肺泡型细胞内表皮生长因子和转化生长因子α、β_1及其受体基因表达的研究

分离培养成年大鼠的肺泡 型细胞 ,通过斑点杂交、原位杂交和免疫组织化学染色 ,研究肺泡 型细胞内表皮生长因子 (EGF)、转化生长因子 α和 β1 (TGFα、TGFβ1 )及其受体基因的表达。结果显示肺泡 型细胞可表达 EGF、TGFα和TGFβ1 ,也可表达相应的 EGF受体 (EGFR)、TGFβ受体 型和 型 (TβR 、TβR )。表明肺泡 型细胞是合成和分泌 EGF、TGFα和 TGFβ1 的细胞之一 ;细胞凭借其 EGFR、TβR的存在 ,其增殖与分化可能受 EGF、TGFα和 TGFβ1 的旁分泌和自分泌两种途径调控。     

脑啡肽类似物与阿片受体亚型的结合

为了探讨脑啡肽类似物与不同受体亚型的结合,我们用液相法所合成的一系列类似物,以豚鼠回肠和小白鼠输精管作为测定类似物对不同受体亚型结合活性的模型,并用放射受体分析法测定了这些类似物对阿片受体的活力,最后我们还用小白鼠热板法测定了它们的镇痛效果。我们发现脑啡肽分子第五位氨基酸侧链的疏水性和游离羧基对δ-受体结合特别重要。对μ-受体来说第五位氨基酸不一定是必需的,而羧端的游离羧基对μ-受体的结合是不利的。第二位甘氨酸被D-氨基酸取代后无论对δ-受体或μ-受体的结合能力都可以提高,但如果D-氨基酸的侧链过于庞大,则大大影响对δ-受体的结合能力。第四位苯丙氨酸对δ-受体来说必须具有典型的苯丙氨酸芳香族。δ-受体对脑啡肽分子的结构要求更为严格,而镇痛活性基本上与μ-受体结合的活性相平行,而与δ-受体结合的活性关系不大。合成的[DAla~2-DSer(Bzl)~5]Enk类似物在与δ-受体上的活力,比已报道的[DAla~2—Ser(Bzl)~5]Enk还要高一倍多,而[DAla—(N—CH_3)Phe~4—DSer(Bzl)~5]Enk的镇痛效果比吗啡要高300倍以上。     

脑啡肽类似物与阿片受体亚型的结合

为了探讨脑啡肽类似物与不同受体亚型的结合,我们用液相法所合成的一系列类似物,以豚鼠回肠和小白鼠输精管作为测定类似物对不同受体亚型结合活性的模型,并用放射受体分析法测定了这些类似物对阿片受体的活力,最后我们还用小白鼠热板法测定了它们的镇痛效果。我们发现脑啡肽分子第五位氨基酸侧链的疏水性和游离羧基对δ-受体结合特别重要。对μ-受体来说第五位氨基酸不一定是必需的,而羧端的游离羧基对μ-受体的结合是不利的。第二位甘氨酸被D-氨基酸取代后无论对δ-受体或μ-受体的结合能力都可以提高,但如果D-氨基酸的侧链过于庞大,则大大影响对δ-受体的结合能力。第四位苯丙氨酸对δ-受体来说必须具有典型的苯丙氨酸芳香族。δ-受体对脑啡肽分子的结构要求更为严格,而镇痛活性基本上与μ-受体结合的活性相平行,而与δ-受体结合的活性关系不大。合成的[DAla~2-DSer(Bzl)~5]Enk类似物在与δ-受体上的活力,比已报道的[DAla~2-Ser(Bzl)~5]Enk还要高一倍多,而[DAla-(N-CH_3)Phe~4-DSer(Bzl)~5]Enk的镇痛效果比吗啡要高300倍以上。     

甲状旁腺素、表皮生长因子及维生素A酸对UMR106细胞EGF受体的调节作用

本文研究了EGF、PTH和RA对UMR106细胞EGF受体的调节作用。结果显示PTH能上调EGF的受体,UMR106细胞经bPTH(1-34)处理3天,EGF受体的相对结合率与对照比较提高了40.3％,每个细胞的EGF受体数目从7.22×10~3增加到1.44×10~4,Kd从2.02×10~(-11)增加到3.68×10~(-11)mol/L。而RA则能下调EGF受体,以RA处理3天,EGF受体数目从7.22×10~3下降到4.28×10~3,Kd则从2.02×10~(-11)增加到4.17×10~(-11)mol/L。提示PTH和RA可能通过调变其EGF受体而分别起到正性和负性生长调节作用。     

转化生长因子α

转化生长因子α(transforming growth factor α,TGFα)是50个氨基酸的单链多肽,由160个氨基酸的前体加工而成。由于表皮生长因子(EGF)受体是 TGFα的功能性膜受体,因此,TGFα的许多生物学效应与 EGF 相似。TGFα最主要的功能是通过自分泌机制维持转化细胞的恶性生长。     

转化的小鼠肝细胞能表达TGFαmRNA

转化生长因子α(TGFα)可以由许多细胞、尤其是转化细胞产生。细胞转化能启动并维持TGFαmRNA的表达及其多肽产物的生成。TGFα与表皮生长因子(EGF)的受体结合,以自分泌的方式刺激细胞生长。曾有报道,EGF可诱导体外培养正常角化细胞的TGFαmRNA聚集,雌激素对大鼠乳癌细胞也有此种作用,说明     

EGF对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分化影响的研究

许多研究发现,表皮生长因子(EGF)对生殖功能有重要的调节作用。本文用体外细胞培养的方法,研究了EGF对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分化的影响及其作用方式。结果如下:EGF可以明显抑制颗粒细胞DNA的合成,但促进孕酮的生成,后者是因为EGF能显著提高细胞内3β-羟甾脱氨酶(3β-HSD)的活性。放射受体分析表明,颗粒细胞上存在EGF的特异性受体,其K_d为1.83±0.3×10~(-8)mol/L,B_(max)为1.75±0.29×10~4个位点/细胞。卵巢免疫组化结果未发现颗粒细胞有EGF样免疫染色,而卵泡膜、黄体及间质内等均有阳性染色。以上结果提示,EGF可能通过旁分泌机制作用于颗粒细胞的EGF受体,从而调节细胞的生长和性激素的分泌,这对于颗粒细胞的成熟及卵泡的发育有着重要意义。     

肿瘤坏死因子α对ROS17/2.8细胞甲状旁腺素受体的下行调节

肿瘤坏死因子α(TNFα)是激活的单核巨噬细胞分泌的蛋白质,分子量17kD。其多功能性和选择性抑制肿瘤细胞生长的作用受到高度重视。我们的实验表明:TNFα(3×10~(-10)-1×10~(-7)mol/L)能显著降低大鼠成骨肉瘤细胞株ROS17/2.8的甲状旁腺素(PTH)受体总结合率,比对照降低7.47-37.45％,且与TNFα的浓度呈正相关。时间曲线显示,TNFα作用时间越长,受体总结合率降低越明显。Scatchard作图表明PTH受体数目降低而其亲和力无显著变化。细胞周期分析显示,TNFα(3.83×10~(-10) mol/L作用3天)能抑制S期DNA合成。可见TNFα通过减少PTH受体数目以调节骨代谢。同时通过抑制DNA的合成以调节骨细胞的增殖。     

雌激素对兔子宫内膜细胞EGF受体和细胞周期的调控

 由受体放射配基结合分析证明家兔子宫内膜细胞的EGF受体Kd值为0.53nmol/L,每个细胞的最大结合容量为1.11×10~4结合位点。10~(-10)mol/L雌二醇处理24h,细胞的最大结合容量增至2.75×10~4结合位点数/细胞,而Kd值无明显变化,可是,当10~(-5)mol/L雌二醇处理24h,细胞的EGF受体结合率,DNA合成速度率均下降。G_0/G_1期细胞比值明显下降,而G_2+M期和S期细胞明显上升。     

一种新的荧光孕酮探测鸡输卵管孕酮受体

我们用化学合成的方法,制备了6S(α-氨基丙酸)-异硫氰酸荧光素-孕酮(简称:6NHPF),对鸡的输卵管孕激素受体(PR)进行了观察。发现PR存在于腔上皮细胞核,在平滑肌肌细胞及输卵管近泄殖腔端不存在PR。在输卵管相邻的组织切片上用孕酮或6NHPF的中间体化合物抑制剂,发现对合成的荧光孕酮都能够竞争性抑制,证实了这种新的,亲水性的小分子荧光孕酮能与PR特异性地结合。     

固相二抗放射免疫法测定表皮生长因子

本实验制备的兔抗鼠表皮生长因子(EGF)抗血清放免效价为1:10~6,抗体的特异性强,亲和常数K为8.29×10~(-10)mol/L,最大结合容量B_(max)为2.61×10~(-10)mol/L。在固相二抗放射免疫法测定中,0.1～100ng的EGF可以竞争性抑制~(125)I-EGF的结合,Logit分析相关系数为-0.993,低限检出量为0.5ng/ml。本方法的回收率及变异系数分别为92％～102％和5.7％～7.0％。应用此方法测定小鼠颌下腺中EGF的含量约为0.66mg/g腺体。     

肺泡Ⅱ型细胞表皮生长因子和转化生长因子α、β1及其受体表达的研究

分离培养成年大鼠的肺泡Ⅱ型细胞,通过斑点杂交、原位杂交和免疫组织化学染色,研究肺泡Ⅱ型细胞内表皮生长因子（EGF）、转化生长因子α和β1（TGFα、TGFβ1）及其受体基因的表达。结果显示肺泡Ⅱ型细胞可表达EGF、TGFα和TGFβ1,也可表达相应的EGF受体（EGFR）、TGFβ受体Ⅰ型和Ⅱ型（TβRⅠ、TβRⅡ）。表明肺泡Ⅱ型细胞是合成和分泌EGF、TGFα和TGFβ1的细胞之一;细胞凭借其EGFR、TβR的存在,其增殖与分化可能受EGF、TGFα和TGFβ1的旁分泌和自分泌两种途径调控。     

表皮生长因子与肿瘤

表皮生长因子(EGF)是由53个氧基酸残基组成的单链多肽,分子量约为6100。除颌下腺外,体内许多其它组织和器官也含EGF。多种因素可调节其合成、贮存及分泌。EGF能诱导正常细胞出现转化细胞的表型;能促进病毒和化学物质的致癌作用,能产生免疫抑制作用。EGF、EGF受体与癌基因及其产物在结构和功能上有密切联系,它亦与转化生长因子的功能相似或相关,EGF在某些肿瘤的发生和发展过程中占有重要的地位。     

表皮生长因子对人类着床滋养层具有自分泌和旁分泌作用

表皮生长因子(EGF)是一个53个氨基酸的多肽。在大部分生殖系统组织中都含有其受体,其中以胎盘、蜕膜、胎膜、子宫及子宫内膜较多。为了探讨EGF在人类着床过程中的作用,作者采用免疫组织化学方法观察了宫内和异位妊娠着床部位EGF及其受体的分布情况。结果发现,在细胞滋养层,EGF及     

神经节苷脂类抑制BT325细胞系生长机理的初步探讨

用 ¹²⁵I-EGF与人多形成胶质细胞瘤BT325细胞系膜上EGF受体的饱和结合实验, 竞争抑制实验研究GM3,BBG(bovine brain gangliosides)对EGF受体最大结合量, 亲和常数及受体数目的影响; 放射受体法观察EGF-EGFR复合物内吞过程, 测定胞质和培养基中EGF含量.结果表明: BT325细胞质膜上存在高亲和力EGF结合位点,GM3对EGF与其受体的亲和力无明显抑制作用(P＞0.05),但能明显减少其受体的数目(P＜0.05); GM3能明显延长EGF-EGFR复合物内吞过程; GM3处理的胞质中EGF浓度比对照组显著升高(P＜0.05), 培养液中无明显差异,这可能是由于GM3抑制EGF分泌所致.     

应激大鼠肾胞液[^3H]醛固酮结合活性的变化及调节机制的初步研究

为探讨烫伤引起病理性应激时大鼠肾胞液醛固酮结合活性的变化及可能的调节机制,以[～3H]-醛固酮为配体,用放射性配基-受体结合分析法测定了正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠肾胞液醛固酮结合活性的结合容量(Rt)和表观解离常数(Kd);采用体内注射TNF-α、IL-1β中和抗体和α-促黑色素细胞刺激激素(α-melanocyte-stimulatinghormone,α-MSH)和合成肽KPV(Ac-D-Lys-L-Pro-D-Val)等措施调节其改变.结果发现,肾胞液存在两种不同结合容量、不同亲和力的醛固酮结合活性受体.与正常对照组的Rt(Rt141.6±7.2fmol/mgpro;Rt2317.6±70.0fmol/mgpro)相比,轻烫组的Rt(Rt141.4±5.0fmol/mgpro;Rt2314.8±45.7fmol/mgpro)无显著差异(P>0.05;P>0.05);重烫组的Rt(Rt122.4±5.4fmol/mgpro;Rt2196.3±32.5fmol/mgpro)则显著下降(P<0.01;P<0.01).体内注射TNF-α与IL-1β中和抗体、α-MSH及KPV均能明显提高重烫组Rt值.结果提示,重度烫伤大鼠肾胞浆醛固酮结合活性降低,TNF-α、IL-1β中和抗体、α-MSH及KPV均可防止重度烫伤引起病理性应激时醛固酮结合活性降低.     

TyrB26位点改变的人类胰岛素类似物的化学合成与体外活性

摘要：为了研究人类胰岛素B链第26位的酪氨酸对胰岛素和受体之间的结合的影响,包括单独的氨基酸替换或化合物替换的不同的胰岛素类似物被合成,其中化合物替代的类似物的B链C末端都减少了4个氨基酸。在对它们与胰岛素受体的亲和力进行研究中,结果发现它们与胰岛素受体的亲和力没有丢失, HisB26类似物和N-MeHisB26类似物的结合能力与胰岛素相比改变不大,分别是胰岛素的72 %和107 %。N-MeGluB26类似物,AadB26类似物和Phe (4-carboxy) B26类似物的结合能力有很大的提高,分别是130 %, 234 %和160 %。     

短肽库中VEGF受体拮抗剂的筛选及生物学活性鉴定

为获得可溶性血管内皮细胞生长因子受体 (s VEGFR,soluble VEGF receptor)的拮抗剂 ,以固相化可溶性 VEGF受体 s Flt- 1和 s KDR通过生物淘选筛选噬菌体十二肽库 .采用 ELISA及竞争性 ELISA筛选阳性克隆 ,12 5I- VEGF竞争性放射免疫吸附实验进一步鉴定阳性克隆的体外结合活性 .经过 3～ 4轮生物淘选的短肽库有明显富集 .初筛后约 3%的噬菌体克隆可同时结合相应的可溶性受体及人脐静脉内皮细胞 .其中 6个克隆与内皮细胞的结合 ,可以部分地被变性复性处理的原核表达血管内皮细胞生长因子 (VEGF)竞争抑制 .4个噬菌体克隆可竞争性抑制 12 5I- VEGF与可溶性受体的体外结合反应 .两个 KDR阳性克隆 K2 37与 K93可在体外抑制内皮细胞的增殖 .克隆K2 37与 F90可抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管形成 .阳性克隆可作为血管内皮细胞生长因子受体拮抗剂 ,具有良好的应用前景 .     

人肝癌细胞表皮生长因子受体以及佛波酯对它的调变

利用放射受体结合测定证明了两株人体肝癌细胞株7402和7721细胞均有EGF受体的存在。受体数目分别为每细胞6.2×10~4和2.5×10~4,代表它们亲和力的解离常数K_D值分别为1.2 nmol/L和0.80 nmol/L。PMA处理对7721细胞的EGF受体及其亲和力均无明显影响;对7402细胞EGF受体却显示了调变作用。受体数目虽同样没有变化;但亲和力却随药物处理时间有一个下降、恢复的变化过程。在PMA处理1小时,EGF结合抑制达最大,此时受体的解离常数K_D值为3.0 nmol/L;在处理96小时,受体亲和力恢复并略有增高,此时K_D值为0.95 nmol/L。~3H-TdR参入实验表明,在PMA抑制7402细胞EGF受体亲和力的同时,细胞DNA的合成速率也相应下降。对于佛波酯等因子对EGF受体的调变作用,我们认为是属于生长因子启动细胞DNA合成进行细胞分裂的整个生物学过程中感受性因子对进行性因子的调节作用。     

一种内源性的竞争性的γ-氨基丁酸受体抑制剂

 用离心、超滤、分子筛及高压液相色谱技术从牛小脑得到一种GABA受体结合抑制剂。该物质竞争性地抑制~3H-蝇草醇(Muscimol)与突触膜GABA受体的高亲和力部位结合,Ki值为0.73±0.25ng。对~3H-二苯羟乙酸-3-奎宁环脂(QNB)和~3H-氟硝安定(~3H-FNZP)与脑匀浆和突触膜的结合没有影响。初步分析该物质为分子量6000道尔顿的肽。