乙酰胆碱对自然杀伤细胞活性的影响

目的:观察乙酰胆碱(ACh)对自然杀伤(NK)细胞活性的影响,并初步探讨其作用的受体机制.方法:根据不同的实验目的,选择ACh、胆碱能受体激动剂和拮抗剂分别作用于NK细胞,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)自然释放法检测不同实验条件下NK细胞杀伤肿瘤靶细胞(Yac)的活性.结果:ACh、M受体激动剂毛果芸香碱和N受体激动剂烟碱在10-10～10-6mol/L浓度范围内都能显著抑制NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性.M受体拮抗剂阿托品(10-8和10-7mol/L)能完全阻断同浓度ACh抑制NK细胞活性的作用;但N受体拮抗剂筒箭毒碱(10-8和10-7mol/L)不能阻断同浓度ACh抑制NK细胞活性的作用.结论:ACh可抑制NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,此作用主要由淋巴细胞上的M受体和N1受体介导.     

奥拉帕尼对黑素瘤细胞的作用及机制研究

目的:探讨奥拉帕尼对黑素瘤细胞的作用及其机制。方法:应用不同浓度的奥拉帕尼处理黑素瘤细胞,利用CCK8检测肿瘤细胞活性。应用Western blot技术检测奥拉帕尼处理黑素瘤细胞后肿瘤细胞内凋亡及周期相关蛋白表达水平。结果:与对照组相比,5μM奥拉帕尼处理黑素瘤A2058细胞即可抑制肿瘤细胞活性(85.53±2.593)%。随着奥拉帕尼处理浓度倍增对黑素瘤细胞活性的抑制作用越强。在10μM、20μM、40μM、80μM奥拉帕尼处理浓度下,黑素瘤细胞活性分别是(68.88±1.484)%、(47.21±1.759)%、(33.04±1.261)%、(28.17±1.731)%。奥拉帕尼处理黑素瘤细胞后可促进肿瘤细胞内凋亡相关蛋白PARP1剪切体表达增加,并可抑制细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达。结论:奥拉帕尼通过促进黑素瘤细胞凋亡及抑制肿瘤细胞周期蛋白表达的机制发挥抑制黑素瘤细胞活性的作用。     

三种细菌DNA及CpG寡核苷酸抗肿瘤免疫的比较实验研究

用大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和双歧杆菌的DNA与CpG寡聚核苷酸 (CpGoligodeoxynucleotides ,CpGODN)对荷瘤鼠进行治疗 ,比较 3种细菌DNA及CpGODN的抗肿瘤免疫作用 ,以筛选最好的细菌DNA及CpG序列用于肿瘤治疗。分别提取 3种细菌DNA并合成 2条CpGODN序列 ,在肝癌HcaFA3细胞株荷瘤小鼠模型上进行免疫治疗 ,以存活期、抑瘤率、NK/Mφ细胞活性及细胞因子 (IFN γ、TNF α、IL 2、IL 12等 )分泌活性等为指标 ,比较 3种细菌DNA之间及CpGODN的抗肿瘤免疫效果。 3种细菌DNA均能使荷瘤鼠的存活期延长 1倍以上 ,但三者之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。抑瘤率为 6 4 .0 3%～ 79.5 0 % (P <0 .0 1) ,而CpGODN的抑瘤率为 4 5 %～ 5 1%之间 (P <0 .0 5 ) ,3种细菌DNA以及CpGODN均能显著增强NK细胞和Mφ细胞的杀伤活性 (P <0 .0 5 ) ,但细菌DNA在诱导细胞因子 (IL 2、IFN、TNF等 )以及下调肿瘤细胞端粒酶活性方面 ,CpGODN作用强于细菌DNA。     

LAK细胞

一、LAK细胞的概念 1980年Rosenberg等首先观察到荷有甲基胆蒽纤维肉瘤的C57BL/6小鼠脾细胞经含有IL-2的培液培养后,可获得较强的抗自身甲基胆蒽纤维肉瘤的细胞毒作用,而对自身正常细胞无杀伤作用,未经IL-2培养的脾细胞或NK细胞对纤维肉瘤无杀伤活性。1982年Grimm等首次提出将这种由IL-2激活的能够杀伤NK抵抗性肿瘤细胞的杀伤细胞称为淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine-activated killer cells)简称LAK细胞。脾脏细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞(PBL)均可经IL-2诱导出显著的     

肿瘤免疫治疗中NK细胞的激活策略及研究进展

NK细胞(natural killer cell)是机体固有免疫系统中一类重要的淋巴样细胞,在免疫调节中发挥重要作用.NK细胞MHC Ⅰ非限制性杀伤肿瘤细胞的特性受到人们广泛关注.然而肿瘤组织浸润难、杀伤活性弱、免疫监视功能低的缺陷极大限制了NK细胞的活性.因此,本文总结了肿瘤免疫治疗中NK细胞激活的机制,探讨了NK细...     

NKG2A的生物学特性与临床应用

NKG2A是主要表达于自然杀伤(natural killer, NK)细胞表面的抑制性受体,与NK细胞表面的激活性受体相互竞争,从而调控NK细胞的活性.近年来,抑制NKG2A免疫检查点可以恢复NK细胞活性从而杀伤肿瘤细胞,使得NKG2A成为抗肿瘤治疗的焦点之一.然而诸多研究发现,NKG2A还参与病毒感染、自身免疫等疾病...     

肿瘤对自然杀伤细胞的杀伤敏感性研究

自然杀伤细胞（NK细胞）是机体抗肿瘤的第一道防线,是机体天然免疫的主要承担者,也是获得性细胞免疫的核心调节细胞。NK细胞对肿瘤的杀伤活性与其细胞表面受体和肿瘤细胞表面的配体密切相关,由于肿瘤细胞表面配体表达不同致使对NK细胞杀伤的敏感性有很大差异,临床疗效不一。我们简要介绍了影响肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性的机制,对目前提高肿瘤细胞敏感性的策略和方法进行了总结。     

济南假单胞制剂PJV对大鼠肝大颗粒淋巴细胞数量、酶活性及自然杀伤活性的影响

本文通过细胞分离、细胞化学染色、电镜观察及~3H-TdR释放试验体外检测细胞毒活性等方法,研究了在生物反应调节剂—济南假单胞制剂PJV作用下,大鼠肝大颗粒淋巴细胞(LGL)和枯否细胞(KC)的数量、形态及其免疫生物特性等变化。结果表明,PJV的应用可引起肝内LGL数量增长达4倍,其体外杀伤肿瘤细胞活性增长约2倍,细胞内ACP活性明显提高。肝KC数量及活性也有明显增加。本文还讨论了肝LGL与KC的相互关系。     

共培养的树突状细胞与CIK细胞的体外增殖和杀瘤活性研究

本文观察树突状细胞与同源CIK细胞共培养后培养物的表型、增殖活性变化,及DC对CIK细胞细胞毒活性的影响。提取健康供血者的PBMC,常规诱导出DC与CIK细胞,用A549肺腺癌细胞裂解液抗原冲击DC,并和CIK细胞共培养,动态观察DC-CIK培养物增殖活性和表型变化;定量检测细胞培养上清中的IFN-γ和IL-12;并用MTT法检测共培养细胞杀伤A549肺腺癌细胞和BEL-7404肝癌细胞的活性。结果表明DC与CIK细胞共培养,通过彼此的相互作用诱导出比CIK细胞增殖活性和杀伤活性更强的细胞群体。经A549肺腺癌细胞裂解液抗原冲击的DC活化的CIK,对A549肺腺癌细胞的杀伤活性高于单纯CIK细胞,差异显著(p<0.05)。二者对BEL-7404肝癌细胞的杀伤活性无显著差异。实验证明DC与CIK共培养细胞是一种增殖活性和细胞毒活性高于CIK细胞的免疫活性细胞,经肿瘤抗原冲击的DC能明显提高CIK对肿瘤细胞的杀伤活性,具有更广阔的应用前景。     

巨噬细胞条件培养基对小脑皮质神经元生存的影响

用快速自动比色微量分析法检测巨噬细胞条件培养基(MφCM)对体外培养的生后7天SD大鼠小脑皮质神经元的作用。实验结果表明,MφCM具有支持神经元生存及增强其活性的作用。此作用以细胞密度1×10~5/孔,MφCM加入量10μl/孔为显著(P<0.05)。不同分子量的MφCM对神经元的作用亦有不同,>10KD分子量的MφCM比<10KD的作用强。     

生物肽-蛋氨酸脑啡肽增强树突状细胞抗肿瘤活性研究

采用反复冻融法制备Rac-1淋巴瘤细胞总抗原,与树突状细胞（DC2.4）共培养制备DC瘤苗;设置不同实验组,M组及RM组加入蛋氨酸脑啡肽（MENK）,研究MENK对DC瘤苗抗肿瘤细胞的杀伤活性影响。结果表明：MENK作用于DC瘤苗后,DC2.4形态上更趋向于成熟,且CD86、MHC-Ⅱ类分子表达水平与对照组相比较明显升高;DC2.4酸性磷酸酶（ACP）含量与对照组相比较明显减少而IL-12的分泌水平升高;同时,DC2.4诱导淋巴细胞增殖能力增强,且诱导活化的淋巴细胞对Rac-1淋巴瘤细胞的杀伤活性与对照组相比较明显增强。结果可见,MENK可明显促进特异性负载Rac-1淋巴瘤抗原的DC2.4的成熟,并增强特异性诱导活化的淋巴细胞对Rac-1淋巴瘤细胞的杀伤活性。     

树突状细胞与CIK细胞共培养诱生的DCCIK细胞群对肿瘤的杀伤作用

由树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的同源杀伤细胞(CIK)的共培养诱生的细胞群(DCCIK)对肿瘤细胞的细胞毒活性的研究。DCCIK细胞体外杀伤肿瘤靶细胞A549(MTT法),效靶比为10∶1、5∶1时杀伤率分别为61%、52%。DCCIK细胞诱导培养3周后,效靶比为10∶1、5∶1时杀伤率分别为64%和56%。数据亦表明DCCIK细胞对靶细胞的杀伤优于CIK细胞。动物体内实验分荷瘤A549、BEL7404和A375三组,每组分(A)DCCIK 化疗、(B)单用化疗。治疗20天、35天后测量各组肿瘤消失率。结果显示:DCCIK 化疗的抑瘤效果明显好于单纯化疗。提示DCCIK细胞有临床应用前景。     

分析CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用

目的:对CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用进行分析。方法:选取BALB/c小鼠作为试验对象,将小鼠随机分为6组,之后分别制备G1F/M2蛋白,用LDH释放法对CTL的活性进行检测,分析T细胞分化情况,并应用流式细胞仪分析LDH的记忆细胞及CD8+/CD4+记忆细胞。结果:将CpG2216混合G1F/M2后,通过腹腔诱导,其特异杀伤的活性显著好于单独采用G1F/M2进行腹腔注射诱导杀伤活性。并且将两者混合的杀伤活性显著强于常规佐剂Al(OH)3。G1F/M2+Al+CpG(i.p.)组的诱导杀伤活性显著优于CpG+G1F/M2(i.p.)组。结论:将CpG ODN当做呼吸道合胞病毒重组疫苗G1F/M2佐剂,能够将细胞免疫应答显著增强。     

负载Her-2多肽的DCIK细胞对乳腺癌细胞杀伤作用研究

本文观察利用树突状细胞(DC)呈递肿瘤抗原(Her-2多肽)的特性提高DCIK细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性。提取外周血来源的有核细胞诱导分离出细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和树突状细胞(DC),DC负载Her-2多肽后和CIK细胞共培养产生DCIK细胞,并鉴定其HLA基因型。分析三株肿瘤细胞(MDA-MB-231、SK-BR-3、MCF-7)HLA基因型和Her-2蛋白表达情况。用细胞毒试验(CCK-8法)测定DCIK细胞的对三株Her2表达不同的乳腺癌细胞株的杀伤活性。结果表明DCIK细胞对MDA-MB-31、SK-BR-3、MCF-7的杀伤率(效靶比10:1)分别为50.38%±3.25%、52.19%±3.25%、47.09%±2.41%。而负载Her-2多肽的DCIK细胞对MDA-MB-231、SK-BR-3、MCF-7的杀伤率分别为76.30%±1.74%(P<0.001)、55.70%±3.05%(P=0.0143)、47.67%±2.40%(P=0.6972)。实验证明负载Her-2多肽的DCIK细胞能显著提高对Her-2( )的乳腺癌细胞的杀伤作用,为乳腺癌患者进行过继免疫治疗提供了理论依据。     

小鼠腹腔活化巨噬细胞的酸性磷酸酶测定

在两组Mφ数量相等的条件下,用金氏改良法测定小鼠腹腔Mφ的Acp含量,结果注射葡聚糖后小鼠腹腔Mφ的Acp含量明显高于对照组。同时,从Gomori氏硝酸铅染色的标本上,亦看到用葡聚糖活化后的小鼠腹腔Mφ胞体明显增大,细胞铺展明显,细胞质中的Acp阳性颗粒多而粗大,个别Mφ细胞质中的Acp颗粒呈强阳性反应。结果表明葡聚糖(Dextran T500)是一种较理想的Mφ活化物,具有明显增强Acp活性的作用。     

一种新型的重组单链三特异抗体的构建与表达

双特异抗体由于其缺乏共刺激信号 ,激活的T细胞往往会导致凋亡。为了更有效地杀伤肿瘤细胞 ,构建了抗卵巢癌单链×抗CD3单链×抗CD2 8单域重组三特异抗体的表达载体。利用大肠杆菌中的分子伴侣FkpA与三特异抗体共表达 ,提高了三特异抗体的在BL2 1Star菌中的可溶性原核表达。ELISA结果显示 ,可溶性的重组单链三特异抗体 (sTRI)与SK OV 3细胞的膜抗原 ,Jurkat细胞上的CD3分子以及重组CD2 8抗原均有较强的结合活性。桥连试验证明该抗体能同时与SK OV 3细胞和Jurkat细胞结合。体外杀伤试验表明该抗体能激活外周血T细胞来杀伤肿瘤细胞。形态学观察也进一步说明该抗体具有良好的结合活性以及体外杀伤活性。这种新型的重组单链三特异抗体为基于T细胞的癌症免疫治疗建立了一个新的技术平台。     

大鼠脾树状突细胞和巨噬细胞S-100蛋白免疫反应性观察

本文采用S-100蛋白免疫组化染色结合ACP组化染色(或lysozyme免疫组化染色)来进一步观察大鼠脾树状突细胞(DCs)和巨噬细胞(Mφs)的染色反应性。结果表明,脾悬液淋巴树状突细胞(LDCs)呈S-100蛋白阳性反应而ACP反应为阴性或弱阳性,Mφs则呈ACP强阳性反应而S-100蛋白反应为阴性;同一涂片S-100蛋白和ACP双染结果,两者不重叠。脾冰冻切片显示交错突细胞(IDCs)和滤泡树状突细胞(FCDs)呈S-100蛋白阳性反应而ACP反应为阴性或弱阳性,Mφs则反之,即ACP反应强阳性而S-100蛋白为阴性反应;同一切片S-100蛋白和ACP双染也无重叠。腹腔Mφs贴片对照染色,Mφs呈ACP强阳性反应而S-100蛋白反应为阴性。由此进一步证实在一定条件下S—100蛋白可作为鉴别DCs和Mφs的标志。     

正常细胞和肿瘤细胞纤维蛋白溶酶原激活物活性的比较

PA是一类蛋白水解酶,它可以把血液中的纤维蛋白溶酶原(PGN)激活成纤维蛋白溶酶(PN)。PN也是一种蛋白水解酶,它可以把纤维蛋白凝块水解成可溶性的产物,它对由赖氨酸或精氨酸的羧基形成的肽键有专一性。正常细胞用化学致癌物。肿瘤病毒等转化之后,纤维蛋白溶酶原激活物(PA)的活性可以提高几十倍,甚至上百倍。 Philip,L.Carl等根据肿瘤细胞PA活性较高这一特点,正在研制一种选择性杀伤肿瘤细胞的新型抗癌药。即把具有一般杀伤作用但     

A- NK 细胞联合IL- 2, IL- 12 在肿瘤免疫治疗中的作用

本文对A-NK细胞联合IL-2和IL-12在抗肿瘤免疫治疗中的作用进行了论述。强调联合应用可高效激活A-NK细胞,提高对肿瘤细胞的杀伤活性。减少IL-2和IL-12的用量及副作用,提高疗效。     

A-NK细胞联合IL-2，IL-12在肿瘤免疫治疗中的作用

本文对A-NK细胞联合IL-2和IL-12在抗肿瘤免疫治疗中的作用进行了论述。强调联合应用可高效激活A-NK细胞,提高对肿瘤细胞的杀伤活性。减少IL-2和IL-12的用量及副作用,提高疗效。