小剂量16O8+离子预辐射减轻大剂量辐射所致小鼠睾丸组织损伤

为了了解小剂量重离子辐射诱导小鼠睾丸结构的适应性反应,采用小剂量(0.05Gy)~(16)O~(8 )离子照射B6C3F_1雄性小鼠睾丸。4h后,再给予2Gy~(16)O~(8 )离子照射。照射后第35天取材在光镜下观察睾丸结构。结果显示,大剂量(2Gy)照射明显损伤睾丸组织,主要表现为曲精细管直径几乎减小一半,精管内各发育阶段的生殖细胞减少或消失,特别是精原细胞几乎完全消失。而Leydig细胞和Sertoli细胞仅有轻度核固缩及胞浆减少。提示睾丸生殖细胞的辐射敏感性明显高于其间质组织细胞。预先给予小剂量(0.05Gy)照射可明显减轻随后大剂量(2Gy)辐射对睾丸组织的损伤。提示小剂量重离子辐射可诱导小鼠睾丸结构明显的适应性反应。     

γ射线一次全身照射对小白鼠生殖细胞减数分裂(中期Ⅰ)染色体的畸变效应

1.本文叙述了对照组和照射组的小白鼠精母细胞和卵母细胞成熟分裂时中期I染色体制备技术。2.对照组小白鼠的卵母细胞和精母细胞中期I染色体的畸变百分数都为0%。3.小白鼠经100、200和300拉德γ射线全身照射后24小时,染色体畸变百分数在卵母细胞分别为2%、3%和16.3%、而精母细胞则分别为13%、29%和111%。两者均随着照射剂量增高而增加,但在雄性方面增加得更显著。根据这些实验,我们认为小白鼠的精母细胞比卵母细胞对辐射更为敏感。     

重复热处理对大鼠精子发生的影响研究:光学和电子显微镜观察

大鼠睾丸每月重复接受43℃热处理(每次处理25分钟)。第一次加温后24小时,光学和电镜观察指出,生殖细胞对加热反应并非是一种特异性效应。电镜观察指出,所有发育期的生殖细胞的胞核均受损伤,但其他细胞器,如细胞膜和线粒体却很完整。本实验表明,加热原初损伤是细胞核,而不是胞质的膜系统。 首次加温后24小时,具空泡化胞核的早期精细胞已有一个小顶体,而胞质的特征却相似于分裂的精母细胞。表明加热能引起精母细胞的核——质非同步发育,即加速胞核分裂和分化。 每月一次,二次加温后182天,绝大多数精小管内无生殖细胞,但在一些部分恢复的精细管中,还发现空泡化的多核巨细胞,本结果表明,一些休止期精原细胞也受潜在损伤,并能生存相当长时间;一旦细胞进行分裂之后,就出现退行性交。     

一个精原细胞形成几个精子

有人对初级精母细胞有没有染色体复制持否定意见,认为精原细胞经过染色体复制以后才转变为初级精母细胞。有关资料对此叙述模糊不清,因此有必要澄清。睾丸的曲细精管是产生精子的地方。曲细精管内生精上皮产生精子的过程是:精原细胞不断进行有丝分裂,增加细胞数量,产生形态特征和分化程度不同的精原细胞,直至分裂、长大分化成为初级精母细胞。初级精母细胞经过减数分裂第一次分裂的间期生长和染色体复制后分裂为两个次级精母细胞(染色体数目减半)。每个次级精母细胞不经过生长     

胚胎及生后不同发育时期大鼠睾丸生殖细胞的凋亡

目的 探索雄性生殖细胞在发育过程中凋亡的特征和规律。方法 利用改进的石蜡切片原位末端标记法（TUNEL法）观察SD大鼠睾丸生殖细胞,对胚胎及生后不同阶段生殖细胞凋亡进行研究。结果 胚胎第13.5天原始生殖细胞即有较高的凋亡率,胚胎第19.5天到出生后第1天,未检测到凋亡生殖细胞,出生后第7天精原细胞分裂增生,伴有较高的凋亡率,与其他各年龄组有显著性差异。出生后第14天精母细胞凋亡率最高,与其他日龄组有显著性差异。结论 SD大鼠雄性生殖细胞发生,发育,成熟过程中都存在凋亡,主要发生在处于细胞增殖过程中的原始生殖细胞,精原细胞和初级精母细胞。     

Ghrelin在正常及X线辐射损伤小鼠睾丸中的表达

目的探讨ghrelin在正常及X射线辐射损伤后小鼠睾丸中的表达变化及其意义。方法采用辐射剂量1·0GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16h取睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测ghrelin在辐射损伤小鼠及正常对照组小鼠睾丸中的表达,探讨ghrelin表达的变化及意义。结果正常小鼠睾丸ghrelin主要表达在间质细胞的胞浆中,呈强阳性。X线照射后16h,ghrelin的表达主要集中于生精小管内各级生殖细胞中,特别是在精原细胞和初级精母细胞中有强阳性反应,且其表达具有生精周期特异性,而间质细胞中呈阴性。结论Ghrelin在小鼠正常及辐射损伤睾丸中的特异性表达和变化,提示其可能与睾丸精子发生、精子形成及辐射损伤修复有关,具有重要的睾丸生物学调节功能。     

小鼠睾丸组织慢速冷冻保存工艺的优化研究

目的 冷冻保存睾丸组织用于后期移植,是除精子冻存以外保持男性生育力的另一有效途径。本文对块状睾丸组织常用的慢速冷冻降温程序进行了改进。方法 通过缩短保护剂加载时间、提高第一阶段的冷却速率、第二阶段直接投入液氮等方法对小鼠睾丸组织进行冷冻保存。在不同温度对小鼠睾丸组织冻存体系进行诱导冰晶成核并冻存,降低睾丸组织慢速冷冻保存所需保护剂浓度。结果 改进的两步法冻后组织内生殖细胞的凋亡阴性率均较高,其中精原细胞98.4%、精母细胞99.2%、精子细胞88.4%、支持细胞98.1%,显著高于常用慢速冷冻组,与对照组均无显著性差异。相比于未置核组, -10℃置核可显著提高5% DMSO保护剂慢速冷冻保存的冻后效果,生殖细胞的凋亡阴性率为精原细胞82.9%、精子细胞92.1%、精母细胞93.2%及支持细胞88.9%,与较高浓度保护剂10% DMSO组冻存结果无显著性差异,说明置核能够降低所需保护剂的浓度,降低毒性损伤。结论 本研究通过改进两步法和置核提高了小鼠睾丸组织冻后的质量,为临床上人睾丸组织的冻存提供参考。     

粗糙沼虾精巢发育的组织学

利用光镜技术,对粗糙沼虾精巢发育进行了研究,根据精子发生过程中每种生殖细胞所占的比例和发生的次序,并结合精巢的形态特征,把精巢发育过程分为五个时期,即精原细胞期,精母细胞期,精细胞期,成熟精子期及退化期,精原细胞期,精巢小,透明乳白色,生精小管内的生殖细胞以精原细胞为主;精母细胞期;精巢体积增大,半透明乳白色,主要由处于初级精母细胞的次级精母细胞阶段的生殖细胞组成;精细胞期,精巢体积继续增大,颜色加深,生精小管内的生殖细胞以精细胞为主;成熟精子期,精巢体积可达最大,紫红色,生精小管内充满着成熟的精子,退化期;精巢体积减小,半透明乳白色,生精小管内的成熟精子几乎排空。     

猕猴精巢发育的研究

本文用54只正常猕猴按齿序分组研究了精巢的发育状况,结果如下: 1.个体发育年龄在第Ⅰ组和第Ⅱ组的所有动物,毫无例外地都没有表现出性细胞的发育——精细管内只有大量的生殖上皮细胞和少量的性原细胞。 2.第Ⅲ组有两种情况:其一,本组初期的6只动物,其精细管内细胞成分仍然和第Ⅰ、Ⅱ组的相似;其二,本组中后期的6只动物其精细管的直径增大,精细管内的生殖上皮细胞已分化,精原细胞数量剧增,有了支持细胞和初级精母细胞(其中仅1只动物还没有精母细胞),支持细胞核基位;甚至其中1只动物的个别精细管内已有了少数精子,这说明精子发生的首要特征在本组后期的1只动物上已开始出现。 3.第Ⅳ组的11只动物中,除了1只动物的精细管内尚未出现精子外,其余10只动物都有了精子发生的各级成分,有了数量不等的精子。 因此,若以齿序为标准来划分雄性猕猴的性成熟阶段,则结果表明,第Ⅳ组初期(即第三臼齿刚出齐后的时期)的绝大多数个体都达到了性成熟的时期,精细管内有了精子。     

尖唇散白蚁工蚁、兵蚁和繁殖蚁精子发生的比较研究

为探讨白蚁非生殖品级和生殖品级生殖细胞发育差异,采用组织学染色技术对尖唇散白蚁Reticulitermes aculabialis Tsaiet Hwang繁殖蚁、工蚁和兵蚁的精巢发育以及精子发生进行了显微观察和比较研究。结果发现3个品级间精巢发育的程度差异很大,三者精巢切面面积相对大小之比为:繁殖蚁∶工蚁=1.7∶1;繁殖蚁∶兵蚁=29.3∶1;工蚁∶兵蚁=17.1∶1。繁殖蚁和工蚁精巢管内有精子的形成,工蚁和繁殖蚁精子的发生都经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子时期,但工蚁有大量次级精母细胞呈细胞凋亡状态。兵蚁生殖细胞发育仅有精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞,没有精细胞和精子产生。工蚁的生殖细胞显著小于同一时期繁殖蚁的生殖细胞,兵蚁的各时期生殖细胞均极显著小于繁殖蚁同一时期的生殖细胞。研究表明各品级之间生殖功能分化与生殖细胞发育有直接关系,工蚁有转化为补充繁殖蚁和兵蚁的能力;而兵蚁由于精巢极度退化不能产生精细胞和精子,因此是非生殖品级分化的终极形式,不具有转化成补充繁殖蚁或其它品级的能力。     

X射线对小白鼠雄性生殖细胞的作用

1.以400伦X射线全身照射昆明种雄性小白鼠,照射后隔1、3、6、12、24小时分别将动物杀死,以Dietrich-Parat法固定其睾丸。制成石蜡切片。观察第Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅻ期精小管横切面中各类细胞数量的变化。 2.X射线照射后,小白鼠雄性生殖细胞中出现各种坏死及异常细胞,按其性质可大致分为四类:细胞坏死、染色体畸变、异常分裂、巨细胞。类似的坏死及异常细胞在正常睾丸中几乎都能发现,但频率低得多。 3.根据细胞数量、细胞分裂周期各类细胞和细胞坏死频率的变化,可以把X射线对精原细胞的早期(24小时内的)效应大致分为三个阶段:原发效应期、恢复期和转折期。 4.精原细胞数量的减少主要由于细胞死亡。它们的辐射致死和细胞分裂周期有一定的关系。然而,当分裂抑制解除时,精原细胞可以在细胞分裂周期的各个时期中死亡。 5.X射线照射后1小时,三种精原细胞都出现了分裂延滞的现象,但对中-后期细胞分裂有一定的促进作用。实验结果表明X射线对精原细胞有丝分裂的抑制是可逆的。抑制的时期可能是在间-前期之间和分裂之前(前期)两个时期。这两个时期与细胞有丝分裂周期中的“不可逆点”(Point of no return)相符。 6.X射线对减数分裂前期细胞及精细胞的数量和显微结构影响不大,但大大地减少减数分裂中-后期正常细胞的数量     

棉酚抗生育作用的研究——Ⅳ.大白鼠长期服棉酚睾丸退化的观察

选用出生1月龄大白鼠按20毫克/公斤体重/日灌服棉酚,每周5次,连续1个月和2个月取材;性成熟大白鼠每天服棉酚5毫克/只,每周6次,给药3、4、6个月和停药1、2、3个月分别取材,睾丸称重后固定、制片作比较观察。实验结果表明,棉酚对幼龄大白鼠睾丸的发育没有影响,但使发育到变态后期的精子细胞受损伤,附睾中出现断头坏死的精子。长期服抗生育有效剂量棉酚的大白鼠中,有相当一部分出现不同程度的睾丸退化。退化通常在睾网附近最先出现,并和死精子在曲精细管中积聚相关连。第Ⅶ—Ⅷ期生精上皮退化的过程是自上皮游离缘18—19期精子细胞开始渐进地向基膜方向推进,直至上皮完全剥落或仅留以个别精原细胞和较多的媬育细胞。停服棉酚后恢复1—3个月的结果指出,已开始退化的睾丸在停药后有继续退化的趋势。严重退化的睾丸经停药3个月,虽然曲精细管排列较整齐,部分留有精原细胞的曲精细管中精原细胞显示增加数目并有B 型精原细胞,但尚未见进一步发展。对于睾丸退化可能与死精子在曲精细管内积聚有关,而不是由于棉酚对整个生精上皮的损伤问题进行了讨论。     

电离辐射对生殖细胞的影响 Ⅰ.小白鼠雄性生殖细胞对X射线的早期反应

1.本文系报告用X射线一次全身照射小白鼠以观察其睾丸中生殖细胞对600伦X射线照射后的早期(5分钟、30分钟、60分钟、6小时)反应。照射条件为:电压140千伏,电流11毫安,出射率100伦/每分钟,距离46厘米,有效剂量600伦。固定剂用FAA;用孚尔根反应着色,快绿作补染。 2.在照射后30分钟及60分钟固定的睾丸制片中观察到精小管内不同发育阶段的生殖细胞有各种反应:(1)精原细胞在分裂后期形成染色体桥;(2)精母细胞在生长期呈固缩,核胀大及返回休止态,组成合胞;在分裂时形成染色体桥,染色体凌乱分布,中期滞死等等;(3)精子细胞与发育中的精子表现固缩,胞核或胞质空泡化,形成合胞,核畸形(变态延缓或失常);(4)成熟的精子,支持细胞和间隙细胞不受影响。 3.同一发育阶段的细胞受到射线的伤损程度不同,反应的方式亦不一致。 4.对于细胞的辐射敏感性,有丝分裂与辐射效应的表现,以及辐射作用对于胞质和胞核的影响等问题作了初步的讨论。     

镉对小鼠精母细胞凋亡及附睾内精子质量的影响

采用人工水质染毒的方法,利用透射电镜技术及流式细胞术（FCM）,探讨重金属镉对小鼠精巢内生殖细胞凋亡及附睾内成熟精子质量的影响.结果表明：各试验组小鼠生殖细胞处于凋亡时期的数量显著高于对照组,凋亡时期的生殖细胞超微结构呈现出线粒体空泡、核膜内陷、染色质周缘化及核固缩等形态特征,表明镉容易引起小鼠生殖细胞凋亡;各试验组精子早期凋亡的比例显著高于对照组,而活性精子的比例显著低于对照组（P<0.05）,其中高剂量组（0.10 mmol·L^-1）精子成活率（75.1%）显著低于对照组和其他试验组,而早期凋亡率（22.6%）则显著高于对照组;高剂量组睾丸生殖细胞DNA断裂率（18.2%）及附睾精子断裂率（26.5%）均显著高于对照组（3.3%、5.6 %）（P<0.05）.各试验组小鼠睾丸内DNA断裂的生殖细胞数量低于附睾内DNA断裂的精子数量.随着添加剂量的增加,小鼠睾丸内生殖细胞及附睾内精子凋亡率逐渐升高.表明小鼠生殖细胞凋亡及DNA损伤数量与镉剂量具有一定相关性.     

PKC-α和PKC-δ在不同发育阶段小鼠睾丸中的差异性表达

蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)作为一类重要的蛋白激酶 ,通过对底物蛋白的Ｓｅｒ Ｔｈｒ残基的磷酸化 ,参与细胞的短期反应与长期反应的调节 ,具有介导细胞生长和增殖 ,调节核基因的表达 ,影响细胞周期等生理作用 ,从而参与调控多种细胞系 ,如ＮＩＨ3Ｔ3细胞、造血干细胞等细胞系的增殖与分化[1,2 ] .在精子形成这样一个独特的细胞分化过程中 ,ＰＫＣ的生理功能仍未十分明确 .睾丸生殖细胞的增殖与分化 (精子发生 )是一个独特复杂的细胞分化过程 ,主要分为 3个阶段 :Ａ型精原细胞增殖和Ｂ型精原细胞分化为初级精母细胞 ;初级精母细胞通过减数分裂形成…     

男性不育的减数分裂研究 Ⅲ.21例不育男性的细胞遗传学分析

21例男性不育症患者的生殖细胞和外周血淋巴细胞的染色体分析表明,10例患者的精子发生过程阻滞在精原细胞或初级精母细胞阶段;3例患者的减数分裂中期Ⅰ出现多价体和单价体;在2例射线引起不育的患者中减数分裂中期Ⅰ畸变细胞率明显增高,其中的1例体细胞染色体畸变率高达16.0％。有6例仅作了精液标本分析,未能作出明确的诊断。     

顺铂对雄性小鼠生殖细胞的细胞遗传学效应

本文以空气干燥法制备小鼠睾丸染色体标本,研究抗癌药物——顺铂(cisplatin)对小鼠生殖细胞的细胞遗传学效应。在中期Ⅰ发现染色体断裂和断片、易位多价体、性染色体和常染色体的单价体频率显著增高。在中期Ⅱ发现异倍体和畸变细胞也显著增多,并发现精原细胞和减数分裂前期的不同阶段对顺铂的敏感性不同。以前细线期(preleptotene)和早粗线期较为敏感。对各种染色体畸变在评定药物效应中的意义以及不同发育阶段生殖细胞对药物敏感性差异的可能原因作了讨论。     

长期低剂量γ线照射和照射加电击对老年前期大鼠性激素、肝功能和脂质过氧化物的影响

本文观察了长期低剂量γ射线照射和照射加电击对老年前期(18～21月龄)大鼠血浆性激素水平、肝微粒体混合功能氧化酶(MFO)活力以及组织脂质过氧化物的影响。长期照射加电击使雄性大鼠血浆睾酮水平明显降低(p<0.05),照射与照射加电击均使雄鼠肝微粒体MFO活力明显下降(p<0.05)。长期低剂量γ射线照射和照射加电击组的睾丸自由基浓度较对照组明显升高(p<0.05),长期照射使雄性大鼠肝匀浆与微粒体,睾丸匀浆与线粒体的脂质过氧化物较对照组明显增高,但照射加电击组的脂质过氧化物较照射组(以及对照组)明显下降。实验结果说明照射与照射加电击对老年前期大鼠的作用有所不同,这些环境因素具有加速老化的作用。     

n-6/n-3 多不饱和脂肪酸营养失衡对小鼠精子发生的影响

目的:探讨n-6/n-3多不饱和脂肪酸营养失衡对小鼠精子发生的影响。方法:健康的30只C57/B6雄鼠随机分为对照组(CON)、高脂组(HF)、花生四烯酸组(HF+AA)。喂食16周,做合笼实验并记录致孕率,通过精子动力分析仪检测小鼠精子活力和数量的变化,用Elisa试剂盒测血清中睾酮和甘油三酯水平。通过病理组织染色观察小鼠睾丸组织的形态学变化。利用Realtime-PCR的方法检测小鼠睾丸中Dazl基因表达水平的变化。结果:高脂组、花生四烯酸组与对照组相比精子活力[(16±0.01;12.33±2.83 vs72.2±12.73)%,P0.001],精子数量[(7.5±1.13;6±0.14 vs 13.87±0.35)million/m L,P0.001],致孕率[(28.57;14.29 vs 78.57)%,P0.001]及血清睾酮含量[(0.35±0.14;0.27±0.07 vs 3.51±0.7)ng/m L,P0.001]均显著性降低。高脂组、花生四烯酸组与对照组相比,血清中甘油三酯的含量显著增高[(0.74±0.04;0.74±0.04 vs 0.45±0.04)mmol/L,P0.001]。病理组织染色观察到花生四烯酸组小鼠睾丸组织出现了明显异形,曲细精管内部的初级精母细胞明显缺失,管腔中从初级精母细胞到精子的发生过程出现了变异,精子的数量也显著性下降。参与精子生成过程中的减数分裂前的有丝分裂增殖期、精原细胞的发育等过程的Dazl基因在高脂组和花生四烯酸组小鼠睾丸中的表达量与对照组相比显著降低(0.87±0.05;0.65±0.03 vs 1.07±0.04,P0.05)。结论:膳食中n-3/n-6多不饱和脂肪酸失衡会导致雄鼠精子发生发育的障碍     

三种波段电磁辐射致大鼠睾丸损伤的比较

目的对比性探讨电磁脉冲(EMP)、S带高功率微波(S-HPM)和X带高功率微波(X-HPM)三种波段电磁辐射致睾丸组织受损的近期和远期效应及其相关敏感指标。方法雄性Wistar大鼠192只,随机分为EMP组、S-HPM组、X-HPM组和对照组,于照后不同时间点采集睾丸组织称重,光镜观察睾丸损伤,并用图像分析技术对曲细精管病变进行定量分析。结果三种波段电磁波辐照后睾丸结构和生精细胞形态损伤基本相似:早期睾丸重及睾丸重/体重比值呈下降趋势;曲细精管生精上皮变薄,生精细胞排列紊乱,精原细胞变性坏死并由管壁脱落,精母细胞和精子数量减少并团聚于管腔中央,支持细胞和间质细胞不同程度变性;曲细精管受损百分率显示EMP组最重,S-HPM最轻,生精细胞受损数量与程度显著增加(P0.05)。结论三种波段电磁辐射对睾丸生精细胞的损伤,具有速发性、时相性、分布不均一性特点;损伤程度呈EMPX-HPMS-HPM;睾丸曲细精管受损百分率可定量反映其损伤程度,可望成为评估电磁辐射致睾丸损伤的敏感指标之一。