脑啡肽的放射免疫测定

1975年发现亮氨酸脑啡肽(LEK)和甲硫氨酸脑啡肽(MEK)。其测定以放射免疫(RIA)最佳。作者提议并合成了多聚赖氨酸琥珀酰脑啡肽免疫原,EK结合率81～90%,每2.3或3.2个赖氨酸残基连上一个EK。免疫3或6个月时获得抗EK血清(ALS或AMS),工作稀度可达1:5000,K_(eff)10~9升/克分子。试用改进的氯胺T标记法及DEAE-Sephadex A-25柱层析制备高比放射性~(125)I-EK免疫活性良好。双抗体法分离抗体结合的和游离的~(125)I-EK。竞争抑制曲线:灵敏度LEK～11微微克,MEK～130微微克;精密度1.8%及1.4%。β-内啡肽,八种肽类激素、吗啡、纳洛酮无明显干扰;交叉反应MEK对ALS为3.3%、LEK对AMS为<1%。脑组织用0.0N盐酸抽提,中和后,直接作RIA。本方法已通过多种方法学考验。正常大鼠脑中EK浓度以下丘脑为最高,尾核次之。本法是灵敏、可靠和特异的。     

大鼠中枢甲硫脑啡肽和亮脑啡肽含量与电针镇痛的关系

应用放射免疫法测定电针镇痛大鼠各脑区和脊髓中甲硫脑啡肽(MEK)与亮脑啡肽(LEK)样免疫活性物质含量。结果表明,电针组大鼠尾核和下丘脑内的 MEK 与 LEK 含量显著升高,丘脑、低位脑干和脊髓的含量基本不变。将每只鼠电针镇痛效果与脑内脑啡肽含量作直线相关处理,可见尾核与下丘脑的 MEK 含量与大鼠针效呈正相关(P 均<0.05),而这两个脑区的 LEK 含量与针效优劣无相关关系。本工作提示,尾核和下丘脑的 MEK 可能在电针镇痛中具有重要作用。     

人血浆亮脑啡肽样物质放射免疫测定法及其临床初步应用

本文报告了血浆亮脑啡肽样物质(LEK)的放射免疫测定法。用 TG-ECDI-LEK 背部皮内多点免疫家兔,获得高特异性的抗 LEK 血清,最小检出量5pg,多种肽类及吗啡、纳洛酮对此均无明显干扰。血浆迅速酸化及抑肽酶等能有效防止脑啡肽(EK)的降解。血浆 EK 可被 XAD-2树脂吸附和用水合甲醇洗脱。本法测定人血浆 LEK 为127.9±5.4pg/ml(m±S.E.M,n=61).作者观察到胰岛素低血糖休克后血浆 LEK 增加,嗜铬细胞瘤患者血 LEK 增加,提示肾上腺體质可能是它的来源之一。     

从兔脑中分离得到的一个具有甲硫氨酸脑啡肽样免疫活性的多肽

近两年来,对于脑啡肽类似物及前体的研究,取得了较大的进展。Lewis等从牛肾上腺髓质中分离到大小不同的包含脑啡肽顺序的多种多肽。Goldstein等从猪垂体中分离得到强啡肽(Dynorphin)。Kangawa等从猪下丘脑中分离得到α-新内啡肽。Minamino等从猪下丘脑中分离得到β-新内啡肽。这些肽都含有甲硫氨酸脑啡肽(MEK)或亮氨酸脑啡肽(LEK)的肽段。它们的N-末端大多是酪氨酸,也有个别的为苯丙氨酸或丝氨酸。我们最近从兔脑中分离得到一个具有MEK免疫活性的多肽,它的N-末端为丙氨酸。一、材料和方法     

用灵敏的血管紧张素Ⅰ放射免疫分析法测定血浆肾素酶活性

报导一个简单的血浆肾素活性(PRA)测定法,利用灵敏的放射免疫分析法(RIA)测定血管紧张素Ⅰ(ATⅠ)产生速率。抗ATI血清是用多聚左旋赖氨酸-琥珀酰-ATⅠ免疫家兔而获得,它和七种肽类激素的免疫学交叉反应是可以忽略的,其中与ATⅡ为低于0.2%。它的有效亲和常数K_(eff)高至4.4×10~(10)升/克分子。使用这个优质抗血清及~(125)Ⅰ标记ATⅠ,并结合双抗体分离技术,已建立了一个特异而灵敏的RIA。其检出极限是9.1±2.7微微克ATⅠ/管(均值±标准差),精密度是1.5±0.8%;测定保温后血浆中ATⅠ(136微微克量及3批连续测定中)批内变异系数C.V是2.5%,批间C.V.是15%。当确定PRA方法学时,研究了一些影响因素,并证实了血浆保温条件显著地影响ATⅠ的产生速率。我们的方法具有某些优点,例如:1)一旦血液被采集,立即加入作为抗凝剂和ATⅠ保护剂的Na_2·EDTA,8-羟基喹啉和二巯基丙醇;2)保温的血浆中加入1/10体积4MTris-HCl缓冲液(pH 7.4),使它维持在生理条件而又尽可能减少稀释;3)证明当保温期间ATⅠ的生成量线性范围可维持3～6小时以上;4)加至血浆中未标记ATⅠ的回收率达98.5%,表明在37℃3小时(PRA)及4℃3天(RIA)的整个保温期间,满意地抑制了蛋白水解酶的作用。为了测试PRA法的精密度,对二份混合血浆,在连续5批检定中进行复管测定,得均值是0.88毫微克AT Ⅰ/毫升/小时和2.35毫微克AT Ⅰ/毫升/小时,其批内C.V.分别是4.3%和1.7%,批间C.V.分别是20%和10%。     

纹状体中亮—脑啡肽在针刺调节免疫功能中的作用

本工作通过 T 淋巴细胞增殖效应的定量分析(LTT),研究了针刺大鼠“足三里”时纹状体内源性亮脑啡肽(LEK)的合成和释放对调节免疫功能的作用。结果如下:(1)针刺“足三里”,LTT 增加时 LEK 含量增高;纹状体微量注射纳洛酮,LTT 受抑。(2)纹状体微量注射 LEK引起的 LTT 增加比电针引起的增加更强。(3)纹状体微量注射 LEK 抗血清时,电针引起的LTT 受抑。以上结果表明,LEK 在电针调节免疫功能中起着重要作用,这作用可能通过它在纹状体中作为神经递质或神经调质所促成的。     

高盐饮食对大鼠血压和脑内脑啡肽含量的影响

大鼠47只,高盐饮食饲养4个月后,尾部收缩期血压为135±2mmHg((?)±SEM),较对照组(40只)102±1mmHg明显升高(P<0.001)。高盐饮食组大鼠的纹状体和脑干的甲硫氨酸脑啡肽(MEK)和亮氨酸脑啡肽(LEK)的含量,均较对照组明显增加(p<0.01),下丘脑区亦增加(P<0.01或P<0.05),而丘脑和海马区与对照组相比,无显著差别。高盐饮食组大鼠血浆中的血管紧张素Ⅰ浓度,比对照组为低(P<0.05)。     

人血浆中血管紧张素Ⅱ放射免疫直接测定法

应用优质抗血清、高比放射度~(125)Ⅰ·ATII及双抗体分离技术,建立了直接测定0.5毫升人血浆中血管紧张素Ⅱ(ATII)的放射免疫分析法。竞争抑制曲线的最小检出量3.6±1.6微微克,精密度4.74±1.4%(28次的m±S.D.)。血浆测定的变异系数为批内7～14%,批间8.7～18%。加入血浆中的ATII可定量回收(97～117%)。随待测血浆加入量增大(0.1至1.5毫升/孵育管),测得ATII量线性增加。8种肽类激素、人血浆及使用的酶抑制剂未显示出明显的干扰。正常人普通饮食时外周静脉血浆ATII浓度:卧位1.5小时以上后26±10微微克/毫升(n=54),与24小时尿钠排出量呈负相关(p<0.01);立位2小时后464±22微微克/毫升(n=17)。低钠饮食或肌肉注射速尿引起血浆中ATII显著激发(p<0.01)。本法可灵敏、精密、特异地正确度量微量ATII,操作简单,每批可测标本数较大。本法的建立有助于各领域中涉及肾素——血管紧张素系统之临床或实验研究工作。     

内啡素的生成释放和降解

自从1975年Hughes等发现两种脑啡肽(甲啡肽,MEK;亮啡肽,LEK)以来,陆续发现存在于体内具有阿片样作用的肽类物质不下20余种。Simon曾建议用endorphins一词泛指内源性吗啡样肽,中文译为内啡肽。但以后此名称多用作β-趋脂素(β-LPH)分子中的特定片断如β-内啡肽(31肽,β-EP)、δ-内啡肽(19肽)、γ-内啡肽(17肽)、α-内啡肽(16肽)等的总称,而不包括脑啡肽、强啡肽等在内。看来,内源性阿片(吗啡)样     

人血浆中血管紧张素Ⅱ放射免疫直接测定法

应用优质抗血清、高比放射度~(125)I·ATII及双抗体分离技术,建立了直接测定0.5毫升人血浆中血管紧张系Ⅱ(ATII)的放射免疫分析法。竞争抑制曲线的最小检出量3.6±1.6微微克,精密度4.7±1.4%(28次的m±S.D.)。血浆测定的变异系数为批内7～14%,批间8.7～18%。加入血浆中的ATII可定量回收(97～117%)。随待测血浆加入量增大(0.1至1.5毫升/孵育管),测得ATII量线性增加。8种肽类激素、人血浆及使用的酶抑制剂未显示出明显的干扰。正常人普通饮食时外周静脉血浆ATII浓度:卧位1.5小时以上后26±10微微克/毫升(n=54),与24小时尿钠排出量呈负相关(p<0.01);立位2小时后46±22微微克/毫升(n=17)。低钠饮食或肌肉注射速尿引起血浆中ATII显著激发(p<0.01)。本法可灵敏、精密、特异地正确度量微量ATII,操作简单,每批可测标本数较大。本法的建立有助于各领域中涉及肾素——血管紧张素系统之临床或实验研究工作。     

20-羟基蜕皮酮放射免疫分析法

<正> 放射免疫分析法(RIA)是放射性同位素示踪技术与免疫反应原理相结合的一种体外的超微量分析方法。其特点是灵敏度高、特异性强、精确度好、取样量少、操作简便,不会引起生物体的辐射损伤。这种方法能定量分析毫微克—微微克水平的微量物质。被测物质达二三百种之多,目前已成为生物学和医学研究中不可缺少的手段。 RIA的基本原理是:在一溶液系统中,一定量的放射性同位素标记的抗原(~*Ag)和待测的非标记抗原(Ag)对一定量特异抗体(Ab)的竞争性结合。Ag的量愈大,~*Ag被稀释的程度也愈大,从而~*Ag-Ab     

蛋氨酸脑啡肽联合白细胞介素-2抗肿瘤作用研究

观察蛋氨酸脑啡肽(MEK)和注射用白细胞介素-2(IL-2)单独和联合应用的抗肿瘤效应。应用动物移植性肿瘤的体内试验法,分别观察MEK、IL-2和(MEK+IL-2)对肿瘤的抑瘤作用及小鼠生命延长率情况。MEK组、IL-2组和(MEK+IL-2)组的抑瘤作用分别为131.38%(P0.01)、69.63%(P0.01)、229.170%(P0.01),都有显著差异;生命延长率为:MEK组18.27%(P0.01),有显著差异;IL-2组9.31%(P0.01),无显著差异;(MEK+IL-2)组32.07%(P0.01),有显著差异。结果表明:MEK、IL-2和(MEK+IL-2)都对小鼠移植性瘤有一定的抑制作用,MEK和(MEK+IL-2)能够延长小鼠生命,而IL-2单独应用不能延长小鼠生命;MEK和IL-2联合应用时作用相加,而不良反应未相加。     

高亲和力抗血管紧张素Ⅱ抗血清的制备——五种免疫原的制备及其免疫效果的比较

为了提高放射免疫分析法(RIA)的灵敏度,达到度量人外周血浆中血管紧张素Ⅱ(ATII)的要求,必需采用亲和力特别高的特异性抗ATII 抗血清。我们使用不同的载体和结合方法,制备了五种ATIIa 免疫原,以提高其抗原性。它们是:1)聚乙烯吡咯酮吸附血管紧张素II 酰胺(ATIIa);2)碳二亚胺缩合兔血清白蛋白与ATIIa;3)戊二醛(GDA)结合牛血清白蛋白(BSA)与ATIIa;4)GDA 结合多聚赖氨酸(PL)与ATIIa;5)碳二亚胺缩合琥珀酰化多聚赖氨酸(PL-Succ)与ATIIa。在分组免疫家兔(皮内多点或多途径注射)后,用生物鉴定、被动血球凝集试验和放射免疫稀释曲线法检测及跟踪抗血清的抗ATII 效价。并用RIA 法以Scatchard 图求亲和常数K_(?)统计显示在组间存在显著差别,以BSA-GDA-ATIIa 及PL-Succ-ATIIa 效果为佳。在3～5个月内成功地获得了K_a>10~(10)升/克分子,适用于ATII 的放射免疫测定的一些抗血清。其中之一已经满意地用于建立一个特异、灵敏的RIA,可以直接测定人体外周血中低浓度的ATII。另一些也有相似的能力。对工作中涉及一些问题,如免疫原制备、影响抗血清质量的因素以及抗ATII 检测方法等,作了初步的比较和讨论。本试验结果,从抗原消耗量、抗体产生速度、成功率及抗血清的效价和亲和力等方面,看来较某些报告有优越之处。     

豚鼠冰水游泳应激后血浆、肾上腺髓质和脑内组织的亮—脑啡肽含量变化

豚鼠冰水游泳应激3min后,用放射免疫法测定血浆、肾上腺髓质和脑内三个脑区组织的亮—脑啡肽(Leu-enkephalin,LEK,)含量和血浆的血管紧张肽Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,ATⅡ)浓度变化。结果表明:在冰水中游泳应激组豚鼠的血浆、肾上腺髓质、下丘脑和纹状体组织的LEK含量和血浆的ATⅡ浓度,均较对照组豚鼠明显升高(P值均<0.01)。提示:豚鼠在冰水中紧张、剧烈游泳后,可能激活了中枢神经和周围组织内的脑啡肽能神经元和血管紧张肽原酶—血管紧张肽Ⅱ系统,从而促进LEK和ATⅡ的释放增加。     

放射免疫测定法

放射免疫测定(Radioimmunoassay,简称RIA)是六十年代发展起来的一种体外分析新技术。它综合了放射性同位素的灵敏性与抗原-抗体反应的特异性两大优点,因此样品(如血、尿)无需提纯,而且能检出毫微克甚至微微克量的待测物质     

五种乙型肝炎放射免疫药盒的研制和中试生产

核素~(125)I标记在抗体或抗原后,成为标记抗体或标-记抗原。这种标记抗体或标记抗原,仍然具有与特异性抗原或抗体相结合的免疫学特性,形成一种标记的免疫复合物。     

四种应激因素对大鼠脑内亮-脑啡肽含量的影响

本文用放射免疫分析法测定了大鼠在热及冷环境、苯丙胺兴奋和骨折等四种应激状态下脑内亮-脑啡肽(LEK)含量的变化。观察到热及冷环境和苯丙胺兴奋均使下丘脑和纹状体LEK 含量明显下降,而骨折使纹状体和丘脑 LEK 含量明显上升。这一结果说明,在四种不同的应激状态下,脑区 LEK 含量变化的趋向不尽相同。     

内啡肽的微量测定——一种快速、简便和高度灵敏的放射受体分析法

本文介绍一种改进的吗啡类物质放射受体分析法。由于将大鼠“前段脑”匀浆用低速离心制备受体部分并以冰冻Tris缓冲液一次离心洗涤结合物,不仅操作快速、简便和无需高级仪器,而且特异性结合率和灵敏度都较高。吗啡和脑啡肽的最小检出量分别达到7微微克和14～140微微克。此外,本文对影响阿片受体结合的其他因素也进行了分析和讨论。     

内啡肽的微量测定——一种快速、简便和高度灵敏的放射受体分析法

本文介绍一种改进的吗啡类物质放射受体分析法。由于将大鼠“前段脑”匀浆用低速离心制备受体部分并以冰冻Tris缓冲液一次离心洗涤结合物,不仅操作快速、简便和无需高级仪器,而且特异性结合率和灵敏度都较高。吗啡和脑啡肽的最小检出量分别达到7微微克和14～140微微克。此外,本文对影响阿片受体结合的其他因素也进仃了分析和讨论。     

尾壳核内注射脑啡肽和bestatin对大鼠操作式条件反射的影响

在条件反射箱内训练雌性Wistar大鼠建立操作式防御性条件反射。训练时灯光先出现15s,然后结合给予脚掌电击8s。每天训练30次。如果动物能在灯光出现15s内按下反应键以避免电击,即谓建立了条件反应。在条件反应率(CR)连续5d达到80％以上后,即进行双侧尾壳核埋植套管手术。术后2—3d,向双侧尾壳核内注射甲硫氨酸脑啡肽(MEK)或bestatin(一种氨基肽酶抑制剂)。注射后30min,2h,24h,48h分别进行条件反射测验(每轮30次)。尾壳核内注射生理盐水作自身对照。实验结果表明:生理盐水注射后,CR仍保持在80％以上。MEK(60ng)或bestatin(10μg)注射后30min和2h,CR显著下降。2h测验时伴有条件反应潜伏期(L)延长。CR及L两项指标于注射后24h和48h恢复至对照水平。纳洛酮(2mg/kg)腹腔注射能阻断bestatin的效应。MEK或bestatin尾壳核内注射后对自发活动无明显影响。上述结果提示尾壳核的脑啡肽有可能参与条件反射再现的调节。bestatin可能通过增加内源性脑啡肽而产生类似MEK对条件反射的作用。