侧脑室注射R-α-甲基组胺对哮喘豚鼠呼吸道P物质样免疫反应物的影响

目的:应用免疫组织化学方法观察侧脑室注射组胺Hs受体激动剂R-α-甲基组胺对哮喘豚鼠气道内P物质样免疫反应物的影响。方法：豚鼠首先腹腔注射卵蛋白致敏,给药组给予豚鼠股静脉注射卵蛋白激发哮喘发作后,再侧脑室注射组胺Hs受体激动剂R-α-甲基组胺(5μg)。哮喘组豚鼠在诱发哮喘发作后侧脑室注射等量生理盐水。对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。经肺动脉灌注4％多聚甲醛,取气管、支气管和肺组织,冰冻切片,做P物质免疫组织化学染色。结果：气管、支气管和肺泡间隔内的P物质样免疫反应物在哮喘发作组明显多于对照组,在给药后10min组明显少于哮喘组,给药后20min组已接近正常组。结论：经侧脑室途径激动中枢组胺Hs受体后,哮喘豚鼠呼吸道内神经源性炎症介质P物质减少,提示中枢组胺Hs受体参与对哮喘气道神经源性炎症的调控。     

滨蒿内酯对哮喘豚鼠气管平滑肌细胞RyR2 mRNA表达影响

研究哮喘豚鼠气管平滑肌细胞Ryanodine受体亚型的变化及滨蒿内酯对其的影响。将动物分为3组:正常组、哮喘组和滨蒿内酯组,采用卵蛋白致敏复制豚鼠哮喘模型,滨蒿内酯组雾化吸入滨蒿内酯。应用RT-PCR鉴定豚鼠气管平滑肌细胞(TSMC)中RyR亚型分布并观察各组豚鼠气管平滑肌细胞RyR2 mRNA表达的变化。豚鼠TSMC表达RyR2和RyR3两个亚型;哮喘时豚鼠TSMC中RyR2 mRNA表达量(以RyR2区带与-βactin区带的密度百分比表示)为47.15%±15.30%,明显低于对照组(77.12%±6.16%)(P<0.01);滨蒿内酯组豚鼠TSMC中RyR2 mRNA量为63.77%±9.09%,较哮喘组增强(P<0.05)。豚鼠TSMC表达RyR2和RyR3两个亚型;哮喘时TSMC RyR2 mRNA表达下调;滨蒿内酯可使哮喘豚鼠TSMC RyR2表达水平得以恢复。     

芍药苷对哮喘模型小鼠气道炎症趋化因子及受体的干预作用

目的观察芍药苷给药后对小鼠哮喘模型气道炎症趋化因子及受体的影响。方法用卵蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型;ELISA法检测血清IL-6、TNF-α水平及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中卵蛋白特异性Ig E(OVA-Ig E)和趋化因子CCL19、CCL21水平;RT-PCR法检测肺组织中趋化因子受体CCR7mRNA表达;Western blot检测肺组织CCR7及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白表达。结果芍药苷干预组小鼠血清IL-6、TNF-α水平显著下降;BALF中OVA-Ig E和CCL19、CCL21水平显著降低;肺组织CCR7mRNA、CCR7及NF-κB蛋白表达明显减少。结论芍药苷对哮喘模型小鼠气道炎症趋化因子CCL19/CCL21及其受体CCR7具有显著的抑制作用。     

侧脑室注射R-α-四基组胺对哮喘豚鼠呼吸道P物质样免疫反应物的影响

目的　应用免疫组织化学方法观察侧脑室注射组胺H3 受体激动剂R α 甲基组胺对哮喘豚鼠气道内P物质样免疫反应物的影响。方法　豚鼠首先腹腔注射卵蛋白致敏 ,给药组给予豚鼠股静脉注射卵蛋白激发哮喘发作后 ,再侧脑室注射组胺H3 受体激动剂R α 甲基组胺 (5 μg)。哮喘组豚鼠在诱发哮喘发作后侧脑室注射等量生理盐水。对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。经肺动脉灌注 4 %多聚甲醛 ,取气管、支气管和肺组织 ,冰冻切片 ,做P物质免疫组织化学染色。结果　气管、支气管和肺泡间隔内的P物质样免疫反应物在哮喘发作组明显多于对照组 ,在给药后 10min组明显少于哮喘组 ,给药后 2 0min组已接近正常组。结论　经侧脑室途径激动中枢组胺H3 受体后 ,哮喘豚鼠呼吸道内神经源性炎症介质P物质减少 ,提示中枢组胺H3 受体参与对哮喘气道神经源性炎症的调控。     

木黄酮对哮喘豚鼠蛋白酪氨酸激酶JAK1和白介素-4表达的影响

目的：探讨支气管哮喘豚鼠肺组织中蛋白酪氨酸激酶（PTK）JAK1和白介素-4（IL-4）的表达及染料木黄酮的作用。方法：39只健康雄性豚鼠随机分为对照组（C组）、哮喘组（A组）和染料木黄酮干预组（G组）,以卵蛋白致敏法复制哮喘模型,ELISA法检测肺组织匀浆中IL-4浓度,Westernblot检测PTK-JAK1的表达。结果：肺组织中IL-4浓度与A组高于C组和G组;PTK-JAK1的表达A组高于C组和G组;PTK-JAK1的表达与IL-4的浓度呈正相关。结论：PTK-JAK1调控IL-4的表达而参与哮喘的炎症反应,染料木黄酮对其有抑制作用。     

PPARγ/PGC-1α在支气管哮喘豚鼠肺组织中表达及作用

目的:观察PPARγ和PGC-1α在豚鼠支气管哮喘肺组织中表达而探索PPARγ/PGC-1α对哮喘作用机制.方法:加只健康雄性豚鼠随机化原则分成对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松(C组)和罗格列酮治疗组(D组)每组10只豚鼠.卵蛋白致敏法复制哮喘模型,第16天始每日诱喘前30min C组和D组分别给予约3至5ml溶有药物的生理盐水灌胃:C组地塞米松2mg/kg,D组罗格列酮4mg/kg连续14天.测细支气管炎症细胞浸润及支气管重塑指标,肺组织病理;原位杂交和RT-PCR检测PPARγ和PGC-1α的mRNA表达免疫组化和Western blot检测肺组织两者蛋白表达.结果:(1)哮喘组出现了明显气道重塑和炎症细胞浸润,地塞米松和罗格列酮对其起抑制作用.(2)原位杂交和RT-PCR显示PPARγ和PGC-1αmRNA哮喘组表达最低四组差异均有统计学差异(P均<0.01);免疫组化和Western blot显示PPARγ和PGC-1α蛋白哮喘组表达几乎都呈阴性而且以核内表达为主,四组差异均有统计学意义(P均<0.01);地塞米松和罗格列酮可上调PPARα和PGC-1γ蛋白以及mRNA的表达.(3)支气管哮喘豚鼠肺组织PPARγ与PGC-1α表达呈正相关,PPARγ和PGC-1α蛋白以及mRNA与浸润的嗜酸粒细胞、Wal%、SMC-A%呈负相关.结论:PPARγ/PGC-1α在卵蛋白致敏急性支气管哮喘模型中表达下降,罗格列酮和地塞米松一样可上调PPARγ/PGC-1α,PPARγ/PGC-1α对哮喘发病起重要作用而可能为哮喘防治开辟新途径.     

哮喘豚鼠肺内SP受体分布的免疫组织化学研究

为探讨哮喘豚鼠肺内SP受体（SPR）的表达[及分布,将豚鼠分成哮喘组和对照组,利用SPR特异性抗血清,免疫组织化学ABC法,葡萄糖氧化酶-DAB-镍染色和计算机图象分析技术。结果显示;与对照组相比,哮喘豚鼠肺内支气管至终末细支气管SPR免疫反应（SPR-IR）阳性产物显浓密,以平滑肌层和粘膜层为。此外,在哮喘组豚鼠而不是对照组豚鼠的呼吸性细支气管壁也有SPR-IR阳性分布。结果表明：SPR表达上调在哮喘的发病过程中起一定作用。     

心肌d_1-肾上腺素受体激动对豚鼠心室乳头肌的影响

用α-受体激动剂新福林(5.0×10~(-6)mol/L)激动豚鼠心室乳头肌α-受体,观察乳头肌跨膜动作电位和收缩力的变化,并用α_1-受体阻断剂哌唑嗪(5.0×10~(-7)mol/L)和α_2-受体阻断剂育亨宾(5.0×10~(-7)mol/L)来判别何种α-受体亚型参与。实验中,β-受体阻断剂心得安(1.0×10~(-6)mol/L)始终存在。实验结果表明心肌α_1-受体激动使(1) 豚鼠心室乳头肌收缩力增强;(2) 收缩峰时间延长;舒张期不变;(3) 快反应动作电位时程延长;(4) 慢反应动作电位零相最大除极速率增加。提示,心肌α_1-受体激动的电生理和正性变力效应的离子机制可能是促进慢内向离子流,使Ca~(2 )内流增加。     

缺氧大鼠心肌α1,β肾上腺素能受体的变化

为了探讨α_1、β肾上腺素能受体在大鼠缺氧性心脏肥大进程中的作用,本研究应用放射配基结合法观察了不同缺氧时间大鼠心室α_1、β肾上腺素能受体变化的动态过程,同时也观察了α_1、β受体阻断剂在预防缺氧性心肌肥大发生中的作用。缺氧10d后,测定右心室重量及组织学检查未见右心室肥大,但此时心室肌α_1受体数量从对照组的27.49±1.25增加到33.80±0.90fmol/mg蛋白(P<0.05);β受体从对照组的51.80±7.60下降到25.10±2.30fmol/mg蛋白(P<0.01)。缺氧20和30d后α_1受体进一步增加到40.70±1.43和32.30±1.96fmol/mg蛋白(P<0.05);β受体分别为27.90±2.30和42.80±1.70fmol/mg蛋白(P<0.05)。缺氧20和30d后右心室重量指数明显高于对照组,在整个缺氧过程中α_1、β受体的亲和性(K_d)未见明显变化,未见左心室肥大。缺氧同时应用α_1受体阻断剂(哌唑嗪4mg·kg~(-1)·d~(-1))30d,可明显预防缺氧所致的右心肥大;而β受体阻断剂(心得安10mg·kg~(-1)·d~(-1))没有此种作用。由此可见,在缺氧所致右心肥大之前,心肌α_1受体数量即明显升高,α_1受体阻断剂可以预防缺氧引起的右心肥大。     

绵羊心浦肯野纤维d-受体和β-受体激动时离子流Isi和Ix的变化

当绵羊心浦肯野纤维α-和β-受体分别激动时,用双微电极法电压箝制术研究慢内向离子流Isi和延迟整流外向离子流Ix的变化。心得安阻断β-受体时,苯肾上腺素5.0×10~(-6)mol/L使Isi的峰值由17.5增加到26nA(n=6,P<0.05).并使Isi由失活到完全恢复的时间由293±51ms延长到441±109ms(n=4,P<0.05),但对Ix无明显影响。酚妥拉明阻断α-受体时,异丙肾上腺素4×10~(-7)mol/L使Isi峰值由27.7增加到40.8nA(n=7,P<0.05),对Isi的动力过程无明显影响,却使Ix尾电流的幅值由6.7增加到14,4nA(n=6,P<0.05)。表明α-和β-受体激动剂作用的差异在于对延迟整流离子流的影响不同。     

β-肾上腺素受体与视紫红质在结构上相似

Richard Dixon 等在1986年5月报告,他们已将哺乳动物β-肾上腺素受体(β-adrenegic receptors,βAR)的基因按顺序排列成功,并确信不是假基因。通过仓鼠肺βAR 基因序列的分析,得出二个结论:一是βAR 和光敏色素视紫红质(rhodopsin)在结构上有相似性;二是仑鼠βAR 基因密码子序列中未发现有非密码片段(内含子introns)插入。药理学家把AR 分为α_1、α_2、β_1和β_2几个亚型,并已认识到AR 与儿茶酚胺接触后所发生的几种反应,例如受体的敏感性降低和受体总数减少。生化学家阐明了儿茶酚胺与受体结合后最初的几步反应:儿茶酚胺与βAR 结合引起受体与G(或N)蛋白发生偶联,并进一步引起GTP 与G 蛋白的α亚单位结合。这     

VEGF与其受体2在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(Flk-1)在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响.方法 SD大鼠18只,随机分为对照组,哮喘模型组和地塞米松干预组各6只.以腹腔注射1%卵蛋白致敏和2%卵蛋白雾化吸入激发复制哮喘模型,干预组在每次激发前给予地塞米松干预.用免疫组织化学技术检测气道平滑肌α-actin以及VEGF和Flk-1蛋白质在不同组大鼠肺组织的表达程度;用RT-PCR方法检测VEGF和Flk-1mRNA在不同组大鼠肺组织的表达程度;采用HMIAS-2000型高清晰度彩色医学图文分析系统进行图像分析.结果 (1)哮喘模型组气道壁平滑肌厚度较对照组和干预组显著增加(P<0.05).(2)哮喘模型组VEGF及Flk-1蛋白质在大鼠肺组织中的表达较对照组和干预组显著增加(P<0.05).(3)哮喘模型组VEGF144,VEGF188 mRNA和VEGF205 mRNA在大鼠肺组织中的表达较对照组和干预组显著增加(P<0.05或P<0.01).哮喘模型组Flk-1mRNA在大鼠肺组织中的表达较对照组和干预组显著增加(P<0.05).直线相关性分析显示,气道壁平滑肌厚度与大鼠肺组织中VEGF205,188,144及Flk-1mRNA表达水平呈正相关(r分别为0.739,0.747,0.744,0.682;P<0.05);气道壁平滑肌厚度与大鼠肺组织中VEGF及Flk-1蛋白质表达水平也呈正相关(r分别为0.693,0.672;P<0.05).结论哮喘模型大鼠肺组织中VEGF及其受体Flk-1表达上调,并与气道平滑肌增殖有密切关系.该结果提示VEGF及其受体2可能参与了哮喘气道重建中气道平滑肌增殖的过程.     

两种方法制备豚鼠脊髓匀浆诱导EAE模型的比较

目的建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型,并检测可溶性血管细胞黏附分子-1在EAE大鼠中的动态表达。方法两种方法制备豚鼠脊髓匀浆:一种方法不用磷酸盐缓冲液(PBS)灌注,直接将豚鼠麻醉后取豚鼠全脊髓制备匀浆,即非灌注法;另一种方法用磷酸盐缓冲液将豚鼠灌注后,再取豚鼠全脊髓制备匀浆,即灌注法。分别采用上述两种方法制备的豚鼠脊髓匀浆为抗原,免疫Wistar大鼠建立EAE的动物模型,取脑、脊髓组织石腊包埋,病理切片,光镜观察;采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中sVCAM-1的表达。结果非灌注组的发病率、临床评分和sVCAM-1的表达显著性升高(P<0.05)。结论采用非灌注法制备的豚鼠全脊髓匀浆作为抗原,能够成功诱发Wistar大鼠的EAE模型,为研究多发性硬化的发病机制及治疗奠定了一定的基础。     

PPAR-γ/PGC-1α对支气管哮喘豚鼠肺组织Nrf2/γ-GCS-h作用

目的：观察PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h在豚鼠支气管哮喘肺组织中表达而探索PPAR-γ/PGC-1α对Nrf2/γ-GCS-h作用。方法：40只健康雄性豚鼠随机化原则分成对照组（A组）、哮喘组（B组）、地塞米松（C组）和罗格列酮治疗组（D组）,每组10只豚鼠,卵蛋白致敏法复制哮喘模型。原位杂交检测PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-hmRNA表达,免疫组化和Western blot检测四种蛋白表达。结果：PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h的mRNA哮喘组表达最低,四组表达差异有统计学意义（P均〈0.01）;免疫组化和Western blot显示PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h的蛋白哮喘组表达几乎都呈阴性而且以核内表达为主,四组差异均有统计学意义（P均〈0.01）。PPAR-γ表达与PGC-1α表达呈正相关,γ-GCS-h mRNA表达与PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2核内表达均呈正相关,Nrf2表达与PPAR-γ和PGC-1α表达均呈正相关。结论：PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h在卵蛋白致敏急性支气管哮喘模型中表达下降;PPAR-γ/PGC-1α可通过上调Nrf2/γ-GCS-h表达提高组织的抗氧化能力,因而PPAR-γ/PGC-1α在哮喘的发病和防治可能起重要的作用。     

掌跖脓疱病患者皮损糖皮质激素受体α和β表达的研究

目的:为了解掌跖脓疱病患者皮损中GR表达情况,我们利用免疫组化方法检测患者皮损和正常皮肤标本中GR-α和GR-β的表达,从而探讨其表达在发病中的作用。方法:选择25例临床诊断为掌跖脓疱病患者皮损,26例外科手术切取的健康皮肤作为正常对照。用免疫组化SP法(链酶卵白素-过氧化物酶法)检测掌跖脓疱病患者皮损与正常对照组皮肤GR-α、GR-β的表达数量和强度。结果:两组GR-α表达无显著差异,患者组GR-β表达阳性率及强度明显高于对照组。结论:GR-β在掌跖脓疱病的发病过程中起重要作用。     

哮喘豚鼠IFN-γ／IL-4失衡与IgE水平相关性研究

采用ELISA法、放免法和化学发光法分别观察哮喘豚鼠血清及肺组织匀浆中IFN-γ,IL-4,IgE的含量变化,以及IFN-γ/IL-4与IgE的相关性在哮喘发病机制中的关系和作用。结果表明:哮喘组血清及肺组织一浆中IL-4,IgE含量明显高于对照组(P<0.01),IFN-γ水平明显低于对照组(血清P<0.01;肺组织 P<0.05)。直线相关分析结果表明:IFN-γ,IL-4和IFN-γ/IL-4与IgE呈显著相关性,其中IFN-γ/IL-4与IgE呈显著负相关(血清中 P<0.05;肺组织匀浆中 P<0.01),提示IFN-γ/IL-4的失衡及IgE水平升高在哮喘发病中可能发挥重要作用。     

中枢组胺H3受体对哮喘豚鼠呼吸运动的影响

目的:探讨中枢组胺H3受体与哮喘发病的关系。方法:动物经侧脑室插管给药后,记录膈肌放电活动(DA)和呼吸频率(RR)。免疫组织化学方法检测下呼吸道内SP样免疫反应物的含量。荧光分光光度法测定脑内组胺含量。结果:①静脉注射卵蛋白(0.1mg/kg)诱发哮喘急性发作后,动物RR加快,DA幅度减小,同时下呼吸道内SP样免疫反应物的数量明显增加(P<0.01),下丘脑和皮质内组胺含量增多(P<0.01)。②哮喘急性发作后,侧脑室注射H3受体激动剂RAMH(5μg)后,与哮喘组相比,RR明显降低,DA幅度明显增加(P<0.01)。下呼吸道内SP样免疫反应物的数量明显减少(P<0.01)。③哮喘缓解期,侧脑室注射组胺H3受体拮抗剂THIO(20μg)后,RR明显加快,DA幅度减小。下丘脑和皮质内组胺含量均高于对照组(P<0.05)。结论:脑内组胺H3受体参与了对哮喘发作的神经性调控过程。     

色胺酮对哮喘豚鼠体内NO和NOS水平的影响

目的:观察色胺酮对哮喘豚鼠血清及肺泡灌洗液中NO、NOS浓度的影响.方法:将初筛合格的48只豚鼠随机分成6组:空白组(A组)、慢性模型对照组(B组)、色胺酮高剂量组(C组)、色胺酮中剂量组(D组)、色胺酮低剂量组(E组)和阳性对照组(F组).采用磷酸卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏加雾化吸入激发的方法复制豚鼠哮喘模型,造模成功后给予色胺酮和地塞米松治疗.测定各组豚鼠肺部组织、血清及肺泡灌液(BALF)中NO和NOS浓度并进行组间比较.结果:与B组相比,C、D、E、F组血清中NO和NOS浓度显著降低,组间比较,差异存在统计学意义(P<0.05);各组肺组织中NOS表达呈阴性;C、D、E、F组BALF中NO浓度较B组降低,组间比较,差异存在统计学意义(P<0.05).结论:色胺酮可降低哮喘豚鼠血清中NO和NOS水平,降低BALF中NO水平,可能对哮喘有一定的防治作用.     

肾上腺素能受体平衡与肺血管通透性关系的研究

本实验动态地检测了油酸所致大鼠肺血管通透性增高的发生、发展过程中肺组织中α、β肾上腺素能受体(αAR、βAR)的最大结合容量及亲和力的变化。结果发现:实验组大鼠肺组织中αAR与βAR之间的平衡遭到了破坏,αAR显著增多,而βAR却显著减少。应用αAR阻断剂——酚妥拉明或βAR激动剂——舒喘灵均可有效地防治油酸引起的大鼠肺血管通透性增高,使肺系数明显减小,支气管肺泡灌洗液中蛋白质含量明显减少,肺组织病变明显减轻。实验结果提示:肾上腺素能受体在肺微血管通透性的调控过程中可能起着重要的作用;肺组织中αAR与βAR之间的平衡失调可能是肺血管通透性增高的重要原因;纠正这种失衡是防治通透性肺水肿的有效手段。     

气道平滑肌细胞Ryanodine受体亚型mRNA的表达及其在哮喘中的变化

目的:测定正常大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)中Ryanodine受体(Ryanodine receptor RyR)各亚型mRNA的表达以及在哮喘中的变化.方法:采用胶原酶消化法培养大鼠ASMCs,RT-PCR测定受体各亚型mRNA的表达.卵蛋白致敏并激发大鼠制备慢性哮喘模型,RT-PCR测定各受体mRNA表达水平的变化.结果:大鼠ASMCs中可见RyR1、RyR2和RyR3三种RyR亚型mRNA共表达,扩增片段测序结果与GenBank中登录的大鼠RyR1-3序列完全一致.制备的慢性哮喘模型中,病理切片显示平滑肌层及黏膜层明显增厚,RyR1的表达较对照组有明显的上调P＜0.05.结论:大鼠气道平滑肌细胞中RyR三种亚型共表达,提示存在着复杂的细胞内钙调节机制;并且RyR1在慢性哮喘的发生过程中可能起了一定的作用.