糖基化对乙型肝炎表面抗原疫苗的影响

哺乳动物（ＣＨＯ）细胞表达的三种糖基化程度不同的乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）Ａ（含ＧＰ３０,ＧＰ２７,Ｐ２３）,Ｂ（含ＧＰ２７及Ｐ２３）,Ｃ（只有Ｐ２３）,在免疫原性、放置后抗原的稳定性以及对不同单克隆抗体亲和力等方面都有明显的差异;（１）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后血清中抗体工（ＥＤ５０）。平均结果为Ａ＝１：８０,Ｂ＝１：１１７,Ｃ＝１：１４,表明有糖基的ＨＢｓＡｇ疫苗对小鼠的免疫力明显高于无糖基的ＨＢ     

重组疫苗预防乙型肝炎

自1982年Paoletti和Moss以及他们的同事们开始研究疫苗重组体的应用以来,用带其它免疫基因的疫苗病毒来达到免疫目的的想法似乎很吸引人,理论上,当把活病毒用到动物时,将表达一个插入到它的DNA上的外源基因。随后对该外源基因产物产生免疫性反应。到目前为止,重组DNA技术已成功地表达了多种疫苗抗源,包括乙型肝炎表     

乙型肝炎多表位DNA疫苗的发展趋势

乙型肝炎多表位DNA疫苗(epitopeDNAvaccine,minigenes/epigenes)是指多个表位(包括T细胞、B细胞等表位)经过优化组合,以能产生高效的细胞、体液免疫应答进而清除HBV病毒为目的而得到的新型乙肝疫苗。该文介绍近年来国内外在乙型肝炎多表位DNA疫苗方面的发展趋势。     

超抗原SEA增强小鼠对HBV DNA 疫苗的免疫反应

观察超抗原SEA(D227A)的真核表达载体（pmSEA）, 对HBV DNA 疫苗诱导Balb/c 小鼠(H2d）免疫应答的调节作用。 肌内注射空载体pcDNA3、HBV DNA 疫苗加pmSEA佐剂（pHBVS2S+pmSEA）或不加佐剂（pHBVS2S）; ELISA 法测定血清抗HBs; ELISPOT检测分泌IFN-γ的脾淋巴细胞;4 h51Cr 释放法检测小鼠脾细胞CTL 活性。HBV DNA佐剂组免疫小鼠抗HBsAg抗体滴度明显高于不加佐剂组,其IgG1/IgG2a的比例不同于多肽免疫组,二者分别为0.282与10。HBV DNA佐剂组均能增强IgG1和IgG2a的产生,是不加佐剂组的1.36、1.73倍。佐剂组小鼠脾淋巴细胞IFN-γ的分泌量是不加佐剂组2～3倍。CTL 细胞杀伤活性（E:T=100）佐剂组与不加佐剂组分别为：69.77%±7.5%、 42.81%±7.7%,差异显著(P<0.05)。HBV DNA 疫苗具有较强的免疫原性, 能够诱导机体产生特异性的抗体及CTL反应;pmSEA佐剂能够提高小鼠对DNA 疫苗的免疫应答,有望成为DNA 疫苗的免疫佐剂。     

转基因细胞分泌乙型肝炎重组疫苗在儿童中的免疫原性初步研究

本文报告用转基因细胞B43分泌的乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白经纯化制成的87-4批重组疫苗进行临床接种观察的结果,同时用8723-1批血源疫苗作对照。疫苗接种采用0、1、2月各接种1针的方案。重组疫苗共接种111名8～13岁儿童,分为20μg、10μg及5μg 3组,血源疫苗分为20μg、10μg 2组。所有儿童接种前检查乙型肝炎病毒表面抗原、抗体及核心抗体均阴性.20μg组1针后1个月,重组疫苗阳转率60.5％,血源疫苗为31％;2针后1个月,两种疫苗的阳转率分别为100％和72.4％;血源疫苗3针后1个月阳转率也仅79.3％。3针后1个月两种疫苗的抗体几何平均滴度(GMT)分别为492.7和207.4mIU。但重组疫苗6个月后血清抗体的GMT为628mIU。10μg组1针后1个月的阳转率重组疫苗为21.7％,血源疫苗为20.9％;2针后1个月分别为87％及62.8％;3针后1个月分别为100％及81.4％。抗体GMT分别为163.7和129.6mIU.5μg组的重组疫苗免疫后6个月100％阳转,其GMT为56mIU。结论认为无论从阳转率或几何平均滴度分析判断,重组疫苗均优于血源疫苗。     

超抗原SEA增强小鼠对HBV DNA 疫苗的免疫反应

观察超抗原SEA(D227A)的真核表达载体(pmSEA),对HBVDNA疫苗诱导Balbc小鼠(H2d)免疫应答的调节作用。肌内注射空载体pcDNA3、HBVDNA疫苗加pmSEA佐剂(pHBVS2S+pmSEA)或不加佐剂(pHBVS2S);ELISA法测定血清抗HBs;ELISPOT检测分泌IFNγ的脾淋巴细胞;4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性。HBVDNA佐剂组免疫小鼠抗HBsAg抗体滴度明显高于不加佐剂组,其IgG1IgG2a的比例不同于多肽免疫组,二者分别为0.282与10。HBVDNA佐剂组均能增强IgG1和IgG2a的产生,是不加佐剂组的1.36、1.73倍。佐剂组小鼠脾淋巴细胞IFNγ的分泌量是不加佐剂组2～3倍。CTL细胞杀伤活性(E:T=100)佐剂组与不加佐剂组分别为:69.77%±7.5%、42.81%±7.7%,差异显著(P<0.05)。HBVDNA疫苗具有较强的免疫原性,能够诱导机体产生特异性的抗体及CTL反应;pmSEA佐剂能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答,有望成为DNA疫苗的免疫佐剂。     

adw与adr亚型乙型肝炎表面抗原基因在哺乳动物细胞中的表达

以pSV2-dhfr DNA为载体,在其单一酶切点Bg1Ⅱ处分别插入adw或adr亚型的HBVDNA Bg1 ⅡA片段(包括完整的pre-s及s基因),构成PSDHB_(r-1)和PSDHBw重组质粒。将其分别与pX1 DNA用磷酸钙沉淀法共转化LTK-细胞,在HAT培基选择压力下,挑选LTK~ 细胞,这些细胞均能有效表达HBsAg。再改用MTX选择培基,并逐渐增加其药量,从MTX抗性细胞中获得稳定表达HBsAg的Mwc-1和Mrm细胞系。     

少年儿童接种乙型肝炎血源疫苗的效果评价

5～15岁的HBV易感儿童,按0、1、6月程序接种10μg×3乙型肝炎血源疫苗(北京生研所批号8615-1A、8722-2)。接种后1～2年他们的抗-HBs阳转率为～92％,无一例HBsAg阳转;未接种疫苗的对照组儿童,抗-HBs阳转率仅2.08％～2.60％,HBsAg阳转率分别为3.23％和2.08％。流行病学保护效果良好。易感少年儿童接种乙型肝炎血源疫苗将加快控制乙型肝炎的进程。     

免疫共刺激分子OX40L对乙型肝炎核酸疫苗的免疫佐剂作用

[目的]为了进一步增强HBV DNA疫苗的免疫反应,本研究将共刺激分子OX40L 作为HBV DNA疫苗的分子佐剂免疫小鼠,旨在探讨共刺激分子OX40L对HBV DNA疫苗诱导体液和细胞免疫应答的影响.[方法]我们将HBV DNA疫苗(pcDS2)单独或联合共刺激分子质粒pOX40L免疫C57BL/6小鼠;分别在第0,2,4周进行免疫,在第6周检测抗-HBs IgG、IgG1和IgG2a,T淋巴细胞增殖指数,细胞因子表达水平和体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用(CTL)等免疫学指标.[结果]pceDS2联合pOX40L免疫组小鼠的抗-HBs水平显著提高,抗-HBs IgG亚类以IgG2a占优;免疫小鼠的T淋巴细胞体外经乙型肝炎表面抗原(HBsAg)刺激后,联合免疫组刺激指数(SI)明显高于pcDS2组;联合免疫组CD4 + T淋巴细胞的IL-4和IFN-γ表达水平及CD8 + T淋巴细胞的IFN-γ表达水平显著升高;DNA疫苗免疫的各组小鼠,HBsAg特异性体内CTL高于对照组,其中联合免疫组小鼠的体内CTL杀伤作用最强.[结论]共刺激分子OX40L不仅能增强HBV DNA疫苗诱导特异性体液免疫应答,还能增强特异性细胞免疫反应,尤其增强体内CTL的杀伤活性,为HBV DNA疫苗的研究奠定了基础.     

生产抗肝炎疫苗

爱丁堡大学和日内瓦生物基因公司的研究人员在距决定性试验仅一年的时间里将介绍一种遗传工程生产的抗乙型肝炎疫苗的具体工作。爱丁堡大学分子生物学部负责人K.默里教授上周在Salford英国科学促进协会年会上说:爱丁堡的研究人员将制备足够的疫苗在12个月左右的时间里对灵长类进行试验。     

增强乙型肝炎疫苗免疫效果的研究进展

乙肝疫苗对于控制乙型肝炎病毒感染十分重要.近年人们仍在根据免疫学理论和生物工程技术进展不断研发更加科学有效的新型乙肝疫苗.就新型乙肝疫苗设计的免疫机制和提高免疫效果的关键因素作出综述.     

HBV-DNA与乙型肝炎血清标志物的相关性分析

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）DNA载量与其血清标志物的相关性。方法：运用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测503例患者HBV．DNA载量和HBV血清标志物。根据HBV血清标志物结果分为大三阳组、小三阳组、少见模式组、抗体阳性及全阴组,比较各组间HBV—DNA的阳性率及定量值。结果：在大三阳组、小三阳组、少见模式组、抗体阳性及全阴组HBV—DNA的阳性率分别为90％、65．1％、65．2％、2．0％,HBV—DNA的定量结果（10gHBV—DNA）别为6．32±1．96、2．01±1．68、3．48＋2．52f抗体阳性及全阴组阳性例数过低,不纳入统计）。大三阳组HBV—DNA的阳性率显著高于小三阳组（P〈0．05）。大三阳组、小三阳组HBV—DNA的阳性率与少见模式组比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）,但大三阳组、小三阳组、少见模式组HBV．DNA的阳性率均显著高于抗体阳性及全阴组（P〈0．01）。HBsAg、HBeAg阳性组HBV—DNA的阳性率分别显著高于HB—sAg、HBeAg阴性组（P〈0．01）。小三阳组、少见模式组HBV．DNA载量均显著低于大三阳组（P〈0．01）,少见模式组HBV—DNA载量显著高于小三阳组（P〈0．05）。结论：HBV—DNA的阳性率与HBeAg、HBsAg相关;HBV—DNA栽量与HBV血清标志物模式相关。     

重组乙型肝炎疫苗免疫小鼠后早期免疫相关因子的反应

目的分析乙肝疫苗免疫后早期小鼠体内细胞因子、趋化因子、转录调节因子等多种免疫相关因子在mRNA及蛋白水平的反应,寻求早期评价乙肝疫苗免疫效果的指标。方法采用皮下免疫方式,每只BALB/c小鼠注射含2μg HBs Ag的汉逊酵母重组乙肝疫苗,免疫后3 h、24 h、48 h、96 h、168 h收集处理小鼠脾细胞和血清,使用Luminex方法测定多种免疫相关因子的mRNA表达和血清中蛋白类因子的分泌水平。结果脾细胞中IFN-α1、IFN-β1、IFN-γ、IL-2、IL-5、IL-6、IL-12p40、CCR1、CCR5、CCL3、CCL4 mRNA在免疫后3 h检测无表达,之后逐渐升高,在24 h达到表达高峰。CXCL10、IRF7 mRNA在免疫后3 h即出现表达,至24 h时达到表达高峰,分别为对照组的6.09倍和9.01倍。血清中CXCL10免疫后3 h即可检测,在24 h达到表达高峰。IFN-γ在96 h开始分泌,168 h时分泌水平最高。IL-12p70的分泌趋势与IFN-γ近似,在96 h之前的3个时间点分泌水平较低,168 h时达到分泌高峰。结论汉逊酵母重组乙肝疫苗免疫后3 h到168 h可检测到多种免疫相关因子表达,为早期评价乙肝疫苗免疫效果提供了指标。     

乙型肝炎疫苗与卡介苗、脊髓灰质炎疫苗联合接种的观察

<正>在热带非测的地方性流行区,乙肝病毒的传播大多发生在婴儿出生的早期。而且围产期的乙肝病毒感染导致高比率的慢性携带。因此,预防乙肝病毒传染的最佳选择是在疫苗保证的情况下,在出生     

应用乙型肝炎疫苗阻断围产期乙型肝炎病毒的母婴传播

993名HBsAg携带者母亲所生新生儿,以768名新生儿为试验组,226名新生儿为对照组,试验组分别注射HBsAg血源性氢氧化铝佐剂疫苗,乙型肝炎高价免疫球蛋白(HBlg)或疫苗加HBIg,对照组注射安慰剂,所用疫苗为国产81-2、82-1-2、83-1和美国NIHA9,观察表明,出生后六个月,试验组各批疫苗的保护率为60～93％,以83-1批为最高;疫苗加HBIg的保护效果与疫苗相似,HBIg组亦有70％的保护效果,以上结果证明单独应用HBsAg疫苗阻断母婴传播的效果是理想的。     

乙型肝炎病毒DNA疫苗的研究进展

预防与控制乙型肝炎发病的乙型肝炎病毒(HBV)疫苗,是有重大的社会和经济意义。HBV的持续感染可引起慢性肝脏疾患,并逐步发展为肝硬化和肝细胞癌(HCC)。目前的乙肝重组亚单位疫苗可以使90％的接种产生保护性抗体;但是对慢性HBV携带,由于其机体对HBsAg蛋白产生耐受,不能产生体液和细胞免疫,因此它只能作为一种预防性的疫苗。DNA疫苗(基因疫苗)是一种新的疫苗技术,通过向体内递送编码抗原的细菌质粒,刺激产生特异的体液和细胞免疫反应。在小鼠和其他的肝炎病毒感染动物模型中,HBV DNA疫苗可以特异性地引起体液和细胞免疫,清除HBV转基因动物血循环中的HBsAg颗粒和HBV DNA。如果加入各种免疫调节细胞因子的基因,可以进一步提高HBV DNA疫苗的免疫效果,因此它不仅可作为预防性疫苗,也可作为治疗型疫苗。     

新生儿大规模乙型肝炎血源疫苗免疫的效果考核

在上海、广东、湖南、河北四省市试点区200万人口中,每年用乙型肝炎血源疫苗免疫新生儿3万人。四省市四年平均接种率为91％～95％。除上海地区对HBsAg阳性母亲的新生儿的免疫剂量为20μg×3外,其余地区大多来用10μg×3。免疫后1至2年和3至4年期间两次考核免疫效果。免疫后3～4年检检测省市HBsAg阳性率平均为1.78％,同免疫前本底对照的16.2％相比,下降88.98％(82.68％～92.71％)。上海4岁婴儿HBsAg阳性率降至0.98％,比免疫前本底对照的9.38％降低89.57％。四年后抗HBs阳性率在67.8％～81.6％之间。本项研究表明,新生儿血源乙型肝炎疫苗普遍免疫的效果极佳。如普遍使用10μg剂量,HBsAg阳性率可从10％下降至2％～3％左右。结合其它研究结果,如对HBsAg阳性孕妇的新生儿首剂使用30μg免疫,或加用HBIg,则新一代人HBsAg阳性率将降至1％以下。     

新疆生产建设兵团儿童乙型肝炎疫苗接种率现况分析

目的:了解新疆生产建设兵团1992年以后出生儿童乙型肝炎疫苗接种情况和影响因素,为相关部门决策提供依据.方法:在南疆、北疆的8个年龄层等比例随机抽取儿童918名,进行乙型肝炎疫苗接种率问卷调查.用SPSS13.0软件进行统计学处理.结果:①儿童乙型肝炎疫苗首针及时接种率为65.7%(标准化率79.28%);全程接种率为70.2%(标准化率72.15%).②南疆、北疆儿童首针及时接种率分别为51.O%、82.5%,全程接种率分别为54.9%、87.6%.③在医院内、医院外出生儿童首针及时接种率分别为90.4%、54.1%,全程接种率分别为89.8%、61.0%.④汉族、少数民族儿童首针及时接种率分别为68.2%、60.9%,全程接种率分别为72.1%、66.3%.结论新疆生产建设兵团儿童乙型肝炎疫苗全程接种率低于全国平均水平.乙型肝炎疫苗接种率南疆高于北疆、在医院出生儿童高于在医院外出生儿童.汉族儿童的全程接种率相对较高.