固相法合成多肽AN-M的工艺研究

目的:探讨生物活性肽AN-M的固相合成工艺,并为工业化合成目的肽提供理论依据。方法采用固相法,以Fmoc-保护基保护的α-氨基酸和Wang树脂为原料,经1—氧—3—双二甲胺羧基苯骈三氮唑四氟化硼盐(TBTU)、1—羟基苯并三氮唑(HoBt)、二异丙基乙胺(DIEA)缩合,20%哌啶的DMF溶液脱保护,用切割试剂将AN-M粗品从Wang树脂上切割下来。结果经反相高效液相色谱分析纯化,可得目的肽的得率大于67．00%,最终成品的纯度在98．78%以上,经质谱鉴定其分子量与理论值一致。结论该合成方法步骤简便、便于操作、产品得率高,可用于大规模合成目的肽。     

固相法合成促黄体生成素释放激素及其类似物

哺乳动物下丘脑分泌的促黄体生成素释放激素能促使垂体前叶分泌促黄体生成素和促滤泡成熟素,因此在临床和畜牧业生产中有着重要的应用价值。本文报导了采用固相肽合成的改进方法合成了促黄体生成素释放激素,即pGlu·His·Trp·Ser·Tyr·Gly·Leu·Arg·Pro·Gly·NH_2,及其类似物[D-Ala~6][去Gly·NH_2~10]促黄体生成素释放激素的乙基酰胺,即pGlu·His·Trp·Ser·Tyr·D-Ala·Leu·Arg·Pro·NHC_2H_5,都获得了较满意的结果。对大白鼠和蟾蜍等动物诱导排卵试验的结果说明,该促黄体生成素释放激素类似物的活性较促黄体生成素释放激素提高了上百倍。     

采用固相法合成高纯度生产激素释放因子

工业技术院纤维高分子材料研究所合成了由44种氨基酸构成的人生长激素释放因子(GRF)。从脑下垂体中放出的人生长激素是受丘脑下部产生的GRF控制的。自从1982年发现GRF是由44种氨基酸组成的肽以后,在全世界范围内进行了对它的合成研究。现在该研究所的大箸信一等使用了连结氨基酸成为肽的自动合成装置,在溶媒中使用二氯甲烷、氯仿、甲醇等,通过固相合成法,成功地合成了在世界上居领先的高纯度GRF。     

核苷氢磷酸法固相合成DNA片段研究

继亚磷酰胺法之后,国外近年来又推出了用氢磷酸法合成DNA和RNA片段的方法。提出氢酸磷法比亚磷酰胺法具有更简便、高效和实用性好的特点。 我们用自己制备的氢磷酸核苷活性单体,以长链烷氨基多孔玻珠(CPG)为载体,用自     

一项改进的固相多肽合成法——催产素与加压素的合成

多肽激素在医学和畜牧业方面的应用已日趋广泛,因此急需改进多肽合成的工艺以适应生产实际的迫切要求。本文报导了一个固相肽合成的改进方法。用N~α-保护的氨基酸钾盐代替三乙胺盐,与氯甲基化的苯乙烯和二乙烯苯聚合的树脂(2%交联度)反应,可获得较高的酯化率,并减少或避免季铵盐的形成及因此而引起的许多副反应。应用此法合成催产素和加压素,都获得了满意的结果。采用了水杨醛形成西佛碱测定α-氨基含量的新方法。     

用片段固相缩合法全合成结晶胰高血糖素

遵照毛主席关于“要认真总结经验”的教导,作者在回顾十年来多肽合成发展过程的基础上,运用一分为二的唯物辩证观点分析了目前已有的两类合成方法都难以合成含100个氨基酸残基以上的大蛋白质的内在矛盾,指出了可能解决矛盾的途径之一,一个新的合成方案——片段固相缩合法。在“独立自主、自力更生”方针的指引下,通过反复实践,我们合成了初步满足新方法所需要的新材料——表层树脂。本文报导合成胰高血糖素(29肽)的结果,目的是对新方法进行一次考验:先将用经典法合成的四个肽片段(5,6,9,6)在三肽树脂上依次进行缩合,每次缩合率皆达95%以上,全合成以后经过氟化氢处理,两次柱分离纯化,便可获得氨基酸组成、层析及碟状电泳等物化行为与天然品相同的,具有高效增血糖活力的胰高血糖素结晶——正交十二面体。全过程总得率可达17%。根据在胰高血糖素的组成中含有侧链功能团氨基酸较多的特点,在虽然给人工合成过程带来不利影响的情况下仍能获得较高缩合率及通过简单分离即能纯化结晶的结果,说明这一方法有可能为人工合成具有严格结构的较大蛋白质提供一条发展途径。     

cDNA文库固相构建法

本文介绍一种ｃＤＮＡ文库的固相构建法。文库构建过程ｃＤＮＡ的合成和修饰全部在固相介质－磁珠上完成,简便、迅速、文库质量高,能满足不同目的的ｃＤＮＡ文库构建,是一种植得借鉴和应用的好办法。     

cDNA文库固相构建法

本文介绍一种cDNA文库的固相构建法。文库构建过程cDNA的合成和修饰全部在固相介质—磁珠上完成,简便、迅速、文库质量高,能满足不同目的的cDNA文库构建,是一种值得借鉴和应用的好方法。     

Fmoc固相合成JFT的工艺研究

目的:研究多肽JFT的合成工艺。方法:本实验采用固相合成法(spps),以Fmoc—氨基酸为原料,TBTU\HoBt\DIEA混合试剂缩合,用三氟乙酸\苯甲硫醚\巯基乙醇\苯酚\水脱保护,将多肽从MBHA树脂上切割下来。结果:粗肽的收率为62%,经RP-HPLC纯化,即可获得纯度在98%以上的目标肽。经MALDI—MS质谱分析其分子量与理论值一致。结论:此工艺操作简单,便于推广,适合大规模生产。     

两种树脂对固相法合成丙型肝炎疫苗多肽的影响

本实验采用固相法合成丙型肝炎疫苗多肽,比较Wang树脂和二氯三苯甲基树脂（以下简称二氯树脂）作为载体时的连接率以及目标肽的产率和纯度。通过质谱鉴定分析所得目标多肽的分子量,用茚三酮法对两种树脂与氨基酸的连接率进行比较,用反相高效液相色谱（RP-HPLC）进行粗肽的分析和纯化。结果显示以二氯树脂作载体,第一个氨基酸的连接率,以及目标肽的纯度和产率都要明显高于Wang树脂,因此二氯树脂作载体合成丙型肝炎疫苗多肽更适合大规模工业化生产的要求。     

多肽固相序列分析载体的合成及应用

用合成的聚合物作载体,与模型15肽(纯品)偶联,使用Edman降解法进行多肽序列分析。比较了各种类型载体对肽的偶联效果。实验结果表明合成的大孔型四次乙基五胺类树脂载体已经达到国外同类产品水平。     

A/U富集片段RNA结合蛋白的固相纯化与鉴定

RNA与细胞靶蛋白结合是RNA发挥其生物学功能的重要基础,因此,分离和鉴定RNA结合蛋白是研究RNA功能的必要步骤．目前,RNA结合蛋白的分离和鉴定方法较多,但各有优缺点．本实验利用可溶性碳二亚胺(EDC)介导的缩合反应,将A/U富集片段RNA共价偶联到固相介质amine M-270上,再用固定化RNA经亲和层析从细胞抽提物中分离纯化RNA结合蛋白,并以SDS-PAGE联合质谱分析和Western blotting等方法鉴定RNA特异性结合蛋白．最后通过荧光原位杂交和共聚焦显微镜证明这些RNA特异性结合蛋白确与RNA在细胞内结合．实践证明这一方法简单、高效、易于掌握．     

固相法合成LRH的D—色氨酸类似物及结构与功能的初步探讨

<正> 自从促黄体生成素释放激素(LRH)的发现和合成,近十年来,国内外对LRH的结构与功能进行了广泛的研究和探讨。目前已合成数百种的LRH的类似物,大部分类似物的生物活性均比夭然的LRH高几十倍至上百倍。实验证明,这类LRH类似物对治疗人     

一种改进的cDNA文库固相构建法

本文介绍一种新的cDNA文库固相构建法。文库构建过程中,cDNA的合成和修饰全部在固相介质――磁珠上完成,简便、迅速、文库质量高,能满足不同目的的cDNA文库构建,是一种值得借鉴和应用的好方法。 Abstract：A method for cDNA library construction was introduced.All enzymatic steps of library synthesis were performed on a solid support-magnetic beads.Therefore it combines fast speed and convenient with high quality library,making it ideally suited for most purposes.It is a good method and worth learning and utilization.     

限量抗原底物珠体系固相酶免疫分析法用于抗腺病毒的IgG抗体的检测

1978年冬至1979年春我们用固相酶免疫分析法中的限量抗原底物珠体系(Dass)间接法检测临床诊断为病毒性肺炎及麻疹合并病毒性肺炎患儿的9 l例双份血清中的抗3和7型腺病毒的0gG抗体,同时以微量血凝抑制试验进行对照,其符合率为90．5％。同时期对临床诊断为非腺病毒感染的lo例双份血清进行检测,两种方法滴度均无四倍升高。非腺病毒感染息者DAssIgG抗体水平较有近期感染患者为低,前者1：64,后者1：2,048。对抗3和7型腺病毒的兔免疫血清及正常兔血清Dass法测定结果及抑制与阻断实验均说明本方法是特异的,其灵敏度较血凝抑制试验高约50倍左右。     

一种固相~(125)I标记抗球蛋白的技术

近十年来,广泛应用放射免疫技术的同时,也建立了免疫放射的分析方法(Mi-les and Hales,1968),利用标记抗体先直接和一特定抗原相结合,再在反应系统中,加入联结于吸附剂上的该抗原,结合剩余的游离抗体,分离后者,从而了解待测抗原的含量。但标记特异性抗体的免疫放射法,和放射免疫法中标记抗原一样,在研究不同实验系统时,需标记不同的抗体,在使用上不便。免疫放射分析技术中的标记     

收集挥发性样品的吸附剂法和固相微萃取法

本文介绍挥发性信息化学物质的两种收集方法——吸附剂收集法和固相微萃取收集法,以植物挥发性化学物质收集为例为例,详述了两种方法的原理、步骤、注意事项和实例,最后比较了两种收集方法的优缺点,供相关工作者使用时参考。     

固相DNaseⅠ足迹法研究DNA-蛋白质相互作用

传统的DNaseⅠ足迹法程序繁杂,并且要求目的蛋白经过一定程度的纯化.而固相DNaseⅠ足迹法通过结合有模板的磁珠,先富集序列特异的DNA结合蛋白,进行DNaseⅠ酶切,然后用测序胶分离并分析结果.此方法简便易行,重复性好,并减少了对操作者的放射性损害,尤其适用于研究未经纯化的核蛋白粗提物内序列特异蛋白.     

槐糖脂合成的廉价底物替代研究进展

槐糖脂是一类主要由酵母菌合成的、目前发酵水平最高的生物表面活性剂。由于其优良的理化活性和生物活性,近些年得到了广泛的关注。发酵成本较高是制约槐糖脂大规模应用的最主要因素,廉价底物替代是降低其生产成本的有效途径。本文中,笔者从槐糖脂的合成通路出发,对槐糖脂合成在廉价底物选择和替代效果方面的研究进行综述,文中主要将廉价底物分为还原糖、脂肪酸类、烃、工业副产品和木质纤维素五大类,分析各自的优缺点。最后,对槐糖脂的工业化生产进行了展望,提出了木质纤维素类材料在槐糖脂合成中的重要潜在价值。