蛭弧菌BDH21-02对鱼类细胞及病原菌的作用

蛭弧菌BDH21-02在双层琼脂平板上能裂解所有检测的17种共36株宿主菌,在水中蛭弧菌对受试病原菌的裂解程度在2.96±0.13~4.46±0.28 lg值之间。其中,BDH21-02使嗜水气单胞菌浓度下降4.32±0.25 lg值的同时,自身浓度上升3.40±0.30 lg值。BDH21-02对PCK、C IK、EPC、FHM等鱼类细胞的毒性实验表明,实验组和对照组没有显著差异(P>0.05)。由实验结果可以看出蛭弧菌BDH21-02在生物防治鱼病方面具有良好的应用价值。     

不同条件下蛭弧菌裂解河流弧菌的研究

选择四种不同培养液,控制温度、pH和Ca＋＋Mg＋＋离子的不同水平,进行蛭弧菌HD94－12－7对河流弧菌WY91－24－3的裂解实验,结果表明,在灭菌蒸馏水、灭菌自来水、灭菌池塘水及Trisbuffer培养液中蛭弧菌HD94－12－7均表现出良好的裂解活性;温度在20—35℃时,蛭弧菌的裂解活性最大,低于15℃时,蛭弧菌的裂解能力明显减弱;pH值在6.5—8．1之间,蛭弧菌的裂解强度最大,pH低于5．6或高于8．1时,不利于蛭弧菌的生存。Ca＋＋,Mg＋＋离子能明显提高蛭弧菌的裂解活性。本研究证实了在实验条件下蛭弧菌对鱼类致病菌一河流弧菌具有明显地清除作用。     

蛭弧菌的分离及其生长条件和裂解能力的研究

噬菌蛭弧菌具有裂解病原菌、净化水体的功效,从海洋环境中分离到4株Bh04系列蛭弧菌,对其生长条件进行了测定,同时研究了它们对61株菌株的裂解能力。结果表明,在1%～3%的盐度范围内,蛭弧菌均可生长,最适盐度为3%;在15～30℃温度条件下蛭弧菌也可生长,但最适培养温度为20-25℃;只有在使用活的宿主菌的培养条件下,蛭弧菌才能生长。4株蛭弧菌分别可裂解21、24、40、43株菌,各占总试验菌数(61)的34.4%、39.3%、65.6%和70.5%。4株蛭弧菌一起,则可裂解55菌株,占总试验菌株的90.2%。研究结果揭示了蛭弧菌在消除海洋环境中有害细菌方面的潜在应用价值。     

海洋蛭弧菌的分离鉴定及其对副溶血弧菌的作用

蛭弧菌广泛存在于自然水体, 具有噬菌的特性, 对水体中细菌数量控制具调节作用。以副溶血弧菌为宿主菌, 利用双层琼脂法, 从海洋水体中分离出15株具有噬菌作用的细菌, 对形成噬菌斑能力最强的1株菌株进行特异性16S rDNA扩增, 确认为蛭弧菌, 命名为Bd-M1。Bd-M1对大多数海水养殖动物病原菌有裂解作用, 裂解率在90%(20/22)以上, 模拟水环境实验发现, 蛭弧菌对副溶血弧菌有较强的裂解和净化作用, 102 h内能使副溶血弧菌从3.0′108 CFU/mL下降到8.7×103 CFU/mL。动物实验表明蛭弧菌能有效预防对虾弧菌病的发生, 表明蛭弧菌有望成为水产动物疾病防治的一种有效的生物制剂。     

微生物学通报（Weishengwuxue Tongbao）2006年，第33卷 总目录

第1期研究报告TIMP-2在毕赤酵母中的克隆与表达……………………………闫训友,赵洪亮,张惟广,薛冲,刘志敏(1)蛭弧菌BDH21-02对鱼类细胞及病原菌的作用…………………林茂,杨先乐,薛晖,曹海鹏,邱军强(7)冻干乳酸菌菌种增菌培养基增殖因子的优化…………………张建友,徐静波,王军     

一株广盐性蛭弧菌的生物学特性

【背景】蛭弧菌有裂解水产养殖中常见致病菌的能力,具有重要的潜在应用价值,但在实际应用中,存在着菌株生长条件与应用环境不相符而导致效果差乃至无效果等问题。因此获得适应范围宽的蛭弧菌甚为关键。【目的】筛选出一株广盐性蛭弧菌以利推广应用;提升蛭弧菌蛭质体密度以利保存。【方法】以枯草芽孢杆菌为宿主,于浅滩水域分离纯化出一株广盐性蛭弧菌;对该广盐性蛭弧菌菌株进行分子生物学鉴定;之后探究其生物学特性及裂解性能,并研究谷氨酸钠、Ca~(2+)和Mg~(2+)、吲哚等影响蛭质体密度的因素。【结果】分离获得一株广盐性蛭弧菌BDN-1,其适宜温度、盐度和pH范围分别为20-30°C、0.5%-3.0%、6.0-8.5;BDN-1对30株受试菌的裂解率为86.7%,对其中16株受试弧菌裂解率为87.5%;谷氨酸钠、吲哚、Ca~(2+)和Mg~(2+)对BDN-1蛭质体密度有提升作用。【结论】研究结果提供了一株裂解能力强且海淡水均可应用的蛭弧菌菌株,查明了其生物学特性及影响其蛭质体密度的因素,为蛭弧菌的高效利用奠定了基础。     

噬菌蛭弧菌对嗜水气单胞菌裂解作用的研究

本文报道了8株噬菌蛭弧菌对河水中分离的9株嗜水气单胞菌的裂解作用。结果发现,噬菌蛭弧菌Bd32的裂解率为77.78％;Bd83、Bd98的裂解率为88.89％,其余5株噬菌蛭弧菌对9株嗜水气单胞菌全部裂解。     

两种培养基对对虾苗池海洋蛭弧菌的分离及其多样性分析

【目的】明确海水(Sw)和聚蛋白胨20(Pp20)两种双层琼脂培养基对海洋蛭弧菌的分离计数效果,了解对虾苗池可培养海洋蛭弧菌多样性。【方法】采用双层平板法,比较Sw和Pp20培养基对2株海洋蛭弧菌和对虾苗池未知海洋蛭弧菌的计数效果。通过宿主范围测试和16S rRNA基因序列分析评估两种培养基分离苗池海洋蛭弧菌的多样性。【结果】宿主菌含量高时,Sw培养基对两株已知海洋蛭弧菌的计数值均显著高于(P0.05)Pp20。Sw和Pp20培养基从同一苗池水样分别分离得到21和22株蛭弧菌。根据宿主裂解范围差异,43株分离物可分为15种裂解模式,其中Sw和Pp20培养基各分离到12和8种。16S rRNA基因序列分析表明,所有分离物都被鉴定为噬菌弧菌属(Bacteriovorax)菌株,并可分为6个类群,Sw和Pp20培养基分别分离到6和4个类群。【结论】Sw培养基在分离计数海洋蛭弧菌及其多样性检测上效果均优于Pp20;对虾苗池可培养海洋蛭弧菌具有较高多样性,并以类群XIII、X及一个潜在新类群为优势种群。     

恩诺沙星对蛭弧菌生长及吸附的影响

本实验通过观察不同浓度恩诺沙星对固体培养条件下蛭弧菌产生噬斑和液体培养条件下蛭弧菌增殖的情况,以及蛭弧菌在不同浓度恩诺沙星下吸附到载体上的情况,研究了恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16生长及吸附的影响.实验发现:2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL和50μg/mL恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16噬斑的产生及增殖均具有抑制作用(P<0.05).在固体培养72 h后.随着恩诺沙星浓度逐渐增大,蛭弧菌BDF-H16产生的噬斑数目逐渐减少;在液体培养72 h后,随着恩诺沙星的浓度逐渐增高,蛭弧菌BDF-H16的增殖浓度不断减少,但10μg/mL恩诺沙星并没有改变蛭弧菌BDF-H16的生长趋势.此外,以沸石作为吸附载体,2μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL和50 μg/mL恩诺沙星降低了蛭弧菌BDF-H16吸附量,随着恩诺沙星浓度的增大,蛭弧菌BDF-H16的吸附量逐渐降低,而蛭弧菌BDF-H16的吸附率却在一定恩诺沙星浓度(2 μg/mL～20μg/mL)下却有所升高(P<0.05).以上结果表明,恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16噬斑的产生及增殖具有抑制作用,但在有载体存在的情况下,蛭弧菌的吸附能力在一定恩诺沙星浓度范围内有所增强,添加载体沸石有助于降低恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16的不良影响.     

噬菌蛭弧菌对206株伤寒杆菌裂解作用的研究

本文报道了噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus,以下简称蛭弧菌)Bd81、Bd98对江苏省15个县市201株伤寒杆菌及5株标准伤寒杆菌裂解作用的研究结果。发现蛭弧菌在含有伤寒杆菌宿主的自来水双层琼脂平板上,经25℃48小时培育,可形成透明噬菌斑。蛭弧菌Bd81裂解199株,占总数96.60％,包括86年68株,87年74株,5株标准菌株全部被裂解,89年59株其中被裂解52株,阳性率为88.14％;Bd98裂解204株,占总数的99.03％,     

仿刺参(Apostichopus japonicus)肠道源植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) HY21的生长及益生特性分析

【目的】在仿刺参(Apostichopus japonicus)健康养殖中为了寻找具有良好耐受性、益生性、安全性的益生菌,本研究从仿刺参肠道内容物中分离获得一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) HY21,对其益生潜能进行评价。【方法】利用摇瓶发酵培养、应用环境因子模拟试验、抗生素药敏测试等方法,分析L. plantarum HY21的生长特性、产酸性能、发酵液的抗氧化性质和对水产致病菌的抑制作用;检测菌体的疏水性、自聚性和共聚性、黏附力和药物敏感性,以及对应用环境因子的耐受性。【结果】L. plantarum HY21摇瓶发酵培养温度30℃、初始pH 8.0,于2-10 h为对数生长期,发酵18 h后pH达到最低3.6;发酵液对溶藻弧菌的抑菌直径达到(13.96±0.30) mm,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine, DPPH)自由基清除率达到95.45%±1.56%;L. plantarum HY21的疏水率为60.42%±2.78%、自聚率为22.69%±1.36%,与溶藻弧菌共聚率为27.98%±1.45%;对体表和肠道黏液蛋白的黏附量分别达到(1.66±0.01)×10⁶ CFU/mL和(1.23±0.15)×10⁶ CFU/mL;对13种常见的抗菌药物均表现敏感;菌体在模拟胃肠液(pH 3.0, pH 6.8)中孵育3 h存活率均可达99%以上,在10%鱼胆汁溶液中孵育3 h存活率达到68.11%±7.98%,在3%海盐溶液中孵育16 h存活率达到97.58%±7.14%。【结论】L. plantarum HY21具有良好的定殖作用、抑菌作用、抗氧化作用等益生特性,而且在应用环境中具有高存活率和高安全性,可以作为一株新的水产益生菌,为开发水产益生菌制剂提供科学理论依据。     

人粪便中分离的噬菌蛭弧菌生物学特性的研究

本文研究了人粪便中分离的噬菌蛭弧菌的生物学特性,测定了它们的生长曲线,并利用微孔滤膜过滤和机械振荡的方法,研究了它们的吸附和穿入动力学,发现链霉素、庆大霉素和卡那霉素能抑制蛭弧菌的吸附;青霉素不影响蛭弧菌的吸附和穿入,但抑制蛭弧菌在宿主内的生长过程。从人粪中分出的噬菌蛭弧菌不仅能裂解大部分需氧的革兰氏阴性菌,而且在微氧条件下也能裂解厌氧菌中的二株脆弱拟杆菌。我们发现一株人粪便中分出的噬菌蛭弧菌能形成蛭弧菌囊体——它的休眠态,它对高热、紫外线照射和真空干燥的耐受力较相应的繁殖体强,看来它是蛭弧菌保持生命期限的一种方式。     

异育银鲫肠道蛭弧菌的分离及其生物学特性的研究

以一株具有致病力的温和气单胞菌作为筛选宿主菌,从异育银鲫肠道中分离到一株蛭弧菌,暂命名为BDF-H16。通过光学显微镜、相差显微镜、电子显微镜对蛭弧菌BDF-H16进行形态观察,并研究了其部分生物学特性。结果表明:蛭弧菌BDF-H16为革兰氏阴性菌,杆形或弧杆形,端生一根鞭毛,菌体大小多为0．2μm～0．5μm×0．8μm～1．2μm;蛭弧菌BDF-H16对实验所选用的革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌均有裂解作用;以大肠杆菌为宿主菌,其最佳生长条件为宿主菌浓度6．75×10⁹cfu/mL、pH7．0～7．5、温度28℃;在NaCl含量0．85%～5．00%的培养基中能够生长;恩诺沙星、诺氟沙星对其有抑制作用。     

噬菌蛭弧菌对鱼类常见致病菌裂解作用的研究

调查了北京地区２５份水样,其中２４份检出噬菌蛭弧菌。本次试验选用４株鱼类主要致病菌为宿主菌,检出的蛭弧菌对上述４种细菌的裂解范围有所不同。其中嗜水气单胞菌可被全部检出的蛭弧菌裂解（２４／２４）,其他３株菌仅部分被裂解,依次为肠型点状气单胞菌（１７／２４）,荧光假单胞菌（９／２４）,鳗弧菌（７／２４）。本次试验直接从水样中检出６株对４种宿主菌均有裂解作用的蛭弧菌,为进一步利用蛭弧菌防治鱼类常见细菌性疾病提供了可用资料。     

噬菌蛭弧菌对鱼类常见致病菌裂解作用的研究*

调查了北京地区２５份水样,其中２４份检出噬菌蛭弧菌。本次试验选用４株鱼类主要致病菌为宿主菌,检出的蛭弧菌对上述４种细菌的裂解范围有所不同。其中嗜水气单胞菌可被全部检出的蛭弧菌裂解（２４／２４）,其他３株菌仅部分被裂解,依次为肠型点状气单胞菌（１７／２４）,荧光假单胞菌（９／２４）,鳗弧菌（７／２４）。本次试验直接从水样中检出６株对４种宿主菌均有裂解作用的蛭弧菌,为进一步利用蛭弧菌防治鱼类常见细菌性疾病提供了可用资料。     

蛭弧菌的分离、培养及保藏方法的研究

蛭弧菌(Bdellovibrio)是一类独特的细菌。它能够侵染、裂解多种革兰氏负细菌。目前已报道能被蛭弧菌裂解的细菌多达20余属,且不存在抗蛭弧菌的突变型,这使得蛭弧菌有一定的经济价值和应用价值。1962年国外首次分离到蛭弧菌后,对其形态学、生活周期、生理学及生态分布都进行了较广泛的研究。国内近几年曾见两篇关于蛭弧菌工作的报道。蛭弧菌的分离工作较一般细菌繁琐得多,现尚无统一方法,报道中多是采用一系列滤膜连续抽滤的方法。我们在工作中对此方法进行了简化,效果较好。对蛭弧菌的培养及保藏方法,我们也做了一些工作,获得了较好的结果。     

蛭弧菌BDE-1的生物特性及促进其蛭质体形成的研究

【背景】蛭弧菌是众多海洋益生菌中的一类较新成员,应用前景十分广阔。但由于蛭弧菌特殊的繁殖方式和周期,它的应用效果受寄生宿主特性和生物活性的影响,因而优选寄生宿主,维持或者提高蛭弧菌微生态制剂的应用活性是关键。【目的】筛选出能够裂解枯草芽孢杆菌的蛭弧菌,以增进其益生性能;研究提高蛭弧菌的蛭质体密度,以利于保存。【方法】从海南取回海泥样后,以枯草芽孢杆菌作为宿主菌,通过稀营养肉汤(Dilute nutrient broth,DNB)双层平板法分离获得蛭弧菌,并对目标菌株进行透射电镜形态鉴定和16S rRNA基因序列分析;然后进行生物学特性研究,同时开展氨苄青霉素、吲哚、Ca~(2+)和Mg~(2+)影响蛭质体形成的研究。【结果】分离出一株以枯草芽孢杆菌作为宿主的蛭弧菌并命名为BDE-1,其最适温度、盐度和pH分别为25℃、2.0%和7.0;BDE-1可裂解24株试验菌,占总试验菌株数(28株)的85.7%,其中对试验弧菌(13株)的裂解率达92.3%;吲哚、氨苄青霉素、Ca~(2+)和Mg~(2+)4种因子对BDE-1蛭质体的形成均有促进作用,其中吲哚和Ca~(2+)的促进作用显著。【结论】研究结果不仅为蛭弧菌寄生宿主的优化选择提供了可行性解决思路,而且为维持或提高蛭弧菌微生态制剂的应用活性提供了理论依据。     

两株海洋蛭弧菌的分离及生物学性质

[目的]从深圳湾海泥中分离鉴定蛭弧菌,并对其生物学性质进行初步研究.[方法]通过稀释营养肉汤(dilute nutrient broth,DNB)双层平板法分离蛭弧菌,对所分离的菌株进行电镜形态观测,并进行16S rDNA测序分析,之后结合1994年版伯杰氏鉴定细菌学手册对菌株进行鉴定,最后通过生理试验对其生物学性质进行研究.[结果]从深圳湾海泥中分离出2株蛭弧菌,分别命名为5#-12和5#-sh06,它们可在20℃～35℃范围内生长,最适温度分别是25℃和30℃;生长pH范围6.1～8.6,最适pH均为7.2;2株蛭弧菌可分别裂解46和48株试验菌,各占总试验菌株数(58)的79.3%和82.8%;联合2株蛭弧菌,可裂解56株试验菌,占总试验菌株数的96.6%;同时,它们一起能将所有试验弧菌裂解.[结论]研究结果揭示了蛭弧菌作为一种生物净化因子具有极大的潜在应用价值.     

鱼病蛭弧菌的微生态学初步研究

本次以鲫鱼出血性腹水病病原菌点状产气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ Ｐｕｎｃｔａｔａ）为宿主菌。从自然界分离获得６株噬菌蛭弧菌菌株,它们具有噬菌蛭弧菌的生物学特性。研究表明,这６株蛭弧菌的最适培养条件为温度２５￣２８℃,ｐＨ７．２,有溶菌性,能裂解多种鱼类病原菌。其中对蛭弧菌Ｂｄｓ－４菌株在实验条件下对病原菌的自然净化作用等方面进行了研究。说明蛭弧菌是精养鱼糖水体中某些致病菌的自然净化的重要生物因素之     

四个类群海洋蛭弧菌类生物生长特性的比较

研究了噬菌弧菌科(Bacteriovoracaceae) 4个类群共12株海洋蛭弧菌类生物(Bdellovibrio- and-like organisms, BALOs)的生长温度和盐度范围及其对6种常见对虾病原弧菌的裂解能力, 并通过透射电镜分析了其中4个代表菌株的形态特征。结果表明, 同一群或亚群内菌株的生长温度或盐度相同, 即类群IV、VI、IX、X菌株的生长温度范围分别为20°C~35°C、15°C~35°C、15°C~ 40°C和10°C~40°C, 最适生长温度为30°C或35°C; 生长盐度范围分别为5‰~40‰、2.5‰~30‰、5‰~60‰和5‰~60‰, 最适生长盐度分别为10‰、5‰、20‰和20‰。测试的6种弧菌中有3种可被全部BALOs裂解, 而其它弧菌仅被部分BALOs裂解, 但即使同一类群菌株, 对某些弧菌也表现不同的裂解能力。形态上, 4株不同类群BALOs均呈典型的弧状细胞, 具极生单鞭毛。