小鼠类胚胎干细胞分离培养及用于制作嵌合体小鼠的实验研究

目的探讨分离小鼠囊胚内细胞群类胚胎干细胞及用于制作嵌合体小鼠的方法及应用价值。方法分离3.5d小鼠囊胚内细胞群的类胚胎干细胞作为供体细胞,通过显微注射方法将分离的类胚胎干细胞注射到供体小鼠的囊胚腔中,再将注射后的囊胚移植到假孕雌鼠的子宫中制作嵌合体小鼠。结果分离36枚囊胚的内细胞群类胚胎干细胞,注射256只昆明小鼠囊胚中,移植32只假孕雌鼠子宫中,获产崽2窝,共12只,其中2只获毛色嵌合体小鼠。结论采用该技术分离所获得的类胚胎干细胞作为供体细胞制作嵌合体小鼠获得成功,该方法为ES细胞介导的转基因动物制作增添了一条新的途径,在同种不同品系的动物改良及遗传病基因治疗中有一定的应用价值,尤其是对未能建立ES细胞系的大动物的遗传工程操作具有一定意义。     

AG490阻断JAK2-STAT3通路并调节Th17/Treg平衡进而抑制小鼠自身免疫性关节炎

<正>IL-6介导的STAT-3信号在Th17的分化和类风湿性关节炎的致病中起关键作用。作者通过研究JAK2抑制剂AG490对Th17/Treg平衡的影响进而探讨阻断STAT3信号的抗类风湿关节炎分子机制。作者通过皮下注射二型胶原构建胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型,并向其腹腔注射AG490并观察在体影响,结果发现AG490改善CIA小鼠的关     

高脂食物对动脉硬化合并类风湿关节炎小鼠肠道菌群的影响

目的 分析高脂食物对动脉硬化合并类风湿关节炎小鼠肠道微生物的影响,了解动脉硬化合并类风湿关节炎小鼠肠道微生物的变化。方法 8周龄ApoE-/-小鼠饲喂高脂食物和普通食物至17周龄来诱发动脉硬化症状,再通过给17周龄ApoE-/-小鼠腹腔注射抗6-磷酸葡萄糖异构酶（glucose-6-phosphate isomerase,GPI）抗体呈阳性的K/BxN血清,从而诱导其产生类风湿关节炎症状。通过Illumina HiSeq平台对各组小鼠粪便进行16S rDNA V4区测序,分析动脉硬化合并类风湿关节炎小鼠肠道微生物的变化。结果 ApoE-/-小鼠饲喂高脂食物后,其血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）浓度和血清总胆固醇（TC）浓度均显著升高,主动脉内膜斑块面积比喂普通食物的ApoE-/-小鼠显著增加,表明ApoE-/-小鼠饲喂高脂食物后引起更显著的动脉硬化症状。再通过腹腔注射抗GPI抗体呈阳性的K/BxN血清,各组ApoE-/-小鼠均出现关节肿胀,饲喂高脂食物的ApoE-/-小鼠其踝关节宽度和临床评分（clinical score）低于饲喂普通食物组小鼠。OTU数、Shannon指数和Simpson指数显示高脂食物和K/BxN血清处理组ApoE-/-小鼠肠道菌群多样性降低,Firmicutes/Bacteroidetes值升高,t-test分析显示在属水平上,Prevotellaceae_UCG-001显著降低,Ruminiclostridium_6显著升高。t-test分析和Firmicutes/Bacteroidetes比值显示ApoE-/-小鼠肠道菌群结构紊乱。结论 高脂食物使ApoE-/-小鼠的肠道菌群组成和结构发生改变,导致ApoE-/-小鼠的动脉硬化症状加重,类风湿关节炎症状减轻。提示肠道微生物组成和结构的改变,可能与动脉硬化合并类风湿关节炎发病机制相关。     

LFA-1基因敲出鼠胶原诱导风湿性关节炎发病率及程度的降低

淋巴细胞功能相关抗原（LFA-1）属于黏附分子家族,在细胞相互作用中发挥重要作用。通过观察LFA-1基因敲除小鼠的胶原诱导关节炎(CIA)发病率、放射线学及组织学变化,探讨LFA-1分子在CIA发病中的作用。实验采用100μg的二型胶原(CII)加弗氏完全佐剂充分混合,在LFA-1基因敲除小鼠及正常对照组小鼠尾根部皮内注射,21天后重复免疫一次,随后进行发病率、放射线学及组织学分析。研究结果显示,CII免疫后,正常对照组小鼠平均发病率为57%,临床可见明显的放射线及组织学的异常变化。而LFA-1基因敲除小鼠无发病,放射线及组织学检查亦无明显异常改变。上述结果提示LFA-1在胶原诱导的关节炎发病中起重要作用。     

小鼠胶原诱导性关节炎模型的建立及其免疫学变化研究

目的 胶原诱导性关节炎模型（collagen induced arthritis,CIA）是研究类风湿性关节炎发病机制和治疗药物筛选的理想模型,也是目前国际上公认的关节炎模型.但是,目前鲜见Ⅱ型胶原诱导CIA模型的系统免疫学变化的报道.因此,本研究采用DBA/1小鼠诱导了CIA模型,并对其免疫学改变进行了系统研究.方法 将牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂混和并充分乳化,于DBA/1小鼠尾根部皮内注射进行初次免疫,20 d后同样方法进行再次免疫.应用千分尺测量CIA模型小鼠的左右两侧足掌厚度,并进行关节炎评分.酶联免疫吸附试验测定小鼠血清Ⅱ型胶原特异性抗体,Luminex技术和αLISA技术测定血清及培养上清中的细胞因子水平.结果CIA小鼠于造模后23 d开始,陆续出现前肢、后肢的红肿、功能障碍,发病率高达100％,且随着时间的延长其关节肿胀程度呈进行性加重,关节炎评分增高.CIA小鼠脾脏指数较正常组明显升高,且Ⅱ型胶原刺激的特异性T细胞增殖明显增强.细胞因子检测结果表明,脾细胞培养上清中IFN-γ和1L-4含量及IFN-γ/IL-4比值明显升高,TNF-α和IL-1β水平亦显著升高.此外,CIA小鼠血清中存在高水平的Ⅱ型胶原特异性抗体.结论 Ⅱ型胶原诱导CIA模型发病率高,免疫学改变以Th1细胞因子升高为主,兼有细胞免疫功能及体液免疫功能损伤.     

伤寒沙门菌耐药质粒体内接合转移的研究

目的研究伤寒沙门菌耐药质粒pRST98在小鼠体内向大肠埃希菌的接合转移,比较质粒在体内、外接合转移的异同。方法由于伤寒沙门菌是一种只对人类致病的病原菌,因此将伤寒沙门菌的耐药质粒pRST98导入遗传背景明确的鼠伤寒沙门菌低毒株RIA中,用接合子pRST98/RIA口饲BALB/c小鼠进行体内接合转移。结果在体外伤寒沙门菌很容易将pRST98转移给大肠埃希菌E.coliK12W1485(F-)RifrLac+,该接合子又可将pRST98转移给鼠伤寒沙门菌RIA,但在不同宿主菌中耐药标志的表达有差异。未经人工感染小鼠肠道分离的大肠埃希菌耐药情况严重,口饲pRST98/RIA后出现了部分耐药标志与pRST98耐药谱相同的大肠埃希菌,但有些抗生素的耐药标记未能表达。质粒检测显示体内形成的接合子均含耐药质粒pRST98。结论伤寒沙门菌耐药质粒pRST98在动物体内、外均可转移给大肠埃希菌,但同一质粒在体内、外大肠埃希菌株中耐药标志表达有差异,即使在同一小鼠体内分离的不同接合子,pRST98/E.coli菌株耐药性亦有不同,显示耐药质粒表达的多样性和复杂性。     

躁郁症可能与线粒体功能障碍有关

日本科学家通过小鼠实验发现,动物脑神经细胞的线粒体功能障碍有可能引发躁郁症。躁郁症是一种时而忧郁、时而狂躁的双极型情感疾病。日本理化研究所等机构组成的研究小组在《分子精神病学》杂志上发表论文说,科学家改变了小鼠的基因,使它们脑神经细胞     

软骨复合物对小鼠类风湿性关节炎的预防作用

目的观察口服软骨复合物对类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）的预防作用。方法口服软骨复合物两周后,再注射弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant,FCA）诱发小鼠RA模型,通过观察小鼠关节炎分数的变化,测定小鼠各器官的指数,检测小鼠血清中一氧化氮（nitric oxide,NO）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平以及关节组织病理学的变化来评价口服软骨复合物对类风湿性关节炎的预防作用。结果软骨复合物能较有效的改善关节的肿胀度,并显著地提高小鼠的胸腺指数（P〈0．01）,显著地提高脾指数（P〈0．05）,明显降低NO和TNF-α水平;组织病理学显示给药组关节的变形破坏得到减轻。结论软骨复合物能有效地起到预防佐剂性关节炎的作用,然而其治疗作用还有待进一步研究。     

HLA-Ⅱ类基因DRα及DRB_1~*0401~1转基因小鼠的制备

利用受精卵原核的显微注射技术,将人类HLA-Ⅱ类DRα及DRB1 *0401两种基因,显微注射至C57BL/6×DBA/1杂交小鼠受精卵中;并移植至假孕受体鼠的输卵管内.实验先后有8只鼠妊娠,稳定遗传五代,经PCR检测95只HLA-DRα、DRB1*0401阳性.α-32P-dCTP斑点杂交与Southem印迹杂交鉴定出68只整合含有DRα及DRB1 *0401混合型的转基因小鼠,有效率为20.9%.经Northern杂交…和RT-PCR检测,其HLA-DRα、DRB1 *0401基因在脾脏和肾脏中均有表达.结果说明,携带人类HLA-Ⅱ类DRα和DRB1* 0401基因的转基因动物模型构建成功.     

HLA-Ⅱ类基因DRα及DRB1*0401转基因小鼠的制备

利用受精卵原核的显微注射技术,将人类HLA-Ⅱ类DRα及DRB1 *0401两种基因,显微注射至C57BL/6×DBA/1杂交小鼠受精卵中;并移植至假孕受体鼠的输卵管内.实验先后有8只鼠妊娠,稳定遗传五代,经PCR检测95只HLA-DRα、DRB1*0401阳性.α-32P-dCTP斑点杂交与Southem印迹杂交鉴定出68只整合含有DRα及DRB1 *0401混合型的转基因小鼠,有效率为20.9%.经Northern杂交…和RT-PCR检测,其HLA-DRα、DRB1 *0401基因在脾脏和肾脏中均有表达.结果说明,携带人类HLA-Ⅱ类DRα和DRB1* 0401基因的转基因动物模型构建成功.     

试图利用脊髓灰质炎病毒修复脊髓损伤

意外伤害可损伤脊髓 .脊髓的运动神经元一旦受伤便不能再生 .伯明翰亚拉巴马大学病毒学家 CaseyD.Morrow及其同事用基因工程方法使小鼠产生在人中可找到的脊髓灰质炎受体分子 .他们并对脊髓灰质炎病毒进行修饰 ,使该病毒不能制造病毒外壳 ,从而使修饰病毒能侵入运动神经元 ,却不能播散到其它神经元而引起脊髓灰质炎 .下一步 ,研究者给一组小鼠注射该修饰病毒的译本 ,另一组小鼠注射无此病毒的译本 .结果 ,接受非病毒译本的小鼠活得很好 ,而接受修饰病毒译本的小鼠走路有问题 ,其运动神经元及其周围的细胞受损害 .说明这种修饰病毒的复制子…     

玻璃酸钠治疗类风湿关节炎的临床观察及护理

目的:探讨玻璃酸钠治疗类风湿关节炎的临床效果及护理方法.方法:选取我科2010年11月-2011年11月收治的280例类风湿关节炎患者为研究对象,将280例患者随机分为两组,每组140例患者.对照组实施玻璃酸钠关节腔注射,常规护理;干预组实施配合玻璃酸钠注射的强化护理.比较两组治疗后的效果.结果:干预组患者治疗后效果好于对照组(P＜0.05).结论:对实施关节腔注射玻璃酸钠治疗类风湿性关节炎的患者施行强化护理,可以提高类风湿性关节炎的治疗效果,为临床治疗及护理提供科学的依据.     

三得利公司开发的动脉硬化的治疗药

日本三得利生物医学研究所与国立循环系统病中心研究所共同开发了人C型钠利尿肽(与hCNP、小鼠CNP是同一物质),这是抑制培养小鼠平滑肌细胞的DNA合成和抑制细胞数量增加的药物.CNP是动脉硬化的治疗药.这项成果已在大阪召开的第6次ANP研究会上发表. 借助NP受体的第2信使cGMP的亢进来抑制这种细胞的增殖.目前已克隆了A型、B型、C型3种NP受体.A型和B型分别与ANP和CNP高度亲和,这有助于生理活性的表达.     

接合转移诱动系统在遗传分析和体内基因操作中的应用

接合转移诱动系统在遗传分析和体内基因操作中的应用赵巍,张成刚,蔺继尚（中国科学院沈阳应用生态研究所,１１００１５）细菌间ＤＮＡ的转移主要有转化、转导、接合和原生质体融合等几种形式。接合是通过供体菌和受体菌完整细胞间的直接接触,而传递大段ＤＮＡ的方法,...     

日本科学技术厅批准在温室内进行重组番茄栽培试验

日本由农林水产省所属农业环境技术研究所、农业生物资源研究所、农业研究中心组成的小组1989年8月4日接到科学技术厅的批准通知,将在9月开始在温室内进行重组番茄栽培试验.这是日本第一次在非封闭系统内进行重组体试验.也是向重组植物利用开放系统前进了一步.计划此试验进行到1990年4月.根据试验结果将进入使用开放系统     

用γ-IFN治疗高钙血症

γ-干扰素将成为治疗高钙血症的强力治疗药.这项工作是生长科学协会附属研究所、东京女子医大研究小组与第一制药公司共同进行的.目前还处于动物(小鼠)试验阶段.从观察结果看,其效果远超过现行的降钙素疗法.于7月3日在札幌召开的日本癌学     

肌肉注射可调控胰岛素基因对糖尿病小鼠降糖作用

为研究四环素调控的胰岛素表达载体肌肉直接注射后对实验性糖尿病小鼠的降糖作用,构建了质粒prTA-tet4-rhINS.以链脲佐菌素(STZ)诱导Balb/C小鼠成糖尿病模型,300 μg质粒注射至小鼠的股部肌肉,并同时在饮水中加入不同浓度强力霉素（Dox）,监测小鼠末梢血糖、体重,测定血清人胰岛素、C肽水平.用RT-PCR检测小鼠肌肉注射部位组织中人胰岛素原mRNA水平的表达情况.结果表明：质粒prTA-tet4-rhINS注射后,给予Dox可显著降低糖尿病小鼠的血糖,血清人胰岛素、C肽水平相应升高,体重增加.效果持续大约二周.小鼠肌肉组织中有人胰岛素原mRNA表达.降糖效果和基因表达程度随Dox浓度增加而增强.质粒prTA-tet4-rhINS对STZ诱导的糖尿病小鼠高血糖起到明显的降低作用.在糖尿病小鼠肌肉组织能很好地表达,并受Dox调控.     

三种眼镜蛇毒镇痛作用的实验研究

目的研究3种蛇毒即N.siamensis、N.naja和N.atra的镇痛效果。方法采用热板法、醋酸致小鼠扭体法和1%甲醛致小鼠舔足法建立3种疼痛模型,于腹腔注射N.siamensis、N.naja和N.atra后不同时间点测量小鼠第1次舔足时间、扭体次数和注射甲醛后舔足总时间,比较各时间点测量值的差异。结果热板法小鼠疼痛模型组,于腹腔注射N.Atra、N.naja和N.siamensis后第6~10h之间能明显提高小鼠疼痛阈值;醋酸致小鼠扭体法模型组与对照组相比,腹腔注射N.siamensis(10μg/kg)、N.naja(10μg/kg)和N.atra(10μg/kg)后明显减少扭体次数;1%甲醛致炎法小鼠模型组,于腹腔注射N.naja(10μg/kg)后在第Ⅰ时相能明显降低小鼠舔足时间,注射N.siamensis(5μg/kg)和N.atra(5μg/kg)后在第Ⅱ时相能明显降低小鼠舔足时间。结论小鼠腹腔注射N.siamensis、N.naja和N.Atra后无论对热刺激还是化学刺激引起的疼痛都有明显镇痛作用,特点是起效较慢但持续时间长。     

同源重组酶的精制

横浜市立大学木原生物学研究所研究助理三品裕司、教授小山秀机等和森永乳业公司首次从小鼠乳癌细胞精制出进行同源反应的2种酶,此工作已在11月京都召开的日本分子生物学会上发表.同源重组是在碱基序列相同或非常类似的2个DNA之间发生的反应.如果能在特定的基因部位发生重组,就有可能用于基因治疗等.目前的问题是重组频率低.已知精制酶仅在体外有活性,还不知道准确的分子量.进一步进行研究能在重组频率上升时起作用.     

Osteopontin调控骨髓间充质干细胞(MSCs)对促进糖尿病足创面愈合的作用

目的:拟以C57糖尿病小鼠为研究对象,建立糖尿病小鼠OPN-/-MSCs组、糖尿病小鼠MSCs组及溶剂组对照组,采用小鼠创面愈合率检测、HE染色、免疫组化等试验方法,观察骨髓间充质干细胞(MSCs)及OPN基因敲除的MSCs对糖尿病小鼠创面愈合的影响.方法:原代提取MSCs及OPN-/-MSCs细胞;利用流式细胞仪检测细胞表面抗原;利用STZ溶液腹腔注射的方法建立糖尿病小鼠模型;将MSCs及OPN-/-MSCs分别注射至小鼠尾静脉,并观察创面愈合情况.结果:成功提取和培养了两组细胞,并成功建立了糖尿病小鼠模型;溶剂组小鼠完全愈合用了19.90± 0.55天,OPN-/-MSCs注射组完全愈合用了18.52±0.75天,MSCs尾静脉注射糖尿病组小鼠用了13.70±0.35天.尾静脉注射MSCs组创面愈合时间明显短于普通糖尿病小鼠组.结论:通过观察三组糖尿病小鼠创面愈合情况,证实MSCs尾静脉注射糖尿病组小鼠比OPN-/-MSCs注射组小鼠和溶剂组小鼠的创面愈合速度快,说明OPN具有调控骨髓间充质干细胞促进创面愈合的作用,为临床治疗糖尿病足提供新的理论依据.