人乳寡糖的分离分析

糖是一类重要的生命活性物质,它不仅是细胞能量代谢的源泉,还常作为信号分子参与细胞的各种活动。人乳寡糖（human milk oligosaccharides,HMOs）在人乳干物质中的含量仅次于乳糖和脂肪,高于蛋白质,对婴儿的发育和健康具有重要作用。为了更好的理解人乳寡糖的生物功能和结构的关系,对其组成和结构开展分析研究是必不可少的。对人乳寡糖进行了简要的介绍,并就其预处理方法、分离分析和结构表征方法进行了综述,以期为人乳寡糖的深入研究提供参考。     

利用光谱技术确定银耳多糖中糖醛酸的连接位点与连接方式

为确定银耳酸性杂多糖结构中糖醛酸的连接位点,对银耳多糖进行了部分酸水解,并采用Sephadex LH-20凝胶柱纯化,得到银耳寡糖部分。对寡糖PMP衍生化后的MS~n分析表明,该寡糖均为酸性糖,主要含有银耳二糖和少量三糖,结合组成糖、甲基化和NMR结果分析,β-D-葡萄糖醛酸残基作为非还原末端以(1→2)-连接方式与甘露糖相连。     

利用重组大肠杆菌合成几丁寡糖的研究

提取根瘤菌Mesorhizobium.loti基因组,克隆编码N-乙酰氨基葡萄糖转移酶nodC基因,插入质粒pUC19的lac启动子的下游,构建并筛选出能够合成几丁寡糖的重组大肠杆菌DCL-3。利用优化的MMYNG培养基,重组大肠杆菌DCL-3在10L发酵罐中培养26h后,培养液菌体浓度测定OD560=10.8,几丁寡糖得率达到526mg/L。收集重组细菌的细胞并煮沸破碎,利用活性炭的吸附和P4凝胶层析对几丁寡糖产物进行分离纯化。纯化产物的液质分析(LC-ESI-MS)结果表明主要寡糖产物为几丁四糖(m/z,831[M H] )和几丁五糖(m/z,1034[M H] )。     

功能糖的抗肿瘤和防治肝病作用

糖类药物研究是基于糖生物学取得的重要进展,以生命体内糖链信息分子的结构、功能为依据,基于细胞粘附和细胞表面糖链识别为靶标的研究。主要研究方向是：新的寡糖化学合成的方法和策略：重要生物活性寡糖的合成及其活性评价;糖苷酶、糖基转移酶抑制剂的设计、合成、评价,以及对天然产物中分离得到的糖类药物进行鉴定和评价。而今已有一些功能糖作为糖类药物在抗肿瘤和防治肝病中得到了一定的应用,并且这种应用正在被人们逐步认知和接受。     

超滤法提取分离甘蔗叶多糖的研究

目的：应用超滤技术对甘蔗叶多糖进行提取分离。方法：采用切割分子量为50000、30000、10000和5000的滤膜对甘蔗提取液进行提取分离,葸酮-硫酸法测定多糖的含量。结果：甘蔗叶多糖的超滤法最佳分离纯化参数为温度30℃-40℃,压力差0．15MPa。膜面流速20m/s,相对分子质量为50000以上的多糖约占总糖的17．2％,而相对分子质量5000以下的寡糖和单糖约占35．5％。     

Man8GlcNAc2糖基化的酿酒酵母菌株的构建

酿酒酵母糖蛋白的N-糖基化经过高尔基体的修饰后形成聚合度约150-200的甘露寡糖,高尔基体N-糖基化的糖基转移酶Mnn1p和Och1p在甘露寡糖的形成过程中起关键作用。通过同源重组置换敲除了酵母中的MNN1和OCH1基因阻断高尔基体N-糖基化修饰,分离纯化了mnn1 och1突变株中的N-糖蛋白,糖酰胺酶PNGaseF酶解释放的N-糖链经过2-氨基吡啶衍生后,利用HPLC和MALDITOF/MS结合的方法分析了突变株糖蛋白上的N-糖链。结果显示mnn1 och1突变株中的糖蛋白的N-糖链为结构单一的糖链,分子量为1794.66,推测为Man8GlcNAc2。     

凝胶色谱法制备寡糖

采用已知结构的多糖,控制其水解条件,使之产生所需寡糖片断。用聚丙烯酰胺凝胶色谱(BiO-6el P-4)分离,对中性糖可以分离到含十一个糖残基的寡糖。对氨基糖可分离到含七个糖残基的寡糖。用薄层色谱和快原子轰击质谱鉴定了它们的纯度。     

高压液相色谱法分离寡糖的对氨基苯甲酸乙脂衍生物

寡糖的对氨基苯甲酸乙酯衍生物,以及它的全乙酰化产物具有紫外吸收基团适合HPLC分离,研究了氨基柱和十八烷基柱对寡糖混合物的分离性能及检测灵敏度。从免疫球蛋白M中分离到的寡糖组分,衍生后用HPLC进一步分离提纯出另一些含量较少的糖链。     

天然植物多糖分离纯化技术研究现状和进展

植物多糖因具有抗肿瘤、增强免疫、抗氧化等功效而备受关注,多糖的分离纯化是多糖结构和生物活性研究的首要前提。本文系统介绍了传统的水提醇沉法以及酶提取法、超声波辅助提取法、超临界流体萃取法、超高压提取技术微波辅助提取法和双水相萃取等新技术,对其分离原理、处理方式和效果进行分析比较和综述;从物理分离方式、分子间作用力及化学性质分离的角度,综述植物粗多糖分离和纯化方法及途径,为天然植物中多糖的分离纯化和综合利用提供参考。     

糖组学研究策略及前沿技术研究进展

糖组学是继基因组学和蛋白质组学后的新兴研究领域,主要研究聚糖结构与功能.通过与蛋白质组数据库结合,糖捕捉法能系统鉴定糖蛋白和糖基化位点.糖微阵列技术可以对生物个体产生的全部蛋白聚糖结构进行鉴定与表征,提高了聚糖分析通量.而化学选择糖印迹技术简化了聚糖纯化步骤并提高了糖基化分析的灵敏度.双消化并串联柱法通过双酶消化双柱分离,在分析聚糖结构的同时也鉴定蛋白质的序列,并与蛋白质组学研究兼容.     

奶牛与水牛初乳中乳寡糖组分比较研究

乳寡糖是由乳汁中含量丰富的固体物质组成.研究结果表明,乳寡糖有提高免疫、益生元及抗感染等作用,已发现与婴儿肠道发育、神经智力发育等多方面关系密切.水牛奶是除牛奶外的第二大奶源,国际上公认其为营养含量高、口感好的优质乳制品,但目前针对水牛乳寡糖的研究多以美洲水牛为研究对象,尚无中国水牛的相关研究.本研究利用固相萃取对已脱脂和除去蛋白质的广西水牛初乳乳汁样品进行纯化,并采用苯胺(aniline,Bn)衍生化试剂对其进行衍生化处理,通过UPLC-ESI-Q-TOF-MS液相质谱进行优化后,对水牛初乳中的寡糖组分进行测定并与牛乳进行了对比,最终测得奶牛初乳中19种及水牛初乳中的9种乳寡糖组分,并对二者的种类及含量进行比较,发现在两种初乳的乳寡糖中,中性糖二糖m/z385.15和中性糖三糖m/z 547.21以及酸性糖m/z 635.23均为其主要寡糖成分,与其他乳寡糖相比含量相对较高.总体而言水牛初乳中的中性寡糖占比比奶牛初乳高,二者中性糖占乳寡糖总量的比例分别为88.88%和63.16%.     

杏鲍菇多糖的研究进展

综述了杏鲍菇多糖的提取、纯化、结构表征、生物活性以及应用研究进展,展望了杏鲍菇多糖对人体保健的应用前景,为杏鲍菇多糖将来的研究和应用提供科学依据。     

综述: 串联质谱寡糖结构解析方法评介

糖组学的研究与发展对生命科学及生物医药的发展具有重要的推动作用．寡糖结构的解析是糖组学中重要的研究课题之一．串联质谱分析技术以其具有高特异性及高灵敏度的特点成为了广为使用的寡糖结构解析方法．本文首先概述了串联质谱寡糖结构解析的研究背景;然后介绍了现有的寡糖结构解析策略及基于每种策略的经典解析方法,并对所列方法的原理和算法进行逐一分析讨论;最后,总结现有方法的优缺点,对串联质谱寡糖结构研究领域进行了研究展望．     

用HPLC证实单糖在酸性处理中的变化

<正> 在碱性条件下,醛糖与酮糖之间会发生结构互变。然而美国学者Feather M S等经过十多年的研究,发现在酸性条件下,葡萄糖、甘露糖和果糖之间也有分子内的互变,并应用~3H放射标记等技术,提出了互变的反应机理,这一互变的存在给寡糖及多糖的组份分析带来了一个问题,即用酸性条件水解寡糖或多糖后,如何确定其中的葡萄糖、甘露糖或果糖     

寡糖的构象分析

糖在生物体内具有极为重要的生物学功能,其在细胞及分子识别等许多过程中的作用已日益得到重视,糖的结构特征已成为研究识别过程的重要依据.集中介绍了有关寡糖结构的基本概念、理论研究热点及现状,并对有关研究方法进行了评述．寡糖结构理论研究的发展方向之一是研究糖与蛋白质的相互作用以及糖蛋白中糖链的结构与功能.     

串联质谱寡糖结构解析方法评介

糖组学的研究与发展对生命科学及生物医药的发展具有重要的推动作用.寡糖结构的解析是糖组学中重要的研究课题之一.串联质谱分析技术以其具有高特异性及高灵敏度的特点成为了广为使用的寡糖结构解析方法.本文首先概述了串联质谱寡糖结构解析的研究背景;然后介绍了现有的寡糖结构解析策略及基于每种策略的经典解析方法,并对所列方法的原理和算法进行逐一分析讨论;最后,总结现有方法的优缺点,对串联质谱寡糖结构研究领域进行了研究展望.     

研究: 奶牛与水牛初乳中乳寡糖组分比较研究

乳寡糖是由乳汁中含量丰富的固体物质组成．研究结果表明,乳寡糖有提高免疫、益生元及抗感染等作用,已发现与婴儿肠道发育、神经智力发育等多方面关系密切．水牛奶是除牛奶外的第二大奶源,国际上公认其为营养含量高、口感好的优质乳制品,但目前针对水牛乳寡糖的研究多以美洲水牛为研究对象,尚无中国水牛的相关研究．本研究利用固相萃取对已脱脂和除去蛋白质的广西水牛初乳乳汁样品进行纯化,并采用苯胺 (aniline,Bn)衍生化试剂对其进行衍生化处理,通过UPLC-ESI-Q-TOF-MS液相质谱进行优化后,对水牛初乳中的寡糖组分进行测定并与牛乳进行了对比,最终测得奶牛初乳中19种及水牛初乳中的9种乳寡糖组分,并对二者的种类及含量进行比较,发现在两种初乳的乳寡糖中,中性糖二糖m/z 385.15和中性糖三糖m/z 547.21以及酸性糖m/z 635.23均为其主要寡糖成分,与其他乳寡糖相比含量相对较高．总体而言水牛初乳中的中性寡糖占比比奶牛初乳高,二者中性糖占乳寡糖总量的比例分别为88.88%和63.16%．     

Man8GlcNAc2糖基化的酿酒酵母菌株的构建

酿酒酵母糖蛋白的N-糖基化经过高尔基体的修饰后形成聚合度约150-200的甘露寡糖,高尔基体N-糖基化的糖基转移酶Mnn1p和Och1p在甘露寡糖的形成过程中起关键作用。通过同源重组置换敲除了酵母中的MNN1和OCH1基因阻断高尔基体N-糖基化修饰,分离纯化了mnn1 och1突变株中的N-糖蛋白,糖酰胺酶PNGaseF酶解释放的N-糖链经过2-氨基吡啶衍生后,利用HPLC和MALDITOF/MS结合的方法分析了突变株糖蛋白上的N-糖链。结果显示mnn1 och1突变株中的糖蛋白的N-糖链为结构单一的糖链,分子量为1794.66,推测为Man₈GlcNAc₂。     

类芽孢杆菌环果寡糖糖基转移酶的分离纯化和酶学性质

采用硫铵沉淀、疏水层析和DEAE离子交换层析对产自类芽孢杆菌Paenibacillus sp.Lfos16的环果寡糖糖基转移酶(Cycloinulooligosaccharide Fructanotransferase,CFTase)进行分离纯化,得到电泳纯的CFTase,最终纯化倍数为13. 9,比活力为33. 3 U/mg。纯化的CFTase经SDSPAGE和Native-PAGE电泳分析得出其相对分子量大小约为120 000,且是双亚基蛋白。探究了CFTase的酶学性质,最适反应条件为:40℃～45℃,p H 7. 0;温度稳定范围为30℃～45℃,p H稳定范围为5. 0～9. 0。并对CFTase降解菊糖的催化机制进行了分析,初步确定为外切加环化作用形成环果寡糖。     

HILIC-ESI-HCD-MS/MS寡糖图谱分析用于海参褐藻糖胶的结构鉴定

褐藻糖胶也称为岩藻黄质、岩藻多糖、褐藻多糖,是一种硫化的多糖,常见于海参、海藻等褐藻纲及海藻类的植物中。研究发现,具有特定硫酸化结构的糖类结构域在生物功能中起着至关重要的作用。因此,对褐藻糖胶寡糖进行精细的结构表征,尤其是确定其硫酸化结构,对于理解褐藻糖胶的结构-功能关系至关重要。