活性炭柱层析纯化油茶皂苷的研究

本文通过选用特定的吸附柱层析活性炭纯化油茶皂苷。以总皂苷的得率及纯度为考察指标,确定活性炭吸附柱层析富集油茶总皂苷的性能、洗脱参数及再生使用情况。结果表明,水洗之后再以90％乙醇洗脱较好;香草醛．浓硫酸为检测方法检测下,总皂苷解吸得率为62．9％,总洗脱率为92．4％,纯度为50．1％以上;该类柱层析活性炭在分离纯化及脱色方面作用较显著,工艺简便、成本低,适合工业化生产。     

油茶脂酰辅酶A脱氢酶基因的克隆与表达分析

以国审油茶(Camellia oleifera)良种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库基础之上,采用RACE技术,克隆获得油茶脂酰辅酶A脱氢酶基因的全长c DNA序列,命名为Co ACAD(基因登录号KJ910338)。该基因c DNA全长为2702 bp,含有2487 bp的开放读码框,编码828个氨基酸,分子量为92.4113 k D,理论等电点p I为8.47,具有2个比较明显的跨膜区和酪氨酸蛋白激酶活性位点LVHGDFRIDNLVF,存在5个亚结构域;在Co ACAD基因c DNA全长序列的基础上构建表达载体,其中原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)中成功诱导表达,获得表观分子量约为93 k D的目的蛋白;实时荧光定量PCR分析表明,Co ACAD基因在果实膨大期和成熟期上调表达,预示着Co ACAD基因可能在种子发育过程中参与能量供应过程的调控。     

油茶3羟酰CoA脱水酶基因的克隆与表达分析

3羟酰CoA脱水酶是一类催化3羟酰CoA脱水转化成为烯酰CoA形式的酶。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,克隆到一个油茶3羟酰CoA脱水酶基因的cDNA全长,命名为CoHCD(Gen Bank登录号KJ910336)。该基因cDNA全长为1145bp,含有666bp的开放读码框,编码221个氨基酸,分子量为25.2kDa,理论等电点p I为9.4,疏水残基占整个氨基酸残基的48.9%,是亲水性蛋白,具有4个比较明显的跨膜区和蛋白质酪氨酸磷酸酶基序"HGXXGXXRS"。在基因c DNA全长序列的基础上,分别成功地构建了原核表达载体、超表达载体和RNA干扰载体,其中,原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得表观分子量约为25 k Da的相应目的蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,在5个不同发育时期的油茶种子中CoHCD高效表达主要集中在8~10月,转录最高峰发生在9月,其表达量在种子发育过程中呈增加趋势。     

油茶传粉昆虫研究现状与方向的探讨

油茶是典型的异花授粉植物,其中虫媒是主要形式,所以利用野生传粉性昆虫来提高油茶授粉效率,解除花粉限制,是解决我国油茶产业"瓶颈"的有效方法之一。目前,关于油茶传粉昆虫的研究比较匮乏,仅限于传粉昆虫的种类调查和部分野生蜜蜂传粉生物学和营巢生物学特性研究,不能满足油茶产业发展的需要。在现有研究基础上,结合传粉昆虫研究发展趋势,本文将提出以下几个重要研究内容:油茶访花昆虫种类的调查和鉴定;主要传粉昆虫传粉生物学研究;优势传粉昆虫的筛选;野生传粉蜜蜂与油茶授粉间的关系;利用传粉昆虫与油茶的协同进化进行油茶品种选育。以期为油茶传粉昆虫的后续研究提供参考。     

抗重楼皂苷类化合物溶血作用的研究

本研究以分离纯化所获得重楼总皂苷、偏诺皂苷(PSs)和薯蓣皂苷(Ds)为材料,用分光光度法测定样品对兔血红细胞的溶血度,探讨不同抗溶血剂对重楼皂苷类化合物溶血作用的影响。当Ds浓度大于75μg.mL-1时溶血率>5%,而重楼总皂苷和PSs浓度大于50μg.mL-1时溶血率>5%;在抗溶血剂存在的情况下,重楼皂苷类化合物的溶血作用被不同程度抑制,且表现为维生素E﹥甘露醇﹥葡萄糖。重楼皂苷中主要产生溶血作用的化合物为偏诺皂苷类化合物,而加入抗溶血剂维生素E对重楼皂苷类化合物的溶血作用具有良好的抑制效果。本实验提示添加抗溶血剂使重楼活性成分运用于静脉注射剂型具有一定的可能性。     

油茶组培苗器官发生的形态学与解剖学研究

以油茶岑软3号组培苗为研究材料,对其器官发生过程进行形态学和解剖学观察。结果表明:在选定的培养基上,外植体不经过愈伤组织,直接由器官诱导形成增殖芽,从而有效地保持了其遗传的稳定性。油茶增殖芽不定根由诱导的根原基发生,它起源于形成层薄壁细胞定向分化,不断向外进行伸长生长,并穿透愈伤组织而形成。这种不定根发生形式属皮部生根类型。油茶增殖芽单芽生根培养25 d后在不定根内形成次生维管形成层和木栓形成层,培养40 d以上根内的输导分子与茎内的输导分子相连。     

滇黄精中一个三萜皂苷的NMR研究

从滇黄精新鲜根茎中首次分离得到一个三萜皂苷,拟人参皂苷-F11。本文利用1D NMR和2D NMR对其碳、氢信号进行了全归属,并对文献中报道的碳谱数据进行了纠正。     

油茶饼粕中茶皂素的提取及脱色研究

以油茶饼粕为原料,通过有机溶剂进行浸取,研究并确定提取了茶皂素的最佳工艺为乙醇体积分数75%,料液比(g:m l)为1:4,提取时间2 h,提取温度60℃;脱色的最佳条件为pH9,脱色温度60℃,脱色时间1 h,加入H2O220 mL。在此条件下提取的茶皂素得率为16.6%,纯化的茶皂素质量分数达到87.3%。     

蒺藜总皂苷灌胃大鼠体内海柯皂苷元的代谢与分布

采用HPLC-UV和LC-MS方法相结合测定分析了海柯皂苷元在蒺藜总皂苷灌胃Sprague-Dawley(SD)大鼠体内不同器官组织分布动态变化。结果表明在大鼠胃肠中蒺藜总皂苷中有部分海柯皂苷水解为海柯皂苷元;在从6到32 h灌胃蒺藜总皂苷的大鼠肝脏中可检测到海柯皂苷元的存在,证明有一定量海柯皂苷元从大鼠胃肠道吸收进入体内;对于海柯皂苷元检测,API-MS检测方法较UV方法有更高的灵敏度,且有好的专属性。     

稀有人参皂苷IH901酶法转化与制备研究

本研究利用酶制剂蜗牛酶,酶法转化三七二醇组皂苷制备稀有人参皂苷IH901,正交实验优化酶解条件,建立酶法转化工艺.结果表明:超声法提取三七总皂苷正交实验优化条件为用75%乙醇溶液,15倍溶剂用量,超声波提取210 min作为最佳条件,三七总皂苷得率为12.21%;酶法转化二醇组人参皂苷制备稀有人参皂苷IH901,正交实验优化的条件为物料比为6/1、反应时间9 h、反应温度为45℃、pH值为3.0,酶解得率为54.24%;经硅胶柱分离获得IH901单体化合物,HPLC测定纯度达98%.酶法转化制备皂苷IH901的工艺方法简便,切实可行,可为中试生产提供参考.     

人参皂苷与生态因子的相关性

环境条件影响中药材活性成分的形成和积累.利用各种数学统计分析方法探讨影响人参皂苷积累的生态因子,提高人参品质.人参样品采自人参道地产区(主产区)吉林、辽宁、黑龙江三省5年生栽培人参,同时采集采样点处的土壤样品.超高效液相(UPLC)色谱法分析了不同产区9种人参皂苷(Rg1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd)的含量;利用“中药材产地适宜性分析地理信息系统”的生态因子空间数据库,获得采样区包括温度、水分、光照等10个生态因子数据;按土壤理化性质常规方法测定土壤样品中的有效硼、有效铁等微量元素和速效氮、速效钾等有效养分.对人参有效成分含量与土壤养分进行典型相关性分析发现,土壤中的有效硼、有效铁、速效氮与人参皂苷含量呈显著正相关,即适当提高土壤中有效硼、有效铁和速效氮的含量可以促进人参皂苷成分的积累,土壤水分与所测人参皂苷含量(Rb3除外)呈显著正相关,速效磷(P)、pH、速效锌(Zn)与各人参皂苷含量呈弱相关;人参皂苷与气候因子相关分析表明,温度(年活动积温、年平均气温、7月最高气温、7月平均气温、1月最低气温、1月平均气温)与人参皂苷含量呈显著负相关,其中与药典中人参含量测定项下的人参皂苷Rg1、Re、Rb1负相关尤为显著(r＞0.6),说明在一定温度范围内,人参皂苷是随着温度的降低而升高的,即适当低温有利于人参皂苷有效成分的积累;海拔与人参皂苷Rc、Rb2、Rb3含量呈显著正相关(r＞0.6),即相对较高的海拔可以促进这3种成分的积累;而年均降水量、年相对湿度和年均日照时数与人参皂苷相关不显著.通过主成分分析(PCA)、典型相关分析、排序等统计方法,考察不同产地样品中人参皂苷含量与生态因子间的相关性,研究结果揭示了温度在人参的主要活性成分-皂苷类形成中起决定性作用,在一定的温度范围内,温度越低越有利于人参皂苷的积累;阐明了土壤中的有效硼、有效铁、速效氮与人参皂苷含量成正相关.研究结果提示在人参实践生产中可以通过适当低温处理,增施硼、铁、氮肥等农艺措施来调控人参皂苷含量.     

油茶蓝翅天牛为害与寄主油茶内营养物质和次生物质含量的关系

[目的]揭示油茶蓝翅天牛Chreonoma atritarsis Pic.发生与寄主枝条营养物质及次生物质含量之间的相互关系,为蓝翅天牛在油茶林中的发生监测预警提供基础依据.[方法]采用五点法对蓝翅天牛在油茶幼龄林和壮龄林中的为害情况进行了调查;采用烘干称重法、蒽酮比色法、3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)和考马斯亮蓝...     

七叶皂苷的药理作用与临床应用

娑罗子为七叶树科植物欧洲七叶树(Aesculus hippocastannum)、日本七叶树(Aesculus turbinata Blume)和中国天师栗(Aesculus Wilsonii Rehd)的果实或种子。欧洲七叶树,又名欧马栗(horse chestnut),其种子和幼枝的外皮可入药,在欧洲应用广泛,早在18世纪即用于解热,19世纪后期可用于治疗痔疮。七叶皂苷是从娑罗子(七叶树种子)中提取的主要活性成分,属于三萜皂苷类药物。它具有抗渗、消肿、改善血液循环、增加静脉张力、抑制胃排空、清除活性氧和抗肿瘤作用。临床上可广泛应用于慢性静脉功能不全,痔疮、水肿、哮喘等。本文对七叶皂苷的药理作用及其临床应用进行综述。     

燕麦纽替皂苷的研究

采用乙醇回流提取,再经AB-8大孔树脂、MCI柱和ODS反相柱层析柱分离,理化方法及1H NMR,13CNMR等方法鉴定结构,从燕麦中得三个纽替皂苷类化合物:Avenacoside A(1)、Avenacoside B (2)、燕麦纽替皂苷C(3).其中化合物3为首次从禾本科植物中分离得到.     

油茶白绢病原菌齐整小核菌分子检测的研究

目的：设计特异性引物建立油茶白绢病齐整小核菌的快速分子检测体系。方法：扩增齐整小核菌核糖体DNA ITS区并测定其序列,比较该序列与GenBank中近似种的ITS序列差异,设计了特异性引物BF1和BR2。结果：该引物可以从齐整小核菌中扩增得到约540bp特异性条带,而扩增其它近似或相关菌株时没有相应的特异性条带。在25μL PCR反应体系中,引物BF1和BR2检测灵敏度为1pg浓度DNA。结论：利用设计的BF1和BR2特异性引物结合PCR方法可快速的扩增出齐整小核菌DNA,检测灵敏度为1pg.但在生产实践中诊断油茶白绢病发病前组织中的齐整小核菌还需要进一步研究。     

薯蓣皂苷对大鼠心肌收缩与钠-钙交换体的影响

目的：观察薯蓣皂苷（Dio）对大鼠心肌收缩作用以及胞内Ca²⁺浓度的影响,并初步探讨其作用机制与Na⁺-Ca²⁺交换体（NCX）的关系。方法：采用Langendorff逆行主动脉灌流法对大鼠离体心脏进行灌流,利用压力感受器插管法测定左心室相关心功能参数,记录及其在应用NCX选择性抑制剂SEA0400情况下对左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末期压（LVEDP）、左心室内压最大上升/下降速率（±dp/dt_max）以及心率（HR）的影响;利用激光共聚焦显微观察薯蓣皂苷及SEA0400对大鼠心肌细胞H9c2细胞内Ca²⁺浓度的影响。结果：离体心脏灌流结果显示,1 μmol/L Dio可显著增加LVSP,增加约19.7%（P<0.01）;增加左室内压最大上升速率（+dp/dt_max）,增加约9.6%;激光共聚焦测定Ca²⁺荧光强度实验结果显示：1 μmol/L Dio可使H9c2细胞中Ca²⁺相对荧光强度增加（P<0.01）;而在SEA0400存在的情况下,1 μmol/L的Dio使细胞内Ca²⁺相对荧光强度变为（17.09±0.63）,给予Dio后差异有显著性（P<0.01）。在细胞液中无Ca²⁺或无Na⁺时,给予1 μmol/L的Dio使Ca²⁺相对荧光强度减小,与给予1 μmol/L的Dio差异有显著性（P<0.01）。结论：Dio可增加左心室收缩压和最大上升速率,表现正性肌力作用;Dio可使细胞内Ca²⁺浓度增加,其作用机制与增加Na⁺内流,促进NCX反向转运有关。     

微波处理对人参皂苷生物转化影响的研究

利用微波技术分别对人参皂苷粗品及人参皂苷转化发酵液进行处理,探讨微波处理对人参皂苷生物转化效果的影响。实验结果通过高效液相色谱分析显示,经微波处理后,人参皂苷峰几乎消失,苷元峰突出,表明微波处理对人参皂苷的转化效果显著。并确定微波的最佳处理条件为微波功率30W,辐射60s。     

肉桂总皂苷提取工艺的研究

选用水浴振荡法提取肉桂总皂昔.采用化学法定性,香草醛-高氯酸法定量.在提取温度、固液比、乙醇浓度、提取时间等单因素实验的基础上,通过正交实验,确定肉桂总皂苷提取的最佳工艺条件为:提取温度50℃,固液比1:16,提取溶剂的浓度为60%,提取时间5 h.     

油菜蜂花粉中皂苷化学成分的研究

油菜蜂花粉煮沸灭酶,减压蒸干,用80%乙醇提取,经AB-8大孔树脂、MCI柱和ODS反相柱层析柱分离,得到4个皂苷类化合物,通过理化方法、1H NMR、13C NMR等手段鉴定他们的化学结构,分别为:3,22-二羟基,3-O-β-D-葡萄糖-齐墩果烷(1)、3,22-二羟基,3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-[-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)]-齐墩果烷(2)、3,22-二羟基,3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-[-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)]-齐墩果酸(3)和3-O-β-D-葡萄糖-谷甾醇苷(4)。其中,皂苷1～3在油菜蜂花粉中首次报导。     

油茶地蜂的传粉生物学特性研究

油茶地蜂是普通油茶的主要传粉昆虫,为深入研究其传粉生物学特性,采用标准株全天观察法、杯罩法、花粉计数法,对油茶地蜂访花行为、访花过程、访花节律、携粉足构造及载粉量等传粉生物学特性进行研究。结果表明,典型的油茶地蜂访花过程呈现"双峰型"的访花节律。油茶地蜂每天进出巢3~4次。第一次回巢到达的最早时间为10:22,最后一次出巢的最晚时间为16:34。出巢到进巢的时间间隔为(1.67±0.46)h(n=27),进巢到出巢的时间为(21.43±8.09)min(n=46)。地蜂总的携粉数量为(2 036±860)粒(n=25)。地蜂携粉足的结构分为两部分,第一部分是由胫节及第一跗节上密集轮生的、较坚硬的、圆锥状毛丛组成的花粉刷;第二部分为股节外部和转节端部有羽状分枝的弧形长毛组成的花粉篮。每只携粉足上的载粉量为(1.64±0.56)mg(n=10),携带的花粉总数为(9 068±2 364)粒(n=42)。地蜂对白色有偏好。对地蜂的传粉生物学特性和普通油茶花的传粉综合征的研究表明,油茶地蜂是高度特化的传粉者,而普通油茶花的传粉综合征是泛化的,两者间构成了一种非对称的进化关系。