用乳胶凝集试验测大便中的轮状病毒

<正>病人大便中的轮状病毒可以用高度敏感和特异的方法——乳胶凝集法(LA)检测。 材料和方法 患者 从急性胃肠炎或疱疹性咽峽炎患者收集大便标本。急性胃肠炎患者年令从3个月至3岁;后者从1岁至5岁。在发病后1～5天收集大便标本。     

应用协同凝集法鉴定沙门氏菌O抗原

<正>鉴定肠炎沙门氏菌菌体O抗原的玻片凝集法需要约40种吸收过的抗血清。这些抗血清的制备是困难而又麻烦的。将抗体与葡萄球菌A蛋白结合的协同凝集程序可以改进这种鉴定方法并增强抗血清活性。Edwards等报导了用协同凝集作沙门氏菌群的快速鉴定法,但试验中仅有少数异种菌株,所以并不能充分证明这些试验剂的特导性。需要进一步证明协同凝集法具有与玻片凝集有同样的特导性和敏感性。     

轮状病毒乳胶试剂盒的研制

用轮状病毒Ａ群单克隆抗体研制出轮状病毒抗原乳胶凝集试剂盒,并与轮状病毒ＥＬＩＳＡ试剂盒进行了比较。试验结果表明,轮状病毒抗原乳胶凝集试剂盒具有较高的特异性（９８７％）和敏感性（８６８％）,与ＥＬＩＳＡ试剂盒比较无显著性差异（Ｐ＞０１）,且操作简便快速、成本低廉     

乳胶凝集法测定甲胎蛋白的方法学研究

自从Singer和Plotz(1956)用乳胶凝集法测定类风湿关节炎以来,乳胶凝集法一方面向简便和快速方向发展,另一方面是扩大其应用范围的问题。1971年11月Pfizers公司举行了乳胶凝集技术会议,与会者认为此法有不同程度的假阳性。Smith等(1971)曾提到用修改的Morris等(1970)的乳胶凝集法测定人甲胎蛋白,认为它只和含甲胎蛋白的血清起反应。     

用轮状病毒抗原包被固相以ELISA法检测粪便中IgA

<正>本文介绍了ELISA方法,并报道了用此法得知的粪IgG的一些特征。 材料和方法 抗原:人轮状病毒“Wa”株在加胰酶的MA104细胞上增殖后,聚乙二醇浓缩,再用CsCl密度梯度离心法纯化。收集内衣壳形成的带(密度,1.38g/Cm~3),4℃保存待用。     

用斑点酶联免疫吸附试验检测轮状病毒抗原

我们用国产试剂和材料建立了一种以硝酸纤维素膜(NCM)作为固相载体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),用于检测粪标本中的轮状病毒. 首先用铁笔将NCM划成5×5mm的小方格,然后将免抗人轮状病毒IgG打点至方格中心,室温凉干后,置封闭液中室温作用1小时,取出用PBST洗涤3～5次,每次5分钟,然后将膜直接浸入待检粪样、阳性抗原对照和阴性抗原对照中.置37℃ 30～60分钟,洗涤。随后将上述诊断膜浸入酶标兔抗人轮状病毒IgG中,室温45～60分钟,洗涤。用底物DAB显色数分钟,至阳性对照样本出现明显褐色斑点时,用自来水终止反应。根据斑点颜色深浅,肉眼即可判断阳性或阴性结果。     

重叠PCR法合成轮状病毒抗原基因VP4

用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得轮状病毒VP4基因.根据Genbank中鼠VP4基因的序列设计34对引物,用overlap PCR法合成VP4全基因的两个片段A、B,将A、B分别连入pMD19-T simple载体,测序结果显示,成功合成了VP4全基因.证明了重叠延伸PCR法是获得目的基因的有效方法.     

用免疫荧光法检测登革病毒抗原

建立了为检测登革病毒抗原的直接免疫荧光法。将标记荧光素的抗IV型登革病毒的免疫腹水IgG抗体,滴加到感染了该病毒原型株的新生小白鼠脑印片和白纹伊蚊细胞系盖玻片培养上进行结合,都观察到特异的荧光。而未经感染或感染了其它型别登革病毒或日本乙型脑炎病毒的新生小自鼠脑印片上,均未观察到特异的荧光。这种特异的荧光能被未标记的特异性抗体阻断或抑制。在吸过感染了该病毒的小白鼠血的饲养的部份雌性白纹伊蚊头压片上,观察到特异的荧光,而在未吸过感染血的雌性白纹伊蚊头压片上,都未观察到特异的荧光。在流行区捕得的21只雌性白纹伊蚊中8只的头压片和82只中5只的涎腺、胃和卵巢压片中的细胞浆内观察到IV型登革病毒抗原的特异性荧光。而用此法对非流行区饲养的雌性白纹伊蚊的各种压片中都未观察到特异荧光。     

用ELISA法和核酸电泳法检测牛轮状病毒

本文用ELISA、核酸电泳法检测腹泻病牛粪便标本。21例中检出轮状病毒抗原有4例为阳性,占19.05%。ELISA法与核酸电泳法结果相符,前者被认为是最值得推广的方法。本研究在江西省首次证明了引起牛腹泻的牛轮状病毒的存在,为防治牛腹泻病采取有效手段提供了病原学依据。     

组织培养小瓶法LAI测定在胃癌中的应用

引言近年来,用于检测肿瘤病人的细胞免疫性的方法很多,LAI试验是其中之一。亀井秀雄(1976)和Rutherford(1977)分别对胃癌病人的LAI测定作了分析。本文进一步报道试用组织培养小瓶法进行检测的结果。材料与方法(一)试剂所用试剂和方法参见前文(葛锡锐等,1978)。为了比较不同类型临床标本的抗原性,我们将胃癌的病理检测标本分成三类:即腺癌、未分化腺癌和粘液样腺癌。将上述三类标本剔除正常组织、血管和坏死部分后,剪碎,加4倍体积0.05M     

伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区在大肠杆菌中的表达与gE乳胶凝集鉴别诊断方法的建立

将伪狂犬病病毒(PRV)Ea株gE基因主要抗原表位区段融合到原核表达载体pET28b的T7启动子下游,构建成原核表达质粒,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western blot印迹分析,证实gE基因主要抗原表位区在大肠杆菌中获得了表达,表达产物具有抗原性,分子量为38kD,位于包涵体中.包涵体经变性、复性处理,复性产物致敏乳胶,并对抗原致敏浓度、致敏时间、致敏温度进行优化,建立了gE乳胶凝集试验(gE-LAT).该方法不仅能显著区分gE基因缺失疫苗免疫猪血清和野毒感染猪血清,而且具有简便、快速等优点.检测临床360份猪血清,阳性率为57.78%(208/360),比国外阻断gE-ELISA的58.06%(209/360)略低,阳性符合率为94.86%(203/214),总符合率为96.94%(349/360),两种检测方法结果差异不显著(P＞0.05).     

四、轮状病毒的电镜检查

<正>电子显微镜检查法在腹泻病的研究中一直起着很重要的作用,人轮状病毒最早就是在电镜观察中发现的,后来根据它的形状命名为轮状病毒。其它与腹泻有关的病毒如星状病毒,萼状病毒等也都有其独特的形态学特征,电镜为我们识别区分这些病毒提供了有利的武器,特别对于那些难于进行组织培养的病毒。因此病毒的形态和大小等特征已成为分类学和实验室诊断的重要依据。     

用改进的ELISA法检测腺病毒抗原

用改进的ELISA法检测94份咽拭子标本中的腺病毒抗原,标本先接种人肾细胞,使病毒有一定程度的增殖,同时与传统的病毒分离作对比,结果表明,腺病毒分离阳性的18例,ELISA法检测全部阳性,76例分离阴性(盲传3代)者ELISA法也全都阴性,两者完全相符,ELISA法检测增殖24、48、72小时的细胞培养物腺病毒抗原的阳性率分别为16.7％,72.2％和83.3％,本法特异、可靠、判断客观、可用来检测腺病毒抗原。     

高压静电检漏法对口服轮状病毒活疫苗包装无损密封性检查

目的探索高压静电检漏法对口服轮状病毒活疫苗包装无损密封性检查的可行性。方法采用高压静电检漏法对口服轮状病毒活疫苗包装密封性进行检查,并观察此方法对疫苗有效成分的影响。结果口服轮状病毒活疫苗经18 000 V和14 000 V高压静电检测显示,导电电流值均极低;病毒滴度结果均在6.0~6.5 lg CCID_(50)/mL之间,热稳定性试验病毒滴度下降值在0.5~1.0 lg之间,均符合质量标准,且与对照组(A组和B组)检测结果差异无统计学意义(P0.05)。结论高压静电检漏法用于口服轮状病毒活疫苗包装无损密封性检查是可行的。     

人轮状病毒命名法

<正>人轮状病毒发现后不久,即已查明在病毒颗粒内衣壳层中具有所有轮状病毒共同的“群”特异性抗原。1978年比利时布鲁塞尔Zissis等和英国伯明翰Felwett等首次报导了轮状病毒的不同血清型。布鲁塞尔报告中中最初采用的是补体结合试验和免疫电镜法,后来美国比塞大Yokan和布鲁塞尔Zissis用ELISA法来鉴别。在英国伯明翰的报导中用免疫荧光灶中和试验法(NIFF)测出血清能中和细胞培养中人粪便轮状病毒的感染能力。     

PBP2a多克隆抗体制备及其乳胶凝集检测法的建立

目的制备兔抗青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)抗体,建立检测PBP2a的乳胶凝集法。方法以重组PBP2a转肽酶区蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测所制备的抗血清效价和特异性,用纯化的多抗建立乳胶凝集法。结果纯化的重组蛋白免疫家兔能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达1∶25 600,Western blot显示该抗体能有效识别原核表达及MRSA临床分离株中的PBP2a,建立了乳胶凝集法,敏感性及特异性良好。结论成功制备了抗PBP2a抗体血清,初步建立了检测PBP2a的乳胶凝集法,为有效制备高特异的单克隆抗体进而研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础。