肠道微生物与2型糖尿病患者T淋巴细胞亚群和炎症因子水平的相关性

探究肠道微生物与2型糖尿病（T2DM）患者T淋巴细胞亚群和炎症因子水平的相关性。

选择2019年4月到2022年4月我院收治的94例T2DM患者作为T2DM组,另选体检健康者81例作为对照组,采集所有受试者外周血及粪便样本,检测空腹血糖（FPG）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、空腹胰岛素（FINS）、炎症因子IL-6、hs-CRP水平、T淋巴细胞亚群（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺）水平和主要肠道菌群丰度,分析主要肠道菌群变化与CD4⁺/CD8⁺、IL-6、hs-CRP的关系。

治疗后T2DM组FBG、FINS、HOMA-IR、IL-6、hs-CRP水平均高于对照组（P＜0.05）,T2DM组CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺及CD4⁺/CD8⁺比值均低于对照组（P＜0.05）。T2DM组肠道双歧杆菌、乳酸杆菌数量、B/E值低于对照组,大肠杆菌、肠球菌数量高于对照组（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示：T2DM患者双歧杆菌、乳酸杆菌、B/E值与IL-6、hs-CRP水平呈负相关,与CD4⁺/CD8⁺比值呈正相关（P＜0.05）;大肠杆菌、肠球菌数量与IL-6、hs-CRP水平呈正相关,与CD4⁺/CD8⁺比值呈负相关（P＜0.05）。

T2DM患者肠道菌群失调、定植力受损,这可能与其能引发患者CD4⁺/CD8⁺水平降低和炎症因子IL-6、hs-CRP水平升高有关。

     

细菌性阴道炎合并HPV16感染患者阴道菌群分布与局部免疫的关系

探究细菌性阴道炎（BV）合并人乳头瘤病毒16（HPV16）感染患者阴道菌群分布与局部免疫的关系。

选取2019年1月到2023年1月我院收治的83例BV合并HPV16感染患者和81例单纯BV患者,分别作为研究组和对照组,检测两组患者阴道菌群分布和宫颈阴道分泌物中T淋巴细胞亚群（CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺）和炎症因子（IL-1β、IFN-γ、IL-2）水平。

研究组乳酸杆菌数量低于对照组,加德纳菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白假丝酵母菌数量高于对照组（P＜0.05）;研究组阴道菌群密集度Ⅲ+Ⅳ级、多样性Ⅱ+Ⅲ级、微生态失调比例均高于对照组（P＜0.05）;研究组宫颈CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺比值低于对照组（P＜0.05）;研究组宫颈IL-1β、IFN-γ、IL-2水平低于对照组（P＜0.05）。

合并HPV16感染可使BV患者阴道乳酸杆菌数量减少,阴道微生态失衡,局部免疫功能下降,应尽早检测此类患者阴道菌群和宫颈阴道局部免疫情况,进行针对性干预。

     

微生态制剂对慢性支气管炎的临床疗效和对患者免疫功能的影响

探究微生态制剂对慢性支气管炎的临床疗效和对患者免疫功能的影响。

选择2019年6月至2022年6月我院呼吸内科收治的86例慢性支气管炎患者为研究对象,按照随机分配的原则分为对照组和观察组。对照组患者接受常规治疗,包括平喘药物、抗炎药物和止咳药物;观察组患者在常规治疗的基础上使用微生态制剂进行治疗。比较两组患者治疗后的临床疗效、临床症状持续时间以及相关免疫指标（IL-8、TNF-α、CD4⁺细胞、CRP）水平。

与对照组相比,观察组患者的住院时间、喘息、咳嗽、肺部喘鸣音持续时间显著短于对照组（均P＜0.05）。观察组患者的治疗有效率达95.35%,显著高于对照组的81.40%（P＜0.05）。与治疗前相比,治疗后两组患者IL-8、TNF-α、CRP水平均显著降低,且观察组上述指标水平均低于对照组（均P＜0.05）。

微生态制剂可有效治疗慢性支气管炎,提高临床疗效,改善患者的免疫功能。

     

鼠李糖乳酪杆菌RH0121冻干工艺优化及降血糖作用的研究

优化鼠李糖乳酪杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）RH0121的冻干工艺,探究其辅助降血糖作用。

通过单因素试验和响应面试验,优化鼠李糖乳酪杆菌RH0121冻干粉的生产工艺;同时利用小鼠实验,探究服用冻干粉后小鼠的体质量、口服葡萄糖耐量和血清生化指标水平的变化。

优化后的工艺为发酵时间9 h,发酵温度37 ℃,接种量4%,冻干时间50 h。经验证,冻干粉活菌数为5.5×10¹¹ CFU/g。灌胃冻干粉样品后的小鼠体质量缓慢回升,小鼠灌胃后120 min血糖水平低于灌胃前（P＜0.05）。灌胃后,样品组小鼠血清TC、TG、LDL和TNF-α水平均低于模型组,INS水平高于模型组（均P＜0.05）。

鼠李糖乳酪杆菌RH0121具有辅助降血糖作用,可为开发其他降血糖产品提供原料。

     

非头颈部恶性肿瘤并发放射性口腔黏膜炎患者口腔菌群和细胞免疫功能变化

探讨非头颈部恶性肿瘤并发放射性口腔黏膜炎（ROM）患者口腔菌群和细胞免疫功能的变化。

选择2020年1月至2022年3月在我院口腔科接受放化疗治疗的非头颈部恶性肿瘤并发ROM患者30例为ROM组,选择在同期接受放化疗治疗但未发生ROM的30例患者为非ROM组。将1～2级ROM患者纳入轻症组,将3～4级ROM患者纳入重症组。患者均在放化疗治疗结束当天禁食禁水,静卧于床上,使用一次性无菌棉签采集口腔、软腭、硬腭、两侧颊黏膜等部位黏膜样本。采用Illumina测序仪进行16S rRNA基因测序,使用贝叶斯算法对OTU在各个分类水平上的群落组成进行统计。采用流式细胞术检测所有研究对象CD4⁺/CD8⁺、B细胞和NK细胞水平。

ROM组和非ROM组患者在性别、年龄、肿瘤分期、肿瘤类型和合并糖尿病方面差异均无统计学意义（均P＞0.05）。相比非ROM组,ROM组患者口腔菌群Chao1指数和Shannon指数均较低,Simpson指数、链球菌属、放线菌属和普雷沃菌属相对丰度均较高（均P＜0.05）。ROM组患者外周血CD4⁺/CD8⁺、B细胞和NK细胞水平均低于非ROM组（均P＜0.05）。重症组患者口腔菌群Chao1指数和Shannon指数均低于轻症组,Simpson指数、链球菌属、放线菌属和普雷沃菌属相对丰度均高于轻症组（均P＜0.05）。重症组患者外周血CD4⁺/CD8⁺、B细胞和NK细胞水平均低于轻症组（均P＜0.05）。

ROM患者口腔菌群多样性表现为Chao1指数和Shannon指数降低,Simpson指数升高,其中链球菌属、放线菌属和普雷沃菌属相对丰度显著变化。此外,ROM患者细胞免疫功能显著降低。

     

低聚果糖对AOM/DSS诱导的结肠炎相关结直肠癌小鼠辅助性T细胞的调控作用

探讨益生元低聚果糖（FOS）对结肠炎相关结直肠癌（CAC）小鼠肠道辅助性T细胞的调节作用。

将6周龄SPF级雄性C57BL6小鼠（体重18～20 g）随机分为对照组、模型组和干预组,每组10只。通过偶氮甲烷、葡聚糖硫酸钠构建CAC小鼠模型,干预组每日使用2 mg/kg b.w. FOS灌胃,持续10周。造模期间监测各组小鼠体重变化,造模结束后测量结肠长度和肿瘤数目。采用微球免疫分析法检测血清Th1/Th2/Th17相关细胞因子水平,流式细胞术分析肠系膜淋巴结内Th1、Th2、Th17细胞亚群比例。

与模型组相比,干预组小鼠结肠长度显著增加（t=3.106,P=0.006 4）,肿瘤数目显著减少（U=15.000,P=0.011 1）,血清中IL-17A（t=3.504,P=0.008 8）、TNF-α（t=2.381,P=0.030 0）等促炎细胞因子水平降低,肠系膜淋巴结Th17细胞比例显著降低（t=6.031,P=0.002 7）,Th1/Th2显著升高（t=2.419,P=0.038 7）。

FOS可调控CAC模型小鼠结肠内辅助性T细胞的分化,抑制肿瘤的发生。

     

肠道菌群与过敏性紫癜性肾炎患儿肾功能及免疫功能的相关性研究

探讨肠道菌群与过敏性紫癜性肾炎患儿肾功能及免疫功能的相关性研究。

选取2021年9月—2023年9月于本院治疗的85例过敏性紫癜性肾炎患儿,标记为研究组。并纳入同期进行健康体检的68例同年龄段健康儿童作为对照组。采集患者空腹静脉血和粪便,采用qRT-PCR法定量分析肠道中大肠杆菌和双歧杆菌的数量,计算双歧杆菌/大肠杆菌（B/E）比值。使用全自动特定蛋白分析系统ARRAY360和流式细胞仪检测IgM、IgG、IgA、外周血CD4⁺ T淋巴细胞和CD8⁺ T淋巴细胞,计算CD4⁺/CD8⁺比值。过敏性紫癜性肾炎患儿肠道菌群与肾功能及免疫功能之间的相关性分析采用Pearson分析。

两组的性别、年龄、体质量指数差异均无统计学意义（P＜0.05）。与对照组相比,研究组大肠杆菌数量增加（P＜0.05）,血肌酐、尿素氮、血清尿酸、IgM、IgG、IgA、CD8⁺ T细胞水平升高（P＜0.05）,但双歧杆菌数量降低（P＜0.05）,B/E比值、CD4⁺ T细胞、CD4⁺/CD8⁺比值显著降低（P＜0.05）。过敏性紫癜性肾炎患儿肠道中的大肠杆菌数量分别与血肌酐、尿素氮、血清尿酸、IgM、IgG、IgA、CD8⁺ T细胞水平呈正相关（P＜0.001）,与CD4⁺ T细胞水平、CD4⁺/CD8⁺比值呈负相关（P＜0.001）;双歧杆菌、B/E比值分别与血肌酐、尿素氮、血清尿酸、IgM、IgG、IgA、CD8⁺ T细胞水平呈负相关（P＜0.001）,与CD4⁺ T细胞、CD4⁺/CD8⁺比值呈正相关（P＜0.001）。

过敏性紫癜性肾炎患儿肠道B/E比值显著降低,并与其肾功能及免疫功能指标存在相关性。

     

红茶对2型糖尿病小鼠肠道菌群分布的影响

探讨红茶对2型糖尿病（T2DM）小鼠肠道菌群分布的影响,为研究红茶在代谢性疾病的辅助治疗机制提供参考。

构建 T2DM小鼠模型,将其随机分为模型组（T2DM组）和茶水饲喂组（T2DM_T组）,取健康小鼠作为对照组（Control组）,每组各15只。实验终点收集3组小鼠粪便进行宏基因组测序,分析组间菌群差异;同时进行肝脏组织形态学检查,观察组织病理学改变。

与Control组和T2DM组相比,T2DM_T组拟杆菌门（F = 21.056,P＜0.001）、邓肯氏菌属（F = 13.330,P = 0.001）、乳杆菌属（F = 36.546,P＜0.001）和粘液乳杆菌属（F = 43.813,P＜0.001）的相对丰度增加,担子菌门（F = 8.676,P = 0.005）、Muribaculum（F = 8.151,P = 0.006）和肠球菌属（F = 4.271,P = 0.040）的相对丰度降低。与T2DM组小鼠相比,T2DM_T组小鼠肝细胞排列较为紧密,细胞空泡变性程度有所减弱。

红茶在一定范围内能调节T2DM模型小鼠肠道菌群结构和相对丰度,红茶水喂饲可减缓造模所致的T2DM小鼠肝脏细胞的损伤,其具体作用机制值得深入研究和探讨。

     

支气管镜下冷冻联合镜下给药治疗溃疡型支气管结核的临床效果

探讨支气管镜下冷冻联合局部镜下注药对溃疡型支气管结核的临床效果,为该病的治疗提供参考。

选取2019年1月至2021年1月大连市公共卫生临床中心结核科收治的溃疡坏死型支气管结核患者80例,根据治疗方案分为对照组（n = 40,给予常规规范抗结核治疗）和研究组（n = 40,在对照组基础上给予支气管镜下冷冻联合局部注药治疗）。观察两组患者治疗4周后疗效、痰菌转阴时间及治疗前和治疗4周后第1秒用力呼气量（FEV1）、白细胞介素-10（IL-10）、C反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）水平及治疗期间不良反应情况。

研究组患者总有效率高于对照组,痰菌转阴时间短于对照组（均P＜0.05）,但两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义（15.0% vs 12.5%,P＞0.05）。两组患者治疗后FEV1水平较治疗前上升,IL-10、CRP、ESR水平较治疗前下降,研究组患者上述指标水平治疗前后差值大于对照组（均P＜0.05）。

支气管镜下冷冻联合局部镜下注药对溃疡型支气管结核的疗效较好,可抑制机体炎症介质的释放,缩短痰菌转阴时间,安全性较高。

     

约氏乳杆菌GLJO02通过改善肠道通透性缓解DSS诱导的小鼠结肠炎

探究约氏乳杆菌GLJO02对DSS诱导的小鼠结肠炎的影响。

从灌胃普洱茶的小鼠粪便中筛选得到益生菌约氏乳杆菌GLJO02。将18只SPF级C57小鼠随机分成3组：Control+PBS组（6只）、DSS+PBS组（6只）及DSS+GLJO02组（6只）,均自由饮用含3% DSS水7 d以建立结肠炎模型,其中DSS+GLJO02组提前1周灌胃GLJO02菌液;造模期间观察小鼠体质量变化情况及粪便性状改变情况;于造模第8天处死小鼠并留取小鼠血清及肠道样品,检测小鼠血清中LPS水平以评估肠道通透性,通过H&E染色评估小鼠结肠病理情况,通过实时荧光定量技术检测小鼠结肠中炎症因子及紧密连接蛋白的表达情况,通过免疫荧光法检测紧密连接蛋白ZO-1及Occludin的表达情况,并通过高效液相色谱法检测小鼠盲肠内容物中短链脂肪酸的含量。

与Control+PBS组相比,DSS+PBS组小鼠体质量显著降低、DAI评分提高同时结肠长度缩短。与DSS+PBS组相比,DSS+GLJO02组小鼠症状缓解,体质量下降显著改善（t = 6.948,P＜0.000 1）,结肠长度提高（t = 3.790,P = 0.003 4）,DAI评分显著降低（t = 11.880,P＜0.000 1）;组织病理学评分显著下降（t = 10.410,P = 0.000 1）;促炎症因子表达水平降低;免疫荧光检测结果显示ZO-1、Occludin蛋白表达增多;应用高效液相色谱法发现GLJO02处理后能够显著提升盲肠中短链脂肪酸的含量（乙酸：t = 4.042,P = 0.005 4;丙酸：t = 12.380,P＜0.000 1;丁酸：t = 7.819,P＜0.000 1）。

约氏乳杆菌GLJO02能够通过改善肠道通透性,起到缓解DSS诱导的结肠炎的作用。

     

芒果苷通过PI3K/Akt/mTOR通路抑制缺氧缺血性脑损伤大鼠神经细胞凋亡及炎症反应

目的:探讨芒果苷抑制缺氧缺血性脑损伤大鼠神经细胞凋亡的机制。方法:将144只SD新生大鼠分为空白组、模型对照组、阳性对照组(尼莫地平,0.4 mg·kg~(-1)·d~(-1))、芒果苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg~(-1)·d~(-1))。检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)水平、细胞凋亡率、PI3K/Akt/mTOR通路分子表达量。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠脑组织中SOD的含量显著降低、细胞凋亡率显著增加,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达量显著减少(P0.05);与模型组比较,芒果苷低、中、高剂量组大鼠脑组织中SOD的含量显著增加,细胞凋亡率均显著减少,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达量显著增加且芒果苷剂量越大,上述变化越显著(P0.05)。结论:芒果苷对缺氧缺血性脑损伤大鼠的细胞凋亡及炎症反应具有抑制作用且该抑制作用与抑制PI3K/Akt/mTOR通路有关。     

蜂毒素通过下调F2RL1表达从而遏制胶质瘤细胞荷瘤小鼠肿瘤增殖的机制

摘要 目的：探讨蜂毒素通过下调F2RL1表达从而遏制胶质瘤细胞荷瘤小鼠肿瘤增殖的机制。方法：40只雄性 NOD/SCID小鼠（5周龄,15-18 g）购自北京维塔河实验动物技术公司。实验前,让小鼠适应环境一周。NOD/SCID 小鼠在右侧海马体中注射了2×10⁵ U87-MG细胞建立异种移植模型。当肿瘤体积增长到100 mm³时,将小鼠随机分为模型组（空腹注射生理盐水）和蜂毒素组（腹腔注射5 mg/kg 蜂毒素）,每组20只小鼠。在第5天(注射的第5天)、第10天、第15天每次处死5只小鼠,通过实时PCR分析小鼠肿瘤组织中F2RL1、Bcl-2、Bax和Capase-3的mRNA表达。使用卡尺测量荷瘤小鼠肿瘤体积,使用电子天平对肿瘤组织进行称重测量。通过蛋白印迹分析肿瘤组织中p-PI3K、p-AKT 和p-mTOR的蛋白表达。通过TUNEL染色检测人脑肿瘤中凋亡细胞的百分比。结果：蜂毒素组F2RL1 mRNA表达较模型组降低（P<0.05）,蜂毒素抑制F2RL1 mRNA表达。第5 d、10 d和15 d测得肿瘤体积发现蜂毒素肿瘤体积较模型组减小（P<0.05）。第5 d、10 d和15 d测得肿瘤体积发现蜂毒素肿瘤重量较模型组减轻（P<0.05）。蜂毒素组p-PI3K、p-AKT 和p-mTOR的蛋白表达较模型组降低（P<0.05）。蜂毒素组Bax和Capase-3的mRNA表达较模型组降低（P<0.05）,蜂毒素组Bcl-2 mRNA表达较模型组升高（P<0.05）。蜂毒素组TUNEL阳性细胞的百分比较较模型组升高（P<0.05）。结论：蜂毒素通过下调肿瘤小鼠体内F2RL1表达抑制PI3K/AKT信号通路激活,促进了体内肿瘤细胞凋亡,从而有效抑制经胶质瘤细胞的生长、增殖。     

Plumbagin inhibits proliferation and promotes apoptosis of ovarian granulosa cells in polycystic ovary syndrome by inactivating PI3K/Akt/mTOR pathway

ABSTRACT

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is recognized as a general endocrine disease and reproductive disorder. Although evidence indicates that PCOS has a complex etiology and genetic basis, the pathogenic mechanisms and signal pathway in PCOS remain unclear. In this study, the normal structure of follicle and corpus luteum were observed, and no cyst nor hyperemia was observed under the light microscopic study with hematoxylin and eosin (H&E) staining. Eestosterone and progesterone were evaluated by radioimmunoassay in rat serum. The alterations of proliferative ability and cell cycle distribution of each group were assessed by Cell Counting Kit-8 (CCK8) assay and flow cytometry. The protein expression of p-mTOR/mTOR, p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT, and GAPDH were analyzed by western blotting. Both doses of PLB could benefit the ovarian morphology and polycystic property. PLBinduced a suppress effect on the proliferation of rat ovarian granulosa cells. In addition, PLB also induced concentration-dependent apoptosis in rat ovarian granulosa cells. The rat ovarian granulosa cells treated with PLB that the expression levels of p-AKT, p-mTOR, and p-PI3K were significantly decreased in a concentration-dependent manner. PLB not only plays a critical role in attenuating the pathology and polycystic property changes in the ovary but can also induce rat ovarian granulosa cell apoptosis through the PI3K/Akt/mTOR signal pathway. This study showed the innovative role of PLB in the pathogenesis of PCOS and provides a new therapeutic modality for the treatment of PCOS.     

B型钠尿肽对急性心肌缺血损伤发挥保护作用的机制

本研究旨在研究B型钠尿肽(brain natriuretic peptide, BNP)对异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)诱导的急性心肌缺血(acute myocardial ischemia, AMI)相关损伤的保护作用。将大鼠随机分作5组:对照组、ISO处理组、ISO+普萘洛尔(5 mg/kg)处理组、ISO+BNP (5 mg/kg)和ISO+BNP (10 mg/kg)处理组。再将4个给药组中的大鼠连续2 d皮下注射ISO。通过心电图(ECG)记录ST段数据;ELISA检测血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)和IL-1β的表达水平;接着使用Western blotting对Bax-2、Bcl-2、PI3K、Akt、GSK-3β、MDA5和SOD1蛋白表达水平进行检测,并测定PI3K、Akt和GSK-3β的磷酸化。实验结果显示,BNP (5 mg/kg, 10 mg/kg)可降低血清中MDA和CK的表达水平以及SOD和LDH的蛋白活性;经BNP预处理显著降低了促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;同时BNP也降低了ST段抬高。此外,BNP改善了ISO诱导的大鼠中SOD1、MDA5、Bax-2、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt和p-GSK-3β的表达。综上所述,通过调节PI3K/Akt/GSK-3β信号传导途径,BNP保护大鼠免受AMI损伤。     

Inactivation of CD4+ CD25+ regulatory T cells during early mycobacterial infection increases cytokine production but does not affect pathogen load

Mycobacterium tuberculosis uses numerous mechanisms to avoid elimination by the infected host. In this study, we investigated the possibility whether, similar to other pathogens, M. tuberculosis exploits natural CD4+ CD25+ T-regulatory cells (Treg) to suppress the effector function of responding host lymphocytes, thus enhancing its survival. During a Mycobacterium bovis bacille calmette guerin (BCG) pulmonary infection, we observed a 2.8-fold increase in forkhead box P3 (Foxp3+) CD25+ Treg in the lung. To inactivate the Treg in vivo, an mAb was given against CD25 (PC61) 3 days before a pulmonary infection with BCG or M. tuberculosis. Following PC61 treatment, we observed significantly decreased CD25 expression on CD4+ T lymphocytes for at least 23 days in the blood, spleen and lung when compared with the control mice. To determine whether Treg inactivation affected the protective antimycobacterial immune response, we measured cytokine production by flow cytometry. We observed small, but significant increases in the percentages of both IFN-gamma-producing and IL-2-producing CD4+ cells from the spleen and the IL-2-producing CD4+ cells from the lungs of PC61-treated BCG-infected mice compared with the infected control mice. Despite this, there was neither a difference between the lung bacterial burdens of PC61-treated mice and control mice, measured until day 44 postinfection, nor was there an effect on infection-induced lung pathology. Together, these data imply that the absence of natural Treg early after infection results in a small increase in cytokine production, but this does not alter the course of either M. tuberculosis or BCG infections. This contrasts with the important role that natural Treg play in the pathogenesis of many other intracellular infectious organisms.     

Nampt及高糖高胰岛素微环境对人顺铂耐药肺癌细胞株增殖和转移的影响

摘要 目的：探究烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）及高糖高胰岛素（HG+HI）微环境对人顺铂耐药肺癌细胞增殖和转移的影响。方法：将人顺铂耐药细胞株A549/DDP分为6组（n=6）：对照组（control）、高糖高胰岛素干预组（HH，使用添加30 mmol/L的葡萄糖和500 mU/L的胰岛素的培养基培养72 h）、分别转染sh-NC和sh-Nampt组（sh-NC和sh-Nampt，使用Lipofectamine 2000将sh-NC和sh-Nampt分别转染到细胞中，转染时间为48 h）、HH干预sh-NC和sh-Nampt组（HH+sh-NC和HH+sh-Nampt）。每组6个重复样本。qRT-PCR检测转染效率，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell检测细胞迁移和侵袭，qRT-PCR检测Nampt mRNA，Western blot检测Nampt、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果：与对照组和sh-NC组比较，sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，而细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。与对照组和sh-NC组比较，HH组和HH+sh-NC组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P<0.005）。与HH组和HH+sh-NC组比较，HH+sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。结论：高糖高胰岛素微环境可能通过上调Nampt/PI3K/AKT信号通路诱导人顺铂耐药肺癌细胞的增殖和转移。     

象皮生肌膏对肛瘘术后创面修复及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

摘要 目的：探究象皮生肌膏对肛瘘切除术后大鼠创面的治疗作用及其与PI3K/Akt/mTOR信号通路的相关性。方法：将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组,共4组,每组10只。4组均采用0号钢丝制造肛瘘模型,造模成功后,除假手术组外,均在麻醉下行肛瘘切除术,创面保持开放,使之形成"开放、渗血、渗液、有脓性分泌物"的感染性肛瘘术后创面,假手术组保留瘘管,不予换药,模型组予以生理盐水冲洗、络合碘消毒后不予换药,治疗组分别予以相应药物进行创面换药,共10天。10天后采用常规面积检测法比较模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组大鼠肛瘘术后创面的创面愈合率及创面肉芽组织覆盖率;HE染色观察各组大鼠肛周组织病理情况;ELISA检测各组大鼠血清中bFGF、EGF、VEGF的表达水平,WB检测比较各组大鼠肛周肉芽组织中PI3K、Akt、mTOR、p70 S6K、p-PI3K（S473）、p-AKT（S473）、p-mTOR（Ser2448）、p-p70 S6K的蛋白表达水平。结果：与模型组比较,治疗第3、7、10天象皮生肌膏组和湿润烧伤膏组的创面愈合率及创面肉芽组织填充率显著升高（P＜0.01）。病理切片显示,假手术组炎性细胞浸润较少,其余各组均可见不同程度的炎性细胞浸润,且创面区可见不同程度炎性修复型肉芽组织增生、胶原纤维新生及血管扩张;其中模型组病理切片显示大量炎性细胞浸润,血管扩张明显,并有明显的血管出血;象皮生肌膏组病理切片显示炎性细胞较少,成纤维细胞成熟且分布整齐,真皮层内胶原纤维丰富且排列整齐,可见血管新生,无明显血管扩张及出血;湿润烧伤膏组病理切片显示少量炎性细胞浸润及血管扩张,真皮层内可见成纤维细胞生成。ELISA检测结果显示,与假手术组比较,模型组血清中bFGF、EGF、VEGF的含量显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,象皮生肌膏组血清中bFGF、EGF、VEGF的含量显著升高（P＜0.01）,湿润烧伤膏组大鼠血清中EGF、VEGF的含量显著升高（P＜0.01）。WB检测结果显示,与假手术组比较,模型组肛周组织中p-PI3K、p-Akt 、p-mTOR、p-p70 S6K蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,象皮生肌膏组肛周组织中p-PI3K、p-Akt 、p-mTOR、p-p70 S6K蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论：象皮生肌膏能有效促进肛瘘术后创面修复,减轻肛瘘术后创面炎症反应,促进创面肉芽生长,其促愈机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达有关,其通过上调PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而加快创面修复进程。     

Apatinib inhibits the growth of small cell lung cancer via a mechanism mediated by VEGF,PI3K/Akt and Ki-67/CD31

This study aimed to investigate the anti-tumour effect of apatinib on extensive-stage small cell lung cancer (SCLC) and elucidate the associated mechanisms. NCI-H345 cells were selected as model cells because of high expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), VEGF receptor 2 (VEGFR2) and phosphorylated-VEGFR2 (pVEGFR2). Cells were exposed to recombinant human VEGF (rhVEGF) and apatinib. Cells were then divided into eight groups, namely, control, rhVEGF, apatinib, rhVEGF+apatinib, serum-free medium (SM), SM+rhVEGF, SM+apatinib and SM+rhVEGF+apatinib. In comparison with the control group, cell proliferation in vitro in apatinib, SM, SM+apatinib and SM+rhVEGF+apatinib groups was inhibited, particularly in SM+apatinib group. The effect of apatinib on tumour growth in vivo was investigated using a mouse xenograft tumour model. In comparison with the control group, tumour sizes were reduced in apatinib-treated group on days 34 and 37. Immunohistochemical and immunofluorescence staining revealed that VEGF, pVEGFR2, PI3K, AKT, p-ERK1/2, Ki-67 and CD31 in the tumour cells of apatinib-treated group were downregulated compared with control group. Haematoxylin and eosin staining revealed that apatinib promoted the necrosis of SCLC cells in vivo. In conclusion, apatinib inhibited the growth of SCLC cells by downregulating the expression of VEGF, pVEGFR2, p-PI3K, p-AKT, p-ERK1/2, Ki-67 and CD31.     

Passive serum therapy with polyclonal antibodies against Mycobacterium tuberculosis protects against post-chemotherapy relapse of tuberculosis infection in SCID mice

We investigated the protective role of immune-sera against reactivation of Mycobacterium tuberculosis infection in SCID mice and found that passive immunization with sera obtained from mice treated with detoxified M. tuberculosis extracts (delivered in liposomes in a composition known as RUTI) exerted significant protection. Our SCID mouse model consisted of aerosol infection by M. tuberculosis, followed by 3 to 8weeks of chemotherapy with isoniazid+rifampicin (INH+RIF) (25 and 10mg/kg, respectively). After infection and antibiotic administration, two groups of mice were treated for up to 10weeks with intraperitoneal passive immunization using hyperimmune serum (HS) obtained from mice infected with M. tuberculosis, treated with chemotherapy (INH+RIF) for 8weeks and inoculated with RUTI (HS group) or with normal serum (CT group). Significant differences were found between HS and CT groups in the number of bacilli in the lungs (3.68+/-2.02 vs. 5.72+/-1.41log(10) c.f.u.), extent of pulmonary granulomatomous infiltration (10.33+/-0.67 vs. 31.2+/-1.77%), and percentage of animals without pulmonary abscesses (16.7% vs. 45.5%). These data strongly suggest a protective role of specific antibodies against lung dissemination of M. tuberculosis infection.     

氟比洛芬酯对食管癌患者围术期外周血淋巴细胞亚群的影响

目的:探究氟比洛芬酯对食管癌患者围术期外周血淋巴细胞亚群的影响。方法:选择2014年6月~2016年8月期间在我院择期行食管癌根治术患者72例为研究对象,采用随机数字法将其分为氟比洛芬酯组(39例)和对照组(33例),患者均给予常规麻醉处理,对照组患者泵入5 mg托烷司琼与20μg/kg芬太尼;氟比洛芬酯组患者给予氟比洛芬酯2 mg/kg。评价术后12 h、24 h和48 h患者疼痛情况(VAS评分),并于术前1 h、术后24 h、术后72 h检测患者血清T细胞中CD3~+、CD4~+、CD8~+及CD56~+比例。结果:两组患者术后不同时刻VAS评分比较,差异均无统计学意义(P0.05);术后24 h两组患者CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+均显著降低(P0.05),术后72 h两组患者CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平均升高,且氟比洛芬酯组患者恢复到术后1 h水平,而对照组患者均仍低于术后1 h,且术后72 h氟比洛芬酯组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05),而CD8~+与CD56~+比例在两组各个时点均没有变化(P0.05);两组患者均未发生严重不良反应。结论:食管癌患者在手术过程中均出现免疫抑制,氟比洛芬酯麻醉效果较好,且对机体免疫功能具有保护作用,促进手术患者免疫功能的恢复,具有重要的临床价值。