发现一个胰多肽家族的新成员——神经肽Y

自从Kimmel等(1968)在鸡胰腺中分离出鸡胰多肽(PP)以来,人们相继由哺乳动物的胰腺中分离出牛、猪、羊、狗和人的胰多肽,并确定PP是由36个氨基酸残基组成的多肽。其后(1980),在Mutt实验室又由猪十二指肠提取物中分离出一种与PP结构类似的36肽,命名为酪酪肽(PYY),所谓PP家族便开始形成。由于用鸡PP或牛PP抗血清进行免疫组织化学研究发现,PP样免疫活性物质广泛分布在中枢神经系统中,因而人们一向认为,哺乳类动物的脑中存在着一种与PP在化学结构上有一定联系的肽类物质。但用放射免疫测定法却未能测出鸡PP、牛PP免疫活性。因此,脑中PP样免疫活性的实质一直没有搞清楚。最近,Totemoto等又从猪脑中分离出一种新的神经肽,命名为神经肽Y(neuropeptide Y,NPY),     

生长激素

19世纪末人们在临床工作中已发现生长发育与垂体有关。1912年Ashner发现单纯切除垂体前叶导致生长障碍。1921年Evans等证实牛垂体提取液对大鼠有促进生长作用。1943年Evans建立了生长激素GH的生物学测定方法即胫骨测定法。1944年李卓浩和伊万斯提纯了牛GH,确定了垂体GH的存在。1956年李卓浩等又提纯了人生长激素(hGH),发现GH有高度种属特异性,并使hGH应用于临床治疗有了可能。1962年Hunter等建立了hGH的放射免疫测定法,从而建立了各种hGH功能试验,使hGH功能紊乱疾病包括垂体侏儒的诊断水平显著提高。1971年已能     

胰多肽

胰多肽(pancreatic polypeptide,简称PP)是一种主要从胰腺中提取出的具有36个氨基酸残基的激素。60年代末Kimmel等在提取鸡胰岛素时偶然发现了胰多肽,称它为鸟胰多肽(avian pancreatic polypeptide,简写APP)。与此同时,林从敏和Chance等在提纯牛胰高血糖素和胰岛素时也发现了PP,称之为牛胰多肽(bovine pancreatic polypeptide,     

牛胰岛素的酰胺化反应及其六酰胺产物的分离及鉴定

牛胰岛素用1％三氟化硼甲醇溶液反应后所得六甲酯与饱和氨甲醇溶液反应,在室温下约经144小时可完全酰胺化。反应过程用红外光谱及酰胺含量分析测定。所得酰胺化粗产品经Sephadex G-75凝胶层析可以将胰岛素六酰胺化合物从其聚合物中分离提纯。由红外光谱、紫外光谱及圆二色散光谱测定表明:牛胰岛素的六酰胺化合物的构象与胰岛素有很大不同,其生物活性也丧失殆尽。     

氧化铝层析从云南红豆杉植物中转化提取紫杉醇

采用氧化铝层析从云南红豆杉植物汉膏中转化生成和分离提纯了紫杉醇。考察了氧化铝的类型、流动相中水和甲醇的添中、反应时间以及洗脱剂组成等层析操作条件对紫杉醇回收和分离的影响。研究表明,采用碱性氧化铝柱层析分离和回收紫杉醇效果显著,通过对紫杉醇转化和分离条件的优化,经一步氧化铝柱层析,可以使紫杉醇的含量从小于１．０％提高到大于２７％,紫杉醇的回收大于１７０％。     

胰蛋白酶的制备及其在细胞培养中的应用研究

无菌采集健康牛胰脏,用0.125 mol/L的硫酸对牛胰脏进行预处理和保存,并对原材料的细菌、真菌、内毒素、支原体、噬菌体和一些病毒外源因子进行检测,筛选合格原料.通过盐析、CM-Sepharose-FF层析、超滤等方法对胰蛋白酶进行提取和纯化.结果表明:经筛选原料提纯的胰蛋白酶通过细胞传代实验240 h后,细胞生长良好,形态正常,而未经筛选直接提取的胰蛋白酶通过细胞传代实验144 h后,细胞出现拉丝、病变等异常情况.     

低聚木糖分离纯化的研究进展

综述了低聚木糖分离纯化的研究进展。低聚木糖是一种非消化性寡糖 ,能选择性增殖肠道内双歧杆菌 ,可广泛应用于食品工业和饲料工业。低聚木糖的分离纯化技术主要包括层析分离技术 (包括凝胶过滤层析、离子交换层析和吸附层析 )和膜分离技术 (包括超滤、纳滤和反渗透 )。低聚木糖的提纯主要采用膜分离技术和层析分离技术 ,低聚木糖单一组分的分离主要采用凝胶过滤层析和吸附层析     

用中性盐分离和提纯蛋白质

在毛主席革命路线的指引下,在批林批孔运动的推动下,全国各地正进一步广泛开展关于常见病、多发病(如气管炎、冠心病、肿瘤等)的研究。在研究这类疾病时,经常需要分离和提纯一些蛋白质(特别是免疫球蛋白)。国内有些实验室在分离和提纯蛋白质时,一般采用离子交换、凝胶过滤、亲合层析、区带电泳、超速离     

三种展层剂层析效果的比较

植物色素的层析方法有多种。目前多采用纸层析、薄板层析和柱层析三种,其中以纸层析法最为常用。此法虽简便、经济、易行,但如展层剂选择不好,常会造成层析效果不佳。为提高色素的分离、提纯效果、增大各色素带间的距离,我们选用双重展层剂,分     

一种快速、可靠的性甾体激素放射免疫测定法

性甾体激素放射免疫测定方法已有大量报道。我们在爱克斯勒(Exley)等人方法的基础上,经多年改进,发展了一种方便、可靠的放射免疫测定方法。实践证明,用同一缓冲液,同一分离试剂,同一温育时间和同样操作步骤,可测定雌二醇、雌酮、孕酮和睾酮。温育时间只需     

层析等电聚焦法提纯葡萄球菌肠毒素D

 我们成功地建立了层析等电聚焦的三步程序,分离提纯葡萄球菌D型肠毒素。首先用CG-50树脂吸附由细菌培养液中获得粗毒素,然后在PBE94柱上进行层析等电聚焦,最后经过Sephacryls-200过滤。纯化的SED纯度约98%,回收率89%,分子量为28500,pI 7.6。Western blot,免疫双向琼脂扩散的鉴定试验表明,纯化SED与其相应抗血清是特异性反应。     

以酶标免疫吸附法测定大鼠肝脏精氨酸酶含量

本文利用丙酮沉淀、凝胶过滤、离子交换层析等方法提纯了大鼠肝脏精氨酸酶,在SDS-PAGE中表现为单一的蛋白质带,其亚基分子量为37,000.建立了大鼠肝精氨酸酶的酶标免疫吸附测定法(ELISA),比较了两种常规的精氨酸酶活性测定法与ELISA法,并初步探讨了ELISA法在精氨酸酶测定方面的一些应用。     

溶液环境对百日咳疫苗分离纯化的影响

针对百日咳疫苗在低盐条件下不稳定, 容易聚集而导致层析过程收率低、分离度低的难题, 实验中选择脲作为稳定剂来改善百日咳疫苗所处的溶液环境, 并采用离子交换层析和凝胶过滤层析进行百日咳疫苗的分离纯化, 通过ELISA抗原活性测定和还原性SDS-PAGE等方法研究了脲对百日咳疫苗分离纯化的影响。结果表明, 在流动相中加入 2 mol/L脲作为稳定剂, 能显著提高离子交换层析和凝胶过滤层析中的PT和FHA活性回收率、凝胶过滤层析的分离度、PT和FHA的纯度。这些结果对百日咳疫苗的分离纯化和层析工艺优化提供了重要的依据和参考。     

一种有效的分离制备柑桔裂皮病类病毒的方法

类病毒分子量小,在寄主体内含量低,不易提纯。一般提纯方法需经过酚抽提,去糖、透析、氯化锂处理、DNase消化和纤维素层析,由于步骤复杂,所以回收率较低,同时所得样品纯度不高,难以满足各种需要。本文报道一种柑桔裂皮病类病毒(CEV)的分离制备方法,采用苯酚-氯仿抽提核酸,核酸经LiCl处理后,进行纤维素(CF-11)层析,然后经PAGE纯化CEV。该方法具有操作简便,所使用的设备简单,纯化CEV效果好等优点,是柑桔裂皮病类病毒早期诊断,序列分析,分子克隆和防治等研究必不可少的基础工作。     

猴头菌和金针菇漆酶对不同染料的降解

利用漆酶(laccase)处理染料废水是近年来研究的热点.本研究以猴头菌Hericium erinaceus和金针菇Flammulina filiformis的发酵液为试验材料,通过硫酸铵沉淀、离子交换层析和超滤等方法,对发酵液中的漆酶进行了初步的分离纯化,然后分别研究了两种初提纯漆酶及其与小分子介体组成的漆酶介体系统...     

亲和层析法分离纯化猪肺血管紧张素转换酶

亲和胶合成实验以双环氧化合物1,4-丁二醇-2-缩水甘油醚(1,4-butanediol diglycidyl ether)为活化体及连接臂,在硼氢化钠(NaBH)存在的碱性条件下,将载体Sepharose CL―4B与雷诺普利(lisinopril)共价连接在一起,成功合成亲和层析胶,并利用亲和层析胶对猪肺血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme, ACE）进行分离提纯.猪肺组织匀浆经1.6～2.6 mol/L硫酸铵分级沉淀、透析平衡、亲和柱分离等步骤,从200 g猪肺中提纯得到0.79 mg ACE蛋白,酶活力回收11.9％,比活力38.8 U/mg.与层析前的酶液比较,亲和层析一步提纯可达264倍;与肺匀浆液比较提纯达808倍.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见,提纯的猪肺ACE为一条带,分子质量约为180 ku.     

昆虫抗冻蛋白的分离纯化及特性分析

昆虫抗冻蛋白具有很高的热滞活性,可保护机体免受结冰引起的伤害。昆虫抗冻蛋白的分离纯化多采用凝胶过滤层析、离子交换层析及HPLC等技术,已用于鱼类抗冻蛋白纯化的冰亲和纯化(IAP)技术也可考虑应用于昆虫抗冻蛋白的分离提纯。昆虫抗冻蛋白具有高活性,规则的一级结构及类似的冰晶结合表面等特性。     

蓖麻籽提取物抗雌鼠生育活性成分体外筛选方法的建立

用不同剂量蓖麻籽乙醚提取物处理原代培养大鼠蜕膜细胞和黄体细胞,观察细胞形态变化,同时用MTT法检测细胞活力,探讨蓖麻籽提取物抗雌鼠生育活性成分的作用靶标,从而建立其有效成分的体外筛选方法。结果表明：400μg／mL蓖麻籽提取物处理液对体外培养大鼠蜕膜细胞生长有明显的抑制作用（P〈0．05）;提取物对蜕膜细胞的半抑制浓度（IC50）为568．6±5．3μg／mL,r=0．9790;其抑制作用具有较好的量-效关系。而提取物对黄体细胞活力的抑制作用不显著。结论：用大鼠离体培养蜕膜细胞的活力测定方法,作为蓖麻籽乙醚提取物抗雌鼠有效成分分离、提纯的活性跟踪指标是可行的。     

人类胰腺中发现一种生长素释放因子

1982年Thorner等从一名肢端肥大症妇女的胰腺中摘除了一个胰岛肿瘤,它能分泌一种生长素释放因子,使患者的垂体前叶分泌过多的生长素。经分离提纯,确定了这种生长素释放因子的氨基酸顺序;并成功地进行了人工合成。这种生长素释放因子是由40个氨基酸组成的直链肽。作者将这种因子称为:“人类胰腺生长素释放因子-40”(human pancreatic growth-hormone-releasing factor-40,简称hpGRF-40)。天然的hpGRF和大鼠下丘脑的生长素释放因子在葡聚精凝胶G 50层析中表现相同的性质,但可用高压液相层析将两者区分。由于(1)大量资料表明,从异位肿瘤中产生的肽与从原位产生的同功能肽之间在结构上有密切联系;(2)高度纯化的大鼠下丘脑生长素释放因子的N端部分氨基酸顺序与bpGRF-40相似;(3)用合成的hpGRF-40和纯化的大鼠下丘脑生长素释放因子在体外实验中得到平行的剂量-反应曲     

根霉12#发酵产生纤溶酶的酶学性质

溶栓疗法是血栓性疾病安全有效的治疗手段,开发新型纤溶酶具有实际应用意义.分离自南方小酒药的根霉12豆粕和麸皮为原料可产生纤溶酶.已采用盐析,疏水层析、离子交换层析和凝胶层析方法对纤溶酶分离提纯.提纯的纤溶酶比活力2143u/mg(尿激酶单位),有直接溶解血栓和激活纤溶酶原的双重溶栓作用,降解纤维蛋白α、β和γ肽链速度快;最适作用温度45℃,适宜作用pH范围6.8～8.8;等电聚焦方法测定该酶等电点8.5±0.1;只分解生色底物N-Succinvl-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA,其米氏常数Km为O.23mmol/L,酶转换数Kcat为16.36 s-1;Molish实验和甲苯胺蓝实验均证明该酶为糖蛋白,地衣酚-硫酸法测得该酶含糖量4.70%;EDTA、PMSF、PCMB对该纤溶酶有抑制作用,说明活性中心含有巯基、金属和丝氨酸;N端12个氨基酸序列为NH2-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly,与其它生物来源的纤溶酶相比较没有同源性.根霉12#产生的纤溶酶为新型纤溶酶,有希望开发成溶栓药物.