小单孢菌属的一个新种

从云南省丽江地区的高寒山区采集的土样中分离到两株小单孢菌Y81—917和Y81一558。它们不产生气生菌丝体。基内菌丝体蓝色。产生蓝色可扩散色素。孢子单个着生,表面皱褶。细胞壁化学组分II型。它们与所有已知的小单孢菌都不同,认为是小单孢菌属中的一个新种,定名为玉龙小单孢菌(Micromonospora yulongensis n. sp.),菌株Y81-917为模式株。     

小单孢菌属的分类及应用研究

小单孢菌在自然界分布广泛,但由于分离、分类方法所限,绝大多数还没有被人们所认识。在小单孢菌的分类学研究中,最初主要依据的是形态特征、培养特征及生理生化特征等表观分类学指征,随着“多相分类”的广泛应用,分子分类在小单孢菌的分类学研究中起到了越来越重要的作用。小单孢菌是寻找新的生物活性物质的重要菌源,某些种能产生抗生素,如庆大霉素、利福霉素、新霉素等;某些种能降解天然橡胶和纤维素。近年来的研究表明,小单孢菌能产生具有独特化学结构的生物活性物质,对肿瘤细胞有靶向和识别作用,并能有效地杀死肿瘤细胞。     

小单孢菌属的分类及应用研究*

小单孢菌在自然界分布广泛,但由于分离、分类方法所限,绝大多数还没有被人们所认识。在小单孢菌的分类学研究中,最初主要依据的是形态特征、培养特征及生理生化特征等表观分类学指征,随着“多相分类”的广泛应用,分子分类在小单孢菌的分类学研究中起到了越来越重要的作用。小单孢菌是寻找新的生物活性物质的重要菌源,某些种能产生抗生素,如庆大霉素、利福霉素、新霉素等;某些种能降解天然橡胶和纤维素。近年来的研究表明,小单孢菌能产生具有独特化学结构的生物活性物质,对肿瘤细胞有靶向和识别作用,并能有效地杀死肿瘤细胞。     

小单孢菌科放线菌的研究进展

小单孢菌科（Micromonosporaceae）菌株是一类具有气生菌丝和基内菌丝分化的经典放线菌,于二十世纪中期被发现,目前包含29属246种的成员。这类菌株不仅广泛分布于普通的陆地生态系统中,在淡水生态系统、海洋生态系统以及一些被认为对生命极具挑战的极端环境中也常能探测到这些微生物的踪迹。小单孢菌产生的抗生素和其他生物活性物质被广泛应用于医疗和农业的多个领域,一直以来受到研究人员的广泛关注。本文就小单孢菌科放线菌的分类学特征、生态分布、基因组特征及其在医药和农业领域的应用情况进行了综述,以期为推进小单孢菌科放线菌资源的高质量发掘奠定基础。     

小单孢菌40027菌株噬菌体的分离及其生物学特性的研究

以福堤霉素A产生菌──小单孢菌40027菌株为指示菌,从土壤中分离得到三株噬菌体:ΦHAU7、ΦHAU9和ΦHAU11。三株噬菌体的寄主专一性较强,在测试的15株放线菌菌株中,三株噬菌体能感染小单孢菌40027菌株和A-M-01菌株,ΦHAU9和ΦHAU11还能感染蔷薇小单孢菌(Micromonospora purprea)。三株噬菌体都是由多面体的头部和尾部组成;形成噬菌斑时培养基中适宜的Ca2 、Mg2 浓度分别为32mM和30mM;ΦHAU7在储存液中适宜的pH范围为6~12,而其它两株噬菌体的适宜的pH范围为6~10;在储存过程中三株噬菌体适宜的温度范围为28~37℃,经60℃保温30min后,除ΦHAU7仍有53%活力之外,其它两株噬菌体全部失活。限制性内切酶酶切结果表明:三株噬菌体基因组DNA均为双链DNA;基因组大小分别约为60kb、58kb和55kb。高压脉冲电泳结果揭示:三株噬菌体基因组DNA均具有粘性末端。     

小单孢菌细胞壁中3－OHDAP的快速分析

本文介绍了用微结晶纤维素簿板层析对小单孢菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）细胞壁中二氨基庚二酸（ＤＡＰ）异构体及其３－羟基衍生物（３－ＯＨＤＡＰ）进行快速分析的方法。在甲醇：水：冰乙酸：吡啶（１０：５：０．２５：１）的溶剂系统中测得Ｒ_{ＬＬ－ＤＡＰ}：ｍｅｓｏ－ＤＡＰ为０．８８,ＤＤ－ＤＡＰ为０．７８,３－ＯＨＤＡＰ为０．７２。     

小单孢菌及其在海洋药物开发中的前景

小单孢菌是除链霉菌外,生产抗生素的另一大家族。从分类地位、生态分布、分离方法以及产生物活性物质的状况等方面,介绍了小单孢菌研究的历史和现状。展望了小单孢菌在海洋药物开发中的前景。     

小单孢菌细胞壁中3—OH DAP的快速分析

本文介绍了用微结晶纤维素薄板层析对小单孢菌细胞壁中二氨基庚二酸（ＤＡＰ）异构体及其３－羟基衍生物（３－ＯＨ ＤＡＰ）进行快速分析的方法。在甲醇：水：冰乙酸：吡啶（１０：５：０．２５：１）的溶剂系统中测得ＲＬＬ－ＤＡＰ：ｍｅｓｏ－ＤＡＰ为０．８８,ＤＤ－ＤＡＰ为０．７８,３－ＯＨ ＤＡＰ为０．７２。     

寡核苷酸探针制备的优化

目的:探讨寡核苷酸微阵列制备中适合使用的探针浓度、探针缓冲液pH值、离子强度、优化杂交条件。方法:选取人白细胞抗原DQA1位点,针对多态性集中的外显子2设计一对保守引物及16条特异性分型探针;分别用ddH2O和0.1、0.2mol/L碳酸盐缓冲液(pH=7)稀释探针至100μmol/L;选取合适的缓冲液浓度后,调碳酸盐缓冲液为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0等6种pH值,选取最优pH值及离子强度,分别溶解探针至20、50、100、200μmol/L,比较上述不同条件的杂交结果。结果:用0.1mol/L、pH9的碳酸盐缓冲液溶解探针杂交效果最佳;探针浓度为20μmol/L时信号弱,其他浓度下无显著差别。结论:通过探针制备的优化可以提高杂交效率,探针浓度与杂交信号强度无明显正相关。     

荧光素标记的庚型肝炎病毒基因探针的制备及应用

参考国内外已完成测序的庚型肝炎病毒（ＧＢＶＣ／ＨＧＶ）基因序列,选取毒株间系列较保守的基因片段,并合成与之互补的核苷酸序列（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ）,用末端转移酶将荧光素Ｎ６ｄｄＡＴＰ标记该片段,制成庚肝病毒基因探针。在严格控制温度的条件下,与固定于硝酸纤维膜（ＮＣ膜）上血清斑点杂交,洗膜后与抗荧光素碱性磷酸酶（ＡＰ）结合,加底物后化学发光自显影判断结果。该方法检测与套式逆转录聚合酶链反应（ＮｅｓｔｅｄＲＴＰＣＲ）检测结果的阳性符合率为８８．２％,阴性符合率为１００％;并且与其他相关病毒基因无交叉反应,具有较好的特异性与灵敏性。其检测结果比ＥＩＡ法检测庚肝病毒抗体更具临床意义。     

Specific Detection of Legionella pneumophila: Construction of a New 16S rRNA-Targeted Oligonucleotide Probe

Based on comparative sequence analysis, we have designed an oligonucleotide probe complementary to a region of 16S rRNA of Legionella pneumophila which allows the differentiation of L. pneumophila from other Legionella species without cultivation. The specificity of the new probe, LEGPNE1, was tested by in situ hybridization to a total of four serogroups of six strains of L. pneumophila, five different Legionella spp. and three nonlegionella species as reference strains. Furthermore, L. pneumophila cells could be easily distinguished from Legionella micdadei and Pseudomonas aeruginosa cells by using in situ hybridization with probes LEGPNE1, LEG705, and EUB338 after infection of the protozoan Acanthamoeba castellanii.     

Fluorescence in Situ Hybridization (FISH): DNA Probe Production and Hybridization Criteria

We describe methods for the production of fluorescence in situ hybridization (FISH) probes and the utilization of these probes for the detection of complementary DNA sequences with accuracy and sensitivity for application in both basic research and clinical diagnosis. Due to the frequent use of FISH in many laboratories, it is important to apply the most convenient and reproducible approach. This review describes some of the most recent techniques, and includes versatile, effective and simple methods of probe production and fluorescence in situ hybridization. We also describe methods for the production of region-specific and chromosome-specific DNA probes and hybridization techniques for the visualization of these probes.     

应用DIG标记探针杂交检测IBDV

本试验用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ,ＤＩＧ）标记的探针建立了核酸杂交检测传染性法氏囊病病毒（ＩＢ－ＤＶ）的方法,并在敏感性方面同琼脂扩散试验进行了比较。探针来源于ＩＢＤＶＳＴＣ－ｌｌ９和ＳＴＣ－２４３ｃＤＮＡ。杂交方法的敏感性试验表明,核酸杂交可以检测到０．１ｐｇ的ＩＢＤＶＲＮＡ;与多个毒株核酸的杂交则显示出标记的探针可以作为通用试剂用于ＩＢＤＶ早期感染的诊断;而同琼脂扩散试验的比较则说明,杂交方法比常规的免疫沉淀反应敏感１０４倍以上。除此之外,由于杂交方法特异以及非放射性探针操作方便,因而具有很大的应用前景。     

人结核分枝杆菌特异性核酸探针制备及结核病PCR检测技术的初步临床应用

采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884～865和568～588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段．将其克隆进pUCl9载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记,分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交,结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PcR检测拄术对74份结核病痰液标本进行检测,并与临床细菌快速培养结果相比较,发现48份临床阳性均为PcR阳性,在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交,显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠,其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法,可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。     

核酸探针与酶免疫反应板定向结合的方法

为了制备一种可供寡核苷酸探针定向结合的酶免疫反应板, 利用部分水解的尼龙包被酶免疫反应板,通过尼龙所含的氨基基团与寡核苷酸探针所含的5′磷酸基团,在水溶性碳二亚胺的催化下,与酶免疫反应板发生5′端特异性定向共价结合, 并对肺炎支原体的PCR扩增产物进行了重复检测,结果重复性好,方法稳定.利用该方法制备的酶免疫反应板可用于核酸探针的临床检测.     

Enzymatic and Hybridization Properties of Oligonucleotide Analogs Containing Novel Phosphoramidate Internucleotide Linkages

In line with the paradigm, that antisense oligonucleotides should contain minimal structural modifications, in order to minimize the risk of toxicity and antigenicity, we describe here the preparation and the properties of oligonucleotides modified to contain, in addition to phosphodiester bonds, a small number of phosphoramidate internucleotide linkages substituted with aminoethoxyethyl groups in order to convey protection against exo‐ and endonucleases. Prolonged stability was, in fact, found in model experiments with respective enzymes, as well as in studies done in human blood serum. Regardless of number and position of phosphoramidate linkages, the modified oligonucleotides showed only a slight decrease of T_m in hybridization studies with complementary oligonucleotides.