一株野生离褶伞菌株的ITS序列分析及其生物学特性的研究

本研究以1株野生离褶伞属真菌为研究对象,通过扩增rD NA-ITS序列并测序分析后确定该野生菌株为暗褐离褶伞(Lyophyllum loricatum)。进一步对该菌株进行生物学特性研究,结果表明,其菌丝可生长温度范围为10~35℃,最适生长温度为25℃,可生长的pH范围为4.0~9.5,最适生长pH为5.5,最适生长碳源为麦芽糖,最适生长氮源为蛋白胨,最适生长因子为肌醇。本研究对暗褐离褶伞菌株的初步探索,为暗褐离褶伞的驯化栽培提供了重要的理论基础。     

一株纤维素降解菌的分离、鉴定及产酶条件初步研究

目的:筛选具有纤维素降解能力的菌株.方法:在广州近郊自然环境取样,利用CMC固体平板筛选具有纤维素降解能力的茵株.结果:分离获得1株纤维素降解能力较强的菌株OY-01.该菌株最适生长温度和pH分别为35℃和6.0-7.0.形态学观察、生理生化和28S rDNA序列分析表明该菌株属于烟曲霉(Aspergillus fumigatus).结论:菌株OY-01被鉴定为烟曲霉,其最适产酶条件为:氮源为硫酸铵,浓度0.15%,温度为35℃,初始pH6.0-7.0,培养48-60h,Aspergillus fumigatus OY-01具有一定的工业应用潜力.     

三株氧化硫硫杆菌的分离与鉴定

从煤堆废水中分离得到3株嗜温嗜酸硫氧化细菌.这3株菌株为革兰氏阴性、菌体大小0.4～0.7 μm×1～2 μm、短杆状运动细菌,其最适生长温度为 30 ℃和最适生长pH 2.0～2.5.它们能够利用元素硫,硫代硫酸钠和连四硫酸钾为能源进行自养生长,不能利用有机物质以及硫酸亚铁、黄铁矿和黄铜矿等无机物质作为能源生长.细菌的形态、生理生化特性研究以及基于16S rRNA序列同源性构建的系统发育树结果表明,这3株细菌初步鉴定为氧化硫硫杆菌.氧化硫硫杆菌能够通过产酸有效促进黄铜矿的浸出速率和浸出率.     

一株嗜热嗜酸纤维素酶高产霉菌分离鉴定及其酶学性质研究

从含有大量纤维素物质的堆肥里分离到一株土曲霉,其最适生长温度为45℃,最适生长酸碱度为pH2.0,在最适条件下培养该菌的最高CMCase活性可达3.680IU/mL,此酶最适反应温度和酸碱度为60℃和pH2.0,并且具有较高的热稳定性。     

越冬沼气池中甲烷螺菌的分离及其系统分类学分析

通过改进的亨盖特(Hungate)厌氧技术,从越冬猪粪发酵沼气池中分离到1株产甲烷菌菌株SH01。该菌呈弯曲杆状,革兰氏阴性,有运动性,形成淡黄色菌落,能利用二氧化碳和甲酸钠作为碳源,但不能利用甲醇、乙酸钠和三甲胺。该菌最适生长pH为6.8～7.2,最适生长温度为35～40℃,最适Na 浓度低于0.1mol/L。通过生理、形态结构特征与16S rDNA序列的同源性分析,表明菌株SH01是甲烷螺菌属中的一个成员,为亨氏甲烷螺菌(Methanospirllum hungatei)。     

南极地区海底沉积物中低温菌的鉴定与生长温度特征

从南极半岛及舍得兰群岛海底沉积物的13个样品中分离到23株细菌,进行了0、5、10、15、18 20、25℃温度梯度培养试验及耐盐度试验。由生长温度曲线得知,其中15株菌在0℃生长,依据菌株不同,其最适生长温度范围均在5—20℃以内;25℃下生长明显下降(9株)或缓慢下降(6株),属于耐冷菌。经鉴定,假单胞菌11株;弧菌1株;芽孢杆菌2株及黄杆菌1株。这15株菌中2,11(均为假单胞菌)及15(黄杆菌)的最适生长温度均为5℃;且前两株菌对中温较敏感;10 (假单胞菌);14(芽孢杆菌)的最适生长温度为10℃。本文还讨论了菌的分布与地区,以及与样点水源和距陆地远近间的相关性。     

一株中度嗜热嗜酸硫氧化杆菌的分离和系统发育分析

从云南腾冲温泉酸性水样分离得到一株中度嗜热嗜酸硫氧化杆菌MTH 0 4 ,对分离菌株进行了形态、生理生化特性研究及 1 6SrDNA序列分析。该菌株为革兰氏阴性细菌 ,短杆状 ,菌体大小 (0 6～ 0 8) μm× (1～ 2 ) μm ,化能自养 ,可利用硫磺、四硫酸盐、硫代硫酸盐为能源生长 ,不能利用蛋白胨、葡萄糖、酵母粉 ,也不能进行混合型生长。最适生长温度在 4 0℃～ 4 5℃之间 ,最适生长pH 2 0～ 3 0 ,代时 8h。以 1 6SrDNA序列同源性为基础构建了包括 1 3株相关种属在内的系统发育树 ,结果表明 ,MTH 0 4与喜温硫杆菌 (Thiobacilluscaldus)处于同一进化树分支中 ,相似性达 99 5 %以上     

引起曝气池产生泡沫的球杆菌生理特性研究

从城市生活污水厂曝气池表面泡沫中分离到1株罕见的泡沫产生菌CU2,该菌为球杆状,通常成对排列,经鉴定为乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)。该菌大量繁殖,可产生严重的泡沫。对其生理特性研究表明:CU2为兼性好氧菌,能在温度15~40℃,pH值3~11范围内生长,最适生长温度为32.5℃,最适生长pH值为10。致死温度为95℃,10 min。对次氯酸钠消毒液敏感。     

油脂下脚料降解菌的选育

从油污土样等样品分离获得两种高产蛋白酶的菌株,命名为M1、DB2,其酶活力分别213.04,206.95 U/mL.利用该两株菌分别对大豆粕,芝麻粕,菜籽粕作为发酵基质进行了初步的降解蛋白能力比较研究,结果表明M1、DB2均能很好的降解三种粕中的粗蛋白.M1、DB2的最适生长温度分别为30、35 ℃,最适生长pH分别为7、8,最佳生长时间分别为12、32 h.初步鉴定M1、DB2为芽孢杆菌属.     

一株果胶酶产生菌HDYM-02的分离鉴定及系统发育分析

对1株从沤麻液中分离的果胶酶产生菌HDYM-02进行了形态、生理生化特征及16S rDNA序列分析,结果表明该菌株为革兰染色阳性,菌体大小为(1~1.2)×(2.7~2.9)μm,最适生长温度为33~35℃之间,最适生长pH为6.5~7.0。以该菌株16S rDNA序列同源性为基础,比对分析发现其与蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)的同源性高达99.5%。     

一株嗜热地衣芽孢杆菌及其产高温淀粉酶的初步研究

从云南腾冲热海热泉中分离到23株产高温淀粉酶的菌株,选取酶活最高的一株菌株进行生长特征、16S rRNA基因测序及系统进化分析表明,该菌株为嗜热的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),并命名为B.1icheniformis Tamy6。该菌株生长范围为37～70℃,最适生长温度为55℃。对该菌所产高温淀粉酶的性质研究表明:该酶在70℃具有最高催化效率,在98℃保温30min,仍有45%的活力,其最适反应pH为5.0。通过Native-PAGE酶谱分析表明菌株Tamy6的粗酶液中含有一种类型的淀粉酶。通过TLC分析水解淀粉产物表明,其产物主要为葡萄糖、麦芽糖及3～5个葡萄糖基的寡糖,说明菌株Tamy6所产淀粉酶为高温α-淀粉酶。     

Characterization of glucoannylaserom Asperigillus terreus 4

A strain of Aspergillus terreus 4 was found to show extracellular amylolytic activity and the amylase was identified as glucoamylase enzyme. The optimum temperature for the enzyme activity was 60% and it was stable at this temperature for 1 h. The enzyme was optimally active at pH 5.0 and stable between pH 3.0-8.0. Km values of glucoamylase for soluble starch, amylose and amylopectin were 5.9 mg/ml, 4.8 mg/ml and 2.6 mg/ml respectively.     

解淀粉芽孢杆菌中温α-淀粉酶基因的克隆、表达与酶学性质分析

以中温α-淀粉酶生产菌株Bacillus amyloliquefaciens M23基因组DNA为模板。PCR扩增得到了2．0kb α-淀粉酶基因全长序列。该基因由上游启动子220bp,结构基因1544bp和终止序列320bp构成。将无信号肽的α-淀粉酶结构基因amyQ,克隆入表达载体pET28a,转化E．coli BL21（DE3）,经诱导,测定α-淀粉酶活性。结果表明：α-淀粉酶基因amyQ获得了活性表达,酶活力为2．297U／mL,SDS-PAGE电泳结果显示出分子量约为58kDa特异性蛋白质条带。酶学性质分析表明,重组α-淀粉酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6．5,在60℃保温15min保持85％以上活性,超过15min,酶迅速失活,在pH5．5～10．0环境下稳定。水解产物分析表明：淀粉水解终产物主要为麦芽寡糖和糊精和少量葡萄糖。     

嗜热菌来源的生淀粉酶分离纯化及其酶学性质

从嗜热菌库中分离到两株能水解生淀粉的菌株173和174,通过扩增和测定两株菌的16S rDNA序列并进行比对结果表明,所分离两株菌属于Geobacillus属的细菌.液体摇瓶发酵菌株173、174,其产生的生淀粉酶(简称RSDE173、RSDE174)活力分别达14.5 U/mL和12.9 U/mL.通过生淀粉吸附-熟淀粉洗脱系统和TOYOPEARL HW-55F系统进行分离纯化,得到纯化的RSDE173和RSDE174,纯化倍数分别为50和29,活力回收率分别为34%和41%.有关RSDE173和RSDE174酶学性质研究显示.对熟淀粉水解的最适作用温度均为70℃,而对生淀粉水解则分别在50℃～60℃和40℃～60℃下表现出高水解活力;对不同底物的最适作用pH值均为5.0～5.5;它们对大多数试验离子的敏感性较低,但个别离子如Co2 、Cu'2 对RSDE173或u'2 对RSDE174的酶活力有一定的抑制作用.纯化的这两种生淀粉酶对不同来源生淀粉的底物专一性并不相同.RSDE173底物专一性顺序为红薯淀粉>小麦淀粉>玉米淀粉>木薯淀粉>糯米淀粉;而RSDE174的糯米淀粉>小麦淀粉>红薯淀粉>玉米淀粉>木薯淀粉.RSDE173对生红薯淀粉有很好的降解,其水解糊化淀粉与生红薯淀粉的比值为1.48;而RSDE174优先降解生糯米淀粉,其相应比值为1.69.     

腊样芽孢杆菌低温淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究

从废弃的淀粉堆中筛选到一株产低温淀粉酶的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)GXBC-1,通过同源保守序列比对,从中克隆到一个淀粉酶基因.该基因全长为1764bp,编码588个氨基酸,分子量约为64kD.将基因克隆到大肠杆菌进行表达及酶学性质研究,该重组酶最适温度为35℃,在20℃仍具有53%的活力;最适pH...     

Characteristic Decrease of Nuclear Protein Kinase Activity in G1-Arrested Cells of Saccharomyces cerevisiae cdc28

An alkalopsychrotrophic strain, Micrococcus sp. 207, inducibly and extracellularly produced amylase and pullulanase. The main hydrolysis product from amylose, with a crude enzyme preparation, was maltotetraose. The optimum temperature for activity of the amylase was 60°C and that for pullulanase 55°C. The activities at 0 to 30°C exhibited similar activation energy values. In an optimized production medium at pH 9.7, the highest yields of these enzymes were obtained after cell growth at 18°C for 4 days. At pH 8.5, the yields of amylase and pullulanase became maximum after 3 days cultivation. With more prolonged cultivation, the yield of amylase but not that of pullulanase activity decreased. These enzymes were not produced at temperatures above 30°C. Sucrose was not effective as an inducer, but it stimulated cell growth and enhanced the enzyme productivities with soluble starch.     

海洋菌W11产中温淀粉酶的酶学特性

本研究从威海文登海域筛选获得一株产淀粉酶海洋菌W11,初步鉴定为弧菌,并探讨pH、温度、无机离子对淀粉酶活性和稳定性的影响及该酶底物浓度效应和Km值。结果表明:在pH7.5左右酶活性最高,pH在4.0～7.5范围内体现较强的稳定性。最适酶解温度为55℃,酶液在60℃以下有较好的热稳定性;Ba2+、Mn2+对淀粉酶有激活作用,而Cu2+、Mg2+、Zn2+则抑制淀粉酶活性,表观Km值为0.973mg/mL。海洋菌W11所产的中温淀粉酶保存温度范围较广、适应pH作用的范围广及稳定性较强,将有着广泛的应用潜力。     

Direct conversion of starch to L(+) lactic acid by amylase producing Lactobacillus amylophilus GV6

Lactobacillus amylophilus strain GV6, isolated from corn starch processing industrial wastes, was amylolytic and produced 0.96?g L(+) lactic acid per gram of soluble starch. The optimum temperature and pH for growth and L(+) lactic acid production were 37?°C and 6.5, respectively. At low substrate concentrations, the lactic acid production on corn starch was almost similar to soluble starch. The strain is fermenting various naturally available starches directly to lactic acid. The total amylase activity of the strain is 0.59?U/ml/min. The strain produced 49 and 76.2?g/l L(+) lactic acid from 60?g/l corn starch and 90?g/l soluble starch, respectively. This is the highest L(+) lactic acid among the wild strains of L. amylophilus reported so far.     

Purification and Characterization of an Extremely Thermostable Cyclomaltodextrin Glucanotransferase from a Newly Isolated Hyperthermophilic Archaeon, a Thermococcus sp.

The extremely thermophilic anaerobic archaeon strain B1001 was isolated from a hot-spring environment in Japan. The cells were irregular cocci, 0.5 to 1.0 μm in diameter. The new isolate grew at temperatures between 60 and 95°C (optimum, 85°C), from pH 5.0 to 9.0 (optimum, pH 7.0), and from 1.0 to 6.0% NaCl (optimum, 2.0%). The G+C content of the genomic DNA was 43.0 mol%. The 16S rRNA gene sequencing of strain B1001 indicated that it belongs to the genus Thermococcus. During growth on starch, the strain produced a thermostable cyclomaltodextrin glucanotransferase (CGTase). The enzyme was purified 1,750-fold, and the molecular mass was determined to be 83 kDa by sodium dodecyl sulfate (SDS)-polyacrylamide gel electrophoresis. Incubation at 120°C with SDS and 2-mercaptoethanol was required for complete unfolding. The optimum temperatures for starch-degrading activity and cyclodextrin synthesis activity were 110 and 90 to 100°C, respectively. The optimum pH for enzyme activity was pH 5.0 to 5.5. At pH 5.0, the half-life of the enzyme was 40 min at 110°C. The enzyme formed mainly α-cyclodextrin with small amounts of β- and γ-cyclodextrins from starch. This is the first report on the presence of the extremely thermostable CGTase from hyperthermophilic archaea.     

嗜热脂肪地芽孢杆菌NAD激酶克隆表达及酶学性质研究

NAD激酶能催化NAD生成NADP。本研究采用PCR技术从嗜热脂肪地芽孢杆菌基因组中获得NAD激酶基因,以pET30a（＋）为表达载体、E．coliBL21（DE3）为宿主菌,实现其在大肠杆菌中异源表达,并进行酶学性质研究。结果显示,嗜热脂肪地芽孢杆菌中NAD激酶编码基因大小为816bp,酶分子量大约为35kD。酶学性质分析表明,来源于嗜热脂肪地芽孢杆菌的NAD激酶最适反应温度和pH分别为35℃、pH7．5,在35qC中保温2h后仍能保持80％左右的活性。Mn2＋、Ca2＋对该酶有较强的激活作用,在最适反应条件下该酶的比活力为4．43U／mg。动力学性质分析结果显示NAD激酶对底物NAD催化的k和圪。,分别为1．46mmol／L和0．25tzmol／（L·min）。NAD激酶在大肠杆菌的异源表达为以NAD为底物生物合成NADP提供了更多生物资源。