尖吻蝮蛇毒内一种新抗凝血因子ACF II 的纯化及特性

利用阴离子交换层析、凝胶过滤及阳离子交换层析三步方法, 从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化到一个新的抗凝血因子ＡＣＦＩＩ（ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒＩＩ） 。纯化的ＡＣＦＩＩ在ＰＡＧＥ、ＳＤＳＰＡＧＥ和ＩＥＦＰＡＧＥ图谱上均呈单一区带。ＡＣＦＩＩ由两条分子量为１４．６ ｋＤ 的肽链通过二硫键连接在一起, 其等电点为７．０。ＡＣＦＩＩ具有显著的抗凝血活性, 在体外延长ＰＰＴ 时间的最终浓度为０ ．４ ｍｇ／Ｌ。ＡＣＦＩＩ不具有类凝血酶活性、磷脂酶Ａ２ 活性和纤溶活性,也没有出血活性和毒性, 是一种潜在的高效抗凝药物。     

蕲蛇酶对大白鼠和家兔实验性脑血栓的溶栓作用

采用血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷（ＡＤＰ）加肾上腺素（Ａｄ）从家兔颈内动脉或大白鼠颈总动脉注入,以形成脑血栓,２ｈ后各组动物分别从静脉给予不同剂量蕲蛇酶（１５０、３００和６００ｍｇ／ｋｇ）,阳性对照药潘生丁（１０ｍｇ／ｋｇ）及空白对照生理盐水（１ｍｌ／ｋｇ）。以脑组织对伊文思蓝通透性改变及脑组织切片计算血栓数目为指标,判断蕲蛇酶对血栓的影响。结果不同剂量蕲蛇酶组对大鼠或家兔的实验性脑血栓均比生理盐水组血栓消褪加快,形成的血栓数目减少,脑组织伊文思蓝含量亦明显减少;潘生丁组亦显示促血栓消褪的效果     

蕲蛇酶对80例高粘血症的纤维蛋白原浓度作用的研究

目的　通过蕲蛇酶对 80例高粘血症患者的治疗 ,研究其对纤维蛋白原的影响 ,试图寻找防栓抗栓的理想药物。方法　采用蕲蛇酶注射液 0 .75 u静脉滴注 ,每天 1次 ,连用 1 4天 ,观察治疗前后临床症状、甲襞微循环 ( NFM)、血液流变学及脂代谢的变化。结果　该药除具有缓解临床症状 ,改善 NFM,降低血粘度、红细胞压积、血小板吸附率及改变脂代谢紊乱等作用外 ,还能有效地降低血浆纤维蛋白原含量。结论　蕲蛇酶注射液对防治血栓形成具有重要意义。     

尖吻蝮(Agkistrodon acutus)人工室外孵化试验

目的　研究在自然环境条件下人工孵化尖吻蝮蛇卵的孵化成活率。　方法　试验于 2 0 0 1年 6～9月在湖南永州之野异蛇实业有限公司试验蛇场内进行。试验基地室内外结合室内面积为 4 m× 3 m,建成多层立体式蛇窝。室外面积为 1 5 m× 1 0 m,灌木和杂草覆盖度 90 %以上 ,有 1个 3 m× 2 m的饮水池 ,供蛇饮水。种蛇 1 5条。孵化湿度 75 %～ 85 % ,温度比场外自然环境温度略低 2～ 3℃。　结果　尖吻蝮蛇平均产卵数为 1 4 .3枚 ;平均孵化天数为 2 2 .5天 ,孵化率为 95 %以上。　结论　在自然环境条件下可以人工孵化尖吻蝮蛇卵 ,而且受精良好的雌尖吻蝮蛇卵出壳率高     

尖吻蝮蛇伤患者微循环与凝血象的同步观察及其与临床关系

本文对尖吻蝮蛇伤患者的甲皱微循环和凝血象同时进行了动态观察。结果显示尖吻蝮蛇伤患者中毒程度不同,甲皱微循环也发生不同程度的改变,另中毒程度越严重,凝血象变化也越显著.甲皱微循环和凝血象的变化与临床病情变化是一致的,对病情的转归及预后估计均有一定的指导意义。     

人工饲养蕲蛇与野生蕲蛇中重金属元素及氨基酸含量的比较研究

目的:对人工饲养蕲蛇与野生蕲蛇中重金属元素及氨基酸含量进行测定和比较分析研究。方法:采用原子吸收法对蕲蛇中Cu、Hg、Cd、Pb、As含量进行测定;全自动氨基酸分析仪测定蕲蛇中氨基酸含量并进行相关性分析。结果:人工饲养蕲蛇与野生蕲蛇中重金属元素含量为均低于《中国药典》2010版限定值。人工饲养蕲蛇与野生蕲蛇中的氨基酸含量丰富,种类构成完整,均含有17种人体所需要的氨基酸,两者氨基酸含量的相关系数r=0.9991。结论:人工饲养蕲蛇与野生蕲蛇氨基酸含量和组成相似,两者存在线性正相关关系,且蕲蛇中重金属含量符合《中国药典》2010版标准,人工饲养蕲蛇可以作为野生蕲蛇的优良替代品。     

尖吻蝮血液11项生化指标的测定

对尖吻蝮Agkistrodon acutus血液11项牛化指标进行了测定,并对其测定结果进行了t检验.结果显示,尖吻蝮血液生化指标中葡萄糖(Glu)、甘油三酯(TG)、血清钠(Na)、血清氯(C;)、m清钙(Ca)、血清磷(P)、血清镁(Mg)的生化指标在雌雄之间差异不显著(P>0.05);总蛋白(IP)为雌、雄之间差异显著(P<0.05);总胆固醇(CHO)、白蛋白(ALB)、血清钾(K)在雌、雄之间差异极显著(P<0.01).从测定结果可看出尖吻蝮雌雄间血液生化值筹异不大.     

尖吻蝮蛇毒中精氨酸脂酶的分离纯化与性质研究

目的：从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出精氨酸脂酶并进行性质研究。方法：利用亲和层析、DEAE—Sepharose FF、Superdex 75柱对尖吻蝮蛇毒进行分离纯化。结果：分离纯化出的2个精氨酸脂酶活性组份分子量分别为36000、30000,它们的HPLC纯度也都达到97％以上。结论：为其临床应用打下了基础。     

五步蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA的克隆和序列分析

抽提五步蛇毒腺总RNA,通过反转录PCR(RT-PCR)扩增出五步蛇毒腺中一种低分子量金属蛋白酶(aculysinl)的cDNA,克隆到pGMT-vector并测定了全序列.推导其编码的蛋白质序列,发现aculysinl是以酶原形式合成的分泌蛋白,酶原包括信号肽、前肽、金属蛋白酶成熟肽和间隔肽4个部分.金属蛋白酶成熟肽与其它蛇毒金属蛋白酶相比,蛋白质一级结构具有一定的同源性,有一个保守的Zn2+结合位点:HEXXHXXGXXH.Aculysinl含有6个半胱氨酸,推测形成3对链内二硫键.五步蛇低分子量金属蛋白酶cDNA的克隆,为研究蛇毒金属蛋白酶结构与功能的关系,以及开发治疗血栓药物打下了良好的基础     

重症五步蛇咬伤深筋膜室网状切开的早期应用

目的探讨重症五步蛇伤患者行深筋膜室网状切开的早期应用。方法选择2007年4月～2011年12月我院收治被五步蛇咬伤后3h内就诊,且患肢组织压在25mmHg以上的患者44例,其中行深筋膜室网状切开13例作为研究组（A组）,使用传统保守非手术治疗31例作为对照组（B组）,观察两组患者72h内组织压的变化、肿胀程度的改变、创口出血及坏死情况,并进行比较。结果两组比较,A组24h后组织压基本降至正常,肿胀程度比B组轻;A组患者伤口有明显出血渗血,早期B组优于A组,但3h后两组的出血情况对比无明显差异。A组2例患者伤处有片状坏死;B组绝大部分患者72h后经切除坏死组织后肿胀明显消退,1例患者因骨筋膜室综合征导致截肢,两组对比有显著统计学差异。结论在重症五步蛇伤中,审慎深筋膜室网状切开患肢,可避免组织坏死、骨筋膜室综合征形成及大出血的发生。     

蛇伤一号合剂治疗五步蛇咬伤临床观察

目的观察中药制剂蛇伤一号合剂对五步蛇咬伤的临床疗效.方法将66例病人分为两组,均给予常规治疗,治疗组加服蛇伤一号合剂,观察两组痊愈情况及病人肿胀开始消退时间、肿胀完全消退时间、疼痛缓解时间、局部坏死和功能受限发生率、住院时间等指标.结果两组病人临床疗效、肿胀开始消退时间、肿胀完全消退时间、疼痛缓解时间、局部坏死和功能受限发生率、住院时间均有显著性差异(P＜0.05).结论蛇伤一号合剂对五步蛇咬伤有显著疗效.     

皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素Ⅳ的纯化与初步鉴定

从皖南尖吻蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）毒液中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量出血毒素（简称ＡａＨⅣ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为４４ｋＤ,等电点为ｐＨ５．０．从５００ｍｇ粗毒中可获得２０ｍｇＡａＨⅣ纯品．ＡａＨⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量（ＭＨＤ）为０．４μｇ．     

五步蛇主要数量性状与排毒量的相关分析

本文首次报道了五步蛇身体主要部位的数量性状与其排毒量的关系。其中我们发现与排毒量有关的部位是头积、体粗、体重、佛指长。     

乙醇对五步蛇（Agkistrodonacutus）毒毒性的影响

目的为了探索乙醇对五步蛇毒毒性的影响。方法将五步蛇毒不同浓度致死量经不同浓度乙醇体外处理后,选择小白鼠分别给予皮下注射、口服,并将致死量蛇毒于小白鼠皮下注射后立即于局部注射乙醇,观察蛇毒毒性情况。结果使用乙醇体外处理后的五步蛇毒毒性明显下降,小白鼠经皮下注射致死量五步蛇毒后立即在局部注射50％异蛇米酒或75％乙醇0．1～0．2ml有一定的保护作用,口服20倍致死量五步蛇毒未发现有毒性表现。结论五步蛇毒体外经过乙醇处理后毒性明显下降。口服五步蛇毒是安全的。蛇毒进入皮下后立即用乙醇处理有一定的治疗效果。     

血小板计数在五步蛇咬伤中的临床意义

目的探讨血小板计数在五步蛇咬伤临床治疗中的指导意义。方法对2006年3月至2009年12月我院收治的77例五步蛇咬伤病人在运用抗蛇毒血清治疗时对病人的血小板计数进行动态监测。蛄果患者入院时的血小板计数越低,抗蛇毒血清用量越大,呈负相关。结论在五步蛇咬伤治疗中,血小板计数可指导抗蛇毒血清的应用剂量。在应用抗蛇毒血清后血小板计数仍较低者．常提示抗蛇毒血清的用量不足,需追加剂量。