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利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
设计一对PCR引物,其中上游引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列,以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该cDNA有2个碱基变异,以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其 相似文献
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丁型肝炎病毒(HDV)核酶是DHV前体RNA分子中一段能自我切割的RNA序列,具有独特的二级结构,为HDV双滚环复制所必需,通过抑制其活性可以控制HDV感染。它又存在分子间切割活性,即反式切割作用,因而有可能应用于切割异源RNA分子。本文就这些方面的研究进展作一综述。 相似文献
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丁型肝炎病毒(HDV)核酶是近年来发现的一种具有独特的假结结构的核酶,本文着重从其结构,功能以及两者之间的关系等方面进行综述。 相似文献
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从我国一例四川丁型肝炎病毒HDVRNA,丁型肝炎抗原均阳性的重症肝炎患者的血清中,用异硫氰酸胍法提取RNA经过逆转录PCR扩增后获得一长289bp的HDVcDNA片段,将PCR产物回收后直接克隆到PCRTMⅡ质粒,挑出阳性克隆并亚克隆入M13mp19的EcoRⅠ区位点,提取单链进行序列分析,结果显示与已知的中国河南、美国、日本、秘鲁和中国台湾5株HDVcDNA相同片段比较,同源性分别为对97.2%、93%、94%、79%、96%。 相似文献
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人丁型肝炎病毒核酶的结构与功能韩金祥靳大川(山东省医药生物技术研究中心,济南250062)(山东医科大学附属医院)关键词人丁型肝炎病毒核酶本文为山东省重点攻关项目和山东省自然基金资助项目人丁型肝炎病毒(HDV)是一种缺陷性负链RNA病毒,是目前已知的... 相似文献
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中国河南株丁型肝炎病毒全基因组的cDNA克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
从我国河南-抗丁型肝炎病毒抗原(anti-HDAg)及丁型肝炎病毒(HDv)RNA双阳性的HBsAg携带者血清中提取RNA,采用人工合成的引物进行逆转录和聚合酶链反应(PCR),获得了贯穿HDV全基因组的6个相互重叠的cDNA片段。经双脱氧末端终止法进行核苷酸序列分析,得到了长度为1674bp的我国人河南株HDVcDNA全序列。计算机分析表明,该株与我国台湾株(HDVIA型)、美国-1株(HDVIB型)、日本-1株(HDVⅡ型)和秘鲁-1株(HDVⅢ型)的核苷酸同源性分别为的94.3%、86.8%、75.4%和66.3%,氨基酸序列的同源性分别为89.7%、85.1%、71.9%和64.6%,并在核苷酸和推导的HDAg氨基酸序列中分别发现了5个和2个集中保守的区域。这些区域均与HDV的某些重要功能密切相关。 相似文献
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中国不同丁型肝炎病毒株抗原编码区基因的cDNA特点分析 总被引:2,自引:0,他引:2
为研究我国不同地区不同人群中丁型肝炎(丁肝)病毒(HDV)毒株感染的分子特征,从我国河南,内蒙,北京,四川,广西,西藏,新疆,辽宁,上海等地的HDV健康携带者,慢性丁肝病人与重症肝病人中,筛选获得10余份HDV-RNA阳性血清,经逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)交叉扩增获得HDV抗原编码区的cDNA片段,并克隆到pGEM-3zf(-)或pGEM-T载体上,经序列分析研究其基因结构特点,结果表明 相似文献
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庚型肝炎病毒(HGV)NS5区部分基因的克隆和cDNA序列测定 总被引:3,自引:0,他引:3
用RT-PCR技术从一例献血员血清标本中扩增出HGV非结构区的部分基因片段,克隆后测定。cDNA序列。该序列与国外三株HGV的核苷酸同源性在90%以上;与GBV—A和GBV—B的同源性分别为44.7%和33.17%;与已发表的23个HCV全序列的相应序列比较,同源性均小于40%。结果表明,克隆的病毒株为HGV中国株。同时,用RT—PCR检测了河北固安和南京地区的115份HCV感染者标本.HGVRNA阳性率为3.47%。表明我国某些特殊人群中HGV感染率较高,是一个不容忽视的问题。 相似文献
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利用原位逆转录聚合酶链式反应(ISRtPCR)技术检测了15例肝细胞癌及其癌旁肝组织中丙型肝炎病毒(HCV)RNA的定位及分布,并探讨影响实验结果的重要因素。结果表明HCVRNA阳性信号主要位于肝细胞和癌细胞胞浆,胞核几乎阴性。影响结果的主要因素包括所用蛋白酶K浓度,消化切片的时间,组织固定所用固定剂的选择及PCR扩增的循环次数等 相似文献
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特异切割马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的核酶研究 总被引:6,自引:0,他引:6
根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯地病毒中国分离株(PLRV-Ch)复制酶基因负链RNA的核酶序列,以体外转录的PLRV-Ch复制酶基因负链RNA作为底物,与转录的核酶RNA共同保温,以检测核酶对底和的体外切割作用。实验结果表明,核酸疼 RNA对PLRV-Ch复制酶基因负锭RNA具有特异切割作用。 相似文献
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原位杂交检测石蜡包埋组织中丙型肝炎病毒RNA 总被引:2,自引:0,他引:2
为了提高HCVRNA的原位杂交检出率,我们应用地高辛标记HCV5'非编码区cDNA作探针,采用原位分子杂交法对96N肝硬变,102例肝细胞肝癌进行了HCVRNA检测,并结合不同年份标本中HCVRNA的检出率,探讨HCVRNA在肝脏的分布及其丢失问题.结果显示HCVRNA定位于肝细胞和肝癌细胞胞浆内,肝脏其它细胞未见明确阳性杂交信号。HCVRNA杂交阳性细胞呈灶状和弥漫分布,正常对照、替代、空白对照为阴性,在不同年份肝硬变及肝细胞肝癌中两两比较表明新近包埋蜡块组织较陈旧蜡块组织HCV RNA检出率明显高。本文结果证实HCVRNA存在于肝细胞和癌细胞的胞浆内,未见肝内其它细胞阳性,还发现HCVRNA在肝硬变、肝细胞癌中的检出率随保存时间的延长,其阳性检出率明显降低,表明HCVRNA在蜡块中存在明显的降解,应尽可能选用近期标本、为临床分析HCV感染,HCV与肝硬变、肝细胞肝癌的关系提供更客观的数据。 相似文献
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