耐酸性α-淀粉酶高产菌株的选育

从酒曲中筛选得到1株高产耐酸性α-淀粉酶的野生菌株Tx-78,经鉴定为曲霉属的黑曲霉(Aspergil-lus niger)。以Tx-78作为出发菌株,通过紫外线(UV)诱变和亚硝基胍(NG)诱变,获得了遗传稳定的高产菌株UN78358,其产酶量可达到1 120 U/mL。     

α-淀粉酶高产菌株选育方法的研究

在含有氨苄青霉素1—10μg/ml的LB液体培养基中,接入枯芽孢杆菌BF7658菌悬液,在37℃下振荡培养3—5天,经平板分离单菌落以及摇瓶发酵试验,初筛获得2213、2104和2120等α-淀粉酶高产菌株。将2213菌株的菌悬液涂布于含有4-6μg/ml氨苄青霉素的2%淀粉培养基上,复筛得到4213、4218、4237等α-淀粉酶高产菌株。4213菌株再经4次亚硝基胍诱变,未能得到蛋白酶活性低、α-淀粉酶活性高的突变株。     

α-淀粉酶高产菌株选育方法的研究

在含有氨苄青霉素1—10μg/ml的LB液体培养基中,接入枯芽孢杆菌BF7658菌悬液,在37℃下振荡培养3—5天,经平板分离单菌落以及摇瓶发酵试验,初筛获得2213、2104和2120等α-淀粉酶高产菌株。将2213菌株的菌悬液涂布于含有4-6μg/ml氨苄青霉素的2%淀粉培养基上,复筛得到4213、4218、4237等α-淀粉酶高产菌株。4213菌株再经4次亚硝基胍诱变,未能得到蛋白酶活性低、α-淀粉酶活性高的突变株。     

耐酸耐热α-淀粉酶高产菌株选育的初步研究

目的：从长期高温堆放的富含淀粉质的土壤里筛选高产α-淀粉酶的菌株并对及产酶条件和酶学性质进行研究。方法：采用平板筛选法获得目的菌株,用观察形态和基因组16S基因序列分析相结合的方法进行鉴定,通过单因素和正交实验确定最适产酶条件,并提取粗酶液研究酶反应条件。结果：得到高产α-淀粉酶的菌株Bacillussp.I15,最适产酶条件为：初始pH6.0,40℃培养时间36h。该酶最适反应温度为70℃,且具强耐热性,100℃下相对酶活性仍保持在78%以上;热稳定性高,且无Ca^2＋依赖性,100℃温育1h,酶活仍能保持66%;最适反应pH为7.0,且具有广谱耐酸性,在pH3.0～7.0之间相对酶活性均能保持在到67%以上。结论：Bacillussp.I15可高产耐热耐酸α-淀粉酶,具有良好的应用前景。     

河内白曲霉酸性α-淀粉酶高产菌株的诱变选育

采用不同浓度的硫酸二乙酯(DES)诱变处理萌发的河内白曲霉孢子,后涂布于筛选培养基,根据透明圈大小初筛高产酸性α-淀粉酶的突变株,并进行摇瓶复筛。结果表明:将萌发的河内白曲霉孢子于1%DES处理20 min,致死率为84.3%,后涂布筛选获得一株高产酸性α-淀粉酶的突变株Hanoi white starter 4,发酵后酶活力达20.8 U/g,比野生菌株提高了61.2%,且遗传稳定性良好。     

枯草杆菌BF-7658α-淀粉酶高产菌株209的选育和投产

以甲基磺酸乙酯(EMS)处理枯草杆菌(Bacillus subtilis)BF-7658的孢子,经过增殖培养,从中分离到209号菌株,其α-淀粉酶摇瓶发酵单位比原生产菌株06-11约高30％;在孢子接种,低浓度发酵,高浓度补料,少加勤补的工艺条件下,投入10,000升、20,000升罐发酵生产α-淀粉酶,发酵单位可增加一倍。     

抗噬菌体α-淀粉酶生产菌株的选育鉴定会

中国科学院微生物研究所和无锡酶制剂厂协作,对国内α-淀粉酶(BF7658)生产中出现的噬菌体及其抗噬菌体菌株的选育进行了研究,并取得成果。本工作已于1986年12月13—14日由无锡市科委主持在无锡酶制剂厂召开了鉴定会。来自高校,科研和生产使用等     

酸性α-淀粉酶生产菌株的选育的初步研究

从淀粉厂的酸性土壤中筛选得到一株生产酸性α-淀粉酶的野生菌,YX-1。此菌株具有较高的产酶能力,初步鉴定为Bacillus stearothermophilus。YX-1能够生产两种α-淀粉酶,在其发酵过程中具有两个产酶高峰,提取两个产酶期的粗酶EI和EII,经特性分析发现两种酶的最适pH值分别为4.5和5.0,最适温度均为60℃。     

枯草杆菌α——淀粉酶基因的遗传学分析及高产菌株的选育

枯草杆菌α-淀粉酶大部分可分泌于培养基中,少量存在于细胞内部,为此α-淀粉酶是枯草杆菌的胞外酶,而且是枯草杆菌主要的胞外酶之一。在培养基中积聚的α-淀粉酶至少在细胞内存在两个调节系统:即α-淀粉酶结构     

黑曲霉α-鼠李糖苷酶高产菌株的选育

本文首次报道利用Davis方法制备的透明圈法筛选α-鼠李糖苷酶高产菌株.用甲基磺酸乙酯对出芽8 h的黑曲霉孢子进行诱变处理,用透明圈法初筛出的菌株中,产量提高40%以上的突变菌株占11%;用摇瓶培养对初筛出的菌株进行两轮复筛α-鼠李糖苷酶高产突变株T-226,摇瓶培养α-鼠李糖苷酶活达373.4 U/mL,比出发菌株提高了22.7%.对该高产突变株进行5 L罐发酵实验,发酵84 h测得α-鼠李糖苷酶活为631.9 U/mL.用新建立的方法选育高产α-鼠李糖苷酶的高产菌株,不仅具有较高的筛选效率,还具有良好的准确性.     

高产α-转移葡萄糖苷酶菌株的诱变选育研究

α-转移葡萄糖苷酶是生产低聚异麦芽糖的关键酶。该文成功筛选了2株产α-转移葡萄糖苷酶菌株。在此基础上,进行了菌株的诱变选育和遗传稳定性试验,确定2株产酶酶活较高的突变株,有望将来应用于低聚异麦芽糖的生产中。     

ε-聚赖氨酸高产菌株的选育

正ε-聚赖氨酸(PL)由链霉菌合成、分泌[1],对细菌、霉菌、酵母菌等有强烈的生长抑制作用,是一种被广泛应用的生物食品防腐剂。但野生型产生菌的ε-PL合成能力都比较低,利用物理和化学诱变,选育S-2-氨基乙基-L-半胱氨酸和甘氨酸抗性突变株,已见报道的最高摇瓶产量为2.11 g/L[2];应用等离子诱变技术和基因组重排技术,可将ε-PL最高摇瓶产量提高到3.11 g/L[3]。但传统的选育手段耗时、耗     

通过同源介导α-淀粉酶基因扩增改良地衣芽孢杆菌α-淀粉酶生产菌株

地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶(BLA)是淀粉水解与生物加工过程中重要关键酶制剂之一.为了进一步提高地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶生产菌株的生产性能,本研究构建了一种含有地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶编码基因amyL的整合性重组质粒pBL-amyL.将重组质粒pBL-amyL转化入BLA工业生产菌株Bacillus licheniformis B0204,再在卡那霉素存在下介导其B.1icheniformis B0204染色体中的同源整合与高温α-淀粉酶编码基因amyL的扩增,由此获得了携带多个amyL拷贝的转化子.对转化子的amyL拷贝数及其BLA发酵水平分别用荧光实时定量PCR及摇瓶发酵试验进行评价与鉴定.与出发菌株B0204相比,含2～5倍amyL拷贝数的重组菌的BLA的合成水平显著提高.其中,重组菌REBL18生产BLA的水平提高了89.2%.     

果胶酶高产菌株选育

从土壤中分离筛选到一株具有较强果胶分解能力的野生菌株Ｎ３２８,经初步鉴定为米曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）。此菌株经紫外线、ＣＯ６０－γ射线、硫酸二乙酯连续诱变得到突变株ＺＩ－４７,该突变株的发酵滤液,当以果胶为底物时,酶活力达３８８７ｕ／ｍｌ（ｕ：ｍｇ还原糖／ｍｌ·ｈ）,为出发菌株的１０倍。且其遗传性能稳定,连续传代１２代,４℃冰箱保存１年,酶活基本无降低。其果胶酶活力超过国内已报道的所有菌株。     

木聚糖酶高产菌株选育

以黑曲霉为出发菌,经紫外线和亚硝基胍（NTG）交替诱变处理,获得一株木聚糖酶高产菌,并初步研究了其固体发酵条件,在该条件下最高酶活力可达3181IU／min.gdw。     

应用转化方法从枯草杆菌168中选育高产α-淀粉酶产生菌

以枯草杆菌168(trp~-)为受体菌,枯草杆菌SH-16(str~R)和枯草杆菌209(lin~R)为供体菌,通过DNA转化而获得抗链霉素,抗林可霉素和色氨酸缺陷回复原养型的各种枯草杆菌转化体。其中,有小部分转化体产生的α-淀粉酶比供体菌高达24%,大部分转化体产生的α-淀粉酶与供体菌差不多或较低,但均比受体菌高。结果表明用DNA转化方法来选育新菌种是有一定价值的。     

应用转化方法从枯草杆菌168中选育高产α-淀粉酶产生菌

以枯草杆菌168(trp~-)为受体菌,枯草杆菌SH-16(Str~R)和枯草杆菌209(lin~R)为供体菌,通过DNA转化而获得抗链霉素,抗林可霉素和色氨酸缺陷回复原养型的各种枯草杆菌转化体。其中,有小部分转化体产生的α-淀粉酶比供体菌高达24%,大部分转化体产生的α-淀粉酶与供体菌差不多或较低,但均比受体菌高。结果表明用DNA转化方法来选育新菌种是有一定价值的。     

高温α-淀粉酶生产菌种选育的研究

以地衣芽孢杆菌B．198为出发株,经不同诱变剂反复诱变和自然选育,得到突变株A.404l,其产高温α-淀粉酶为出发株的100倍。在摇瓶培养条件下,酶活力达200u／ml．是一株无孢子并带有Rifr、Met-、Arg-标记的抗分解代谢阻遏突变株。初步纯化的A1041α-淀粉酶最适反应pH为5—7,晟适反应温度90—95℃,于90℃、60分钟处理不失活,表明突变株A．4041所产α-淀粉酶是高温淀粉酶,具有工业生产价值。     

高温α-淀粉酶生产菌种选育的研究

以地衣芽孢杆菌B．198为出发株,经不同诱变剂反复诱变和自然选育,得到突变株A.404l,其产高温α-淀粉酶为出发株的100倍。在摇瓶培养条件下,酶活力达200u／ml．是一株无孢子并带有Rifr、Met-、Arg-标记的抗分解代谢阻遏突变株。初步纯化的A1041α-淀粉酶最适反应pH为5—7,晟适反应温度90—95℃,于90℃、60分钟处理不失活,表明突变株A．4041所产α-淀粉酶是高温淀粉酶,具有工业生产价值。     

热稳定β－淀粉酶高产菌株选育及发酵条件研究

从土壤中分离得到一株高温放线菌V4菌株(Thermoactinomyces sp．v4),经测定能产生热稳定β-淀粉酶。V4菌株经过热诱变获得一株具高活力β-淀粉酶的变异株A61产酶活力从400u／ml提高到1000u／ml。A61菌株产生的β-淀粉酶最适反应温度为60℃,酶的热稳定性良好,50℃保温4小时不失活,55℃保温2小时仍具有最初活力的96%。