福建省2015～2018年风疹病毒分子流行病学特征

风疹病毒(Rubella virus,RV)的分子流行病学监测是控制和消除风疹的重要途径。为了解福建省2015～2018年流行RV的变异特征,并探讨其流行规律,本研究收集2015～2018年福建省风疹病例咽拭子标本并开展病毒分离,采用RT-PCR方法扩增RV的E1基因739个核苷酸片段并进行序列测定,随后与WHO的13个基因型的32条RV参考株序列比对进行基因型别鉴定,并与GenBank数据库中2010年以来国内外流行1E和2B基因型RV代表株进行比对分析。最终从2015～2018年279例风疹病例中共分离获得113株RV毒株,基因型别鉴定结果显示,25株为2B基因型,88株为1E基因型,后者均来自2018年。2B基因型RV存在4个进化分支(Cluster 1～4),福建省2B基因型RV毒株均属于Cluster1分支,与国内多数省份流行情况一致。1E基因型RV存在6个进化分支(Lineage 0～5),福建省1E基因型RV毒株属于Lineage 5b分支,不同于我国2018年之前流行的1E基因型RV毒株(Lineage1),两者之间的核苷酸和氨基酸遗传距离分别是0.035～0.050和...     

2003～2007年中国风疹病毒基因特征分析

本研究用Vero细胞或Vero/SLAM细胞从我国10个省(直辖市、自治区,下同)2003～2007年风疹暴发和散发病例的咽拭子标本中分离到57株风疹病毒,用RT-PCR方法扩增了57株风疹病毒E1基因1 107个核苷酸的片段,并对该PCR产物进行序列测定和分析.结果提示,在基于WHO基因定型靶序列739个核苷酸片段构建的基因亲缘关系树上,其中55株风疹病毒株属于1E基因型,相对于其他国家的1E基因型,形成一个独立分支;另外2株风疹病毒属于2B基因型.57株风疹病毒大部分核苷酸的突变为无义突变,氨基酸序列高度保守,除了2株风疹病毒在E1蛋白血凝抑制和中和位点区域第212位氨基酸由Thr变为Ser,其他病毒株均无重要抗原位点的改变;所有我国已分离到的1E基因型风疹病毒在E1蛋白第338位氨基酸共享突变位点(Leu338→Phe338),而其他基因型以及其他国家的1E基因型风疹病毒在该位点均未发生突变,提示该氨基酸(Phe338)可能是我国1E基因型风疹病毒所特有.2003～2007年在我国10个省均分离到1E基因型,而2B基因型只在2006年从四川省的越南输入病例中分离到,提示1E为绝对优势基因型,2B基因型为输入基因型.与1979～1984年和1999～2002年我国流行的风疹基因型不同,发生了基因型的更替,近年我国风疹的流行是由1E基因型为主的风疹野病毒的多个传播链引起.     

辽宁省2007～2012年流行风疹病毒基因特征分析

为了解辽宁省2007~2012年流行性风疹病毒基因特征,本研究用Vero/Slam细胞从辽宁省2007~2012年风疹暴发和散发患者的咽拭子标本中分离到145株风疹病毒(Rubella,RV),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增RV分离株E1基因的945个核苷酸片段,对扩增产物进行序列测定和分析。将辽宁省145株RV与世界卫生组织(WHO)RV 13个基因型的32株参考株基于739个核苷酸片段的基因定型序列构建基因亲缘性关系树。结果提示,辽宁省2007~2012年145株RV分离株均属于1E基因型,核苷酸和氨基酸同源性为97.2%~100.0%和97.6%~100.0%。与2株WHO 1E基因型参考株(Rvi/Dezhou.CHN/02,RVi/MYS/01)序列相比,核苷酸和氨基酸同源性分别为96.6%~99.2%和98.2%~100.0%.除RVi/Shenyang.Liaoning.CHN/13.11/13株病毒在E1基因的第246位发生了突变(Val246-Ala246);RVi/Shenyang.Liaoning.CHN/13.11/4和RVi/Liaoyang.Liaoning.CHN/26.11/2株病毒在E1基因的第262发生相同突变(Asp262-Asn262)外,其他毒株在N-型糖基化位、血凝抑制位点和中和位点等重要抗原位点均未发生变化,抗原性稳定。辽宁省所有1E基因型风疹病毒在E1蛋白的第338位氨基酸发生相同突变(Leu338-Phe338)。本研究证实1E基因型为辽宁省RV的优势基因型,近6年来辽宁省风疹疫情是由1E基因型RV的多个传播链引起。     

2001～2011年上海市风疹病毒分子流行病学研究

本研究对2001～2011年本实验室保存的血清标本检测结果为麻疹IgM阴性,风疹IgM阳性病例相对应的咽拭子标本进行风疹病毒（Rubella virus,RV）分离,用RT-PCR方法对细胞培养产物鉴定后扩增病毒E1基因,扩增产物用于核苷酸序列测定,并进行分子流行病学分析。结果表明,60份咽拭子标本共分离到31株RV,获得27株RV的739nt（nt8 731～nt9 469）核苷酸序列,系统同源性分析表明,27株RV分离株分别属于两个不同的基因型,除分离自2011年的11009株、11052株和11106株为2B基因型外,其他分离株均为1E基因型。27株RV分离株大部分的核苷酸突变为无义突变,氨基酸序列高度保守。24株1E基因型分离株中大部分毒株氨基酸序列完全一致,自2001年以来可能有来自同一传播链的RV在持续传播。本研究首次监测到2B基因型RV2011年开始在上海流行,经GenBank核苷酸序列比对发现,其与越南、日本、阿根廷等国家近几年的RV分离株核苷酸序列同源性达99%。由于以前对风疹的监测较少,尚不能证明其来源。     

福建省2000～2003年戊型肝炎病毒分离株的分子流行病学研究

为研究福建省2000～2003年急性散发性戊型肝炎病毒（HEV）分离株的分子流行病学特征,采用RT—PCR方法扩增HEV ORF2的基因片段,经纯化、克隆、测序后,对其序列用Neighbor-Joining法和Bootstrap法进行基因进化分析。从158例急性散发性戊型肝炎的血清标本中扩增出72份HEV RNA,经基因进化树分析,这72株HEV均属于HEV基因Ⅳ型,且被明显地分为A、B、C、D共4个组群。A群的同源性最高,群内同源性为93．3％～100％;D群的同源性最低,群内同源性在86．6％～100％之间。A群和B群流行株所占比例没有差异;C群流行株所占比例由2002年的7．1％逐渐增加到2003年的26．3％（x^2=10．553,P=0．014）;D群则由85．7％逐渐减少到44．7％（x^2=8．136,P=0．043）。引起福建地区急性散发性戊型肝炎流行的HEV均属于HEV基因Ⅳ型,基因型内存在不同的组群,其中D群的变异较大。     

风疹病毒核酸的研究现状

对风疹病毒（ＲＶ）ＲＮＡ进行广泛深入的研究是基因工程亚单位疫苗的前提。本文就近几年来国外对ＲＶＲＮＡ的研究进展进行了较详细的阐述,包括基因结构和功能、体外表达等,并将ＲＶＲＮＡ与同科的α病毒ＲＮＡ作了同源性比较分析。     

山东省蚊虫乙脑病毒携带状况及分子流行病学研究

为探索中国山东省蚊虫中流行性乙型脑炎（简称乙脑）病毒的携带状况,研究其分子流行病学特征,本研究于2017年和2019年夏季,在济宁微山县、临沂莒南县、东营垦利区、淄博淄川区、烟台龙口市、济南历城区（2017年）和济阳县（2019年）等6个监测点采集蚊虫,分拣分装研磨后,提取上清RNA,使用荧光定量PCR实验检测乙脑病毒核酸,采用最大似然法估算蚊虫中乙脑病毒的携带率,并对阳性标本进行乙脑病毒PrM基因的扩增测序和系统发生学分析。共采集蚊虫标本36 015只,其中三带喙库蚊26 969只,为优势蚊种。所有蚊虫分为605份标本进行检测,共检出乙脑病毒核酸阳性标本100份,分别来自三带喙库蚊（95）、骚扰阿蚊（2）、中华按蚊（2）和淡色库蚊（1）。2017年和2019年山东省监测点蚊虫JEV总体感染率分别为4.03‰和1.98‰,不同年份不同监测点的蚊虫中乙脑病毒感染率有较大差异。基于PrM基因的系统发生学分析显示本研究的阳性标本均为基因1型乙脑病毒。本研究证明了山东省蚊虫中存在持续性的基因1型乙脑病毒循环,其感染率随时间和地区的不同而呈现动态变化,加强人群中乙脑疫苗的接种是保持全省乙脑发病处...     

风疹病毒诱导细胞凋亡分子机制的研究进展

风疹病毒是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员,能够诱导细胞发生细胞凋亡。Ras-Raf-MEK-ERK和PI3KAkt信号通路是病毒增殖与细胞生存的必要通路,在细胞凋亡过程中起着必不可少的作用。p53蛋白和TAp63蛋白能够进入细胞核与DNA特异结合,抑制Bcl-2的表达,促进Bax的表达,导致线粒体内外膜间的物质(细胞色素C等)释放,进而引起caspase级联反应,最终导致细胞凋亡。本文从风疹病毒感染的细胞系,病毒感染导致的细胞病理改变和病毒诱导的细胞凋亡信号通路及其相关因子等方面对风疹病毒诱导细胞凋亡的分子机制进行了综述。     

分子生物学技术在风疹病毒包膜糖蛋白研究中的应用

风疹病毒(RV)是最重要的人类致畸病毒。对RV包膜糖蛋白的研究,有助于构建与表达RVRNA病毒样颗粒,用于核酸检测质控品的研究与开发;并且有助于理解RV产生免疫的机理,以研制基因工程疫苗、亚单位疫苗、多肽疫苗等新型疫苗。本文对分子生物学技术在RV包膜糖蛋白研究中的应用进展进行了综述,包括风疹病毒RNA病毒样颗粒的构建与表达、建立风疹病毒免疫学诊断方法以及制备基因工程疫苗和亚单位疫苗的研究等。     

重组风疹病毒抗原的分离纯化

为了制备临床诊断用的风疹病毒抗原,建立了亲合色谱分离纯化的方法.风疹抗原以可溶性形式在大肠杆菌工程菌中获得高效表达,用GST亲合色谱在不变性的条件下直接从细菌裂解液中分离纯化.纯化的目的蛋白电泳为单一条带,EUISA试验表明,重组抗原与风疹病毒IgM阳性血清能特异反应,而与IgM阴性血清不反应,表明重组蛋白具有良好的抗原性,能满足临床检验要求.     

山东省十地市人轮状病毒分子流行病学研究

用核酸凝胶电泳法对1985—1986年山东省十地市的318份婴幼儿急性腹泻粪便标本中测出的170份HRV阳性标本作了RNA电泳型分析,发现3个地区为HRVI亚群流行,3个地区为HRVⅡ亚群流行,4个地区为两亚群共同流行,共检出差异电泳型34个,其中14个属长RNA电泳型,20个属短RNA电泳型。在一个地区虽有多个差异电泳型毒株流行,但仅有其中的1—2个占流行优势。在两亚群毒株共同流行区,检出的差异电泳型特别多。本文并对HRV RNA电泳型多形性的原因及意义进行了讨论。     

2020年我国风疹流行病学和病毒基因特征分析

为了解2020年我国风疹流行病学特征以及流行风疹病毒(Rubella virus,RV)的基因特征,本研究收集整理全国麻疹/风疹监测信息报告管理系统中2020年中国风疹发病数据,分析其流行病学特征;同时,依托全国麻疹/风疹实验室网络获得RV分离株,经鉴定后扩增并测定阳性RV分离株的靶基因序列——E1基因的739个核苷酸片段,并与WHO推荐的基因型参考株序列以及已发表的基因亚型参考株序列进行比对确定基因型和亚型,同时与我国2000-2019年间流行的RV进行亲缘性关系分析.结果显示,2020年中国风疹报告发病率为0.18/10万,继2018-2019年风疹的复发和暴发后出现大幅下降,发病人群年龄组主要为10-29岁无免疫史的青少年和成人;2020年我国RV流行的主要基因亚型为1E-L2与2B-L2c,为2018-2019年间检测到的境外输入性病毒.因此,在实施有效的风疹疫苗免疫后,我国本土流行的病毒逐渐被阻断,然而由于我国风疹易感人群的累积和输入性病毒的持续传播导致了我国近些年风疹疫情的回升.鉴于此,我国应根据现状制定更加切实有效的风疹疫苗免疫策略,消除青少年和成年人中的易感人群;同时应进一步加强风疹流行病学和病毒学监测,从而科学地阻断输入病毒的传播.     

宁夏2004—2007年麻疹监测分析

为了客观评价宁夏麻疹监测系统现状,探讨控制和消除麻疹的策略。对宁夏2004—2007年麻疹流行病学和实验室监测工作进行分析。结果显示,宁夏麻疹监测系统的灵敏性较高,疑似麻疹病例标本采集率和血清学诊断率等主要监测指标已达较高水平。同时,对监测到的36株麻疹野病毒基因型进行了探讨,全部为H1基因型H1a亚型,未发现其它基因亚型。因此,宁夏亟需加速控制麻疹,应继续做好麻疹监测和麻疹疫苗免疫接种。     

Molecular Epidemiology of Japanese Encephalitis Virus in Okinawa

In order to elucidate the molecular characteristics of Japanese encephalitis (JE) virus in Okinawa, 23 strains of JE virus isolated in a 25-year span were sequenced for the 240 nucleotides of the C-preM junction region and 111 nucleotides of the E gene region and compared with those of reference strains isolated in mainland Japan. The results of phylogenic analysis showed that although all the Okinawan isolates showed more than 96% homology in the nucleotide sequence in each region, they were chronologically divided into two groups: the old group (nine strains) and a new group (14 strains). On the other hand, in a comparison with reference strains in mainland Japan, the Okinawan isolates showed more than 94% nucleotide sequence homology in both regions, indicating that the Okinawan strains belong to the same genotype as that of JE strains in mainland Japan. The nucleotide homology of the old group was relatively higher than that of the new group. Among the 14 strains in the new group, 13 strains were isolated from mosquitoes collected from a pig farm from 1986 through 1992. These strains showed higher nucleotide divergence than the old group strains, isolated from mosquitoes and swine sera collected at several sites, in both regions. A nucleotide substitution at the position 1920 in the E gene was identified in three isolates. This substitution generated an asparagine-proline-threonine sequence capable of serving as an attachment site of carbohydrate.     

登革病毒的分子进化和流行趋势

登革热是一种最流行的蚊媒传播传染病 ,近二十年来其流行呈上升趋势 ,本文从现代分子生物学和分子进化角度 ,对登革热的流行趋势进行综述。