支原体培养基的改良及其效果评价

为了改良支原体培养基配方,评价其效果。按《中华人民共和国药典》(以下简称药典)中规定的灵敏度比较方法,将实验室制备的新型支原体改良培养基与《药典》中支原体检查法推荐的处方培养基和商品化支原体培养基进行灵敏度效果比较试验。结果表明,改良后的支原体肉汤和半流体培养基,与接种口腔支原体和肺炎支原体及其它支原体的精氨酸培养基、支原体肉汤培养基无显著差异;与接种肺炎支原体的支原体半流体培养基无显著差异;与接种口腔支原体的支原体半流体培养基差异显著。因此经改良后的支原体培养基灵敏度能够满足药典规定的要求,但其操作简便,且成本低于现有的支原体培养基。     

易致污染的支原体在固体培养基上的形态特征

目的研究不同条件下、不同生长期易致污染的支原体在固体培养基中的形态特征。方法通过改变支原体菌体浓度、培养时间及培养基组成,观察支原体在固体培养基中的形态变化。结果支原体菌体浓度小于103cfu/m L时,培养至2~3天后可在固体培养基中形成典型的"油煎蛋"状形态,以蔗糖作为碳源培养支原体会导致葡萄糖发酵型支原体(肺炎支原体)不能在固体培养基中形成典型菌落,当使用牛血清代替马血清为支原体提供外源胆固醇时,猪鼻支原体在固体培养基中不能形成典型菌落。结论支原体的不同生长期、菌体浓度、培养基的组成都会使易致污染的支原体在固体培养基上的形态发生变化。     

泌尿生殖道支原体三种检测方法的评价

目的 评价三种检测方法对非淋菌性尿道炎(NGU)检测解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)的效果.方法 对我院2011年7月~2012年6月妇科、皮肤性病科门诊患者的分泌物标本采用PCR检测方法、液体培养基方法、免疫性检测法对解脲支原体和人型支原体进行检测,并对三种方法的检测结果进行分析.结果 PCR检测方法和液体培养基方法对非淋菌性尿道炎检测具有临床诊断意义.结论 PCR检测支原体灵敏度高、特异性强,适用于对非淋菌性尿道炎的诊断.     

自制解脲与人型支原体培养基的实验研究

目的用自制解脲与人型支原体培养基对泌尿生殖道标本支原体进行检测,并与传统的培养基比较.方法培养基以布氏肉汤为基础,并增加小牛血清含量;将传统培养基中的抑菌剂青霉素改为万古霉素、氟康唑与多粘菌素B;将解脲培养基中的酚红指示剂改为氯酚红.结果用自制培养基对1 071例泌尿生殖道标本支原体检测,阳性346例,阳性率为32.3%,解脲、人型支原体与其混和感染,分别占阳性总数的63.3%、7.2%和29.5%.221例标本用传统与自制解脲培养基同时检测,传统培养基有尿素分解69例,其中32例有细菌生长,阳性检出率为16.7%.自制培养基有尿素分解82例,仅5例有细菌生长,阳性检出率为37.1%.结论自制培养基营养丰富、配制简单、选择性强和变色灵敏,与传统培养基比较,检出率高,污染小,临床应用效果满意.     

直接培养法检测支原体方法的建立

采用牛心消化液,加入支原体营养成份及琼脂,制备成固体培养基。以此培养基检测支原体,并根据其灵敏度及适用性确定培养基的配方。结果表明,用此法可以检测牛血清、胰酶、细胞及疫苗中的支原体生长,并且检测时间短,重复性好,灵敏度高,可以用于生物制品的质量控制。     

人胚胎干细胞支原体感染的检测和控制

目的：优化检测人胚胎干细胞支原体感染的方法,寻找控制支原体感染的途径。方法：利用hoeshest33258染色检测感染支原体的人胚胎干细胞,接触感染培养基的人胚胎成纤维细胞,比较两种方法检测效果;利用RNApolymeraseⅡ作为新的鉴定指标,直接检测感染支原体的人胚胎干细胞;利用抗支原体药物对感染细胞进行处理,检测处理后细胞的感染状态。结果：hoechest33258染色后,受支原体感染人胚胎干细胞检测效果不明显,接触感染培养基的人胚胎成纤维细胞在培养7天后有拉丝状染色分布;RNApolymeraseⅡ染色则能直接检测出受感染的人胚胎干细胞表面粘附的支原体;利用抗支原体药物Plasmocin对感染细胞进行处理后hoechest33258拉丝状染色基本消失,但持续培养后重新出现。结论：间接法使用hoechest33258染色或者直接利用RNApolymeraseⅡ染色都能够很好地检测人胚胎干细胞培养过程中的支原体感染。抗支原体药物Plasmocin能够有效减轻支原体感染情况,但是不能完全杀灭支原体。     

人胚胎干细胞支原体感染的检测和控制

目的:优化检测人胚胎干细胞支原体感染的方法,寻找控制支原体感染的途径。方法:利用hoeshest33258染色检测感染支原体的人胚胎干细胞,接触感染培养基的人胚胎成纤维细胞,比较两种方法检测效果;利用RNApolymeraseⅡ作为新的鉴定指标,直接检测感染支原体的人胚胎干细胞;利用抗支原体药物对感染细胞进行处理,检测处理后细胞的感染状态。结果:hoechest33258染色后,受支原体感染人胚胎干细胞检测效果不明显,接触感染培养基的人胚胎成纤维细胞在培养7天后有拉丝状染色分布;RNApolymeraseⅡ染色则能直接检测出受感染的人胚胎干细胞表面粘附的支原体;利用抗支原体药物Plasmocin对感染细胞进行处理后hoechest33258拉丝状染色基本消失,但持续培养后重新出现。结论:间接法使用hoechest33258染色或者直接利用RNApolymeraseⅡ染色都能够很好地检测人胚胎干细胞培养过程中的支原体感染。抗支原体药物Plasmocin能够有效减轻支原体感染情况,但是不能完全杀灭支原体。     

一种快速判定细胞培养中支原体污染的方法——瓜氨酸测定法

目的：开发一种简便、快速、能及时发现细胞培养中支原体污染的方法。方法：用HPLC检测细胞培养中瓜氨酸是否存在及其量的大小。结果：当细胞培养被支原体污染时,培养基中精氨酸量明显下降,同时有瓜氨酸出现;当支原体被消除后,瓜氨酸即消失。结论：在细胞培养中瓜氨酸的出现与支原体污染的关系是特异的,用HPLC在2h内即可检出,表明该方法可靠、简便、快速,可作为细胞培养过程中支原体污染的常规监测手段。     

肺炎支原体ELISA检测试剂盒的临床应用

目的评价肺炎支原体ELISA检测试剂盒在临床应用的效果。方法用肺炎支原体ELISA检测试剂盒检测呼吸道感染患儿的咽拭子标本,并以肺炎支原体快速检测培养基试剂做同步盲法对照试验,分析该试剂盒的准确性及批内、批间产品的稳定性。结果在100例呼吸道感染患儿咽拭子标本中,肺炎支原体ELISA检测法阳性率为38%,肺炎支原体快速检测培养基法阳性率为37%,两种方法阳性结果符合率为97%。同步盲法试验结果显示,肺炎支原体ELISA检测试剂盒批内、批间产品阳性结果的一致率均为100%。结论该试剂盒具有较好的准确度和特异性,并且操作简便、快速,临床可推广应用。     

支原体新培养基的效果观察

既往常规使用的支原体培养基主要成份为盐酸消化猪胃胨,牛肉浸液,马血清及酵母浸液。近几年采用猪肺消化液代替猪胃胨和牛肉浸液,卵黄液代替马血清组成新培养基。用上述两种培养基对四种支原体进行多次定性和定量的生长效果对照观察。结果表明新培养基的培养效果与常规培养基一致,而且较常规培养基来源方便,价格便宜。用新培养基制备的抗原质量更为理想。     

对液体尿素支原体培养方法的改进

目前对于支原体的培养多采用液体尿素培养基 ,此培养基仅含尿素和精氨酸两个生化反应 ,结果模棱两可 ,难以准确判断。为了提高支原体鉴定的准确性 ,我们对广东珠海浪峰公司的支原体试剂的操作方法进行了改进。现报道如下。1　材料与方法1.1　标本来源　 16 7例标本取自 2 0 0 0年 5月～ 2 0 0 1年 2月期间临床拟诊为非淋菌性泌尿生殖道炎 (Non- goncoccolureathritis,NGU)病人的泌尿生殖道 ,规范采集 ,其中男性10 8例 ,女性 5 9例 ,年龄在 2 0～ 6 0岁之间。1.2　支原体试剂盒　广东珠海浪峰生物技术有限公司生产的支原体试剂盒 ,支原体固…     

某高校大学生泌尿生殖道支原体感染状况的调查及其影响因素分析

目的通过对大学生泌尿生殖道支原体的检测,了解大学生泌尿生殖道支原体的感染状况.并分析影响大学生泌尿生殖道支原体感染的流行病学因素,为大学生泌尿生殖道支原体的预防提供科学依据。方法以某高校医学院2005级学生为研究对象,进行2次调查。按文献制备支原体培养基,取研究对象的中段尿,利用解脲脲原体和人型支原体在生长过程中分别水解尿素和精氨酸产生氨而使培养基变碱,从而使培养基由桔黄色变为紫红色而判断为阳性,2次均为阳性者才算为真阳性。同时采用问卷调查研究对象的基本情况和可能的影响因素,数据库建立和统计学分析采用SPSS 13.0,2χ检验用于单因素分析,成组Logistic回归分析用于多因素分析。结果共检测了998例大学生的尿标本,65例为阳性,其中女性54例,男性11例,总阳性率为6.51%。经单因素2χ检验,发现性别和是否会游泳与泌尿生殖道支原体的感染有关,经多因素成组Logistic回归分析,发现性别、父母健在情况和家庭居住地与泌尿生殖道支原体的感染有关。结论大学生人群存在泌尿生殖道支原体感染,并且女性感染率明显高于男性。父母健在情况、家庭居住地是影响大学生泌尿生殖道支原体感染的危险因素。     

肺炎支原体液体培养法检测的实验评价

目的比较液体培养法和固体培养法平行检测肺炎支原体结果的一致性;评价液体培养法检测肺炎支原体的可靠性。方法采用液体培养基和固体琼脂培养基平行检测1 648份临床标本的肺炎支原体,比较同一份标本在2种培养基上的检测结果。结果液体培养法阳性296例,阳性率为18%;固体培养法阳性244例,阳性率为14.8%;液体培养法阳性而固体培养法阴性57例;固体培养阳性而液体培养法为阴性5例。2种方法的阳性检出率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺炎支原体快速液体培养法与固体培养有较好的一致性,具有方便、简单、准确且可以用于早期检测等优点,适合临床大批量标本筛查。需结合患者临床症状等排除真菌和耐药菌造成的假阳性。     

猪肺炎支原体的培养和保存

猪肺炎支原体的培养和保存张顺凤（浙江农技师专）刘奎（宁波市医科所）猪肺炎支原体的培养支原体是一种微小原核生物,无细胞壁,可在人工培养基上生长,形成小苗落。引起猪气喘病的病原体──猪肺炎支原体,因生长速度慢、要求培养条件苛刻而难以培养,对防治猪气喘病的...     

对不同液体支原体培养基的使用评价

解脲脲原体（Uu）和人型支原体（Mh）是引起非淋菌性泌尿生殖道炎（NGU）的主要病原体。对支原体的测定用固体培养基生长缓慢,而采用聚合酶链反应（PCR）的方法测定没有药敏,所以目前对支原体测定多采用集培养、鉴定、计数、药敏于一体的试剂盒。笔者先后使用了法国生物梅里埃、广东中山、珠海银科、珠海浪峰的产品,都存在着一个共同的弊病,即在液体支原体培养基中的抗生素不能完全杀灭除支原体以外的其它细菌,造成假阳性明显提高,使药敏结果的敏感性降低。偶然的机会使用了珠海黑马生物工程有限公司的产品,彻底解决了上述厂家存在的共同弊病,获得了较满意的结果,现将结果综合回顾性分析后反馈给临床及厂家,供同行借鉴。     

从传代细胞株中去除支原体污染的研究

用抗菌药物从传代细胞株中去除支原体污染的试验结果表明,卡那霉素和庆大霉素对支原体均无明显的杀灭作用。用lOμg／ml的Tiamutin处理支原体的效果较好。采用单克隆细胞稀释、选择法与Tiamutin(10μg／ml)处理相结合,经电镜观察可去除细胞中支原体的污染。检查支原体的方法是否特异、敏感、快速是对试验结果正确判断的一个重要的关键。为了防止支原体的污染,除了加强对原材料(包括小牛血清、培养液等)的检查以及把住严格的无菌操作条件外,必要时可在培养基中加入10μg／ml的Tiamutin。     

液体支原体培养基中病原菌分布及抑菌成分的探讨

目的：了解非淋菌性泌尿生殖炎病原菌的分布情况,探讨加强对支原体液体培养基中抑菌剂成分的监测。方法：将标本按说明操作,接种于解脲支原体和人型支原体液体培养基中,24h后将液体标本转接种于血平板,如有病原菌生长,做氧化酶、触酶、血浆凝固酶试验,并同时做革兰染色镜检。结果：167例标本中检出病原菌85例,阳性率为50.9%,其中10例为两种病原菌混合感染,共计检出95株,混合感染率为11.8%。95株病原菌中革兰阳性球菌占74.7%,革兰阴性杆菌占14.7%,革兰阳性杆菌占9.5%,酵母样菌占1.1%。结论：过去认为不致病或致病性较弱的非致病菌、低毒株的条件致病菌、正常菌群代替传统的强毒株为主的致病菌已成为非淋菌性泌尿生殖道炎（解脲支原体和人型支原体以外）的主要病原菌。本组结果显示,液体支原体培养基中的抑菌剂已基本失去了它的抑菌作用,应根据病原菌药敏变化作不断调整,提高试剂质量。     

大鼠呼吸道肺支原体的分离与鉴定

大鼠呼吸道肺支原体的分离与鉴定柳家玉,杨文华西医科大学实验动物中心成都６１００４１支原体又称霉形体,它介于细菌与病毒之间,是可在无生命培养基中生长的一类最小原核细胞型微生物,无细胞壁,个体为高度多形态。在开放饲养的普通大鼠中,呼吸道感染肺支原体的频率...     

黄芩甙体外抗解脲支原体作用

为了观察黄芩提取物黄芩甙抗解脲支原体的作用,揭示黄芩甙的更广泛的抗病原体效应,采用液体培养基稀释法,测定黄芩甙对解脲支原体体外抑菌效应。黄芩甙对解脲支原体的最低抑菌浓度(MIC)为1.87~4.32 mg/mL。黄芩甙对解脲支原体有明显抑制作用。     

EPO工程细胞株支原体检测

支原体污染是细胞培养过程中最常见的问题之一,对细胞支原体的检测是细胞特性鉴定的重要方面。我们采用抗支原体单抗免疫荧光法和培养法(包括液体培养法和固体培养法)检测工程细胞支原体。单抗免疫荧光法检测结果表明:支原体阳性的细胞膜表面有明亮荧光,工程细胞EPO C_2细胞膜表面无荧光。支原体液体培养法结果显示:作为阳性对照的支原体由于在生长过程中产酸使培养液变黄,而加入EPOC_2株细胞悬液的样品管与阴性对照管相同,无颜色变化。固体培养法结果显示:在显微镜下观察,支原体阳性对照在固体培养基上呈荷包蛋样集落,而阴性对照及EPO C_2株细胞样品均无菌落生长。以上结果表明:受检的EPO C_2株细胞未被支原体污染。