梅毒螺旋体重组抗原的表达及在梅毒血清学诊断中的应用

目的：克隆、表达梅毒螺旋体（Treponema pallidum, Tp）膜蛋白TpN47、TpN17、TpN44.5和TpN15,建立双抗原夹心ELISA法,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法：应用聚合酶链反应法（PCR）从Tp全基因组中扩增4个目的片段,克隆到载体pET-HT-JKM中,在BL21(DE3)plysS菌中诱导表达,Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,辣根过氧化物酶标记,双抗原夹心酶联免疫吸附法检测人血清中的特异性IgM和IgG抗体。结果：成功表达了4种重组蛋白用作ELISA包被和酶标抗原检测国家Tp参比血清,特异性和灵敏度均为100％;检测385份临床血清样本,结果与TPPA法相比符合率达到99％（P＜0.01）,灵敏度和特异性分别为98.2%（162/165）和99.5%（219/220）。结论：表达的4种重组抗原具有很好的生物活性,为理想的梅毒的血清学诊断用抗原。以这4种表达蛋白为基础建立的双抗原夹心ELISA法灵敏度高,特异性好,而且方法简单,结果客观,易于自动化操作,值得临床大力推广。     

三种方法检测梅毒螺旋体抗体的比较

应用ELISA法、TRUST法和TPPA法分别检测梅毒患者血清标本中梅毒螺旋体IgG抗体,比较3种方法的敏感性和特异性,选择一种适合于梅毒螺旋体抗体检测的高敏感性和高特异性的血清学检测方法。     

电化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的应用研究

目的对罗氏电化学发光免疫法(ECLIA)检测梅毒螺旋体特异性抗体的临床价值进行评估。方法收集梅毒疑似病例血清标本132份,分别用ECLIA、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)和免疫印迹法(WB)进行检测,以WB为金标准,计算并比较ECLIA和TPPA的灵敏度和特异性,进而比较化学发光免疫法检测低S/CO值和高S/CO值的灵敏度和特异性差异。结果针对132份血清标本,ECLIA敏感性为100.00%,特异性为83.33%,阳性预测值为96.43%,阴性预测值为100.00%,总符合率为96.97%。TPPA敏感性为93.52%,特异性为87.50%,阳性预测值为97.12%,阴性预测值为75.00%,总符合率为92.42%。ECLIA检测1≤S/CO3组与S/CO≥3组的敏感性均为100.00%,特异性分别为86.96%和95.24%,结论 ECLIA检测具有较高的敏感性,适合临床大样本筛查,对S/CO值低的标本应结合TPPA、WB及临床资料确诊。     

免疫-PCR法检测梅毒螺旋体特异性抗体

以梅毒螺旋体重组蛋白为抗原,应用免疫-PCR方法检测梅毒螺旋体抗体,并同常规ELISA法进行比较,探讨免疫-PCR方法检测梅毒螺旋体特异性抗体的可行性。结果免疫-PCR法敏感性是常规ELISA法的104倍,阳性检出率高于ELISA法;对照血清标本梅毒螺旋体抗体检测为阴性。表明免疫-PCR方法具有较高敏感性和特异性,有一定的临床推广价值,对梅毒患者的早期诊断及时治疗等具有重要意义。     

基因重组抗原检测梅毒螺旋体抗体研究

梅毒是一种传染性很强的性传播疾病,早期诊断是防止其传播及治疗的关键。采用基因重组的梅毒螺旋体P47和P15抗原对289份临床标本进行梅毒螺旋体抗体的检测,并与常规方法进行了比较,结果表明：重组抗原ELISA法具有较高的敏感性和特异性,并能对梅毒进行早期诊断,可以代替常规方法检测梅毒螺旋体抗体。186份现患和已治愈梅毒患者标本,重组抗原ELISA法、TPHA法和RPR法均为阳性;60份健康献血员标本,重组抗原ELISA法和TPHA法、RPR法均为阴性;17份与梅毒患者有性接触者的标本,重组抗原ELISA法有2份阳性,而TPHA法、RPR法均为阴性,1个月后复查这2份血清TPHA和RPR均为阳性;6份RPR和类风湿因子均为阳性的血清,重组抗原ELISA法和TPHA法均为阴性,;20份肝硬化患者血清,3种方法检测均为阴性。     

梅毒螺旋体TpN17与TpN47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫吸附试验建立和应用

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成的人工基因片段tpE17-47,然后构建了全长tpN17、tpN47基因以及tpE17-47融合基因的原核表达系统。SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查结果显示,所构建的原核表达系统能稳定表达目的重组蛋白rTpN17、rTpN47和rTpE17-47,其产量分别约占细菌总蛋白的36%、20%和28%。采用Ni-NTA亲和层析法提纯的rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白经SDS-PAGE分析,均显示为单一的蛋白条带。Western blotting结果表明,rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别。以rTpE17-47为包被抗原的rTpE17-47-ELISA检测630例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%,仅略高于TPPA(97.9%)(P>0.05),但明显高于rTpN17-ELI...     

胶体金法与TPPA法检测梅毒特异性抗体的对比研究

目的 :探讨梅毒螺旋体特异性抗体胶体金法 (TPAb)在临床工作中的应用。方法 :以梅毒累旋体明胶凝集试验 (TPPA)为“金标准” ,同时用TPAb法检测梅毒高危人群的血清。结果 :两种方法经 χ2 检验P >0 0 5 ,差异没有显著性 ,Kappa值为 0 86 ,TPAb法其敏感性 88 9% ,特异性 97 8% ,准确性 93%。结论 :TPAb法可推荐用于血清学梅毒特异性抗体检查 ,有助于临床梅毒的快速诊断     

梅毒螺旋体TpN17与TpN47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫吸附试验的建立和应用

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性.根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成的人工基因片段tpE17-47,然后构建了全长tpN17,tpN47基因以及tpE17-47融合基因的原核表达系统.SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查结果显示,所构建的原核表达系统能稳定表达目的重组蛋白rTpN17,rTpN47和rTpE17-47,其产量分别约占细菌总蛋白的36%、20%和28%.采用Ni-NTA亲和层析法提纯的rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白经SDS-PAGE分析,均显示为单一的蛋白条带.Western blotting结果表明,rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别.以rTpE17-47为包被抗原的rTpE17-47-ELISA检测630例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%,仅略高于TPPA(97.9%)(P>0.05),但明显高于rTpN17-ELISA(83.8%)、rTpN47-ELISA(83.3%)和RPR(72.1%)(P<0.01).上述ELISAs和TPPA对25例SLE、36例RA患者和250例健康体检者的血清标本检测结果均为阴性,但RPR分别有1、2和2例标本检测结果为阳性.本试验成功地构建了rTpE17-47抗原表位融合基因及其高效原核表达系统,所建立的rTpE17-47-ELISA可作为一种快速、简便、安全、敏感和特异的梅毒血清学筛查或诊断新方法.     

化学发光微粒子免疫法和梅毒螺旋体颗粒凝集试验检测梅毒抗体的比较

目的评价化学发光微粒子免疫法（chemiluminescence microparticle immunoassay, CMIA）检测临床血清标本梅毒螺旋体抗体的敏感性和特异性。方法用梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TVeponema Pallidum particie agglutination test,TPPA）法作为对照标准,采用CMIA法检测2012年11月到12月1200例住院患者的血清标本,并用卡方检验评价两种检测方法对同一个样本的化验结果的一致性。结果1200例血清标本中用CMIA法检出阳性率为11.3%,TPPA法检出阳性率为10. 9% ,以TPPA为标准,CMIA法敏感性为96. 9%,特异性为99. 2%,其中CMIA法检测血清S/CO值〉 4. 00的110例,用TPPA确认107例阳性,阳性预测值（PPV）为97.3%;CMIA法S/C0值在1.0-9.0,TPPA可出现阴性结果。结论CMIA法可替代TPPA法进行梅毒螺旋体抗体检测,对于CMIA法检测S/C0值1. 0-4.0的需进一步复检。     

明胶颗粒凝集试验联合ELISA法在梅毒检测中的应用价值

目的分析明胶颗粒凝集试验(TPPA)联合酶联免疫吸附试验(ELISA)在梅毒检测中的应用价值。方法选择我院2015年1月至2018年12月收治的128例疑似梅毒患者为研究对象,将其中43例临床确诊患者纳入梅毒组,余下85例为非梅毒组,全部受试者均接受ELISA法联合TPPA检测,比较单独ELISA法和ELISA联合TPPA检测的结果。结果梅毒组患者中ELISA法诊断阳性35例,阴性8例;ELISA联合TPPA诊断阳性42例,阴性1例;ELISA法假阳性率14.63%(6/41),明显高于ELISA联合TPPA法的2.33%(1/43),差异有统计学意义(χ~2=4.163,P=0.041)。ELISA联合TPPA诊断梅毒的特异性、敏感性、阴性预测值及阳性预测值分别为98.82%、97.67%、98.82%、97.67%,均显著高于单独ELISA检测的92.94%、81.40%、90.80%、85.37%,差异均有统计学意义(χ~2=143.650、6.081、5.575、4.163,P0.001、=0.014、=0.018、=0.041)。结论 ELISA适用于大批量梅毒筛查,TPPA法的特异性及敏感性高,可作为梅毒血清抗体检测的确认试验。二者联合检测能够提高梅毒诊断效能,具有较高的应用价值。     

一期梅毒实验室诊断差异性研究

目的通过梅毒螺旋体初筛试验、确认试验和鉴别诊断试验,探讨一期梅毒实验室诊断差异性,最大限度减少漏诊与误诊,为深入研发新型早期梅毒诊断试剂奠定基础。方法依据2000年中国卫生部防疫司颁布的性病诊断标准,临床筛选一期梅毒患者86例（研究组）和非梅毒患者100例（对照组）,对患者血清进行甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）初筛和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）确认。筛选临床体征、TRUST法和TPPA法三者结果有差异的患者进一步鉴别诊断,鉴别诊断主要应用荧光定量PCR（FQ-PCR）法、免疫PCR法与自身抗体检测等试验。结果初筛TRUST法灵敏度和特异性分别为62．8％、93．0％;确认TPPA法灵敏度与特异性分别为66．3％、100％。TRUST法和TPPA法两者结果差异占12．8％;临床体征诊断、TRUST法和TPPA法三者结果差异占41．9％。TPPA法与TRUST法两者均阴性的一期梅毒患者中,FQ-PCR阳性率达88．0％,免疫PCR阳性率占40．0％。TPPA法阳性、TRUST法阴性的一期梅毒患者免疫PCR法与TPPA法结果一致;TPPA法阴性、TRUST法阳性11例患者中结核抗体阳性2例,类风湿因子阳性3例与抗Sm抗体结果阳性6例。结论一期梅毒患者实验室诊断结果差异性较大,漏诊与误诊的比例较高,有待研发新型的诊断试剂和提高诊断水平。     

现用梅毒血清试验临床应用价值评估

通过检测梅毒患者正规治疗前、后血清抗体变化,评价梅毒实验室各种血清学试验方法对梅毒的诊断和随访的临床意义.本文采用梅毒螺旋体(TP)暗视野显微镜检查、快速血浆反应素(RPR)试验、TP明胶凝集试验(TPPA)和TP-IgM酶联免疫吸附试验(TP-IgM ELISA)等方法对135例梅毒患者正规治疗前、后的血清进行检测....     

巢式PCR法在早期梅毒诊断中的应用评价

目的：评价巢式PCR（nPCR）法在早期梅毒诊断中的临床应用价值,以提高早期梅毒诊断的灵敏度和特异性。方法：选择2010年10月至2011年11月来我院就诊,经临床综合分析为一期梅毒的患者195例和同期就诊的120例非梅毒患者为研究对象,采用nPCR法对棉拭子标本和血液标本中梅毒螺旋体特异性基因tpp47进行扩增检测,所有标本同时做暗视野镜检和Tp—ELISA血清学检测。结果：nPCR法共检测出阳性标本176例,其灵敏度和特异性分别为90．3％和100％,明显高于暗视野镜检和Tp-ELISA法,差异有统计学意义。结论：nPCR法在早期梅毒诊断中具有较高灵敏度和特异性,可以作为暗视野镜检和血清学检测的补充试验。     

梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验的建立及应用

建立梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验（ELISA）,用于梅素血清学诊断和调查。其法,用表达的重组抗原IPN17和TmpA,建立检测血清特异抗体的间接ELISA,并与其它检测方法比较,分别检测梅毒参比血清、病人及献血员血清。其结果,敏感性、特异性均为100％。新建ELISA与TPHA的总符率为95．7％,明显高于RPR与TPHA的总符合率（89．1％）。献血员人群抗体阳性率为0．3％－0．69％,健康人群中抗体阳性率较低。     

早期先天梅毒几种实验室诊断方法的评价

目的评价梅毒螺旋体蛋白印迹试验(TPPA-IgM-WB)和梅毒螺旋体19(s)-IgM酶联免疫吸附法[TP-19(s)-IgM-ELISA]在先天梅毒早期诊断中的作用。方法对45例梅毒孕妇所产46例(1例双胞胎)新生儿运用血清IgM-WB试验、梅毒螺旋体19(s)-IgM酶联免疫吸附法[TP-19(s)-IgM-ELISA]和常规血清学方法(TPPA、RPR、FTA-ABS-IgM)检测,评价上述试验诊断方法在先天梅毒早期诊断中的作用。结果45例梅毒孕妇所生的新生儿中,按常规综合诊断方法21例确诊为先天梅毒,新生儿血清IgM蛋白印迹试验23例阳性,梅毒螺旋体19(s)-IgM酶联免疫吸附法24例阳性(21例常规方法诊断为先天梅毒)。30例作为对照的非梅毒孕妇及新生儿各项检查均为阴性。结论血清IgM蛋白印迹试验和梅毒螺旋体19(s)-IgM酶联免疫吸附法[TP-19(s)-IgM-ELISA]诊断先天梅毒具有较高的特异性和敏感性,结果显示可能高于现行的常规综合诊断方法的诊断价值。