红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响

探讨红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响,为从微生态角度研究红茶在人体肠道菌群形成过程中的作用机制奠定基础。

利用宏基因组测序技术检测4周龄新生幼鼠（4weeks组,n = 30）、12周龄正常对照组小鼠（control组,n = 15）和12周龄喂饲红茶水实验组小鼠（teadrink组,n = 15）的肠道菌群分布,分析3组样本的菌群差异情况,探求红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响。

与control组相比,teadrink组小鼠肠道拟杆菌门（t = −7.711,P＜0.001）、拟杆菌科（t = −3.411,P = 0.009）、长尾嗤菌体科（t = −2.515,P = 0.036）、拟杆菌属（t = −2.693,P = 0.027）、邓肯菌属（t = −2.434,P = 0.041）、居海事城球杆菌属（t = −3.327,P = 0.029）、迪博邓肯菌（t = −2.679,P = 0.028）、普通居海事城球杆菌（t = −3.401,P = 0.027）和Duncaniella_sp._C9（t = −3.104,P = 0.035）相对丰度显著增加,厚壁菌门（t = 8.952,P＜0.001）、乳杆菌科（t = 13.102,P＜0.001）、消化链球菌科（t = 3.665,P = 0.021）、爱格菌科（t = 4.481,P = 0.002）、理研菌科（t = 3.626,P = 0.022）、乳杆菌属（t = 5.542,P = 0.004）、黏液乳杆菌属（t = 6.334,P = 0.002）、龙包茨菌属（t = 3.785,P = 0.005）、阿德勒菌属（t = 4.504,P = 0.002）、约氏乳杆菌（t = 4.282,P = 0.011）和罗伊氏粘液乳杆菌（t = 6.156,P = 0.003）相对丰度显著减少。与4weeks组相比,teadrink组小鼠肠道菌群分布差异大于control组。

红茶对新生幼鼠肠道菌群的形成能够产生影响,不同丰度的菌群可能通过调节碳水化合物代谢等途径来达到改善肠道菌群结构、增强肠道稳态的目的,具体代谢机制有待深入研究。

     

氨基酸型肠内营养制剂支持后克罗恩病患者肠道微生物和非靶向代谢组学指标的分析

探讨氨基酸型肠内营养制剂支持后克罗恩病患者的肠道微生物和非靶向代谢组学指标的变化,为该类患者的治疗提供参考。

选择我院收治的20例克罗恩病活动期患者作为研究对象,所有患者均采用氨基酸型肠内营养制剂进行支持治疗。比较患者治疗前后肠道菌群结构、菌群多样性以及非靶向代谢组学检测结果的差异。

治疗后,患者肠道乳杆菌属（t=5.200,P＜0.001）、大肠埃希菌（t=11.974,P＜0.001）、克雷伯菌属（t=15.033,P＜0.001）、糖单胞菌（t=12.166,P＜0.001）、恶臭假单胞菌（t=31.063,P＜0.001）、肠球菌属（t=28.867,P＜0.001）数量均显著升高;同时患者肠道菌群OUTs（t=40.435,P＜0.001）、Observed species（t=5.475,P＜0.001）、Chao1指数（t=12.348,P＜0.001）、Simpson指数（t=2.961,P=0.005）、Shannon指数（t=3.330,P=0.002）均显著升高。相比治疗前,治疗后患者血清以及粪便中的氨基酸、多肽、脂肪酸、胆固醇及碳水化合物水平均显著改善。

氨基酸型肠内营养制剂支持后,克罗恩病患者肠道菌群丰度提高,同时患者脂质代谢的改善可能与氧化应激反应通路相关联。

     

内毒素血症对新生鼠肠道菌群的影响

利用高通量测序技术分析内毒素血症新生鼠肠道菌群的变化, 探究肠道菌群与内毒素血症的关系, 为临床诊治提供思路。

复制新生大鼠内毒素损伤模型, 注射LPS后第24小时、第3天、第7天分别处死新生大鼠, 留取粪便并将对照组(C1组6只、C3组5只、C7组7只)和LPS组(L1组5只、L3组5只、L7组5只)按处死天数各分为3组。高通量测序分析各组间菌群多样性及相对丰度差异。

(1) Alpha多样性分析提示对照组和LPS组菌群多样性及丰度有显著差异, C3组较L3组Shannon指数均值小(t=-3.386 8, P=0.009 5), Simpson指数均值大(t=3.102 4, P=0.014 6);C7组较L7组Shannon指数均值大(t=2.459 4, P=0.033 7), Simpson指数均值小(t=-2.475 6, P=0.032 8)。(2)物种组成分析表明LPS组的菌群结构发生改变, 在门水平LPS组较对照组变形菌门相对丰度高, 厚壁菌门相对丰度低; 在属水平上LPS组较对照组埃希菌-志贺菌属相对丰度高, 乳杆菌属相对丰度低; 且随着天数的递增LPS组埃希菌-志贺菌属呈递增趋势, 红球菌属呈递减趋势。

内毒素血症可以改变新生鼠肠道菌群的组成, 并与肠道菌群失调有一定的关系。

     

乙型肝炎肝硬化腹水合并自发性细菌性腹膜炎患者肠道菌群特征

初步分析乙型肝炎肝硬化腹水合并自发性细菌性腹膜炎（SBP）患者肠道菌群特征,为该类患者的治疗提供参考。

选取我院符合纳入标准的乙型肝炎肝硬化腹水患者45例为研究对象,其中24例合并SBP的患者为SBP组、21例未合并SBP的患者为NSBP组,另选同期20例健康人为HC组。应用16S rDNA测序技术检测患者肠道菌群,并使用生物信息学方法分析各组对象肠道菌群变化。

SBP组、NSBP组及HC组相比,其肠道菌群的物种多样性及丰富度差异均无统计学意义（均P＜0.05）。PCoA分析显示,NSBP组与HC组患者肠道菌群结构相似,SBP组与其他两组相比菌群结构较为不同。与NSBP组相比,SBP组患者肠道菌群中变形菌门（Proteobacteria,5.45% vs 13.50%,U = 161.000,P = 0.038）、软壁菌门（Tenericutes,0.019% vs 0.073%,U = 162.000,P = 0.035）、埃希—志贺菌属（Escherichia-Shigella,0.24% vs 9.53%,U = 103.000,P = 0.001）、柠檬酸杆菌属（Citrobacter,LDA＞2）等丰度均增加;酸杆菌门（Acidobacteria,0.026% vs 0.015%,U = 152.000,P = 0.023）、罗氏菌属（Roseburia,2.55% vs 2.00%,U = 152.000,P = 0.023）、粪球菌属（Coprococcus,LDA＞2）等丰度下降。

乙型肝炎肝硬化腹水的发生发展与肠道菌群密切相关,在SBP患者肠道菌群中发现潜在病原体数量显著增加,并伴随有益细菌数量的减少。

     

高校女性日常能耗与肠道菌群的相关性研究

探讨高校女性日常能耗及肠道菌群结构特征,分析不同能耗指标与特征肠道菌群之间的相关性。

基于智能可穿戴设备人体运动能耗检测仪对广州两所大学的青年女性（Y组,n=30）、中年女性（M组,n=30）进行48 h能耗监测,统计分析日常能耗的组间差异。采集调查对象清晨粪便进行16S rRNA基因测序,运用多元统计学分析中青年女性肠道菌群结构特征。将目、属水平的特征菌群与能耗指标进行相关性检验及回归分析。

Y组人群的日均步数（t=4.250,P＜0.001）、每日能耗值（t=3.590,P＜0.001）、日均中高强度活动时长（t=4.357,P＜0.001）均显著高于M组;两组人群肠道菌群的目、属水平的丰度差异菌群主要为乳杆菌目（Lactobacillales）（t=2.537,P=0.014）、小杆菌属（Dialister）（t=2.904,P=0.005）、布劳特菌属（Blautia）（t=3.246,P=0.002）,其中Lactobacillales和Dialister与多项能耗指标呈正相关,Blautia与多项能耗指标呈负相关。

日均步数、每日能耗值、日均中高强度活动时长的能耗指标可用于预测更好的身体机能;一定条件下,增加低、中、高强度活动时长可能提高Lactobacillales和Dialister的丰度,进而延缓身体机能下降。

     

不同健康状况百岁老人肠道菌群的差异性

探索广西不同健康状况百岁老人肠道菌群的特征。

采用1∶1病例对照研究方法,在广西长寿地区按年龄收集不同健康状况的21对百岁老人粪便和血样标本,同时收集个体一般信息和食物摄入信息;使用标准量表测量身体机能和认知功能（MMSE）,测定血生化指标,采用16S rRNA的V4–V5区序列进行高通量测序分析肠道菌群的差异。

非健康组百岁老人较健康组百岁老人肠道菌群丰度和多样性显著降低（t = 3.987、4.000、3.703,均P＜0.001）;健康组百岁老人肠道菌群中蓝藻菌门（Cyanobacteria）、黏胶球形菌门（Lentisphaerae）丰度显著高于非健康组,拟杆菌门（Bacteroidetes）丰度显著低于非健康组;健康组百岁老人肠道菌群中别样杆菌属（Alistipes）、瘤胃球菌属（Ruminococcus）、气味细菌属（Odoribacter）、厌氧菌属（Anaerotruncus）、丁酸单胞菌属（Butyricimonas）丰度显著高于非健康组;非健康组百岁老人肠道菌群中拟杆菌纲（Bacteroidia）、拟杆菌目（Bacteroidales）、拟杆菌种（Bacteroides coprophius）丰度显著高于健康组;非健康组百岁老人身体机能、MMSE评分显著降低（t = 2.775、2.058,P = 0.008、0.046）。

广西不同健康状况百岁老人肠道菌群丰度和多样性具有显著特征,健康状况良好的百岁老人可能具有更好的肠道菌群构成。

     

营养干预对肝硬化代偿期合并糖尿病患者肠道菌群的影响

探讨营养干预对肝硬化代偿期合并糖尿病患者肠道微生物的影响。

收集2022年9月—2023年9月本院收治的80名肝硬化代偿期合并糖尿病患者,随机分为对照组和观察组,每组40例。对照组使用常规降糖药物治疗,观察组在对照组基础上,进行营养干预,根据1.5 g/kg的体重剂量摄入乳清蛋白质粉,接受常规饮食咨询和营养建议。每4周收集空腹血清样本,在干预前和营养干预后12周收集粪便样本,使用全自动生化分析仪、ELISA法检测血清葡萄糖、总胆固醇、高密度脂蛋白（HDL-c）胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）胆固醇水平等临床参数。使用Illumina Nova Seq平台对粪便基因组DNA测序。

对照组患者12周后临床各项指标与基线比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。观察组患者营养干预后空腹血糖（t=2.862,P=0.005）、空腹胰岛素（t=5.926,P＜0.001）、HOMA-IR（t=2.680,P=0.009）、hs-CRP（t=3.386,P=0.001）、蛋白质氧化率（t=7.762,P=0.001）均显著降低,呼吸商显著增加（t=2.958,P=0.004）。营养干预后6个菌种的相对丰度发生了显著变化,分别属于厚壁菌门、拟杆菌门和变形菌门。属于拟杆菌属和梭菌目的菌种在营养干预后产生了显著的菌株基因组变化。基于HOMA-IR的相对改善,将观察组患者分为响应者（R）亚组和非响应者（NR）亚组。两个亚组之间肠道微生物群的动态变化差异有统计学意义（P=0.008）。

肠道微生物群在营养干预对肝硬化代偿期合并糖尿病患者胰岛素敏感性影响中发挥重要作用,可能有助于临床实施个体化生活方式干预。

     

呼吸窘迫综合征新生儿肠道菌群的改变

探究呼吸窘迫综合征新生儿肠道菌群的改变,为该类患儿的治疗提供参考。

选取我院2020年4月至2022年4月收治的83例呼吸窘迫综合征新生儿作为试验组,另选我院同期健康新生儿83例作为对照组,收集两组对象粪便标本。对比两组对象肠道菌群的变化情况。

与对照组相比,试验组患儿肠道菌群Chaol指数和Shannon指数显著降低,Ace指数显著升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。两组对象肠道厚壁菌门、变形菌门、链球菌属相对丰度对比差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

呼吸窘迫综合征新生儿肠道菌群改变较大。

     

IgE介导牛乳蛋白过敏婴幼儿肠道菌群改变初探

应用高通量测序技术探讨IgE介导的牛乳蛋白过敏(cow′s milk protein allergy, CMA)婴幼儿肠道菌群结构和组成的变化。

回顾性分析2012年6月-2013年6月入组食物过敏患儿, 选择出IgE介导的CMA(IgE-CMA)患儿4例, 非IgE介导的CMA(non-IgE-CMA)患儿4例, 采集粪便样本进行454焦磷酸测序分析, 血清样本进行细胞因子检测。

与non-IgE-CMA患儿相比较, IgE-CMA患儿肠道菌群多样性Shannon指数(t=-2.996, P=0.010)和Simpson指数(t=-1.786, P=0.036)显著改变, 菌群多样性下降, 菌群丰富度指数ACE(t=0.406, P=0.021)显著升高。β-多样性PCA分析可显著区分两组, 提示IgE-CMA患儿肠道菌群发生显著改变。LEfSe组成差异分析发现肠道菌群中硬壁菌门和拟杆菌门的改变与CMA的不同表型无关, IgE-CMA婴儿中链球菌、肠球菌、鞘氨醇单胞菌、双歧杆菌、罗思氏菌属、红球菌和梭菌属第Ⅺ簇等减少, 而厌氧杆菌和狭义梭菌属增加, 可用于鉴别诊断CMA表型。

IgE可决定CMA患儿肠道菌群的改变, 这为开展以肠道菌群为靶点的不同表型CMA诊疗提供了新策略。

     

基于16S rRNA基因测序研究蜥蜴胃康方对胃癌肝转移裸鼠肠道菌群的影响

观察不同剂量蜥蜴胃康方对胃癌肝转移裸鼠肠道菌群的影响。

60只裸鼠随机分为正常对照组(10只)和造模组(50只), 造模组用HGC-27胃癌细胞通过脾脏注射制备胃癌肝转移模型, 造模4周时, 随机取正常对照组1只与造模组5只, 取裸鼠肝组织通过病理切片对比验证造模是否成功。随后剩余造模组45只裸鼠随机分为模型组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组以及蜥蜴胃康方高(2.6 g/mL)、中(1.3 g/mL)、低(0.6 g/mL)剂量组, 每组9只。取最后一次灌胃2 h后各组裸鼠新鲜粪便进行16S rRNA基因测序。

16S rRNA测序结果显示, 与正常对照组相比模型组裸鼠肠道菌群在门水平表现为拟杆菌门、厚壁菌门丰度下降, 放线菌门、蓝藻菌门丰度富集。属水平表现为Muribaculaceae丰度显著降低(t=3.514 4, P=0.024 6), 拟普雷沃菌属丰度显著富集(t=-4.660 1, P=0.009 6), 副拟杆菌属丰度显著富集(t=-4.284 7, P=0.012 8), 瘤胃球菌属丰度显著降低(t=3.342 7, P=0.028 8)。经蜥蜴胃康方干预后, 胃癌肝转移裸鼠的肠道菌群结构得到了改善, 门水平表现为厚壁菌门丰度增加, 放线菌门丰度降低, 各组间差异有统计学意义(H=11.619 9, P=0.040 4);蓝藻菌门丰度降低, 组间差异有统计学意义(H=11.433 1, P=0.043 4)。属水平表现为Muribaculaceae丰度升高, 拟普雷沃菌属、副拟杆菌属丰度降低; 瘤胃球菌属(H=14.658 4, P=0.011 9)、乳杆菌属(H=11.386 0, P=0.044 2)丰度显著富集, 各组间差异有统计学意义(P < 0.05)。

蜥蜴胃康方能增加厚壁菌门丰度, 降低放线菌门、蓝藻菌门丰度, 提高益生菌乳杆菌属、瘤胃球菌属丰度, 降低致病菌肠杆菌属、梭状芽胞杆菌属丰度。其中以蜥蜴胃康方高剂量组对肠杆菌属、梭状芽胞杆菌属的抑制作用最显著, 并能有效提高乳杆菌属丰度, 从而调节胃癌肝转移裸鼠肠道菌群的平衡, 增强肠黏膜免疫屏障, 激活免疫细胞释放肿瘤坏死因子来发挥对胃癌的抑制作用。

     

肠道菌群对2型糖尿病肾病患者肾功能损害及白蛋白尿短期进展的影响

研究2型糖尿病肾病（DN）患者肠道菌群与肾功能损害及白蛋白尿短期进展的关系。

选择2018年2月至2021年2月收治的2型DN患者作为DN组并分为微量白蛋白尿患者（30～300 mg/24 h）和大量白蛋白尿患者（＞300 mg/24 h）,另取同期收治的尿白蛋白水平正常（＜30 mg/24 h）的2型糖尿病患者作为DM组,健康体检者作为对照组,检测各组对象肠道菌群多样性指标Ace指数、Simpson指数、Chao1指数、Shannon指数及肠道菌群门水平的组成,根据2型DN组患者前后2次入院时尿白蛋白水平的变划分为白蛋白尿短期进展和未进展,分析2型DN患者肠道菌群特征与病情及白蛋白尿短期进展的关系。

DN组患者的肠道菌群Ace指数、Simpson指数及厚壁菌门占比均低于DM组和对照组,拟杆菌门占比高于DM组和对照组（均P＜0.05）,Chao1指数、Shannon指数以及放线菌门、变形菌门占比与DM组、对照组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）;DN组中大量白蛋白尿患者的Ace指数、Simpson指数及厚壁菌门占比低于微量白蛋白尿患者,拟杆菌门占比高于微量白蛋白尿患者（均P＜0.05）;DN组中白蛋白尿短期进展患者的Ace指数、Simpson指数及厚壁菌门占比低于未进展患者,拟杆菌门占比高于未进展患者（均P＜0.05）;DN组患者的Ace指数、Simpson指数以及厚壁菌门占比、拟杆菌门占比均对白蛋白尿短期进展具有预测价值。

2型DN患者肠道菌群的多样性降低、厚壁菌门减少及拟杆菌门增多,肠道菌群的变化与病情加重和白蛋白尿短期进展有关。

     

变应性鼻炎患者肠道微生态变化及其与T淋巴细胞亚群的关系

探讨变应性鼻炎患者肠道微生态变化及其与T淋巴细胞亚群的关系。

回顾性分析2019年4月至2020年4月医院收治的64例变应性鼻炎患者的资料, 记为A组; 另回顾性分析同期在该院体检的58例健康者的资料, 记为B组。对比A组和B组研究对象肠道菌群多样性和丰富度的变化, 对比A组和B组研究对象血清T淋巴细胞亚群水平, 分析变应性鼻炎患者肠道菌群相对丰度与血清T淋巴细胞亚群水平的相关性。

A组研究对象肠道菌群Chao1指数和Shannon指数均低于B组(P < 0.05), A组肠道菌群门水平拟杆菌门、变形菌门、厚壁菌门的相对丰度均高于B组(P < 0.05), 放线菌门的相对丰度低于B组(P < 0.05), 属水平毛螺菌属、链球菌属的相对丰度均高于B组(P < 0.05), 肠球菌属、双歧杆菌属、棒状杆菌属的相对丰度均低于B组(P < 0.05)。主成分分析显示2组菌群样品均能明显分开, 横纵坐标的贡献率分别为48.9%和16.7%, 两坐标轴总共解释了不同细菌群落差异的65.6%, 2组群落结构差异明显(P < 0.05)。A组CD3⁺比例、CD4⁺比例和CD4⁺/CD8⁺比值高于B组(P < 0.05), CD8⁺比例低于B组(P < 0.05);采用Pearson相关性检验, 变应性鼻炎患者肠道菌群门水平拟杆菌门、变形菌门和厚壁菌门的相对丰度分别与CD3⁺、CD4⁺比例和CD4⁺/CD8⁺比值呈正相关(P < 0.05), 分别与CD8⁺比例呈负相关(P < 0.05), 放线菌门的相对丰度分别与CD3⁺、CD4⁺比例和CD4⁺/CD8⁺比值呈负相关(P < 0.05), 与CD8⁺比例呈正相关(P < 0.05);属水平毛螺菌属和链球菌属的相对丰度分别与CD3⁺、CD4⁺比例和CD4⁺/CD8⁺比值呈正相关(P < 0.05), 分别与CD8⁺比例呈负相关(P < 0.05), 肠球菌属、双歧杆菌属和棒状杆菌属的相对丰度分别与CD3⁺、CD4⁺比例和CD4⁺/CD8⁺比值呈负相关(P < 0.05), 分别与CD8⁺比例呈正相关(P < 0.05)。

变应性鼻炎患者肠道菌群多样性降低, 门、属水平菌群比例均发生改变, 菌群结构差异明显, 血清CD3⁺、CD4⁺水平和CD4⁺/CD8⁺比值升高, CD8⁺水平降低, 变应性鼻炎患者肠道菌群相对丰度与血清T淋巴细胞亚群水平相关。

     

枳术丸汤剂中枳实不同剂量配伍对慢传输型便秘小鼠肠道菌群多样性的影响

基于攻补兼施法探讨在大剂量生白术的配伍下不同枳实剂量配伍的作用及枳术丸（ZZW）对慢传输型便秘（STC）小鼠肠道菌群的影响。

将65只SPF级别昆明（KM）小鼠随机分为空白对照组10只与模型组50只,空白对照组正常喂养,模型组使用番泻叶0.8 g/kg灌胃7 d,制成脾虚模型后禁食禁水,隔天喂食生大米,饮水0.5 h,连续8 d建立脾虚便秘模型。15 d后将模型组随机分为5组,每组10只,即模型组、西药组、ZZW低剂量组、ZZW中剂量组、ZZW高剂量组。ZZW低、中、高剂量分别为9.7 g/kg、11.6 g/kg、13.7 g/kg,西药组给予莫沙必利2.5 mg/kg。空白对照组和模型组灌胃同等量蒸馏水。治疗1周后收集肠道内容物,行16S rRNA测序,取结肠组织HE染色行病理形态学观察。

ZZW高剂量组能够显著提高肠道推进率（P＜0.05）。结肠切片肉眼观察发现小鼠结肠组织黏膜光滑,未见充血、糜烂及器质性损伤。HE病理学检查结果显示,模型组存在轻微水肿,腺体不齐现象,其余各组小鼠结肠黏膜无变薄、固有层炎症浸润,结肠腺体形态正常。16S rRNA测序结果显示,STC小鼠肠道菌群物种丰富度和均匀度显著下降（P＜0.05）,菌群多样性升高（P＜0.01）。门水平上,与空白对照组比较,模型组拟杆菌门相对丰度升高、厚壁菌门相对丰度降低,但差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组比较,ZZW低剂量组较模型组拟杆菌门相对丰度显著降低（P＜0.01）,厚壁菌门、变形菌门相对丰度升高（P＜0.05）,ZZW高剂量组较模型组拟杆菌门相对丰度降低（P＜0.05）,厚壁菌门相对丰度升高（P＜0.05）。属水平上,模型组较空白对照组Prevotellamassilia、葡萄球菌属、拟杆菌属、丁酸弧菌属相对丰度升高（P＜0.05）,螺杆菌属、另枝菌属相对丰度显著降低（P＜0.01）,经治疗后ZZW低剂量组Prevotellamassilia、葡萄球菌属、拟杆菌属相对丰度降低（P＜0.05）,ZZW中剂量组丁酸弧菌属相对丰度降低（P＜0.05）;ZZW高剂量组Prevotellamassilia、葡萄球菌属相对丰度显著降低（P＜0.01）。此外,与模型组比较,ZZW低剂量组狄氏副拟杆菌属相对丰度降低（P＜0.05）。

攻补兼施代表方ZZW能明显缓解STC小鼠便秘症状,以ZZW高剂量组效果最佳,但治疗效果与枳实剂量不存在量效关系,其治疗机制可能与ZZW水煎液调整菌群丰度、多样性及菌群物种数目,恢复正常肠道生态环境有关。

     

基于肠道菌群研究枳术丸治疗脾虚证慢传输型便秘的作用机制

观察枳术丸对脾虚证慢传输型便秘（slow transit constipation,STC）小鼠肠道菌群、短链脂肪酸（SCFAs）、5-羟色胺（5-HT）和肠道传输功能的影响,探讨枳术丸治疗STC的机制。

将50只健康的KM小鼠按随机数字表法分为正常组（15只）和造模组（35只）,正常组小鼠基础饲料喂养,造模组小鼠以番泻叶灌胃和限制饮食饮水方法制作脾虚证STC小鼠模型。造模成功后,将造模组小鼠分为模型组、莫沙必利组和枳术丸组,每组10只,对应给药治疗7 d。治疗结束后分别采用16S rRNA基因测序技术分析小鼠粪便菌群多样性和菌群结构,气相色谱/质谱法检测粪便中SCFAs水平,HE染色观察各组小鼠结肠组织病理形态改变,使用ELISA法检测小鼠脑组织、结肠组织中5-HT水平。

造模后,各造模组小鼠体质量显著低于正常组（均P＜0.01）;治疗结束后,模型组小鼠体质量和肠道推进率显著低于正常组（均P＜0.01）;与模型组比较,莫沙必利组和枳术丸组小鼠体质量和肠道推进率升高（均P＜0.05）。小鼠结肠组织HE病理显示模型组腺体排列不齐,结肠黏膜轻微水肿、充血,轻度炎症浸润。与正常组比较,模型组小鼠肠道菌群丰富度和多样性皆降低,枳术丸组和莫沙必利组小鼠肠道菌群多样性和丰富度更趋近于正常组。在门分类水平上,与正常组比较,模型组小鼠厚壁菌门、疣微菌门相对丰度降低,拟杆菌门、变形菌门相对丰度增加;与模型组比较,枳术丸组小鼠疣微菌门相对丰度增加,拟杆菌门相对丰度降低。在属分类水平上,与正常组比较,模型组小鼠拟杆菌属、乳杆菌属相对丰度增加,异形藻属、梭菌属、另枝菌属相对丰度降低;与模型组比较,枳术丸组小鼠拟杆菌属相对丰度降低,异形藻属、梭菌属相对丰度增加。与正常组比较,模型组小鼠粪便乙酸、丙酸水平降低（均P＜0.05）,结肠组织、脑组织5-HT水平降低（均P＜0.05）;与模型组小鼠比较,枳术丸组小鼠粪便乙酸、丙酸水平显著升高（均P＜0.01）,结肠组织、脑组织5-HT水平升高（均P＜0.05）。

枳术丸可通过调节肠道菌群的平衡,促进SCFAs的分泌和5-HT的分泌释放,提高推进率,促进肠道蠕动治疗脾虚证STC。

     

小儿支原体肺炎合并气道黏液栓形成的气道微生物菌群变化

研究支原体肺炎（MPP）合并气道黏液栓的患儿气道微生物菌群的变化。

选取2018年1月至2020年1月在我院诊治的116例MPP患儿为研究对象。根据支气管镜检查结果,将56例合并气道黏液栓的MMP患儿纳入MPP合并黏液栓组,60例无气道黏液栓的MPP患儿纳入单纯MPP组。用16S rRNA测序技术分析各组患儿支气管灌洗液中气道菌群的组成,比较各组气道微生物菌群分布差异,采用Pearson相关性分析探讨MPP合并黏液栓组菌属与临床参数的相关性。

单纯MPP组和MPP合并黏液栓组的优势菌门是软壁菌门、拟杆菌门、厚壁菌门。MPP合并黏液栓组软壁菌门和变形菌门相对丰度显著高于单纯MPP组（P = 0.012、0.001）,两组的拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门和梭杆菌门相对丰度间差异无统计学意义（P＞0.05）。单纯MPP组和MPP合并黏液栓组的优势菌属包括支原体属、放线菌属、鞘氨醇单胞菌属、苯杆菌属、伊丽莎白菌属、普氏菌属、链球菌属和韦荣球菌属。相比于单纯MPP组,MPP 组合并黏液栓组支原体属、放线菌属的相对丰度较高（P＜0.001）,鞘氨醇单胞菌属和伊丽莎白菌属相对丰度较低（P＜0.001）。单纯MPP组和MPP合并黏液栓组的苯杆菌属、普氏菌属、链球菌属和韦荣球菌属的相对丰度差异无统计学意义（P＞0.05）。相比于单纯MPP组,MPP合并黏液栓组菌群多样性及相对丰度差异不具有统计学意义（P＞0.05）。MPP合并黏液栓组链球菌属的相对丰度与患儿年龄呈显著负相关（r = −0.524,P = 0.014）,和发热时间呈显著正相关性（r = 0.684,P = 0.002）。

MPP合并气道黏液栓患儿气道菌群的变化可能是气道黏液栓形成的重要因素,MPP合并气道黏液栓患儿链球菌属的相对丰度与患儿年龄呈负相关,与发热时间呈正相关,值得临床深入研究。

     

基于16S rDNA测序的自身免疫性甲状腺疾病患者肠道菌群研究

探讨Graves病患者、桥本甲状腺炎患者及健康人的肠道菌群结构、多样性和丰度差异。

选取2020年8月至2020年12月于湖北省中医院甲状腺疾病诊疗中心就诊的新诊断且未经治疗的Graves病患者（GD组）、桥本甲状腺炎患者（HT组）各15例以及15例年龄、性别相匹配的健康受试者（健康对照组）。采集参与者粪便样本,采用16S rDNA高通量测序法分析肠道菌群,比较各组对象肠道菌群物种组成及丰度差异。

与健康对照组相比,GD组患者肠道菌群Sobs指数、Ace指数、Chao指数偏低,Coverage指数偏高（均P＜0.05）。GD组与HT组以及HT组与健康对照组比较,其肠道菌群Sobs指数、Ace指数、Chao指数、Coverage指数差异均无统计学意义（均P＞0.05）。3组对象肠道优势菌门为拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门、梭杆菌门。瘤胃球菌属、罗斯伯里菌属、罗姆布茨菌属、链球菌属等在3组对象中差异均有统计学意义（均P＜0.05）,其中GD组患者肠道乳杆菌目、链球菌属、链球菌科的相对丰度较高;HT组患者肠道瘤胃球菌属、消化链球菌科、消化链球菌—蒂氏菌目、罗姆布茨菌、梭菌科、严格厌氧梭状芽胞杆菌1、梭菌目的相对丰度较高;而罗斯伯里菌属、光冈菌属在健康对照组中丰度较高。GD组患者肠道中严格厌氧梭状芽胞杆菌1、Odoribacter、Phocea丰度低于HT组,而Streptococcus的丰度高于HT组（均P＜0.05）。

Graves病患者、桥本甲状腺炎患者的肠道菌群与健康人群有显著差异,促进脂肪累积与能量吸收的菌群在Graves病患者中降低,而条件致病菌在自身免疫性甲状腺疾病患者中丰度增加,这些菌种变化可能通过破坏肠道稳态,干预免疫调节,促进炎症反应介导自身免疫性甲状腺疾病的发病。严格厌氧梭状芽胞杆菌1、Odoribacter、Phocea、链球菌属可能是Graves病和桥本甲状腺炎的关键差异菌属,但还需要进一步的研究以明确这些菌株介导疾病的机制。

     

首发抑郁症患者肠道菌群特征及其与健康人群肠道菌群结构的差异

比较首发抑郁症患者与健康人群肠道菌群的差异,探讨抑郁症患者肠道菌群和抑郁症状间的关系,为抑郁症的发病机制研究及治疗提供一定的理论依据。

选择2019年10月至2020年9月我院收治的首发抑郁症患者及健康人群为研究对象,分为抑郁组（n = 23）和健康组（n = 31）。对研究对象肠道菌群16S rRNA基因中V4−V5区域片段进行基因测序,使用汉密尔顿抑郁量表对两组对象抑郁症状进行评估。检测两组对象肠道菌群α多样性、β多样性和组间差异。

首发抑郁症患者与健康人群肠道菌群多样性差异无统计学意义（均P＞0.05）。两组对象肠道拟杆菌门和拟杆菌纲的相对丰度差异有统计学意义（均P＜0.05）。两组对象芽胞杆菌目等的相对丰度差异有统计学意义（P＜0.05）。在属水平和种水平上,两组对象分别有28个菌属和40个菌种的丰度差异有统计学意义（均P＜0.05）。LEfSe分析显示,拟杆菌科、艾克曼菌科等10种菌科是造成两组对象肠道菌群差异的主要细菌。

首发抑郁症患者与健康人群肠道菌群多样性未发现显著差异,但抑郁症患者肠道菌群结构与健康人群相比发生了改变,主要体现在拟杆菌属等细菌在抑郁症患者肠道中的相对丰度显著上升。

     

基于16S rDNA技术研究隔药饼灸对高脂血症兔肠道菌群属水平的影响

研究隔药饼灸对高脂血症兔属水平肠道菌群的作用,筛选相关菌属。

将24只兔按随机数表法分为正常组、模型组和隔药饼灸组,每组8只;干预12周后,观察TC、TG、LDL-C水平的变化,采用16S rDNA高通量测序技术分析属水平菌落差异。

与模型组比较,隔药饼灸组兔血清LDL-C、TG、TC水平均下降（均P＜0.05）。隔药饼灸组肠道菌群结构发生改善,un_f_Muribaculaceae、un_o_Gastranaerophilales、瘤胃球菌科UCG-014属、阿克曼菌属相对丰度均显著提高（均P＜0.05）,毛螺菌属NK4A136、瘤胃梭菌属6、拟杆菌属相对丰度均降低（均P＜0.05）。

隔药饼灸能改善异常血脂及调整菌群结构,可能与上调un_f_Muribaculaceae、un_o_Gastranaerophilales、瘤胃球菌科UCG-014属、阿克曼菌属相对丰度,降低毛螺菌属NK4A136、瘤胃梭菌属6、拟杆菌属相对丰度有关。

     

妊娠期糖尿病孕妇肠道菌群变化及其与血糖的相关性——

利用16S rDNA高通量测序技术,研究妊娠期糖尿病（GDM）孕妇的肠道菌群变化及与血糖的相关性。

2020年9月—2021年3月,选取在温州市人民医院定期产前检查并分娩的孕妇44例,根据妊娠24~28周口服75 g葡萄糖耐量试验结果分为妊娠期糖尿病组（22例）及正常对照组（22例）,收集孕妇的一般资料。通过Illumina Miseq平台对受试者粪便细菌DNA进行16S rDNA测序,比较两组肠道菌群的结构、丰度及多样性。

肠道菌群ɑ−多样性分析结果显示,GDM组孕妇Chao1、Shannon、Ace、Coverage指数与正常对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。两组孕妇肠道菌群的共同优势菌群为厚壁菌门和拟杆菌门,GDM组弯曲杆菌门比例高于对照组（P＜0.05）。LEfSe分析结果显示两组丰度有显著差异的物种共有28种,其中24种在GDM组中富集,4种在正常对照组中富集。通过Bray-Curtis dbRDA分析发现,肠道菌群结构与75 g OGTT 0 h血糖及75 g OGTT 1 h血糖呈负相关（P＜0.05）。采用Spearman相关性分析评估两组肠道菌群与OGTT血糖值的相关性,发现瘤胃球菌属、链球菌属、丁酸球菌属与OGTT 0 h血糖呈负相关（P＜0.05）;小杆菌属、布劳特菌属、Monoglobus与OGTT 1 h血糖呈负相关（P＜0.05）;毛螺旋菌属、普雷沃菌属与OGTT 2 h血糖呈负相关（P＜0.05）。

16S rDNA高通量测序有助于分析GDM孕妇肠道菌群的丰度及多样性,为研究GDM孕妇肠道菌群结构的特点及与血糖的相关性提供新的思路和理论依据。