用人工合成的丁型肝炎病毒抗原多肽检测丁肝病毒IgM抗全及其初步应用

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＶ－Ａｇ）肽建立了检测抗ＨＤＶ－ＩｇＭ抗体的ＥＬＩＳＡ方法。本法操作简便、快速、重复性好、特异性强,与抗ＨＡＶ－ＩｇＭ＇抗ＨＢｃ－ＩｇＭ、抗ＨＢｓ－ＩｇＭ、抗ＨＣＶ－ＩｇＭ、抗ＣＭＶ－ＩｇＭ、抗ＲＶ－ＩｇＭ、类风湿因子（ＲＦ）及抗核抗体（ＡＮＡ）阳性血清均不起反应,且可被２－巯基乙醇阻断而不起反应。经初步临床应用,３１例正常人血清抗ＨＤＶ－ＩｇＭ全部阴性,２８例慢     

抗原捕获聚合酶链式反应（AC—PCR）直接分型检测单纯疱疹病毒

用抗单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）型共同性ｇＣ和ｇＤ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,包被Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管,捕捉ＨＳＶ,同时加入３个引物：一个是ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－型共同性上游引物,另两个分别是ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２型特异性下游引物。借此建立了能直接分型检测ＨＳＶ的抗原捕获聚合酶链式反应（ＡＣ－ＰＣＲ）。ＨＳＶ－１的扩增产物为４７７ｂｐ,ＨＳＶ－２的为３９９ｂｐ,两型病毒经ＡＣ－ＰＣＲ扩增后产生分子量不同的ＤＮ     

抗丙肝病毒核心抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

用基因工程重组技术获得的丙肝病毒（ＨＣＶ）核心蛋白抗原与鼠血清白蛋白交联后免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术成功地建立了４株稳定分泌抗核心抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞,试验结果表明,该４株ＭｃＡｂｓ与免疫抗原及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶ ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５无反应,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。４株ＭｃＡｂｓ中３株为ＩｇＧ２     

HBV套式PCR技术的建立及HBcAb血清的检测

本文实验设计了套式ＰＣＲ引物进行ＨＢＶＤＮＡ诊断。外引物限定ＨＢＶＣ基因的一个６１３ｂｐ片段,内引物限定其内－５０７ｂｐ的片段,扩增后产物被限制性内切酶图谱证明。该技术的特异性强,重复性好,灵敏性达到１－１０ｆｇ,对ＨＢＶ血清可做出明确诊断。应用这项技术,对４２例ＨＢｃＡｂ血清进行了检测,实验表明仅ＨＢｃＡｂ阳性血清同带ＨＢｓＡｇ的ＨＢｃＡｂ阳性血清一样,体内持续进行着大量ＨＢＶＤＡＮ复制。     

HCV RNA的检测方法简介

本文讨论了检测丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ）的样本来源和处理,引物的设计,合成和选择等问题;重点介绍了蛋白酶Ｋ消化法,聚乙二醇沉淀法,异硫氰酸胍一步法,硅凝胶提取法和直接捕获法提取ＨＣＶ　ＲＮＡ的５种方法,以及一步ＰＣＲ法,常规ＲＴ－巢式ＰＣＲ,直接ＲＴ－巢式ＰＣＲ,化学修饰的ＲＴ－巢式ＰＣＲ,联合ＰＣＲ,双温ＰＣＲ和定量竞争性ＰＣＲ等７种ＰＣＲ方法检测ＨＣＶ　ＲＮＡ,用ＰＣＲ检测ＨＣＶ　ＲＮＡ方法的标准化以及检测ＨＣＶＲＮＡ具有非常重要的意义。本文还介绍了一种新型的定量方法－ｂＤＮＡ信号放大技术检测ＨｃＶＲＮＡ。     

丙型肝炎病毒C33_c单克隆抗体的研制和鉴定

用丙型肝炎病毒重组蛋白Ｃ３３_ｃ抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,运用杂交瘤技术成功地建立了７株能稳定分泌抗Ｃ３３_ｃ单克隆抗体的杂交瘤细胞１Ｈ６Ｄ２、２Ｇ１Ａ６、３Ａ４Ａ８、３Ｅ３Ｅ７、４Ｇ１２Ｃ１０、４Ａ１０Ｃ２、５Ｆ４Ｂ６．试验结果表明,７株ＭｃＡｂｓ具有良好的ＨＣＶ特异性,间接ＥＬＩＳＡ法测得小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１：１０￣４－１：４×１０￣４;竞争抑制实验和相加指数测定证实７株ＭｃＡｂｓ识别相关的抗原表位;７株ＭｃＡｂｓ中１株为ＩｇＭ（５Ｆ４Ｂ６）,其它６株为ＩｇＧ（２ａ）。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肾小球系膜细胞原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

在建立大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）体外培养方法的基础上,通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验,ＲＮＡ印迹分析和斑点杂交观察ｂＦＧＦ对ＭＣＤＮＡ合成及原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响．结果表明,ｂＦＧＦ作用于ＭＣ１８ｈ,ＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入率明显增加（Ｐ＜０．０５）,２４ｈ达到高峰（Ｐ＜０．０１）;ｂＦＧＦ显著诱导原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达,其表达活性分别于３０ｍｉｎ和１ｈ达到高峰．提示ｂＦＧＦ是ＭＣ的强效丝裂原,其对ＭＣＤＮＡ合成的促进作用与诱导原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达有关．     

丙型肝炎病毒感染标志检测临床意义的研究现状

随着丙型肝炎病毒分子生物学研究的深入，相继建立了多种ＨＣＶ感染标志的检测方法。本文就ＩｇＧ抗－ＨＣＶ，ＨＣＶＲＮＡ和ＩｇＭ抗－ＨＣＶ检测在丙型肝炎诊断，预后估计及抗病毒药物疗效评价方面的意义作简要综述。     

丙型肝炎病毒RNA多聚酶在昆虫细胞中的表达

ＨＣＶ ＮＳ５Ｂ基因片段克隆入ＢＡＣ－ＴＯ－ＢＡＣ＾ＴＭ重组杆状病毒表达系统的ｐＦＡＳＴＨＴｃ载体质粒,转化ＤＨ１０ＢＡＣ＾ＴＭ感受态细菌获得重组的Ｂａｃｍｉｄ质粒,将重组Ｂａｃｍｉｄ质粒转染Ｓｆ细胞,获得的重组杆状病毒可表达目的蛋白。免疫印迹和体外活性检测表明,所表达蛋白为ＨＣＶ ＮＳ５Ｂ蛋白,具有多聚酶活性。     

AHF及NE、人参皂甙对不同年龄大鼠VSMC c-myc基因和HSP_(70)基因表达的影响

用原位杂交法及激光光密度计灰度扫描半定量法,比较了老年组（２４月龄）与青年组（６周龄）Ｗｉｓｔａｒ大鼠离体培养的主动脉ＶＳＭＣ（５－１０代）ｃ－ｍｙｃ与ＨＳＰ７０基因的表达及红细胞抗高血压因子（ＡＨＦ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）与人参皂甙对上述基因表达的影响。结果表明：１．增龄导致的ＶＳＭＣ增殖很可能与ｃ－ｍｙｃ基因的过度表达有关,ＮＥ、ＡＨＦ和人参皂甙可以通过调控ｃ－ｍｙｃ基因的表达来影响ＶＳＭＣ增殖。２．增龄伴随的应激能力下降可能与ＨＳＰ７０基因表达的减少有关。３．ＨＳＰ７０基因也可能参与了ＶＳＭＣ增殖与分化的调控,ＮＥ、ＡＨＦ与人参皂甙可能通过调控ＨＳＰ７０基因的表达来影响ＶＳＭＣ的增殖     

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的同步PCR扩增

介绍了一种从人血清中同步扩增和检测ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＣＶ－ＲＮＡ的方法。ＨＣＶ－ＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ,这种ｃＤＮＡ和从ＨＢＶ中抽提出的ＤＮＡ一起,用根据ＨＢＶ、ＨＣＶ保守区序列设计的特异引物进行同步ＰＣＲ扩增,这种方法对于检测ＨＢＶ和ＨＣＶ重复感染很有用处     

用显微切割技术和催化信号扩增法检测何杰金病瘤细胞（H／RS）中的 …

为明确何杰金病（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ,ＨＤ）瘤细胞中是否存在人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）感染,采用显微切割技术结合ＰＣＲ方法检测ＨＤ组织及其瘤细胞Ｈｏｄｇｋｉｎ／Ｒｅｅｄ－Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（Ｈ／ＲＳ）中的ＨＣＭＶ核酸;采用免疫组织化学催化信号扩增（ｃａｔａｌｙｓｅｄ ｓｉｇｎａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ,ＣＳＡ）法检测ＨＤ中ＨＣＭＶ的立即     

乙型肝炎病毒（HBV）体内外对单个核细胞白细胞介素—1和白细胞介素…

本研究用ＰＡＰ法、胸腺细胞增殖法、脾细胞增殖法,分别检测１６例体外ＨＢＶ感染和骨髓单个核细胞与１６例慢性乙型肝炎患者体内感染的骨髓单个核细胞中的ＨＢｃＡｇ和白细胞介素－１、白细胞介素－２的诱生活性。结果显示,体外ＨＢＶ感染组成体内ＨＢＶ感染组骨髓ＭＮＣｓ中ＨＢｃＡｇ检出率分别为５０％和４３．７％。本实验结果表明,ＨＢＶ在体外感染骨髓ＭＮＣｓ,且与体内自然感染相符,但光镜下未观察到致细胞病变效应。体     

丙肝病毒IgM抗体检测方法的初步研究

选择东燃公司的重组结构区和非结构区抗原建立的抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检测方法,简便、快速、特异性强、重复性好、敏感性高。只在丙肝病人组检出而健康献血员均为阴性,与抗ＨＡＶ、ＨＢＶ的ＩｇＭ抗体无交叉反应,且排除了ＲＦ干扰和ＩｇＧ占位引起的假阳性和假阴性,适用于抗ＨＣＶ－ＩｇＭ的临床检测。对２４例丙肝病人的抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检测结果显示,急性丙肝病人血清抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检出率较高（７５％,６／８）,且随ＡＬＴ正常而消失或滴度下降。慢性病人抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检出率为５６．３％（９／１６）,其中７例ＩｇＭ持续阳性者为慢性活动性丙肝,说明慢性病人抗ＨＣＶ－ＩｇＭ与疾病的活动性密切相关。结果提示抗ＨＣＶ－ＩｇＭ的检测在急性肝炎的诊断及慢性丙肝的预后和转归上具有临床意义。     

抗原捕获聚合酶链式反应（AC－PCR）直接分型检测单纯疱疹病毒

用抗单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）型共同性ｇＣ和ｇＤ羊克隆抗体（ＭｃＡｂ）,包被即Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管,捕捉ＨＳＶ,同时加入３个引物：一个是ＨＳＶ─１／ＨＳＶ─２型共同性上游引物,另两个分别是ＨＳＶ─１和ＨＳＶ─２型特异性下游引物。借此建立了能直接分型检测ＨＳＶ的抗原捕获聚合酶链式反应（ＡＣ─ＰＣＲ）。ＨＳＶ─１的扩增产物为４７７ｂｐ,ＨＳＶ─２的为３９９ｂｐ两型病毒经ＡＣ─ＰＣＲ扩增后产生分子量不同的ＤＮＡ片段,致使ＡＣ─ＰＣＲ能直接分型检测ＨＳＶ。ＨＳＶ─１和ＨＳＶ─２扩增产物的克隆和序列分析表明,本方法特异性好。用本法检测Ｂａｌｂ／ｃ幼鼠中枢神经系统ＨＳＶ感染的脑标本,进一步证实本方法不仅敏感、特异,而且分型准确。     

丙肝病毒抗原在肝细胞癌组织中的定位——共聚焦激光扫描显微镜观察

应用共聚焦激光扫描显微镜（ＣｏｎｆｏｃａｌＬａｓｅｒＳｃａｎｎｉｎｇＭｉｃｒｏｓｃｏｐｅ,ＣＬＳＭ）观察免疫荧光标记的丙型肝炎病毒核心抗原（ＨＣＶＣＰ－１０）在肝癌组织中的表达,与免疫组化普通光镜观察结果比较,显示ＨＣＶＣＰ－１０抗原在肝细胞癌和癌周肝组织的定位特点,介绍ＣＬＳＭ在病理学中的应用。研究结果表明：ＨＣＶＣＰ－１０抗原大部分存在于胞浆,少部分存在于胞核,ＨＣＶ的表达有核内过程;ＨＣＶＣＰ－１０抗原在癌周肝组织的表达明显强于癌组织;ＣＬＳＭ比普通光镜在确定抗原定位上有更大的优越性     

天然和氧化修饰型LDL、VLDL及HDL对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因fos及myc表达的影响

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要。脂蛋白和氧化修饰型脂蛋白对ＳＭＣ增殖的影响以及ＳＭＣ增殖与原癌基因异常表达的关系是当前ＡＳ发病机制研究的热点之一。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ,ｅｒｂ－Ｂ原癌基因转录表达的影响。结果表明：①ＨＤＬ对ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ基因表达无影响;②ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势,但与对照比较差异不显著（Ｐ＞０．０５）;③ＯＸ－ＶＬＤＬ,ＯＸ－ＶＬＤＬ和ＯＸ－ＨＤＬ有使ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ基因表达显著增强的作用（Ｐ＜０．０１）,且其作用较相应的天然脂蛋白大（Ｐ＜０．０１）．上述结果说明：ＬＤＬ,ＶＬＤＬ,ＯＸ－ＬＤＬ,ＯＸ－ＶＬＤＬ和０Ｘ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与刺激ＳＭＣｆｏｓ和ｍｙｃ癌基因表达增加有关。     

反义癌基因c－jun对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

构建可表达原癌基因ｃ－ｊｕｎ正义和反义ＲＮＡ的真核细胞表达载体,将其导入体外培养的大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）后,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析证实,两种插入方向的ｃｊｕｎ基因均在ＶＳＭＣ中大量表达;￣３Ｈ－ＴｄＲ参入实验表明,ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ的增殖具有显著抑制作用．提示用反义核酸抑制ｃ－ｊｕｎ表达对治疗某些由于ＶＳＭＣ增殖所引起的心血管病可能具有一定意义．     

丙型肝炎病毒RNA打点杂交检测方法同RT－PCR方法的比较

采用ＨＣＶ基因组结构区Ｃ区ｃＤＮＡ探针和非结构区ＮＳ３－４区ｃＤＮＡ探针,建立了用打点杂交（ｄｏｔｂｌｏｔｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法,同采用ＨＣＶ基因组５’端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异地检出血清中ＨＣＶＲＮＡ,但ＲＴ－ＰＣＲ法敏感性优于ＲＮＡ打点杂交法。对于无血清学指标的慢性ＮＡＮＢ肝炎病人的诊断,可采用这两种方法。这两种方法的敏感性在很大程度上依赖于引物和探针的敏感性,以及ＲＮＡ提取方法。ＲＴ－ＰＣＲ法适用于诊断病毒血症和复制,打点杂交法适用于研究ＨＣＶＲＮＡ量的变化,对治疗的评价,以及为实验筛选较高滴度的ＨＣＶＲＮＡ阳性样本。     

献血员巨细胞病毒感染的研究

用ＰＣＲ法和ＤＮＡ杂交法检测同一献血员的白细胞及血清中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ,并用ＥＬＩＳＡ法检测血清中的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ、ＩｇＧ（测四个不度）,连续两年共检测白细胞和血清样本各２００人份。ＰＣＲ法检测白细胞中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为６３％和７０％,ＤＮＡ杂交法检测的阳性率为４２％和５０％。ＰＣＲ法检测血清中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率为４９％和５３％,ＤＮＡ杂交法检测的阳性率为３３％和３９％。Ｈ