从酵母中制备辅酶Ⅰ的简易方法

辅酶Ⅰ(尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸,NAD~+)是一种重要的生化试剂,常从面包酵母中提取。前人报道的提取方法,或是银盐沉淀方法,或是层析方法,由于成本昂贵,操作繁复耗时,反应体积大等缺陷,不甚理想。本文报告一种以小体积汞盐试剂分离纯化NAD~+的简易方法。     

酵母的综合利用——从生产辅酶A下脚水中提取辅酶Ⅰ的简便方法

辅酶Ⅰ又名烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide Adenine Diphosphate:NAD~ )分子式为C_(21)H_27O_(14)N_7P_2,分子量为663;等电点为3.0;化学结构如下:     

槲皮素对节律钟基因的调控研究*

目的:探讨槲皮素对节律钟基因表达的影响。方法:通过50%的马血清刺激诱导人骨肉瘤U2OS细胞同步化,利用槲皮素处理同步化后的U2OS细胞。进一步利用荧光定量PCR检测节律钟关键基因的变化。利用western blot检测槲皮素对组蛋白乙酰化的影响,并且通过试剂盒测定槲皮素对细胞内氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的影响。通过尼克酰胺和槲皮素同时处理U2OS细胞,利用荧光定量PCR检测节律钟关键基因的变化。结果:U2OS细胞经过槲皮素处理后节律钟关键基因芳烃受体核转位蛋白3(brain and muscle Arnt-like protein-1,BMAL1),节律周期蛋白2(Period 2, PER2),孤儿核受体alpha(REV-ERBα)和蓝光受体蛋白1(Cryptochrome 1,CRY1)在转录水平的表达水平有明显的升高。槲皮素处理可以显著降低U2OS细胞的组蛋白乙酰化的水平,并且显著升高U2OS细胞内的氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的水平。进一步研究发现,尼克酰胺(Nicotinamide,NAM)处理完全抑制了槲皮素对节律基因的影响。结论:槲皮素显著地激活了节律钟关键基因的mRNA表达水平,槲皮素对于节律基因的调控依赖于Sirtuins的活性,其机制可能是由于槲皮素增加了细胞内的氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的水平所导致。     

草酰乙酸—苹果酸穿梭系统对甘氨酸和α-酮戊二酸氧化的调节

草酰乙酸—苹果酸穿梭系统通过改变线粒体基质内NAD~+的可利用量或NADH/NAD~+比率对甘氨酸和α-酮戊二酸氧化进行调节。该穿梭系统利用不同来源的NADH的能力相近。     

眼镜蛇毒对大鼠延髓一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠延髓某些核团一氧化氮合酶(NOS)表达的影响。方法 采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)方法,观察大鼠延髓某些核团NOS阳性神经元在眼镜蛇毒中毒组、生理盐水组、正常对照组的变化。结果 蛇毒组大鼠延髓的中缝大核,外侧网状核NOS阳性神经元比对照组表达增强。结论 眼镜蛇毒对延髓的NOS阳性神经元表达有上调作用。     

NAD~+对小麦叶片线粒体甘氨酸氧化和三羧酸代谢的调节

外源NAD~+对小麦叶片线粒体内甘氨酸、苹果酸及α—酮戊二酸氧化都有促进作用。当几种呼吸底物同时存在时,其中甘氨酸的氧化抑制了其他底物的同时氧化,因为催化这两类废物氧化的酶对NAD~+的亲和力和对NADH/NAD~+比值的敏感程度有差异,催化甘氨酸氧化的甘氨酸脱羧酶对线粒体基质内可利用的NAD~+的亲和力分别比苹果酸脱氢酶和α—酮戊二酸脱氢酶的亲和力大约1或2倍。另外,甘氨酸亦可通过保持线粒体基质内高NADH/NAD~+比值来影响三羧酸环的正常代谢。     

大鼠尾壳核头部一氧化氮合酶阳性神经元区域性分布和脑缺血后变化

用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶法，观察了大鼠尾壳核头部背内侧区，背外侧区，腹内侧区和腹外侧区一氧化氮合酶阳性神经元的分布和形态特征。并在夹闭双侧颈总动脉２小时后，观察这些区域一氧化氮合酶阳性神经元的变化。     

细胞内NAD~+水平分析方法的研究进展

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD~+)是存在于所有活细胞中的必需吡啶核苷酸。NAD~+作为一种重要的辅酶和底物,参与能量产生、DNA修复、基因表达、钙依赖的二级信使信号和免疫调节作用等多种生物学过程。NAD~+代谢长期失衡会扰乱机体的生理功能,导致代谢性疾病、神经退行性疾病以及癌症的发生。NAD~+的水平随着老龄化以及年龄相关性疾病的发生逐渐降低。最近的研究表明,提高细胞内NAD~+水平是延缓衰老,预防年龄相关退行性疾病的一种有前景的方法。尽管细胞内NAD~+代谢与人类健康和疾病密切相关,但NAD~+含量的检测极具挑战性。目前为止,开发了多种用于定量分析细胞内NAD~+水平的分析方法。该文就细胞内NAD~+水平分析方法作一综述,着重分析近年来国内外细胞内NAD~+水平检测的研究进展以及提出未来NAD~+定量分析所需解决的问题。     

眼镜蛇毒对大鼠脑桥某些核团一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对大鼠脑桥某些核团一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元表达的影响.方法采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)方法,观察大鼠脑桥某些核团NOS阳性神经元在眼镜蛇毒中毒组、生理盐水组、正常对照组之间的变化.结果蛇毒组大鼠脑桥的三叉神经运动核,面神经核NOS阳性神经元比生理盐水组、正常对照组表达增强.结论眼镜蛇毒对脑桥的某些核团的NOS阳性神经元表达有上调作用.     

抗衰老因子——NAD~+水解酶抑制因子78C

正衰老(senescence)又称老化(aging),指发育成熟个体随年龄增长结构与机能的退变过程;衰老常伴随运动机能下降、代谢紊乱、心功能下降等病理表现,与糖尿病、癌症等疾病发病密切相关。引发衰老的主要因素包括:自由基氧化应激、线粒体损伤、端粒缩短、基因组损伤、致瘤因素、衰老基因激活、理化损伤等。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD~+)含量与衰老相关。NAD~+含量降低,可能是衰老重要机     

不同时辰电针对大鼠杏仁核一氧化氮合酶表达的影响

目的观察不同时辰电针对大鼠杏仁核一氧化氮合酶(NOS)表达的影响.方法采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)法,观察不同时辰电针大鼠一侧"足三里"穴对杏仁核NOS表达的影响.结果电针对大鼠杏仁皮质内侧核群、基底外侧核群NOS的表达有上调作用,并存在时辰差异(P<0.05);电针对大鼠杏仁中央核NOS表达无明显作用(P>0.05).结论电针对大鼠杏仁核NOS表达的影响有时辰差异.     

分光光度法与^14C标记法测定RuBP羧化酶的活性的比较

方法的原理分光光度酶偶联法是根据RuBP羧化酶催化RuBP产生的磷酸甘油酸与NADH的氧化作用相偶联的原理设计的。当加入ATP及NADH后,NADH在PGK和GAPDH的催化下氧化为NAD~ ,每羧化1molRuBP有2molNADH被氧化,根据在波长340nm处光密度的变化,可测知NADH     

光呼吸代谢物乙醇酸、乙醛酸和草酸对烟草叶片硝酸还原的影响

乙醇酸、乙醛酸和草酸能明显促进烟草(Nicotiana rustica)叶片在黑暗中的硝酸还原,光呼吸抑制剂a-羟基吡啶甲烷磺酸能消除前二者的促进作用而不能完全消除草酸的作用。草酸+NAD~+能显著促进离体的硝酸还原。烟叶提取液加入草酸和NAD~+后生成NADH和CO_2认为活体内由乙醛酸氧化生成的草酸是经脱氢生成NADH供硝酸还原之用。未能证明在烟叶内存在乙醇酸脱氨酶,因此排除由乙醇酸直接脱氢以还原硝酸的可能。     

氧化磷酸化作用和有关問題的研究 Ⅴ.維生素K_3对鼠肝綫粒体腺三磷酶的激活作用

当有KCN存在时维生素K_3对鼠肝线粒体ATP酶活力有明显的激活作用。维生素K_3对ATP酶活力的这种抑制作用受Amytal抑制。我们认为维生素K_3的这种作用是由于构成了呼吸链与NADH之间电子循环传递,电子由细胞色素(或呼吸链上其他中间电子载体)逆传至NAD~+,利用高能磷酸链的能量使NAD~+进行需能还原生成NADH,生成的NADH再通过DT黄酶及维生素K_3重新又把电子传回呼吸链,这样电子继续不断循环,ATP即不断水解。维生素K_3激活的ATP酶可能仅牵涉NADH氧化偶联三步磷酸化作用的第一步磷酸化作用。本文结果支持我们前文中关于维生素K_3对NAD~+需能还原抑制作用的解释。     

扬子鳄梨状皮质NOS、AChE阳性神经元的分布

目的观察扬子鳄梨状皮质内一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(acetylcho-linesterase,AChE)阳性神经元的形态和分布,为扬子鳄脑的比较解剖学积累资料,为其机能研究提供形态学依据。方法采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)法和亚铁氰化酮法观察扬子鳄梨状皮质内NOS和AChE阳性神经元的分布和特征。结果扬子鳄梨状皮质内有NOS和AChE阳性神经元分布,为大、中、小型细胞,以中小型细胞为主,胞体呈圆形、椭圆形、三角形和梭形。结论扬子鳄梨状皮质内有NOS和AChE阳性神经元分布。     

扬子鳄新皮质NOS、AChE阳性神经元的分布

目的 观察扬子鳄新皮质内一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)阳性神经元的形态和分布,为扬子鳄脑的比较解剖学积累资料,为其机能研究提供形态学依据.方法 采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)法和亚铁氰化酮法观察扬子鳄新皮质内NOS和AChE阳性神经元的分布和特征.结果 扬子鳄新皮质内有NOS和AChE阳性神经元分布,为大、中、小型细胞,以中小型细胞为主,胞体呈圆形、椭圆形、三角形和梭形.结论 扬子鳄新皮质内有NOS和AChE阳性神经元分布.     

高等植物中的谷氨酸脱氢酶及其生理作用

谷氨酸脱氢酶普遍存在于植物体内,它虽然不是植物吸收利用氮素的主要成员,但在植物氮代谢中起着重要作用。高等植物的谷氨酸脱氢酶主要存在于线粒体中,以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH)为辅酶。该酶分子量为255-258kD,由六个亚基组成,亚基包括a和b两种类型,存在七种同工酶形式。又能氧化脱铵从而为三羧酸循环提供碳骨架。     

生物医学光学中NADH荧光检测技术的发展

NADH(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)自1962年被发现至今已有五十多年了,在此期间,运用NADH及其相关技术进行医疗诊断与医学检测的方式不断发展,领域也不断扩大。从当前的研究成果来看,NADH因为其独有的性质在现代医学诊断与检测领域发挥了极大的作用,如实时、无损地监测脑部的活动;清晰、有效地识别不同种类的脑组织;抗细胞辐射损伤;抗辐射诱导的细胞凋亡;进行人体内的诸多平衡调节及人体生物钟调节等。本文将重点介绍在重要领域中的NADH研究和应用的突破。     

乳酸发酵第2阶段能量释放生物学教学研究

高中生物学教学中,有教师对乳酸发酵第2阶段是否释放能量存在分歧。对乳酸发酵第2阶段反应研究文献进行综述,通过对乳酸脱氢酶催化机理、NADH/NAD~+电子传递和氧化还原反应的热力学分析,提出丙酮酸生成乳酸进程中,NADH转化成NAD~+过程释放能量,但不能产生ATP。为乳酸发酵第2阶段能量释放等问题讨论提供理论依据。     

扬子鳄中脑视叶NOS、AChE阳性神经元的分布

目的观察扬子鳄中脑视叶一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)阳性神经元的形态和分布,为扬子鳄脑的比较解剖学积累资料,为其机能研究提供形态学依据。方法采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)法和亚铁氰化酮法观察扬子鳄中脑视叶NOS和AChE阳性神经元的分布和特征,并作统计学处理。结果扬子鳄中脑视叶有NOS和AChE阳性神经元分布,为大、中、小型细胞,以中、小型细胞为主,胞体呈椭圆形、三角形、圆形和梭形。结论扬子鳄中脑视叶有NOS和AChE阳性神经元分布。