靶向B细胞并特异结合其分泌IL-10的重组融合蛋白的构建、表达和初步鉴定 *

目的:CD19单链抗体可变区(single-chain fragment variable)sc Fv能特异性识别结合B细胞表面的CD19分子,白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是调节性B细胞(Breg)的主要特征之一。旨在构建CD19sc Fv和IL-10受体1(IL-10R1)胞外段的重组融合蛋白,拟用该融合蛋白捕捉和封闭Breg细胞分泌的IL-10。方法:CD19sc Fv和IL-10R1胞外段克隆到p ET-28a原核质粒上,E.coli BL21(DE3)工程菌表达蛋白通过镍柱富集和纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定,Pull down实验验证蛋白与CD19分子和IL-10细胞因子的结合。结果:成功表达CD19sc Fv-IL-10R1融合蛋白,该融合蛋白能在体外同时结合CD19和IL-10分子。结论:CD19sc Fv-IL-10R1融合蛋白在体外可以同时结合CD19分子和IL-10分子,具有潜在应用前景可作为特异性抑制Breg的生物小分子。     

SARS-CoV-2 NP和NP-FlaB融合蛋白的免疫原性研究

新型冠状病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染引发的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情在全球持续流行,疫苗的研发和推广使用是阻止新冠疫情的关键手段.SARS-CoV-2核衣壳蛋白(NP)作为病毒的主要结构蛋白,是疫苗开发的潜在候选靶点.鞭毛素B(FlaB)可作为免疫佐剂,增强抗原的免疫原性....     

HIV-1辅助蛋白Vpr多肽抗体的制备与鉴定

预测Vpr蛋白的B细胞抗原表位,并利用合成的B细胞表位肽制备Vpr特异性抗体。应用生物信息学技术获得Vpr蛋白共享氨基酸序列并预测其潜在B细胞抗原表位,与载体蛋白血蓝蛋白(KLH)偶联合成多肽并免疫家兔,鉴定及纯化获得的多肽特异性抗体。软件预测显示,Vpr蛋白N端的第3～19位(N)和C端的第82～95位(C)氨基酸序列为潜在B细胞抗原表位;ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价都达到1:105以上;Western-Blotting结果显示,无论对HIV-1B亚型还是CRF07_BC重组型的Vpr蛋白,其多肽N抗体和C抗体均能特异性识别;免疫沉淀结果显示,Vpr多肽N和C抗体也能特异性结合未变性的野生型Vpr或GFP-Vpr融合蛋白。利用生物信息学技术能成功预测Vpr蛋白B细胞抗原表位,免疫所获得的抗体具有较好的特异性和应用性。     

人微小病毒B19感染的研究进展

近年来人微小病毒B19(human parvovirus B19)作为人类疾病的重要病原已愈来愈广泛受到重视。大量研究成果不但揭示了B19病毒的致病机理,Th-1介导的细胞免疫应答,而且发展了B19感染的诊断和B19污染血制品的筛查技术,并且为疫苗的研制奠定了基础。这里对人类B19病毒的病原学特征、致病机理、临床症状及实验室诊断方法和技术进行了较全面的综述。     

人细小病毒B19与自然流产关系的研究

无菌留取 5 4例自然流产妇女和 43例妊娠无异常孕妇血清 ,用聚合酶链反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)检测的人细小病毒B19(HumanParvovirusB19,B19)DNA ,在自然流产组中人细小病毒B19DNA有 15例阳性 ,阳性率为 2 7.78%。正常对照组中 ,人细小病毒B19DNA有 2例为阳性 ,阳性率为 4.65 % ,用x2 检验 ,x2 =8.86,P <0 .0 1,两组有非常显著性差异。由此总结 ,人细小病毒B19感染可能是导致自然流产的原因之一     

人细小病毒B19基因组编码蛋白真核表达质粒的构建与鉴定

目的:构建人细小病毒B19(B19V)基因组编码蛋白的真核表达质粒,并对其表达进行鉴定,为研究B19V蛋白功能提供支持。方法:设计并合成B19V基因组编码蛋白VP1、VP2、NS1、11k Da、X、7.5k Da和VP1独特区域(VP1u)的PCR扩增引物,以B19V感染性克隆p B19-M20为模板,PCR扩增基因组编码蛋白的核苷酸序列,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)-HA-Flag,并进行酶切鉴定和核苷酸序列测定;将鉴定正确的重组质粒转染HEK293T细胞,通过免疫印迹分别检测病毒蛋白的表达情况。结果:构建了B19V 7种蛋白的真核表达质粒,免疫印迹鉴定表明均可表达相应的目的蛋白。结论:构建了B19V 7种蛋白的真核表达质粒,为深入研究B19V蛋白功能及其在致病机制中的作用奠定了基础。     

人类微小病毒感染

<正>微小病毒科(PV)是迄今所知最小的一类含DNA病毒。该科中的微小病毒能自身复制并有众多脊椎动物宿主,能引起小哺乳动物的各种疾病。最近又发现它们与人类疾病的关系。本文重点论述PVB19。 PVB19的发现 1975年,Cossart等在常规筛选乙型肝炎抗原(HBAg)时发现几份血清免疫电泳阳性但血凝和放射免疫分析结果阴性。在11份血清中,发现一种新的病毒,命名为B19。电子显微镜(EM)可观察到直径20—25nm的圆形病毒颗粒及其碎片,空壳。该抗原的血清学反应不同于HBAg。他们推测这种新的病毒为一传染性病原体,并注意到30%成人血清B19IgG抗体阳性。遗传学和生化学分析证实B19属于PV科。几年以后,二位士兵出现一种短暂发热性疾病,通过EM观察到血清中的PV样颗粒。血清人类微小病毒(HPV)B19抗原阳性。这是症状性HPV感染的首例报告。     

新融合蛋白CD19scFv/CD80抗白血病作用研究

B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)是一种十分常见的血液系统恶性肿瘤,尽管目前化疗效果显著,但仍有部分儿童和成人B-ALL患者疗效较差、预后不佳.研究表明,ALL细胞表面免疫共刺激分子CD80(B7.1)表达降低或不表达,导致白血病细胞不能有效地被细胞毒T细胞(CTL)识别杀伤.然而,几乎所有的B-ALL细胞均表达CD19表面抗原.因此,本研究利用前期构建的CD19单链抗体(scFv)/CD80融合基因及表达的融合蛋白,通过融合蛋白中抗CD19scFv,将CD80结合到B-ALL白血病细胞表面,靶向激活CTL细胞,起到杀伤白血病细胞的作用.在体外共培养实验中,该融合蛋白结合B-ALL细胞系Nalm-6细胞后,可诱导淋巴细胞增殖,分泌细胞因子并产生较显著的特异性细胞毒作用.以Nalm-6细胞在免疫缺陷小鼠(Mus musculus)中建立白血病动物模型,CD19scFv/CD80融合蛋白联合输注淋巴细胞可显著延长小鼠的生存时间.本研究表明,该融合蛋白可使逃避免疫监视的B-ALL细胞有效地转化成抗原提呈细胞,进而激活特异性免疫反应,具有潜在的临床应用价值.     

人细小病毒B19分子生物学研究进展

人细小病毒B19 (Human parvovirus B19,简称B19病毒),是目前为止已知能够感染并引起人类疾病的两种细小病毒科成员之一。B19病毒作为一种重要病原,能够引起如儿童传染性红斑、急性再障危象、胎儿水肿甚至死胎等疾病。文中从B19病毒基因型、病毒受体、基因组结构特点与复制、病毒转录与转录后调控、病毒非结构和结构蛋白特点与功能以及病毒诊断及抗病毒药物研究策略6个方面来综述B19病毒的最新研究进展,以期为B19病毒致病机制的深入研究与治疗诊断策略的制定提供参考。     

苹果蠹蛾细胞色素P450基因CYP332A19和CYP337B19的克隆及表达分析

【目的】本研究旨在通过克隆苹果蠹蛾Cydia pomonella细胞色素P450基因CYP332A19和CYP337B19,并对其进行序列和表达分析,以更好地了解这两个P450基因在植物次生物质解毒方面的作用,为进一步的功能研究提供依据。【方法】采用本地BLAST搜索苹果蠹蛾转录组数据库获得细胞色素P450基因cDNA序列,采用RT-PCR技术克隆目的基因的编码区。利用生物信息学软件分析目的基因的序列特征及与其他近缘物种的P450基因的系统进化关系。采用RT-qPCR技术测定目的基因在苹果蠹蛾不同发育阶段(卵、1-5龄幼虫、蛹和成虫)、4龄幼虫不同组织(头部、表皮、脂肪体、中肠和马氏管)以及4龄幼虫分别取食添加0.1%香豆素和0.5%槲皮素的人工饲料2 d后的表达水平。【结果】克隆获得苹果蠹蛾细胞色素P450基因CYP332A19(GenBank登录号: MF574708)和CYP337B19(GenBank登录号: MF574697)的全长cDNA序列,开放阅读框(ORF)分别长1 518和1 491 bp,分别编码505和496个氨基酸,其蛋白质分子量分别为58.586和57.734 kD,理论等电点分别为8.99和7.61。结构域分析显示,CYP332A19和CYP337B19中均包含包括血色素结合区在内的5个保守的细胞色素P450结构域。系统发育树显示,苹果蠹蛾CYP332A19与苹淡褐卷蛾Epighyas postvittana CYP332A9等CYP332A基因聚在一枝,而CYP337B19与稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis CYP337B12和六星灯蛾Zygaena filipendulae CYP337B11等CYP337B基因聚在另一枝。RT-qPCR分析结果表明,CYP332A19和CYP337B19在苹果蠹蛾幼虫期的表达水平高于卵期的,分别在4龄幼虫脂肪体和中肠中的表达量最高。取食分别含0.1%香豆素和0.5%槲皮素的人工饲料2 d后,4龄幼虫体内的CYP332A19和CYP337B19相对表达量显著高于对照组(取食含2%DMSO的人工饲料)。【结论】CYP332A19和CYP332B19分别在苹果蠹蛾幼虫脂肪体和中肠中高表达,且在取食含香豆素和槲皮素的人工饲料的苹果蠹蛾幼虫体内表达量升高,说明这两个基因可能参与苹果蠹蛾对外源物质的解毒代谢过程。本研究的结果有助于我们了解苹果蠹蛾对寄主次生物质解毒代谢机理,为苹果蠹蛾防治提供新思路。     

不同气候变化情景下2070-2099年中国潜在植被及其敏感性

潜在植被作为当前气候条件、无人类干扰下,所能发育演替形成的最稳定、最成熟的一种顶极植被类型,能够反映立地植被发展的趋势。潜在植被的研究有助于人类了解植被与气候系统的作用机制,可为区域植被恢复工程和生态建设提供参考依据。基于综合顺序分类系统,利用A1B、A2及B1情景下2070-2099年气象数据对中国潜在植被进行了模拟,在不同气候变化情景下分析了未来中国潜在植被的空间分布和潜在植被对不同气候变化的敏感性。结果表明:(1)不同气候变化背景下中国潜在植被分布的规律具有相似性,但潜在植被类在总数和各情景下分布的面积存在差异性;(2)比较发现,中国的气候条件在20世纪和21世纪均不适宜炎热极干热带荒漠类(ⅦA)的发育;(3)中国潜在植被在3种气候变化情景下表现为敏感性的区域占到国土总面积的64.10%,在西北地区、北方地区、南方地区及青藏地区不同自然区敏感性地区所占各区的比例不同,分别为68.20%、70.82%、49.94%及66.59%。     

钙调神经磷酸酶和金属钒复合物的顺磁共振(ESR)研究

钙调神经磷酸酶是新近发现的一种磷蛋白磷酸酶。它由两个不同种亚基1:1组成。大亚基A(分子量为61K)和小亚基B(分子量为19K)。B亚基的一级结构和钙调素,肌钙蛋白C非常相似。     

人细小病毒B19生物学特性研究进展

细小病毒B19是目前细小病毒家族中除人博卡病毒(HBoV)和新型细小病毒PARV4(Humanparvovirus 4)以外唯一可以引起人类疾病的病毒。它可能是多种疾病的致病因子,感染儿童可引起传染性红斑,感染成人可引起多发性关节病综合征,而对一些有免疫病,血液病的患者,B19感染可以引起严重的疾病,如慢性红细胞贫血,暂时性再障危象。病毒感染后对细胞的毒性是引起暂时性障碍危象和纯红细胞再障的直接原因。血液病患者中,B19病毒感染是引起暂时性障碍危象的主要病因,持续B19病毒感染会导致免疫缺损患者     

NK细胞免疫治疗防治COVID-19应用潜力的研究进展

新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019, COVID-19)作为一种新发型急性呼吸道传染病,目前已对全球公共卫生安全构成严重威胁。严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)感染导致COVID-19重症患者淋巴细胞减少、淋巴细胞功能障碍并引起不可控的炎症反应。由于自然杀伤细胞(natural killer cell, NK细胞)在抗病毒和免疫调节中具有重要作用,以NK细胞为基础的免疫治疗可能是有效抗击COVID-19的治疗策略之一。现就已发表的SARS-CoV-2临床研究报告,整理介绍了该病毒的基本特征及COVID-19患者的主要免疫病理学状态,阐述NK细胞在抗病毒领域的潜在作用机制与研究进展,并对NK细胞防治COVID-19的免疫治疗策略及所面临的问题与挑战作一综述。     

结核病血清学检测FolB蛋白(Rv3607c)抗体效果的初步评价

血清学检测是结核病诊断的主要方法之一,Fol B蛋白(Rv3607c)是结核分枝杆菌的一种分泌蛋白,是潜在的血清学检测生物标记物。本研究的目的是评价Fol B蛋白作为生物标记物的特异性和灵敏度。以结核分枝杆菌基因组DNA为模板,通过PCR的方法成功的获得Rv3607c目的基因,克隆到大肠杆菌p ET28a载体上,并在BL21(DE3)中可溶性表达。利用Ni-柱亲和层析系统纯化得到纯度为95%的Fol B蛋白,以此蛋白作为包被抗原,对44例健康人和212例阳性结核患者血清进行了ELISA检测。结果显示Fol B蛋白能区分结核病人和健康对照组,灵敏度和特异性分别为49.3%和90.6%,都比目前公认的临床应用蛋白Pst SI(38 k D)要高,因此Fol B蛋白可以作为一个在结核病临床诊断上有潜在应用意义的生物标记物。     

人细小病毒B19病毒样颗粒的制备

采用昆虫杆状病毒表达系统,制备人细小病毒B19病毒样颗粒(VLPs)。先通过PCR方法合成细小病毒B19衣壳蛋白基因VP2,将其克隆到pFastBac1质粒,然后转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP2。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒rBac-VP2。利用rBac-VP2感染Sf9细胞表达B19VP2蛋白,通过间接免疫荧光、Western blotting等方法鉴定目的蛋白表达。采用两次超速离心的方法对表达产物进行纯化,纯化产物在透射电镜下可见直径约22nm的VLPs。本研究成功制备了人细小病毒B19的VLPs,为B19感染血清学检测方法的建立提供了参考。     

新型冠状病毒肺炎与牙周炎的潜在关联

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是目前全球面临的最紧迫的公共卫生问题之一。牙周炎是一种高发病率的慢性疾病,同时也是多种全身性疾病的诱因。最新研究表明COVID-19与心血管疾病、高血压、糖尿病、肥胖和慢性肾病等其他慢性疾病存在相关性。旨在基于严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的感染与牙周炎发生的主要致病机制探讨两者之间是否存在潜在关联。总结发现牙周炎与COVID-19发病率的上升没有直接关联,但是牙周炎能间接影响COVID-19预后。对两者关系的进一步了解,不仅可以预防牙周炎,还可以降低COVID-19不良预后的发生。本文为COVID-19合并牙周炎患者的治疗提供新型研究思路及理论参考。     

NF-κB信号通路在骨关节炎中的作用

骨关节炎(osteoarthritis, OA)是一种世界范围的慢性退行性关节疾病,对其发病机制的研究一直是临床研究的热点问题。核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)信号通路参与软骨退化、滑膜炎症、软骨下硬化等OA重要病理过程,与OA的发生和发展关系密切,或可成为OA治疗的潜在新靶点。本文就NF-κB信号通路在OA发病中的研究成果进行综述,以期更好地了解其发病机制,为OA的诊疗提供参考和依据。     

细小病毒B19 Oligo探针设计

利用BLAST软件对细小病毒B19的序列进行序列比对,获得特异序列;利用生物学软件Oligo6.40设计特异性高、Tm值接近、长度均一的Oligo探针。结果获得了13条70bp的Oligo探针,用于芯片打印及细小病毒B19的检测。表明利用BLAST系统和生物学软件Oligo6.40设计细小病毒B19诊断芯片的探针是一种简便而有效的方法。