MiR-196a促进人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299侵袭转移的研究

目的:非小细胞肺癌发生、发展的分子机制仍是目前研究的热点与难点,新近研究表明microRNA在肿瘤的发展过程中起着重要的作用.本研究旨在探讨miR-196a在人非小细胞肺癌组织及细胞系中的表达水平,以及抑制miR-196a对非小细胞肺癌细胞侵袭转移能力的影响.方法:通过real-time PCR技术检测人非小细胞肺癌及细胞系中miR-196a的表达水平,通过转染miR-196a inhibitors抑制miR-196a的表达水平,并通过定量PCR检测转染效率.利用transwell实验检测下调miR-196a对NCI-H1299细胞的迁移、侵袭能力的影响.结果:相对于正常肺组织及细胞,在非小细胞肺癌组织和细胞中miR-196a的表达水平出现了显著的上调,NCI-H1299细胞中转染miR-196a inhibitors能显著抑制miR-196a的表达水平且抑制miR-196a的表达能降低NCI-H1299细胞的迁移、侵袭能力.结论:定量PCR结果显示miR-196a在非小细胞肺癌组织及细胞中表达显著上调,而封闭其表达能影响非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭功能,提示miR-196a的表达上调可能在非小细胞肺癌的发生、发展中起着关键的作用,并有可能作为将来非小细胞肺癌诊断、预后的分子靶标.     

HOXD9促进肺癌发生发展的生物学作用及初步机制

摘要 目的：探究同源盒基因HOXD9在H3255、H2170肺癌细胞株中的生物学作用及作用机制。方法：构建HOXD9过表达稳转H3255、H2170肺癌细胞株,通过CCK-8、克隆形成、小鼠皮下瘤实验检测HOXD9对肺癌细胞增殖的影响;利用transwell、基质胶实验检测HOXD9对肺癌细胞迁移及侵袭的影响;采用彗星实验、磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）免疫荧光染色检测HOXD9对肺癌细胞DNA损伤的影响;通过流式细胞术检测HOXD9对肺癌细胞凋亡的影响;通过qRT-PCR、western blot、luciferase、ChIP、rescue实验探究HOXD9在肺癌中促癌的作用机制。结果：CCK-8、克隆形成、小鼠皮下瘤实验显示HOXD9可促进肺癌细胞增殖;transwell实验表明HOXD9可促进肺癌细胞迁移;基质胶实验显示HOXD9可促进肺癌细胞侵袭;彗星实验与γH2AX免疫荧光染色提示HOXD9可抑制肺癌细胞DNA损伤;流式细胞术显示HOXD9可抑制肺癌细胞凋亡。HOXD9可通过转录上调肺癌细胞中增殖细胞核抗原PCNA的表达水平。结论：HOXD9可通过促进PCNA的转录介导肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制肺癌细胞DNA损伤及凋亡。     

lncRNA BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移

目的:研究长链非编码RNA BLACAT1在非小细胞肺癌发生和转移过程中的作用机制。方法:starBase软件分析TCGA数据库中肺腺癌及肺鳞癌与癌旁组织之间BLACAT1表达差异;qRT-PCR检测人非小细胞肺癌细胞A549、HCC827、NCI-H1299、NCI-H23和正常肺上皮细胞BEAS-2B中BLACAT1的转录水平差异,筛选BLACAT1高表达非小细胞肺癌细胞系;CCK-8检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;starBase软件预测BLACAT1作用的miRNA,采用qRT-PCR验证敲低BLACAT1对预测miRNA表达的影响,筛选与BLACAT1相互作用的miRNA,双萤光素酶报告基因实验验证结果;CCK-8检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western印迹检测非小细胞肺癌细胞转移相关基因的蛋白表达水平。结果:肺腺癌及肺鳞癌组织中BLACAT1表达量显著高于癌旁组织;非小细胞肺癌细胞A549的BLACAT1表达量最高;敲低BLACAT1降低A549细胞活力、迁移和侵袭能力;BLACAT1作为海绵吸附miR-374b-5p;敲低BLACAT1增加miR-374b-5p的表达,抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论:BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移。     

IscU2对非小细胞肺癌增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制的研究

该文通过shRNA干扰技术敲低IscU2干扰细胞IscU2的表达,研究了干扰IscU2对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NCI-H520增殖、迁移及侵袭能力的影响。构建了稳定低表达IscU2的非小细胞肺癌细胞系NCI-H520;采用CCK-8和平板克隆实验检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期、凋亡、ROS、线粒体膜电位变化情况;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot检测相关蛋白的表达。结果表明,干扰IscU2后,非小细胞肺癌细胞的增殖及克隆形成能力降低;细胞周期停滞在G1/G0期,同时伴随有p-AKT和Cyclin D1蛋白含量的下降;细胞晚期凋亡率明显增加,凋亡蛋白Cleaved-caspase3和Cleaved-PARP表达上调;细胞迁移和侵袭能力降低,上皮标志物E-Cadherin表达上调,间质标志物N-Cadherin和Snail表达下调;细胞ROS积累和线粒体膜电位下降。该研究结果表明,干扰IscU2显著抑制非小细胞肺癌的增殖、迁移、侵袭能力和上皮–间质转化,这为非小细胞肺癌的诊断和治疗提供了新的潜在靶点和视角。     

LncRNA SPINT1-AS1通过靶向miR-433-3p调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

该研究主要探讨lncRNA SPINT1-AS1对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞H1299增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。选取新疆医科大学附属肿瘤医院2017年3月至2019年3月的30例NSCLC组织及匹配的癌旁组织;体外培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系H1299、Calu-3、Calu-6,将H1299细胞分为NC组、si-NC组、si-SPINT1-AS1组、miR-NC组、miR-433-3p组、si-SPINT1-AS1+anti-miR-NC组、si-SPINT1-AS1+anti-miR-433-3p组。RT-qPCR检测NSCLC组织和细胞中lncRNA SPINT1-AS1和miR-433-3p的表达水平;MTT检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞的迁移和侵袭;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA SPINT1-AS1和miR-433-3p的靶向关系。结果表明与癌旁组织和人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,NSCLC组织和细胞系中lncRNA SPINT1-AS...     

KEAP1基因及其突变位点对非小细胞肺癌细胞株作用的实验初步研究

摘要 目的：研究KEAP1基因及KEAP1基因突变位点对肺癌细胞株的作用。方法：通过Western blot 方法,比较携带KEAP1 基因突变的肺癌细胞株（A549,NCI-H460,NCI-H838）与KEAP1 基因野生型的肺癌细胞株（NCI-H292, NCI-H1299, 95D, SPC-A1）之间,NRF2基因与NRF2下游基因HO-1的蛋白表达水平,检测并比较两组细胞的活性氧（ROS）含量;以新发现的非小细胞肺癌（NSCLC）病人的 KEAP1 体细胞突变作为模板构建 KEAP1 突变质粒,对自身存在 KEAP1 突变的肺癌细胞株A549,通过改造的 pMSCV 逆病毒转染体系,分别构建过表达空载,野生型及突变型 KEAP1 的 A549 稳定细胞株,比较过表达不同质粒的细胞间丙二醛（MDA）含量及 NRF2 下游抗氧化等相关基因的表达水平;通过克隆形成实验检测细胞增殖情况。结果：KEAP1基因突变组肺癌细胞株与KEAP1基因无突变的对照组细胞株相比,NRF2和HO-1蛋白表达显著增高,活性氧水平显著降低（P<0.01）;过表达野生型KEAP1 与过表达空载的 A549细胞相比,NRF2 及其下游基因转录水平表达显著下降（P<0.01）,蛋白水平表达下降,细胞内丙二醛水平显著增高（P<0.01）,克隆形成率显著降低（P<0.01）,而过表达突变型 KEAP1 与过表达空载的 A549细胞相比,NRF2 及其下游基因表达、细胞内丙二醛水平、克隆形成率均无显著差异（P>0.05）。结论：KEAP1基因具有抑癌作用,其突变为失活型突变,突变后KEAP1/NRF2通路激活,KEAP1基因突变可能通过改变细胞的氧化应激水平,促进肺癌的发生发展。     

白藜芦醇通过下调MEK/ERK/c-Jun信号通路抑制H2O2诱导的肺癌细胞增殖

目的:探讨白藜芦醇(Res)是否通过下调ERK激酶/胞外信号调节激酶/原癌基因(MEK/ERK/c-Jun)信号通路抑制小剂量过氧化氢(H2O2)诱导肺癌细胞增殖。方法:采用MTS实验检测小剂量20μM H2O2以及分别加入MEK阻断剂U0126和Res后H2O2对肺癌细胞NCI-H1395增殖的影响,采用Western Blot检测H2O2对ERK1/2和Akt蛋白磷酸化水平以及加入Res后H2O2对MEK、ERK1/2和c-Jun蛋白磷酸化水平的影响。结果:小剂量H2O2对肺癌细胞NCI-H1395具有促增殖作用,H2O2通过活化ERK1/2和Akt蛋白的磷酸化水平促进肺癌细胞NCI-H1395增殖,加入MEK阻断剂U0126后H2O2对肺癌细胞NCI-H1395增殖作用降低(P<0.05)。Res可抑制H2O2诱导的肺癌细胞NCI-H1395增殖,加入Res后,H2O2引起的MEK、ERK1/2和c-Jun蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05)。结论:小剂量H2O2对肺癌细胞NCI-H1395具有促增殖作用,Res通过抑制MEK/ERK/c-Jun信号通路来抑制H2O2对肺癌细胞NCI-H1395的促增殖作用,其具体机制还需进一步研究。     

B-Myb稳定过表达H1299细胞株的构建与分析

B—Myb是Myb家族的成员之一,在细胞周期和癌变过程中具有重要作用。但其在肺癌中的作用及其分子机制仍不清楚。为了研究B—Myb在肺癌中的作用,构建了B-Myb稳定过表达的H1299肺癌细胞株。流式细胞术和MTT检测的结果表明,B—Myb稳定过表达导致G1期细胞减少,S期细胞增加进而促进细胞增殖：克隆形成实验及Transwell的结果表明,B—Myb稳定过表达显著增强H1299细胞的克隆形成、侵袭及迁移能力。定量RT-PCR检测结果表明,B—Myb稳定过表达显著提高了细胞周期基因CCNA1的表达水平;对CD97和MTSS1等细胞运动相关下游基因的表达则无明显影响。该研究成功构建了B-Myb稳定过表达细胞株,发现了B-Myb过表达可促进肺癌细胞的增殖、侵袭迁移及克隆形成能力,为进一步研究奠定了基础。     

余甘子提取物调控LINC01772/miR-153对肺癌细胞A549生物学行为的影响

摘要 目的：探讨余甘子提取物对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法：体外培养A549细胞,分为对照组、不同剂量（低、中、高剂量）余甘子提取物组、si-NC组、si-LINC01772组、高剂量余甘子提取物+pcDNA组和高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,嵌入式细胞共培养法（Transwell）检测细胞侵袭,免疫印迹法（Western Blot）检测细胞中上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和神经型钙黏蛋白（N-cadherin）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测LINC01772和miR-153表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01772和miR-153调控关系。结果：与对照组相比,不同剂量余甘子提取物组A549细胞中LINC01772表达降低,且光密度值（OD值）、克隆形成数、迁移以及侵袭细胞数减少（P<0.05）,而miR-153含量与E-cadherin蛋白表达升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性（P<0.05）。LINC01772在A549细胞中负调控miR-153表达。与si-NC组相比,si-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力受到抑制（P<0.05）。与高剂量余甘子提取物+pcDNA组相比,高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力增强（P<0.05）。结论：余甘子提取物可能通过调控LINC01772/miR-153轴抑制肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,其可能通过下调LINC01772进而上调miR-153表达发挥作用,具有开发为治疗肺癌药物的潜在价值。     

雷公藤红素对非小细胞肺癌细胞株H1299增殖与凋亡的影响

目的：研究雷公藤红素对非小细胞肺癌细胞株H1299的杀伤作用及相关调控机制。方法：用细胞计数法测定不同浓度雷公藤红素对H1299细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测H1299细胞的细胞周期;用Western blotting检测剪切的（cleaved）聚ADP核糖聚合酶（PARP）、cleaved caspase-3和低氧诱导因子-1（HIF-1）的表达水平;用DCF-DA染色和荧光显微镜检测细胞内的活性氧（ROS）水平;用萤光素酶活性测定法检测NFκB的活性。结果：雷公藤红素以时间和剂量依赖性的方式抑制H1299细胞的增殖,并使细胞阻滞在G2/M期。同时,雷公藤红素显著上调cleaved PARP和cleaved caspase-3的表达,提高细胞内的ROS水平,并且抑制NFκB的活性。结论：雷公藤红素以时间和剂量依赖性的方式抑制H1299细胞的增殖,并诱导caspase依赖性的细胞凋亡,具体机制与细胞内ROS的积累和NFκB的活性抑制有关。     

沉默lncRNA PCAT1调控miR-128表达增强肺癌H1299细胞放射敏感性

[目的]探讨LncRNA PCAT1调控miR-128对肺癌H1299细胞放射敏感性的影响。[方法]用LncRNA PCAT1阻断剂处理或不处理肺癌H1299细胞,根据放射剂量的不同将细胞分为空白对照组(0Gy)、低剂量组(2Gy)、中剂量组(4Gy)和高剂量组(8Gy)。采用RT-qPCR检测各组细胞LncRNA PCAT1、miR-128表达水平,CCK-8法检测细胞存活率,transwell实验检测细胞侵袭力,划痕实验检测细胞迁移力,流式细胞术检测细胞凋亡率。[结果]空白对照组及各放射剂量组肺癌H1299细胞使用阻断剂后LncRNA PCAT1表达显著降低,miR-128显著升高(P<0.05)。与空白对照组比较,低、中、高剂量组肺癌H1299细胞存活率、迁移率和侵袭力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。使用阻断剂后各剂量组细胞存活率、迁移率和侵袭力均显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。[结论]沉默lncRNA PCAT1可上调miR-128表达来增强肺癌H1299细胞的放射敏感性。     

长链非编码RNA SNHG17通过抑制p57表达促进肺癌进展

目的:分析肺癌中长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)与p57的表达相关性及功能联系。方法:通过starBase数据库分析SNHG17和p57在肺癌组织和正常组织中的表达差异;采用人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人肺癌细胞系A549、H1975进一步分析SNHG17和p57在肺癌细胞和正常肺细胞中的表达差异;采用qRT-PCR和Western印迹检测si-SNHG17在mRNA和蛋白表达方面对SNHG17和p57的影响;采用CCK-8法检测siSNHG17对A549细胞增殖的影响;采用Transwell法检测si-SNHG17对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:通过数据分析发现SNHG17在肺腺癌和肺鳞癌组织中显著高表达,而p57在肺腺癌和肺鳞癌组织中却显著低表达;与正常肺细胞相比,SNHG17和p57在肺癌细胞中的表达趋势与在肺癌组织中一致;SNHG17和p57的表达呈负相关;沉默SNHG17使p57的表达一定程度上调,A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到抑制。结论:SNHG17在肺癌中高表达,促进肺癌细胞增殖,并通过调节p57的表达来抑制肺癌细胞的增殖和迁移。SNHG17和p57在肺癌中的具体作用机制仍有待进一步研究。     

二甲双胍抑制H1299细胞迁移及其机制研究

该文主要研究二甲双胍(metformin, Met)对肺腺癌H1299细胞增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。利用显微镜观察二甲双胍处理后细胞形态,划痕实验检测二甲双胍对细胞迁移的影响; Annexin V/PI标记,流式检测二甲双胍对细胞凋亡的影响; 5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶(Edu)法检测二甲双胍对细胞增殖的影响。结果表明,二甲双胍能改变H1299细胞形态且能显著抑制细胞迁移;二甲双胍不能诱导H1299细胞凋亡;二甲双胍能抑制H1299细胞增殖。进一步研究发现,二甲双胍能下调p-ERK和p-MEK蛋白水平,同时增加E-Cadherin和减少FAK、vimentin蛋白表达,说明二甲双胍主要通过抑制ERK信号通路抑制H1299细胞增殖和迁移,并通过上调E-Cadherin、下调FAK、vimentin使H1299细胞迁移受到明显抑制,为二甲双胍应用于肺腺癌的预防及治疗提供了指导依据。     

重楼皂苷Ⅶ抑制肺癌H460细胞增殖和迁移能力研究

为研究重楼皂苷Ⅶ(polyphyllin Ⅶ)抑制人肺癌H460细胞增殖、迁移能力和诱导凋亡的作用和机制.本实验采用MTT法检测重楼皂苷Ⅶ处理后H460细胞生长抑制率,Hoechst 33258染色观察细胞形态,细胞集落形成实验考察细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell小室实验研究H460细胞迁移和侵袭能力的改变...     

脂联素抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖、迁移及侵袭的作用及机制研究

摘要 目的：探讨脂联素（APN）对子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用及分子机制。方法：分别采用磺酰罗丹明 B(SRB)实验、细胞迁移(Transwell)实验和划痕实验检测子宫内膜癌细胞HEC-1B的增殖、迁移和侵袭能力。采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路相关蛋白、AdipoR1、AdipoR2、cyclinD1和cyclinE2蛋白表达水平。结果：与对照组相比,APN组HEC-1B细胞增殖、迁移及侵袭功能明显下降（P<0.05）。与对照组相比,APN组p-AMPK/AMPK比值明显提高,而p-mTOR/mTOR和p-4EBP1/4EBP1比值明显下降（P<0.05）。与对照组相比,APN组cyclinD1和cyclinE2蛋白表达水平明显下降（P<0.05）。APN组和对照组的AdipoR1、AdipoR2蛋白表达水平比较无统计学差异（P>0.05）。结论：APN能够激活AMPK信号通路并下调cyclinD1和cyclinE2蛋白表达,进而抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭功能。     

miR-142通过靶向HMGB1对宫颈癌细胞生物学行为影响的实验研究

摘要 目的：通过实验探究miR-142靶向高迁移率族蛋白1（high-mobility group box 1 protein,HMGB1）对宫颈癌（cervical cancer,CC）细胞生物学行为的影响及其潜在的作用机制。方法：采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测CC组织和正常组织中miR-142和HMGB1 mRNA及蛋白表达水平,采用荧光素酶报告实验分析miR-142与HMGB1的靶向关系,CCK-8法检测CC细胞生存能力,克隆形成实验检测CC细胞增殖能力,划痕修复实验检测CC细胞迁移能力,基质胶侵袭实验检测CC细胞侵袭能力。结果：CC组miR-142 mRNA和蛋白表达水平显著低于正常组（P<0.05）,HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常组（P<0.05）,且CC癌组织中miR-142和HMGB1 mRNA和蛋白表达水平均呈显著负相关（r=-0.399,P=0.002;r=-0.429,P=0.001）;miR-142与HMGB1存在靶向关系;CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,miR-142 mimic组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著低于miR-NC组（P<0.05）,miR-142 inhibitor组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-NC组;Western Blot实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组HMGB1蛋白表达水平显著高于miR-142 mimic+control plasmid组（P<0.05）,显著低于miR-NC+plasmid组（P<0.05）;CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-142 mimic+control plasmid组（P<0.05）,显著低于miR-NC+plasmid组（P<0.05）。结论：miR-142可通过靶向负调控HMGB1表达,进而抑制CC细胞生存、增殖、迁移和侵袭。     

miRNA-21靶向调控Wnt/β-catenin对非小细胞肺癌细胞增殖与侵袭的影响

目的研究microRNA-21(miR-21)是否通过调控wnt/β-catenin信号通路从而影响人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞株NCI-H1975细胞体外增殖与侵袭能力。方法预测和构建含有miR-21候选靶基因和β-连环蛋白基因的双荧光素酶报告质粒。将miR-21模拟物通过Lipofactamine 2000脂质体转染法转染NCI-H1975细胞,应用qRTPCR检测细胞中miR-21和β-catenin mRNA表达情况,应用Western blot检测β-catenin蛋白水平,CCK-8法检测miR-21mimic对NCI-H1975细胞增殖能力的影响,Transwell侵袭实验检测miR-21 mimic对NCI-H1975细胞侵袭能力的影响。结果qRT-PCR肺癌组织中的miR-21与邻近正常组织相比表达明显升高;双荧光素酶报告基因结果显示miR-21能和β-catenin的3’UTR端结合且显著促进荧光素酶活性;上调miR-21可使β-catenin的mRNA和蛋白表达水平显著升高,同时上调miR-21可显著增强NCI-H1975细胞的增殖与侵袭能力。结论 miR-21在转录后水平调控β-catenin表达来促进NCI-H1975细胞的增殖与侵袭能力,可能是NSCLC潜在的治疗靶点。     

KIF26B在非小细胞肺癌发生发展过程中的表达与功能研究

驱动蛋白与肿瘤的发生有密切联系，但对 KIF26B驱动蛋白在非小细胞肺癌的表达和相关功能作用的研究甚少。为了探索KIF26B在非小细胞肺癌中的表达水平及潜在机制，通过干扰KIF26B后探索对非小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移、细胞周期、凋亡以及相关蛋白表达量的影响。对mRNA TCGA 数据库信息分析得出，KIF26B基因在非小细胞肺癌中高表达。qRT-PCR 检测 KIF26B在几株常见非小细胞肺癌细胞系中的表达水平，筛选出 KIF26B在A549 和 NCI-H292细胞系中高表达。利用 RNA干扰技术(RNA interference, RNAi)敲低 A549 和 NCI-H292细胞的 KIF26B基因，通过CCK8、采用实时细胞分析仪、平板克隆及 Transwell 实验检测敲低 KIF26B基因后的生物学功能，免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果显示，敲低KIF26B后A549 和 NCI-H292细胞增殖明显降低，侵袭及迁移能力明显减弱。敲低KIF26B后阻碍了A549 和 NCI-H292细胞从G1期向S期的转变，同时凋亡细胞明显增多，与之相关的细胞周期蛋白 D1、Bcl-2、E-cadherin和Vimentin的表达水平显著下调，同时活化的半胱天冬酶-3（active Caspase-3）和其剪切底物 PARP1 的剪切体（cleaved PARP1）表达水平显著上调。结果表明KIF26B可能作为非小细胞肺癌发生的促癌基因，参与了非小细胞肺癌的发生及发展过程。KIF26B有望成为非小细胞肺癌治疗的潜在靶点。     

E2F1 介导8-氯-腺苷引起的人肺癌细胞H1299的凋亡

8-氯-腺苷（8-Cl-adenosine,8-Cl-Ado）可诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299发生凋亡,但其分子机制还没有阐明．首先用四唑盐（MTT）比色法检测了8-Cl-Ado 对H1299 细胞的生长抑制作用．进一步采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting) 检测了8-Cl-Ado 处理H1299细胞后,procaspase-3 的激活情况以及E2F1的蛋白水平．通过用pcDNA-HA-E2F1表达载体和pSUPER-E2F1 RNA 干扰载体分别转染H1299 细胞,研究在E2F1 过表达和RNA 干扰（RNA interference, RNAi）两种情况下对凋亡的影响．实验结果表明,8-Cl-Ado可抑制H1299 细胞的生长,激活凋亡关键执行蛋白procaspase-3,升高E2F1 蛋白水平．当E2F1 过表达后,同时伴有procaspase-3 的激活,而E2F1 表达受到抑制后,与对照相比,8-Cl-Ado 引起的procaspase-3 的激活被明显抑制,说明E2F1 介导8-Cl-Ado 引起的人肺癌细胞H1299 的凋亡．     

MicroRNA-575靶向抑制BLID促进非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭

目的:通过体外实验探讨miR-575对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖与侵袭能力的影响及相关机制。方法:采用实时定量PCR法检测不同非小细胞肺癌细胞系中miR-575、BLID的表达;CCK-8法检测转染miR-575模拟物、抑制因子后不同时间A549细胞增殖情况的变化;Transwell法检测A549细胞的侵袭情况;Targetcan法及双荧光素酶检测miR-575对BLID 3'UTR端的靶向作用;Western blot法检测BLID蛋白的表达。结果:A549、SPC-A1、H1299、H1650等人非小细胞肺癌细胞系中miR-575的表达均显著高于永生化的人支气管上皮细胞系16HBE(P0.001)。MiR-575模拟物转染的A549细胞miR-575的表达明显高于对照组(P0.001),同时细胞的增殖和侵袭力增强(P0.05);反之,miR-575抑制因子转染的A549细胞miR-575的表达显著降低,且细胞的增殖和侵袭力明显降低(P0.01)。Targetscan法预测BLID可能是miR-575的下游靶基因,荧光素酶结果显示miR-575不仅能够有效抑制野生型BLID 3'UTR端的荧光素酶反应(P0.01),而且能够降低BLID的蛋白表达量(P0.01)。实时定量PCR结果显示BLID在NSCLC细胞系中均呈现显著的低表达(P0.001),且转染BLID后,NSCLC细胞的增殖和细胞侵袭被明显抑制(P0.05),而当miR-575与BLID共转染时,miR-575能够逆转BLID所抑制的细胞增殖和侵袭(P0.01)。结论:在NSCLC细胞系中,miR-575的表达上调,且能够通过直接作用于下游靶点抑癌基因BLID从而促非小细胞肺癌细胞增殖及侵袭。