均能按原大尺寸复制成清晰的幻灯片。器材需一只4—6寸晒箱,4号光面印相纸,8定黑白幻灯正片和一般洗相用的显影、定影药剂。制作在装有红色安全灯的暗室,按画稿大小裁切一张4号印相纸,药膜朝上铺在晒箱面板玻璃上、再把选好的画稿页扣在相纸上,让画稿面与相纸药膜面     

介绍一种制作义眼的简易方法

义眼是制作各类动物标本不可缺少的材料,它对保证动物标本质量、突出动物形态特征有着重要的作用。现介绍一种以廉价的有机玻璃碎片为原料,采用加热和铁杵按压的简易方法收到了较好的效果。现将制作程序介绍如下。先选取一块厚约3—5毫米(大小可根据制作需要)的有机玻璃碎片,用尖嘴钳夹住边缘,放到酒精灯或电炉上加热1—3分钟。应注意均匀加热和不要靠热源太近,以防止有机玻璃材料因受热不均或局部受热过高而出现气泡。待其受热软化(见冒微烟为度)后,放在事先准备好同规格的圆管形模具上(亦可用短铁管或玻璃瓶口代替),速用圆头铁杵(略小于所…     

绿色荧光蛋白嵌合体小鼠的建立和鉴定

为研究嵌合体动物中供体胚胎干细胞 (ES)在宿主胚胎发育中的走向和定位 ,同时探讨绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因在转基因动物制作中的应用价值 ,本研究将pEGFP N1基因导入小鼠ES D3 细胞系 ,得到稳定表达GFP的胚胎干细胞亚系ES D3 GFP ,通过对昆明小鼠的囊胚腔注射 ,获得了 4只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠。其中 1只存活至成年 ,3只出生时死亡。荧光显像及组织PCR检测显示了绿色荧光蛋白在小鼠体内的嵌合情况。以绿色荧光为指标可实现活体水平的动态观察 ,本实验首次观察到以GFP为指标所示的机体嵌合情况与根据毛色嵌合推测的机体嵌合情况存在很大差异 ,以GFP为嵌合指标更加全面而准确 ;但不排除GFP对小鼠发育存在一定毒性的可能 ;另外 ,有结果显示供体ES细胞在宿主体内除了大片补丁状嵌合外 ,还存在细胞散在嵌合的情况 ,后者提示了在组织中利用GFP对ES细胞实施单细胞追踪和实时观察的可行性 ,为胚胎发育和疾病发生的相关研究提供了新的观察方法     

干花标本的简易制作

将硅胶磨碎,筛取1毫米以下的细小颗粒烘干备用。取鲜花标本放入稍大的容器(如杯、碗等)内,用硅胶掩埋固定(注意保持花的自然姿态),立即用塑料膜封密杯口用绳扎紧。6—7天后,小心地移去硅胶,取出干花并置于盛有干燥剂的标本瓶中,或将干花柄穿上铅丝插在木     

胶泥模型的简易制作

选取胶性泥(在河流、池塘边常有)为原材料,加适量麻丝,和匀摔制成基本形状,在阴凉处放至半干,用小刀修饰;水分挥发尽后,用毛     

简易振动切片机的制作

利用两用电动剃须刀、显微镜架等材料,我们制作了简易型振动切片机。该机切下的脑薄片,在人工脑脊液中其自发放电可维持12h以上。     

简易唾液收集器的制作

从口腔自然流出的唾液,在短时间内不能获得较多的量,而且其中常会含有杂质。为了获得较多、纯净的唾液,俄国生理学家研制了克拉斯诺格尔斯基氏囊,但其制作和使用较为复杂。现介绍一个简易的唾液收集方法。     

BALB／c小鼠胚胎干细胞系的建立及其嵌合体小鼠的获得

目的：建立BALB/c小鼠胚胎干细胞系,并用于制作嵌合体小鼠。方法：从BALB／c小鼠囊胚内分离培养内细胞团块。建系后,进行C57BL／6L小鼠受体囊胚腔注射,制作嵌合体小鼠,结果：建立了我国第一株BALB／c小鼠胚胎干细胞系,该细胞系具有典型的ES细胞形态,碱性磷酸酶强阳性,核型正常以及具有分化为三种胚层组织的能力,并已产生5只嵌合体小鼠,结论：建立的BALB／c小鼠胚胎干细胞系具有胚胎干细胞的各种特点,可用于体内外诱导分化研究,在进一步观察生殖系嵌合情况后,决定是否可应用于基因打靶等转基因动物的制作。     

人抗药基因在小鼠ES细胞中的表达及嵌合体小鼠的研究

本文用磷酸钙沉淀法将含人mdrl 基因表达质粒(pHaMDR 1/A)转染到小鼠胚胎干细胞(ES-5),得到了四个能稳定地在含有200 ng/ml 秋水仙素培液中生长传代的细胞克隆。经Southern 印迹杂交及RNA 印迹杂交证明人mdrl 基因已整合到ES 细胞基因组,并有表达。其中两个克隆杂交信号较强,抗药基因可随秋水仙素浓度提高而扩增,表达量也随之增加。用抗该基因编码的p170糖蛋白抗体对ES-mdr 1细胞作免疫荧光染色,证实p170蛋白分布于细胞表面。未发现ES-mdr 1细胞的体内、外发育潜能与亲代细胞的有何差异。但是mdr1细胞不能被RA 和HMBA 化学药物诱导分化,表明这些细胞已与亲代ES-5细胞不同,具有拮抗化学药物诱导分化的作用,其机理尚待研究。因此,ES-mdr1细胞可作为在细胞水平研究p170糖蛋白作用机理的体系,也可用以建立体外筛选拮抗抗约基因作用新手段的模型。我们也得到了含人mdr1基因的嵌合小鼠,并对它们的嵌合情况作了分析。     

人抗药基因在小鼠ES细胞中的表达及嵌合体小鼠的研究

本文用磷酸钙沉淀法将含人ｍｄｒ１基因表达质粒转染到小鼠胚胎干细胞,得到了四个能稳定地在含有２００ｎｇ／ｍｌ秋水仙素培液中生长传代的细胞克隆。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交及ＲＮＡ印迹杂交证明人ｍｏｄｒ１基因已整合到ＥＳ细胞基因组,并有表达。其中两个克隆杂交信号较强,抗药基因可随秋水仙素深度提高而扩增,表达量也随之增加。用抗该基因编码的ｐ１７０糖蛋白抗体对ＥＳ－ｍｄｒ １细胞作免疫荧光染色,证实ｐ１７０