抗MRSA-PBP2a鸡卵黄抗体的制备及乳胶凝集检测法的建立

制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a( MRSA- PBP2a)抗原的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立检测MRSA的乳胶凝集方法.采用体外诱导的方法制备PBP2a蛋白,胸部肌肉多点注射方式免疫6只海蓝蛋鸡,水稀释法提取IgY,BCA法测定蛋白含量,Western blotting进行特异性分析,用提取的IgY抗体致敏聚苯乙烯乳胶,建立检测PBP2a的乳胶凝集方法.成功诱导并制备获得纯化的PBP2a蛋白,首次免疫后1月每枚鸡蛋提纯后可获得约48 mg IgY抗体,Western blotting结果显示IgY抗体能有效识别纯化的PBP2a蛋白;成功建立检测PBP2a的乳胶凝集法,敏感性达1 mg/L.抗MRSA- PBP2a鸡卵黄抗体具有较高的敏感性和特异性,基于其建立的乳胶凝集检测方法具有较好的灵敏性.     

PBP2a多克隆抗体制备及其乳胶凝集检测法的建立

目的制备兔抗青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)抗体,建立检测PBP2a的乳胶凝集法。方法以重组PBP2a转肽酶区蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测所制备的抗血清效价和特异性,用纯化的多抗建立乳胶凝集法。结果纯化的重组蛋白免疫家兔能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达1∶25 600,Western blot显示该抗体能有效识别原核表达及MRSA临床分离株中的PBP2a,建立了乳胶凝集法,敏感性及特异性良好。结论成功制备了抗PBP2a抗体血清,初步建立了检测PBP2a的乳胶凝集法,为有效制备高特异的单克隆抗体进而研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础。     

轮状病毒乳胶试剂盒的研制

用轮状病毒Ａ群单克隆抗体研制出轮状病毒抗原乳胶凝集试剂盒,并与轮状病毒ＥＬＩＳＡ试剂盒进行了比较。试验结果表明,轮状病毒抗原乳胶凝集试剂盒具有较高的特异性（９８７％）和敏感性（８６８％）,与ＥＬＩＳＡ试剂盒比较无显著性差异（Ｐ＞０１）,且操作简便快速、成本低廉     

日本脑炎病毒E基因与流感病毒HA基因的串联表达及应用

根据GenBank公布的日本脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus, JEV) SA14 14 2株的核酸序列和人流感病毒的血凝素基因(ha)序列, 设计一对特异性引物, 用 PCR方法扩增编码 JEV囊膜蛋白主要抗原域基因, 其中含ha基因主要核苷酸序列。将PCR产物定向克隆入原核表达载体 pET 32a( ), 构建原核表达载体 pET EHA。阳性质粒转化BL21(DE3)宿主菌, 经 IPTG诱导获得表达, 重组蛋白以包涵体的形式存在。Western blot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性。利用纯化的表达产物与流感病毒血凝素单抗及乳胶建立了诊断日本脑炎病毒抗体水平的乳胶凝集试验。结果表明乳胶凝集方法具有简便快速、敏感性高、特异性强、价格低廉、可现场检测等优点, 是一种适合基层兽医单位用于日本脑炎病毒抗体水平检测的新方法。     

使用免疫酶标法、免疫荧光法和免疫酶标电镜法观察甲胎蛋白在人胚组织中的分布

甲胎蛋白是一种血清蛋白,Bergstrand等(1956)首次在人胚中发现。在正常情况下,它仅是胚胎或新生儿时期的产物。6周人胚肝细胞开始有此蛋白的合成。合成能力增长迅速,在发育到第12—13周时,胎儿血清中甲胎蛋白含量达到高峰。随后合成能力下降,当胎儿接近出生阶段,合成过程即将逐渐停止。成人血清中此种蛋白的含量极少。根据动物实验和临床研究证实,甲胎蛋白的重新出现和持续存在,意味着存在原发性肝癌或胚胎性生殖腺肿瘤(Sell等,1976; Abelev等,1967;1971)。     

日本脑炎病毒E基因与流感病毒HA基因的串联表达及应用

根据GenBank公布的日本脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)SA14-14-2株的核酸序列和人流感病毒的血凝素基因(ha)序列,设计一对特异性引物,用PCR方法扩增编码JEV囊膜蛋白主要抗原域基因,其中含ha基因主要核苷酸序列.将PCR产物定向克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET-EHA.阳性质粒转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导获得表达,重组蛋白以包涵体的形式存在.Western-blot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性.利用纯化的表达产物与流感病毒血凝素单抗及乳胶建立了诊断日本脑炎病毒抗体水平的乳胶凝集试验.结果表明乳胶凝集方法具有简便快速、敏感性高、特异性强、价格低廉、可现场检测等优点,是一种适合基层兽医单位用于日本脑炎病毒抗体水平检测的新方法.     

用乳胶凝集试验测大便中的轮状病毒

<正>病人大便中的轮状病毒可以用高度敏感和特异的方法——乳胶凝集法(LA)检测。 材料和方法 患者 从急性胃肠炎或疱疹性咽峽炎患者收集大便标本。急性胃肠炎患者年令从3个月至3岁;后者从1岁至5岁。在发病后1～5天收集大便标本。     

五步蛇毒毒中蛋白凝集素的发现及其凝集特性的研究

发现尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)粗毒对动物细胞有凝集作用。顺序用DEAE—Sephadlex A-50,CM Sephadex C25柱层析,从尖吻蝮蛇毒中分离纯化出一种毒蛋白凝集素。经分子量,等电点和出血活性等实验测定确定该凝集素就是徐询等人早期分离、纯化的出血毒素Ⅲ(AaHⅢ)。这种凝集素对许多动物细胞都有凝集作用,例如脾淋巴细胞、HeLa细胞、人肾成纤维细胞和草鱼(Ctenoph argngodon idellus)。但对组细胞和血小板无作用。和植物凝集素PHA相比AaHⅢ产生细胞的凝集块体积要大些。对淋巴细胞起凝集作用的最低浓度为2.5ug/ml。能使HeLa细胞和淋巴细胞凝集在一起。如预先加肝素和溶菌酶可以抑制对淋巴细胞的凝集怍用。用溶菌酶(2mg/ml)和AaHⅢ(1mg/ml)在37℃′下保温2小时AaHⅢ的出血活性仍然存在。     

贮粮害虫遗传防治的进展

<正> 近年来,贮粮害虫遗传防治方面有不少工作,主要可归纳为下列几个方面。 1.不育性的利用 一般是用伽马等射线或化学不育剂使雄虫不育,大量释放此种不育雄虫的方法现已广泛使用。S.Pradham(1971)提倡用伽马照射防治贮粮甲虫,但因处理引起甲虫竞争力的显著减退,没有获得良好效果。但Ducoff(1971)则认为可由照射剂量分级产生健康而不育的杂拟谷盗。     

二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠肝癌过程甲胎蛋白变化的定性和定量观察

在我国,甲胎蛋白已广泛应用于原发性肝细胞癌的诊断(上海市肿瘤防治研究协作组,1973)。为了建立一株甲胎蛋白阳性的肝癌大鼠模型,我们于1973—1974年用DENA诱发大鼠肝癌,并对诱癌过程的甲胎蛋白变化作了定性和定量观察,本文将主要结果作一简报。至于所诱发的甲脂蛋白阳性肝癌已在我所建成一株移植型大鼠肝癌(强家模等,1978)。     

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的快速检测方法

采用反向被动乳胶凝集法 (RPLA)和mini VIDAS (ELFA)两种方法对 42份金黄色葡萄球菌阳性样品进行了肠毒素检测。结果RPLA法的金葡菌肠毒素检出率为 61.9% (P<0.05 )要高于ELFA法的检出率 50.0% (P <0.05 ) ,但检测时间长 ( 20h)。在实验中我们还发现 ,血浆凝固酶阴性的葡萄球菌也可产生肠毒素 ,其原因有待进一步的研究。     

鸡胚凝集因子在发育过程中的活性变化

人们认为,细胞表面含碳水化合物的蛋白质可能在细胞相互作用中起着重要作用。从脊椎动物中分离出凝集因子以后(Teichberg et al., 1975;Nowak et al., 1977),许多研究表明这类凝集因子是与膜相结合的。这些发现支持了人们原先的设想。Beyer等人(1979;1980)从成体鸡肠中分离出一种结合乳糖的凝集因子,这种凝集因子似乎存在于粘液分泌小粒之中。1980年Pitts和Yang又从鸡胚肾脏中分离出一种结合乳糖的凝集因子,它可能是一种外周蛋白质。尽管他们的实验证明了成体鸡肾和肠这两种器官,同视网膜、肝脏、肌肉、心脏、脑和脊髓一样,存在着结合乳糖的凝集因子。但凝集因子在这两     

甲胎蛋白对HeLa细胞增殖的促进作用

为探讨甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞增殖的促进作用。用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,通过MTT计数、[3 H] TdR参入法、流式细胞仪等研究细胞增殖 ,并用放射免疫法测定细胞内cAMP、共聚焦显微镜扫描细胞内Ca2 浓度等观察细胞内第二信使物质的改变及测定3 2 P转移反映细胞内蛋白激酶A(PKA)活性 ;用Western印迹分析法分析突变型 p5 3、p2 1ras蛋白表达。结果显示AFP(浓度大于 10mg/L)对HeLa细胞增殖有明显的促进作用。在AFP(2 0mg/L)作用下 ,HeLa细胞cAMP浓度升高 30 0 % ;Ca2 浓度最大升高 15 4 .9%、PKA活性最大升高 10 0 %。突变型 p5 3和 p2 1ras分别增高 81.1% (2 4h)和 96 .2 % (2 4h)。抗甲胎蛋白单克隆抗体能有效地阻断AFP促HeLa细胞增殖作用。以上表明 ,(1)AFP具促HeLa细胞增殖的生理功能 ;(2 )AFP促进HeLa细胞增殖的作用是通过影响细胞内cAMP和Ca2 浓度以及PKA活性进而促进一些原癌基因的表达来实现的。     

马拉维卡隆加区家庭中引入13价肺炎球菌结合疫苗前后的肺炎球菌携带情况

2011年11月在马拉维引进了13价肺炎球菌结合疫苗(PCV13),并将其作为常规免疫的一部分提供给6周、10周和14周大的婴儿。PCV13有望减少疫苗型(VT)鼻咽带菌,从而减少传播并产生群体保护。作者采用横断面分析和纵向分析相结合的方法,比较了马拉维卡隆加农村地区2009—2011年的疫苗接种前和2014年的疫苗接种后的肺炎球菌携带情况。鼻咽拭子标本是从一组母婴和16岁以下的家庭成员中收集的。采用乳胶凝集法对2009—2011年的肺炎球菌进行血清学分型,并通过荚膜膨胀反应进行血清学分型。2014年,两个步骤都使用了乳胶凝集。使用接种疫苗前后的患病率数据,采用对数二项回归法计算携带率,并根据年龄、季节性和家庭组成进行调整。2014年参与研究的婴儿接受PCV13作为常规免疫的一部分。     

利用4种血清标志物筛查唐氏综合征的新方法

AmericanJournalofObstetricsandGynecology 2 0 0 2年 187卷 1期 197～ 2 0 1页报道 :日本国北海道大学医学院妇产科学系的医学博士东正树等 ,最近推出了利用兵豆 (Lensculinaris)凝集素反应性甲胎蛋白(AFP L3)比例 ,结合传统的血清标志物 ,来检测胎儿的唐氏综合征 (先天愚型 ,先天痴呆 )的新方法。东正树等采集了 5 30例未患病孕妇和 31例妊娠 14～ 2 0周怀了唐氏综合征胎儿的孕妇的血清。用记分法评价了兵豆凝集素反应性甲胎蛋白、甲胎蛋白、人绒毛膜促性腺激素和未结合雌三醇 4种血清标志物的不同组配的检测效果 ,而不考虑与孕妇年…     

四联活菌苗气雾免疫研究——Ⅲ.炭疽、布氏、鼠疫、土拉活菌苗联合气雾免疫家兔血清抗体测定及炭疽菌苗的保护力试验

一、炭疽活菌苗单价气雾或与布氏、鼠疫、土拉联合气雾一次吸入免疫均能产生较好的免疫力,每只动物剂量3亿,攻击80个绝对致死量可保护70-100%。二、应用炭疽乳胶抗原测定免疫血清抗体水平,可见动物保护在70-100%时,其血清几何平均滴度为1：12-1：18之间。在四联气雾免疫中,不论是血清抗体的产生还是对强毒菌的攻击,都与单价结果相近,看不出有干扰现象。三、应用炭疽、鼠疫乳胶抗原,布氏、土拉菌体染色抗原测定血清抗体,结果表明上述四种菌苗免疫后六天半数以上动物产生抗体,十二天内可达100%阳转。四、用炭疽、鼠疫乳胶抗原在免疫前测定动物自然抗体,全部为阴性,免疫后血清滴度达到1：5者,玻片全血凝集即为阳性。玻政策全血凝集具有特民、敏感、简易、快速等特点,可作为炭疽、鼠疫活菌苗免疫后效果观察的辅助方法。     

乳酸链球菌凝集淀粉粒机理的进一步研究

本文进一步报道了在我国传统的“酸浆法”生产淀粉的过程中,乳酸链球菌(Streptococcuslactis)菌体上的何种物质使淀粉粒凝集。实验表明,能使蛋白质变性的各种物理因素及化学因素如加热、紫外线照射、超声波以及用苯酚、三氯乙酸、甲醛、来苏尔等,都能使乳酸链球菌凝集淀粉粒的作用完全丧失;用糜蛋白酶处理菌体后,菌体凝集淀粉粒的作用也完全丧失,而用被Kunitz抑制剂抑制了的糜蛋白酶或用纤维素酶、果胶酶、脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、溶菌酶处理菌体,则仍然保留其凝集淀粉的能力。上述实验暗示,对淀粉粒的凝集超作用的是菌体表面上的某种蛋白质类物质,很可能是某种凝集素(lectins)。本文述报道了菌体、淀粉粒和阳离子三者之间量的关系,它们之间最的正相关表明,在凝集作用中,三者可能是以某种方式结合在一起的。结合的性质还待进一步研究。     

共振瑞利散射测定痕量甲胎蛋白含量研究

用共振瑞利散射光谱研究磷钼杂多酸与甲胎蛋白的相互作用的过程中,发现其结合会引起共振瑞利散射(RRS),最大RRS峰均位于480 nm。在一定浓度范围内,AFP浓度与散射强度成正比,这样就产生了一种新的利用共振光散射强度定量测定甲胎蛋白的方法。本文对该反应体系的适宜反应条件、主要影响因素、散射强度与AFP浓度的关系、方法的灵敏度等,进行了比较研究。发现不同的杂多酸对于甲胎蛋白的检出限(3σ)在5.2~78μg.L-1之间,其中以磷锑钼酸体系灵敏度最高,对于甲胎蛋白(AFP)的检出限为2.5μg.L-1。该方法具有操作简便、灵敏度高、线性范围宽等优点。考察了共存物质的干扰影响,获得了满意的结果。     

效果明显的渗透装置

剪取一块羊皮纸(或半透明纸)作为半透膜,蒙在长颈漏斗上用橡皮筋扎紧。漏斗颈上套上一段三厘米左右长的乳胶管。把漏斗口朝下放在平整的桌面上,用吸管吸取加有红色墨水的浓蔗糖溶液,从乳胶管口注满漏斗。选一支10.5毫升移液管,插入乳胶管并与漏斗颈相接。用色彩鲜艳的纸条做一宽半厘米:左右的纸环,套在移液管上,纸环可以沿移液管上下移动,作为标记环。装好后,把漏斗移入盛有清水的烧杯中,移置铁架台上加以固定(如图)。     

一株乳酸菌细胞壁上的凝集淀粉因子I．电子显微镜观察

由粉丝厂的酸浆中分离到一株有强大的凝集淀粉能力的纯培养菌,初步定名为乳酸链球菌(Streptococeus lactis)。用扫描电镜直接观察证明凝集淀粉因子位于细胞壁的外侧。同样可以用离体细胞壁观寮到淀粉凝集活性。用胰凝乳蛋白酶处理细胞可使凝集淀粉能力丧失,证明这种凝集因子是位于壁上的一种功能蛋白。用溶菌酶处理菌体,用90,000倍相对离心力所得的上清液也有凝集淀粉活性,从而证明这种蛋白能溶于水中,它很可能是一种外源凝集素类物质。