莴苣胚囊细胞分离

用酶解和解剖方法分离了莴苣的卵细胞,助细胞,中央细胞和合子。莴苣子房先在酶液中酶解40～50min,然后在不含酶的分离液中用解剖针解剖子房。在解剖出的胚囊中,可看到卵细胞,两个助细胞和中央细胞的轮廓。将胚囊的合点端切破,轻轻挤压胚囊的珠孔端,四个细胞即可逸出。在最佳条件下,90min可从40个子房中分离出29个胚囊,进一步从中分离出11个卵细胞。分离出的胚囊细胞用显微操作仪收集备用。莴苣卵细胞的成功分离为进行离体受精探索创造了条件。     

胡萝卜精、卵细胞、助细胞和中央细胞的分离

用两个解剖针挤压胡萝卜花粉使其破裂释放出精细胞。用酶解-解剖方法分离胡萝卜胚囊中的卵细胞、助细胞和中央细胞。胡萝卜胚珠先在酶液中酶解40~50min,然后将其转移到不含酶的分离液中用解剖针解剖胚珠。将胚珠的合点端切破,轻轻挤压胚珠的珠孔,卵细胞、助细胞和中央细胞即可逸出。在最佳条件下,20min可从20个胚珠中分离出5个卵细胞。对分离胚囊细胞的渗透压和酶液成分进行了筛选。分离出的卵细胞用显微操作仪收集。胡萝卜精、卵细胞的成功分离为在双子叶植物中进行离体受精探索创造了条件。     

洋葱卵细胞的分离

将洋葱的胚珠置于酶液中酶解50-110 min后剥去其珠被,可清楚地看到珠心中的胚囊轮廓。用解剖针将珠心从中部横切,然后挤压其珠孔部位,卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪的玻璃针将卵细胞和两个助细胞分开,达到分离洋葱卵细胞的目的。酶对分离卵细胞具有重要作用,在最佳的酶液浓度[0.02%果胶酶Y23、0.08%果胶酶（Serva）、0.05%纤维素酶和0.05%半纤维素酶]下酶解胚珠110 min后,解剖1 h可从24个胚珠中分离出10个卵细胞（41.67%）。随着胚囊的发育,两个助细胞的体积出现明显的二形性。洋葱生活卵细胞的分离为开展洋葱离体受精建立了基础,也为研究洋葱卵器细胞的发育创造了条件。     

洋葱卵细胞的分离

将洋葱的胚珠置于酶液中酶解50~110 min后剥去其珠被,可清楚地看到珠心中的胚囊轮廓。用解剖针将珠心从中部横切,然后挤压其珠孔部位,卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪的玻璃针将卵细胞和两个助细胞分开,达到分离洋葱卵细胞的目的。酶对分离卵细胞具有重要作用,在最佳的酶液浓度[0.02%果胶酶Y23、0.08%果胶酶(Serva)、0.05%纤维素酶和0.05%半纤维素酶]下酶解胚珠110 min后,解剖1 h可从24个胚珠中分离出10个卵细胞(41.67%)。随着胚囊的发育,两个助细胞的体积出现明显的二形性。洋葱生活卵细胞的分离为开展洋葱离体受精建立了基础,也为研究洋葱卵器细胞的发育创造了条件。     

颠茄胚囊细胞原生质体的酶法分离和观察

分离被子植物雌配子原生质体对发展植物受精工程有着重要意义。最近几年,虽然用酶法分离生活的胚囊已有一些成功的报道。但对分离组成胚囊细胞的原生质体前人还没有进行过尝试。1984年我们首次从烟草生活胚珠中分离出卵细胞、中央细胞、助细胞和反足细胞的原生质体。最近我们又用颠茄胚珠为材料,采用酶解压片技术进行分离胚囊细胞的原生质体,也取得预期的结果。获得了有活性的卵细胞、中央细胞和助细胞的原生质体。从而证明这项技术是有推广应用价值的。在观察中发现用酶法分离生活胚囊细胞的原生质体,能     

葱卵细胞的分离

将大葱（Allium fistulosum）胚珠置于酶液中30分钟可将其外珠被去掉。可清楚地看到由内珠被包裹的胚珠中胚囊的轮廓。将胚珠转移至不含酶的相同溶液中,用解剖针从胚珠中部切割,然后挤压胚珠的珠孔部位,卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪将卵细胞和2个助细胞分开,达到葱卵细胞分离的目的。酶对分离卵细胞具有重要的作用,经0．2％果胶酶Y23、0．8％果胶酶、0．8％纤维素酶和0．5％半纤维素酶的处理,可在2小时内从30个胚珠中分离出18个卵细胞。随着胚囊的发育,2个助细胞的体积出现明显差异。生活的葱卵细胞的成功分离,为建立葱离体受精体系创造了条件。     

葱卵细胞的分离

将大葱(Allium fistulosum)胚珠置于酶液中30分钟可将其外珠被去掉。可清楚地看到由内珠被包裹的胚珠中胚囊的轮廓。将胚珠转移至不含酶的相同溶液中, 用解剖针从胚珠中部切割, 然后挤压胚珠的珠孔部位, 卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪将卵细胞和2个助细胞分开, 达到葱卵细胞分离的目的。酶对分离卵细胞具有重要的作用, 经0.2%果胶酶Y23、0.8%果胶酶、0.8%纤维素酶和0.5%半纤维素酶的处理, 可在2小时内从30 个胚珠中分离出18个卵细胞。随着胚囊的发育, 2个助细胞的体积出现明显差异。生活的葱卵细胞的成功分离, 为建立葱离体受精体系创造了条件。     

天竺葵雌性生殖单位的超微结构

应用透射电镜研究了临近受精时天竺葵(Pelargonium hortorum Bailey)胚囊中的卵细胞、助细胞和中央细胞的结构。证明了卵细胞与助细胞以及助细胞与助细胞之间从合点端至珠孔端有很大的面积以质膜分界,仅珠孔端少部分以壁分隔。卵细胞与中央细胞之间同样缺乏细胞壁。在卵细胞的合点端,两质膜不同程度地分离形成宽窄相间的间隙。在间隙的絮状基质中存在小泡,这些小泡的产生似与卵和中央细胞中周质内质网的活动有关。推测小泡为多糖性质,可能为合子新壁的建造提供物质。卵细胞质中含巨大线粒体,质体和内质网也较丰富。基于超微结构的特征,可认为卵细胞具高度的生理合成活动的潜能。中央细胞极核位于珠孔端与卵器细胞毗邻,有利于在双受精作用中同时发生精细胞与卵细胞和精细胞与中央细胞核的融合。中央细胞的侧壁在珠孔端形成内突,具传递细胞的特点,表明这是雌配子体向孢子体摄取营养的重要部位。助细胞的细胞质含丰富的细胞器,这与多数植物中的相似,但具几个明显的特征,即核中存在微核仁,内质网形成圆球体或脂体,线粒体富集在丝状器的附近。传粉后花粉管进入胚囊之前,两个助细胞中一个退化。     

扁豆成熟胚囊的超微结构

本文对扁豆（Dolichos lablab)成熟胚囊的超微结构进行了研究,在成熟胚囊中,卵细胞和助细胞仅在珠孔端1／3有细胞壁,靠近合点端,卵细胞一助细胞,卵细胞－中央细胞,助细胞－中央细胞之间没有细胞壁存在,相邻细胞的质膜靠在一起,在卵细胞和中央细胞的质膜间,有些地方存在中等电子密度的物质,卵细胞的细胞质中含有很多的线粒体和质体,内质网和高尔基体较少,助细胞的珠孔端有一复杂的丝状器,靠近珠孔端的细胞质中有很多管状的内质网,表明助细胞可能具有分泌功能,在助细胞的合点端,含有丰富的粗糙内质网,助细胞和卵细胞的质膜之间有很多囊泡状的结构,中央细胞内含有丰富的线粒体,高尔基体和内质网,中央细胞的壁向内形成突起,在周缘细胞质中含有丰富的脂滴。     

扁豆成熟胚囊的超微结构

本文对扁豆（Dolichos lablab)成熟胚囊的超微结构进行了研究,在成熟胚囊中,卵细胞和助细胞仅在珠孔端1／3有细胞壁,靠近合点端,卵细胞一助细胞,卵细胞－中央细胞,助细胞－中央细胞之间没有细胞壁存在,相邻细胞的质膜靠在一起,在卵细胞和中央细胞的质膜间,有些地方存在中等电子密度的物质,卵细胞的细胞质中含有很多的线粒体和质体,内质网和高尔基体较少,助细胞的珠孔端有一复杂的丝状器,靠近珠孔端的细胞质中有很多管状的内质网,表明助细胞可能具有分泌功能,在助细胞的合点端,含有丰富的粗糙内质网,助细胞和卵细胞的质膜之间有很多囊泡状的结构,中央细胞内含有丰富的线粒体,高尔基体和内质网,中央细胞的壁向内形成突起,在周缘细胞质中含有丰富的脂滴。     

蓝猪耳卵细胞和合子的分离

蓝猪耳(Torenia fournieri)胚囊部分裸露出胚珠,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞和助细胞的形态结构.用解剖和酶解-解剖两种方法都能分离出生活卵细胞.用前种方法机械分离出的卵细胞数量较少(5%),但避免了酶对配子识别研究的干扰.在后种方法中加入0.1%纤维素酶和0.1%果胶酶既能使分离更加容易操作,又对卵细胞没有致命伤害,能在短时间内分离出较多的卵细胞(18%).用酶解-解剖方法也可分离出授粉14 h后的合子细胞.     

莴苣助细胞发育过程中钙的分布研究

用焦锑酸盐沉淀法对莴苣助细胞中的钙分布进行了观察。结果表明,开花前3天刚形成的助细胞中的钙颗粒很少:开花前2天助细胞壁中的钙颗粒增加;开花前1天助细胞珠孔端细胞壁加厚,其中积累了许多钙颗粒:开花当天助细胞珠孔端的丝状器中聚集了大量的钙颗粒。授粉后1h时两个助细胞的结构和钙分布发生差异,一个呈退化状,其中的钙颗粒明显增多,另一宿存助细胞中的钙分布与授粉前相似。去雄不授粉1天后两个助细胞均保持完好,且两助细胞中的钙分布没有明显差异,表明由花粉管引起一个助细胞中钙含量增加进而导致了助细胞退化。退化助细胞在卵细胞与中央细胞之间形成一薄层。助细胞退化后不同部位的钙颗粒呈现出与受精作用密切有关的变化:授粉后1h时,钙主要聚集在近合点端部位;授粉后2.5h卵细胞即将受精,这时许多细小的钙颗粒主要聚集在卵细胞与中央细胞之间的薄层中;授粉后4h精、卵细胞已融合,这时退化助细胞合点端的钙颗粒明显减少,而在其珠孔端又聚集了较多的钙。上述助细胞中的钙含量变化与吸引花粉管进入胚囊和促使精卵细胞融合密切有关。     

甘蓝型油菜珠孔与胚囊的超微结构研究

甘蓝型油菜的外珠孔基本上为开放结构,内珠孔为闭合结构。胚囊成熟时反足细胞已退化,仅由二个助细胞、一个卵细胞、与一个中央细胞组成。助细胞极性不明显,二个助细胞在花粉管到达前均显示同等退化迹象。卵细胞极性明显。中央细胞中含结构独特的质体。受精前,卵与中央细胞的质膜之间含有特殊的电子致密物质。     

被子植物受精机制的研究进展

被子植物的受精是一个复杂而精巧的过程。花粉管到达子房,通过退化助细胞进入胚囊,释放出两个精细胞。原来在花粉管中相互联结的两个精细胞在退化助细胞中分开,一个与卵细胞融合,另一个与中央细胞融合,完成双受精。目前对双受精过程中有关雌、雄配子识别的机制还知之甚少。本文介绍了目前被子植物精、卵细胞融合前后的细胞周期变化、退化助细胞的功能、精细胞在退化助细胞中迁移的研究动态、精细胞的倾向受精和卵细胞的激活等被子植物受精生物学领域中的一些新的研究成果和发展趋势。     

烟草未受精中央细胞及其它胚囊细胞的离体分裂

自70年代中期以来,未传粉子房和胚珠的离体培养已在多种植物中取得成功,得到的单倍体植株来源于胶囊中的卵细胞、助细胞以及反足细胞。而分离的未受精胚囊及其成员细胞的离体培养虽屡经尝试,迄今只有Kranz等诱导了玉米未受精卵细胞分裂形成小愈伤组织,至于中央细胞与其它雌配子体细胞则无离体分裂的报道。本文报道大叶烟草未受精中央细胞首次培养成细胞团及其它胚囊细胞启动离体分裂的实验结果。     

甜菜无融合生殖单体附加系M14成熟胚囊的超微结构特征

以甜菜无融合生殖单体附加系M14（Betavulgaris,2n=18＋1）为实验材料,利用电子显微镜技术对成熟胚囊及其超微结构进行研究。结果表明：M14成熟胚囊包括1个卵细胞、2个退化的助细胞、1个具有次生核的中央细胞和3-6个反足细胞。其卵细胞具有3种不同的形态：（1）极性正常的卵细胞,细胞核位于合点端,细胞质含有大量核糖体、线粒体、内质网等细胞器;（2）细胞核位于细胞中央;（3）细胞核位于珠孔端,且后2种形态细胞器的种类与数量少。大多数胚囊中的2个助细胞在开花前已退化。中央细胞的次生核位于反足细胞附近;未经受精自发分裂前的卵细胞与中央细胞的细胞核大、核仁明显,细胞器的种类与数量多,呈现旺盛代谢活动特征,成为二倍体孢子无融合生殖过程中,卵细胞与次生核自发分裂的细胞学标志。     

水稻胚囊超微结构的研究

水稻(Oryza sativa L.)胚囊成熟时,卵细胞的合点端无细胞壁,核居细胞中部,细胞器集中在核周围,液泡分散于细胞周边区域。助细胞珠孔端有丝状器,合点端无壁,核位于细胞中部贴壁处,细胞器主要分布在珠孔端,液泡主要分布在合点端。开花前不久,一个助细胞退化。中央细胞为大液泡所占,两个极核靠近卵器而部分融合,细胞器集中在极核周围和靠近卵器处,与珠心相接的胚囊壁上有发达的内突。反足细胞多个形成群体,其增殖主要依靠无丝分裂与壁的自由生长,反足细胞含丰富活跃的细胞器,与珠心相接的壁上有发达的内突。开花后6小时双受精已完成,合子和两个助细胞合点端均形成完整壁。合子中开始形成多聚核糖体、液泡减小。退化助细胞含花粉管释放的物质,其合点端迴抱合子。极核已分裂成数个胚乳游离核,中央细胞中细胞器呈活化状态。反足细胞仍在继续增殖。讨论了卵细胞的极性、助细胞的退化、卵器与中央细胞间界壁的变化、反足细胞的分裂特点等问题。     

甜菜无融合生殖单体附加系M14 成熟胚囊的超微结构特征

以甜菜无融合生殖单体附加系M14(Beta vulgaris, 2n=18+1)为实验材料, 利用电子显微镜技术对成熟胚囊及其超微结构进行研究。结果表明: M14成熟胚囊包括1个卵细胞、2个退化的助细胞、1个具有次生核的中央细胞和3-6个反足细胞。其卵细胞具有3种不同的形态: (1)极性正常的卵细胞, 细胞核位于合点端, 细胞质含有大量核糖体、线粒体、内质网等细胞器; (2)细胞核位于细胞中央; (3)细胞核位于珠孔端, 且后2种形态细胞器的种类与数量少。大多数胚囊中的2个助细胞在开花前已退化。中央细胞的次生核位于反足细胞附近; 未经受精自发分裂前的卵细胞与中央细胞的细胞核大、核仁明显, 细胞器的种类与数量多, 呈现旺盛代谢活动特征, 成为二倍体孢子无融合生殖过程中, 卵细胞与次生核自发分裂的细胞学标志。     

成熟胚囊的结构与功能是什么？

答：大多数被子植物的成熟胚囊由7个细胞8个核构成,包括珠孔端的1个卵细胞、2个助细胞、合点端的3个反足细胞和1个中央细胞,其中中央细胞具有2个核。这些细胞的结构和功能如下：     

助细胞

被子植物的雌配子体,又称胚囊,通常由七个细胞所组成,包括在珠孔端的一个卵细胞二个肋细胞和在合点端的三个反足细胞以及在这两群细胞之间的一个大的含有双核的中央细胞. 在胚囊中结构最为复杂、并在受精过程中起着极其重要作用的是两个助细胞.助细胞紧靠卵细胞,与卵细胞呈三角状排列,各细胞都