大蒜素抗变异链球菌的致龋效果

目的 研究大蒜素对口腔变异链球菌生长及其菌斑生物膜粘附的抑制作用。方法 二倍稀释法梯度稀释测最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）,将MIC以上2个梯度浓度对应的培养物涂布于BHI培养基上进行次代培养获得最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration,MBC）;酶标仪测A值观察不同浓度大蒜素抑菌效应;抑制产酸试验观察抑制细菌产酸效应;结晶紫法研究亚抑菌浓度提取物对变异链球菌粘附能力及生物膜总量的影响;采用激光共聚焦荧光显微镜（laser scanning confocal microscopy,LSCM）观察常态牙菌斑生物膜生长过程中及药物处理后牙菌斑生物膜中死菌和活菌的构成,研究其对牙菌斑生物膜结构和活性的影响。结果 抑菌试验中,得到大蒜素MIC为12.8 mg/L,MBC为25.8 mg/L。MIC及亚抑菌浓度抑菌试验显示均有一定的抑菌性,抑制率为2.17%~67.12%,并且抑菌性与浓度梯度成正相关。产酸试验显示24 h内大蒜素明显抑制细菌产酸（P<0.01）,细菌粘附试验结果显示大蒜素在MIC时生物膜的生成速度最慢,生物膜的总量最低（P<0.01）。共聚焦荧光显微镜可见大蒜素组随药物浓度增加,菌斑生物膜较薄,绿色的活菌及团块明显减少,抑制生物膜的生长。结论 大蒜素对变异链球菌生长、产酸与粘附有一定抑制作用。     

黄连素对变异链球菌抑制作用的体外研究

目的分析黄连素对体外变异链球菌生长、产酸、粘附的影响,探讨其防龋作用。方法采用微量肉汤稀释法进行最小抑菌浓度(MIC)的测定;然后通过试管粘附法测定不同浓度药液对变异链球菌粘附作用的影响;最后计算不同浓度药液作用24h后pH值的变化。结果黄连素对变异链球菌的MIC为1.25mg/mL,MBC为5.00mg/mL。实验组对变异链球菌的粘附及产酸的抑制作用随着药物浓度的增加而增强,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论黄连素可抑制体外变异链球菌的生长、产酸及粘附。     

伊犁黑蜂蜂胶对口腔主要致龋细菌及生物膜生长的实验研究

目的研究伊犁黑蜂蜂胶对口腔常见致龋细菌及其生物膜生长的影响,观察其防龋效果。方法 (1)通过液体稀释法测定伊犁黑蜂蜂胶对口腔常见致龋菌的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC);(2)生物膜形成抑制试验测定伊犁黑蜂蜂胶对口腔常见致龋菌的最小生物膜形成抑制浓度(MBIC50);(3)通过结晶紫染色法测定伊犁黑蜂蜂胶对口腔常见致龋菌的最小生物膜清除浓度(MBEC);结果(1)伊犁黑蜂蜂胶对变形链球菌、远缘链球菌、嗜酸乳杆菌、血链球菌、粘性放线菌和内氏放线菌的最低抑菌浓度分别是0.78、0.39、1.56、0.39、0.20和0.20 mg/mL,最低杀菌浓度分别为1.56、0.78、3.125、0.78、0.39和0.39mg/mL;(2)伊犁黑蜂蜂胶对变形链球菌、远缘链球菌、血链球菌、粘性放线菌和内氏放线菌的MBIC50分别是0.39、0.39、0.39、0.05和0.10mg/mL;(3)伊犁黑蜂蜂胶对变形链球菌、远缘链球菌、血链球菌、粘性放线菌和内氏放线菌的MBEC分别是6.25、1.56、3.1256、0.78和0.78mg/mL。结论伊犁黑蜂蜂胶对口腔主要致龋细菌的生长具有抑制作用,能够抑制主要致龋细菌单菌生物膜的形成,并具有一定清除作用,是具有一定防龋效果的天然药物。     

低龄婴幼儿龋相关致龋微生物研究进展

低龄婴幼儿龋（Earlychildhoodcaries,ECC）发生、发展是由多种因素共同作用,多种微生物共同参与的复杂过程。因此、了解儿童口腔内致龋微生物的种类及其与龋病的相关关系,对预防和治疗儿童龋病有着重要意义。本研究就ECC相关致龋菌及菌斑生物膜研究进展作一综述。     

甲壳胺影响变形链球菌粘附力的研究

目的：研究甲壳胺对变形链球菌的附着力的影响。方法：通过变链菌粘附实验和细菌平皿计数法,观察变链菌在有或无甲壳胺的培养基中的粘附和生长情况,结果：1．甲壳胺对变链菌的附着有抑制作用。2．甲壳胺能使已附着的变链菌脱落。0．5％浓度的甲壳胺作用强于0．25％。3．甲壳胺对变链菌的生长数量及形态无影响。结论：甲壳胺的防龋性是由于它减弱了变链菌的粘附力,而不是通过减少变链菌的数量来实现的。     

厚朴酚对变形链球菌生物膜致龋毒力因子作用的研究

目的 通过激光共聚焦显微镜观察厚朴酚对变形链球菌生物膜的抑菌效果,并初步了解厚朴酚对变形链球菌生物膜的产酸、耐酸、胞外多糖形成及生物膜形成能力等相关致龋毒力因子的转录表达的影响,为进一步研究厚朴酚防龋的药理作用机制奠定基础.方法 建立变形链球菌生物膜体外模型,激光共聚焦显微镜观察不同药物浓度作用后效果,并进行红绿荧光定量分析;根据GenBank基因库查询ffh、gtfD、pdp等基因序列并设计引物,进行RT-PCR.结果 CLSM观察厚朴酚作用变形链球菌生物膜后可使膜内活菌比例明显下降;RT-PCR结果表明毒力因子ffh、gtfD、pdp的表达水平受到抑制.结论 厚朴酚对变形链球菌生物膜的致龋毒力因子ffh、gtfD、pdp的转录表达有明显的抑制作用.     

变异链球菌和血链球菌全代谢途径比对分析

为了比较变异链球菌和血链球菌全代谢途径,依据KEGG数据库(http://www.genome.ad.jp/kegg)对变异链球菌和血链球菌的全部代谢途径作逐项比对。结果显示,二者参与了85个代谢途径,包括多数以相同的酶参与的中央代谢途径,即糖酵解、三羧酸循环、磷酸戊糖途径等,和多数以不同的酶参与的双组分感应系统等。通过变异链球菌和血链球菌整体代谢网络对比,了解了变异链球菌和血链球菌理论上的全部代谢途径,为全面揭示二者代谢交流研究奠定了基础。     

致龋变异链球菌N-乙酰谷氨酸激酶的表达、纯化和生化特性研究

探讨了在大肠杆菌中实现致龋变异链球菌N-乙酰谷氨酸激酶基因(argB)的表达、蛋白纯化和生化特性研究。以变异链球菌基因组DNA为模板,设计特异引物,PCR扩增argB基因。经消化和连接构建重组载体pET28a-argB,测序确认后转化表达菌E.coli BL21(DE3)。SDS-PAGE鉴定argB基因能诱导表达,且表达物可溶。通过镍离子螯合层析和分子筛纯化成功获得N-乙酰谷氨酸激酶(NAGK)重组蛋白。NAGK酶促反应分析表明：精氨酸生物合成的乙酰化环式路径关键酶NAGK活性不受精氨酸反馈抑制,提示可能存在其他调节方式有待进一步研究。此外,分析型分子筛结果显示：具有催化活性NAGK以单体形式存在,显然不同于此前氨基酸激酶家族中的相关报道。     

椰子油对变形链球菌抑菌作用的体外研究

目的 研究椰子油对变形链球菌的生长抑制作用,通过观察其对生物膜活性、产酸及粘附的影响,探讨其在口腔中防龋的作用。方法 采用96孔微量板液体稀释法进行抑菌试验,并测得最低抑菌浓度（MIC）。体外建立变形链球菌生物膜模型,通过激光共聚焦显微镜（CLSM）扫描生物膜,观察不同浓度药物作用24 h后对生物膜活性的影响。其次测定处理后各组培养基上清液的终末pH值。最后通过玻璃棒粘附试验计算出不同浓度药物作用48 h后对生物膜粘附的影响。结果 椰子油对变形链球菌的生长有抑制作用,其对变形链球菌的MIC为3.13%。CLSM观察24 h后生物膜内活菌比例逐渐下降,死菌逐渐增多。培养基上清液的终末pH值随椰子油浓度的增大而升高,且均高于阴性对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。实验组变形链球菌的粘附率随椰子油浓度增高而降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 椰子油对变形链球菌有抑制作用,并能抑制其生物膜的活性、产酸及粘附等作用。     

抑制龋齿生成菌(变异链球菌)的优势共培养菌株的筛选CSCD

目的比较10株益生菌的各项生理功能,筛选抑制龋齿生成菌(变异链球菌)的优势共培养菌株,为后期开发应用奠定基础。方法对组合菌株及单个菌株进行体外抑菌试验筛选,并进一步探索对变异链球菌的抑菌机制。结果10株益生菌菌株中,植物乳杆菌AI-66、乳双歧杆菌AI-01、干酪乳杆菌AI-12和婴儿双歧杆菌AI-20抑制变异链球菌较其他菌株有优势;鼠李糖乳杆菌AI-11与发酵乳杆菌AI-25、婴儿双歧杆菌AI-20与副干酪乳杆菌AI-62、乳双歧杆菌AI-01与干酪乳杆菌AI-12这3个共培养组合菌株较单个菌株对变异链球菌的抑制效果差异具有统计学意义(均P<0.01)。其可能的抑菌物质在低pH具有较好的抑菌效果,且对热不敏感,对胰蛋白酶敏感,可能是小分子多肽类物质。结论筛选出的3个共培养组合菌株在抑制龋齿生成菌(变异链球菌)效果上较单菌株有优势,可应用于食品、功能食品及膳食补充剂中,以降低龋齿、口臭等口腔疾病的风险。     

Activity of Nidus Vespae extract and chemical fractions against Streptococcus mutans biofilms

AIMS: To evaluate the effect of Nidus Vespae extract and chemical fractions on the viability and architecture of Streptococcus mutans biofilms. METHODS AND RESULTS: The raw material was first extracted using 95% ethanol/water. Subsequent fractions were prepared from this extract using cyclohexane/ethyl acetate, petroleum ether/ethyl acetate and chloroform/methanol. The biomass dry weight and total protein of samples treated with Nidus Vespae extract and chemical fractions were significantly less than those treated with the vehicle control (P < 0.05). Biofilms treated with Nidus Vespae also resulted in lower percentage of polysaccharide composition. The pH decrease in the biofilm matrix was retarded by Nidus Vespae compared with the vehicle control. Architecture of biofilms treated with Nidus Vespae was different than in the vehicle control and 0.05% chlorhexidine. CONCLUSIONS: Chloroform/methanol fraction was the most effective treatment. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The significant antibiofilm activity demonstrated by Nidus Vespae shows it to be a promising source of novel anticariogenic agents.     

白及块茎铜,锌超氧物歧化酶的纯化及其性质

白及（Ｂｌｅｉｌｌａｓｔｒｉａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｒｅｉｃｈｂ．ｆ．）的ＳＯＤ同工酶只有一条较宽的谱带,确认为Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ。其块茎ＳＯＤ总活性和比活性都高,且含有丰富的白及胶;经丙酮分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析分离纯化,获得对ＣＮ￣－敏感的淡兰色Ｃｕ·ＺｎＳｏＤ粉末。在凝胶电泳染色图谱上,纯化后的酶与粗酶液的ＳＯＤ区带相对应,且其酶活性染色带与蛋白染色带位置对应,表明已纯化到均一程度。该酶分子量约３３ＫＤ,亚基分子量约为１６．４ＫＤ;紫外光区的吸收峰在２６４．６ｎｍ,等电聚焦电泳呈现一条蛋白区带,ｐＨ值在４．３５左右;该酶在ｐＨ６．０～１０．０,温度在５０℃范围内具稳定性。纯化后的酶为４５６３．２ｕ／ｍｇ·蛋白,纯化了５１倍,活力回收为２２．３％。上述酶没有过氧化氢酶活性。提取过程中还得到高质量的副产品白及胶。     

白芨粗多糖提取方法的比较研究

以白芨（Bletilla Striata(Thunb.)Reichb.f.）块茎为原料,运用多种理化方法,提取白芨粗多糖,经红外吸收光谱、紫外吸收光谱的比较和鉴定确诊提取物中有多糖特征吸收,测定粗多糖中总糖、还原糖、蛋白质等组成物质的含量,以多糖纯度和提取率为主要指标,对提取方法予以比较。结果表明热水处理和室温下超声处理为较理想的提取方法。     

白芨多糖胶皮肤毒理学安全性评价研究

本文对白芨多糖胶皮肤毒理学安全性评价进行了系统研究。     

变形链球菌对不同牙科充填材料的粘附及早期生物膜的形成

目的探讨变形链球菌对不同牙科充填材料的粘附和早期生物膜的形成.方法比较经放射性同位素3H-TDR(3H-胸腺嘧啶核苷)标记的变形链球菌对3种唾液包被的充填材料的粘附.采用蛋白质测量试剂盒定量分析其对唾液蛋白的吸附量;采用凝胶电泳和图像分析系统定量分析其对唾液白蛋白和α-淀粉酶的吸收率.结果各种材料对变形链球菌的粘附能力,对唾液蛋白的吸附能力均随着材料的不同而不同.Fuji IX对细菌的粘附量很高,但是对蛋白的吸附量却很低;而F2000对细菌的粘附量很低,对蛋白的吸附量却很高.结论在不同充填材料表面形成的生物膜是不同的,提示早期生物膜的形成具有一定的特异性.这种生物膜的差异对口腔微生态环境及龋病和/或牙周病的发展具有重要意义.     

白及种子萌发与快速繁殖技术的研究

将不同胚龄的白及种子接种到不同培养基中进行培养,对白及种子萌发率、萌发时间、丛生芽增殖、生根等方面进行了研究。结果表明:白及种子萌发率与其胚龄及有胚率成正相关,萌发时间则与胚龄及有胚率成负相关;胚龄16周的种子在1 g/L花宝1号 2 g/L花宝2号的培养基上萌发率可达84%;胚龄等于或大于20周的种子萌发率不受培养基成分的影响,均可达100%,萌发时间只需7 d;丛生芽增殖的最佳培养基为1/2 MS 4.0 mg/L6-BA 0.2 mg/L NAA 100 g/L CM,其增殖倍数达4.41倍;诱导生根较好的培养基为1/2 MS 0.2 mg/L NAA,生根率达90%。     

In vitro activity of xanthorrhizol against Streptococcus mutans biofilms

AIMS: We determined the effect of xanthorrhizol (XTZ) purified from the rhizome of Curcuma xanthorrhiza Roxb. on the Streptococcus mutans biofilms in vitro. METHODS AND RESULTS: The biofilms of S. mutans at different phases of growth were exposed to XTZ at different concentrations (5, 10 and 50 micromol l(-1)) and for different time exposures (1, 10, 30 and 60 min). The results demonstrated that the activity of XTZ in removing S. mutans biofilm was dependent on the concentration, exposure time and the phase growth of biofilm. A concentration of 5 micromol l(-1) of XTZ completely inhibited biofilm formation by S. mutans at adherent phases of growth, whereas 50 micromol l(-1) of XTZ removed 76% of biofilm at plateau accumulated phase when exposed to S. mutans biofilm for 60 min. CONCLUSIONS: Xanthorrhizol isolated from an edible plant (C. xanthorrhiza Roxb.) shows promise as an antibacterial agent for inhibiting and removing S. mutans biofilms in vitro. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: XTZ could be used as a potential antibacterial agent against biofilm formation by S. mutans.     

The anti-biofouling effect of Lactobacillus fermentum-derived biosurfactant against Streptococcus mutans

Biofouling in the oral cavity often causes serious problems. The ability of Streptococcus mutans to synthesize extracellular glucans from sucrose using glucosyltransferases (gtfs) is vital for the initiation and progression of dental caries. Recently, it was demonstrated that some biological compounds, such as secondary metabolites of probiotic bacteria, have an anti-biofouling effect. In this study, S. mutans was investigated for the anti-biofouling effect of Lactobacillus fermentum (L.f.)-derived biosurfactant. It was hypothesized that two enzymes produced by S. mutans, glucosyltransferases B and C, would be inhibited by the L.f.-biosurfactant. When these two enzymes were inhibited, fewer biofilms (or none) were formed. RNA was extracted from a 48-h biofilm of S. mutans formed in the presence or absence of L.f. biosurfactant, and the gene expression level of gtfB/C was quantified using the real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). L.f. biosurfactant showed substantial anti-biofouling activity because it reduced the process of attachment and biofilm production and also showed a reduction in gtfB/C gene expression (P value < 0.05).