Atrolnc-1在制动诱导小鼠后肢肌萎缩中的作用研究*

目的: 探讨Atrolnc-1在制动诱导小鼠后肢肌萎缩中的作用。方法: 将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control)和制动组(Immobilization),每组10只。对照组不作任何实验处理,制动组小鼠右侧后肢装入自制塑料制动器固定。2周后分离其腓肠肌,用苏木素-伊红(HE)染色并观察腓肠肌形态学改变,测定肌纤维横截面积。采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测肌肉萎缩F-box蛋白(Atrogin-1)及肌萎缩特异性长链非编码RNA Atrolnc-1的变化。蛋白免疫印迹(WB)检测Atrogin-1、肌肉环状指蛋白1(MuRF-1)、胞浆及胞核p-NF-κB蛋白的表达。结果: 制动2周后小鼠腓肠肌萎缩。与对照组相比,制动组小鼠腓肠肌湿重减少(P＞0.05),腓肠肌湿重/体重千分比明显降低(P＜0.05);HE染色可见制动组骨骼肌大量肌纤维缩小或溶解,肌纤维横纹排列紊乱,间质见炎症细胞浸润;肌纤维横截面积减少(P＜0.01)。QRT-PCR及WB结果显示,Atrolnc-1表达上升(P＜0.01),胞浆p-NF-κB蛋白表达减少(P＜0.01),但胞核p-NF-κB蛋白表达升高(P＜0.01),同时Atrogin-1(P＜0.01)与MuRF-1(P＜0.01)表达均升高。结论: 制动诱导小鼠腓肠肌萎缩,可能与Atrolnc-1激活NF-κB入核,促进MuRF-1表达增加有关。     

食蟹猴脑出血模型的建立及评价

目的建立稳定的食蟹猴自体股动脉抗凝血脑出血模型。方法健康成年食蟹猴8只,采用新鲜抗凝自体股动脉血1．5mL,立体定向一次性缓慢匀速注入右侧基底节区屏状核内侧,利用MRI、PET、神经功能缺损评分和组织病理学对模型进行评价。结果动物在麻醉苏醒后出现了与血肿部位相对应的神经系统定位体征,影像学检查血肿腔位于右侧基底节,注血部位大片代谢缺损区,中线向左侧移位。组织病理学检查损伤局部周围可见多量泡沫细胞、淋巴细胞及单核巨噬细胞浸润,部分损伤脑组织已被肉芽组织机化。结论自体股动脉抗凝血定向脑内注射法可建立稳定、可靠的食蟹猴脑出血模型,注血量、注血部位和速度是模型成功与否的关键。     

TLR-3在骨骼肌萎缩中的作用

[目的]禁食、慢性疾病等会导致肌肉萎缩的发生,临床表现为肌肉质量下降、肌纤维直径变小、肌肉张力以及抗疲劳能力下降等。有研究显示,小鼠成肌细胞C2C12中7种Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)均表达,为了进一步研究TLR家族中TLR-3在肌萎缩中的作用机制,探讨治疗肌萎缩的新方法。[方法]以小鼠C2C12细胞为实验材料,地塞米松处理构建肌肉萎缩模型,转染si TLR-3后通过免疫荧光、q PCR和Western Blot方法检测对肌细胞萎缩模型的改善情况。[结果]发现干涉TLR-3能明显改善细胞萎缩模型的表型,并使肌萎缩标志性基因MuRF和MAFbx在mRNA水平和蛋白水平均明显下调。[结论]以上结果说明干涉TLR-3改善了成肌细胞肌萎缩症状,该研究为探明Toll样受体家族在肌萎缩中的作用机制,及肌肉疾病的防治奠定基础。     

人骨髓间充质干细胞脑内移植对食蟹猴脑出血的治疗作用

目的评价人骨髓间充质干细胞脑内移植对食蟹猴脑出血模型的治疗作用。方法符合普通级标准的成年食蟹猴12只,用自体股动脉抗凝血脑内注射方法建模后1周,用脑立体定位法在血肿周围植入人骨髓间充质干细胞,细胞数分别为高剂量5×106、低剂量1×106、对照组等体积生理盐水。利用MRI、PET、神经功能缺损评分和组织病理学对干细胞移植效果进行评价。结果神经功能评分显示干细胞移植1周后动物神经功能明显改善。PET结果显示干细胞移植后2周高剂量组血肿周围皮层、基底节核团的SUV%值与对照组间存在显著性差异(P=0.02)。移植后3周高、低剂量组血肿周围皮层、基底节核团的SUV%值与对照组间差异存在显著性(P值分别为0.03和0.04)。MRI显示剂量组血肿吸收速度大于对照组。病理检查可见剂量组坏死灶面积小于对照组,出血灶周围有大量新生血管生成,剂量组与对照组间差异存在显著性(P<0.01)。结论在损伤脑组织周围移植hBMSC可促进食蟹猴损伤神经组织的恢复,为hBMSC治疗脑出血的临床应用提供了重要实验依据。     

妊娠晚期食蟹猴与同龄未孕食蟹猴血液生理和生化指标的比较

目的提供妊娠晚期食蟹猴有关的血液学数据。方法采用Sysmex XE-2100血液分析仪、SysmexCA-7000凝血分析仪,及OL YMPUS AU600型全自动生化分析仪,对15只怀孕晚期食蟹猴及10只正常对照非孕食蟹猴进行血常规、凝血三项及17项血生化指标分析。结果妊娠晚期食蟹猴在WBC、NEU%、LYM%、PT、APTT、Fgb、TP、Alb、BUN、CR、CHOL、Glu、Fe、LDK、HDBH上,与同龄未孕食蟹猴相比差异显著（P〈0.05）,其他指标RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT、ALT、AST、ALP、T.Bili、TG、P相比,于孕晚期有不同程度改变,但无显著性差异（P〉0.05）。结论初步建立了孕晚期食蟹猴的常规生理学数据,为相关的实验研究提供基础资料。     

食蟹猴肾移植模型的建立

目的建立食蟹猴的肾移植模型。方法通过显微外科手术对食蟹猴进行同种异体移植,将供体肾动脉、肾静脉分别端侧吻合到受体腹主动脉、下腔静脉,供体输尿管端端吻合到受体输尿管。结果154例肾移植食蟹猴无一只在手术过程中因意外死亡;无一只因手术感染死亡;无一只因手术并发症死亡;肾热缺血时间（30±4.5）min。结论应用食蟹猴建立肾移植模型,技术成熟,方法可靠。应用此模型评价新型免疫抑制药物,进行免疫耐受、异种移植研究可为临床试验提供更为准确可靠的依据。     

推拿对失神经骨骼肌萎缩大鼠的治疗作用及其机制*

目的:探讨推拿对失神经骨骼肌萎缩大鼠的治疗作用及其机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为模型组(n=24)和推拿组(n=24),通过切断右侧胫神经制备腓肠肌萎缩大鼠模型。术后第2日开始给推拿组大鼠手术侧腓肠肌给予手法干预,模型组不予干预。两组分别在0 d、7 d、14 d、21 d四个时间点各处死6只大鼠,取大鼠双侧腓肠肌,称重后计算各组大鼠腓肠肌湿重比;HE染色测定肌纤维截面积和直径,实时荧光定量PCR检测腓肠肌中miR-23a、Akt、MuRF1、MAFbx基因相对表达量。结果:与0 d比较,模型组和推拿组大鼠腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径呈现进行性下降的趋势,其中7 d、14 d、21 d推拿组腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径均显著高于模型组(P＜0.05,P＜0.01);与0 d比较,模型组和推拿组MuRF1、MAFbx、Akt mRNA表达均呈现先升后降的趋势,其中7 d、21 d推拿组MuRF1 mRNA表达均显著低于模型组(P＜0.05,P＜0.01),7 d、14 d、21 d推拿组MAFbx mRNA表达均显著低于模型组(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01),7 d、14 d、21 d推拿组Akt mRNA表达均显著高于模型组(P＜0.05,P＜0.01);与0 d比较,模型组和推拿组21 d时miR-23a mRNA表达升高,推拿组miR-23a mRNA表达显著高于模型组(P＜0.05)。结论:推拿能延缓失神经骨骼肌的萎缩,其机制可能与上调miR-23a、Akt基因的表达,下调 MuRF1、MAFbx基因的表达,使蛋白降解速度受到抑制,从而减轻骨骼肌蛋白的降解程度有关。     

青少年食蟹猴糖尿病模型的肝脏病理生理学研究

目的通过对胰岛素用量不足条件下链脲佐菌素诱导的青少年食蟹猴1型糖尿病模型肝脏病理生理学的研究,探讨长期高血糖所致青少年食蟹猴肝损伤特点及机制。方法通过静脉注射68 mg/kg的链脲佐菌素,诱导4只3岁的食蟹猴成为1型糖尿病模型,然后经长期的血糖监测和静脉糖耐量实验来评价该模型的可靠性及稳定性,造模4年后,对模型猴进行血生化、PAS染色、苏丹III染色及普通病理和超微病理等指标的检测,另外选取4只健康与模型猴年龄匹配的猴作为正常对照组,同时进行相应的检测。结果与正常对照组比较,糖尿病猴血清学检测指标中总胆汁酸、尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆碱酯酶、乳酸脱氢酶、总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇明显升高。组织化学染色结果显示,与正常猴比较,糖尿病猴中央静脉区肝实质细胞肿胀,肝细胞PAS染色（糖原染色）加深,苏丹Ⅲ染色（脂肪染色）阳性细胞增多;电镜结果显示糖尿病猴肝细胞内胞质糖原颗粒增多;线粒体电子密度显著增高,结构不清;窦周隙内含有大量脂滴的肝星状细胞明显增多。结论在长期胰岛素用量不足血糖控制不理想的条件下,青少年食蟹猴1型糖尿病模型肝脏特异性的病理改变是肝糖原贮积和含有大量脂滴的肝星状细胞增生,这些病理改变与非酒精性脂肪肝病的病变特点存在显著不同,但其机制目前尚不清楚。     

食蟹猴血液学及血清生化指标日间节律性变化

目的研究食蟹猴血液学及血清生化指标日间节律性变化,为正确全面评估血液学及血清生化测定结果提供一定的实验事实依据。方法在9：30（am）～10：30（am）、12：30（pm）～13：30（pm）、15：30（pm）～16：30（pm）及19：30（pm）～20：30（pm）4个时间段对12只食蟹猴（雌雄各半）采血。采用全自动血细胞分析仪及血液生化分析仪分别测定血液学及血清生化指标。利用高效液相色谱（HPLC）方法分析血浆中皮质醇含量。结果雌雄食蟹猴下午白细胞数（WBC）及尿素氮（BUN）显著升高;雌性食蟹猴下午血红蛋白（HGB）及血细胞压积（HCT）显著降低,天门冬氨酸氨基转换酶（AST）及丙氨酸氨基转换酶（ALT）活性显著升高;雄性食蟹猴下午血糖（GLU）及血浆皮质醇显著降低。结论雌雄食蟹猴血液学及血清生化部分指标存在明显的日间节律性。     

大鼠肌卫星细胞移植失神经骨骼肌的形态学观测

目的探讨大鼠肌卫星细胞移植能否延缓失神经骨骼肌萎缩。方法将16只成年Wistar大鼠分为实验组与对照组,两组均切断大鼠右后肢胫神经,建立腓肠肌失神经动物模型。实验组：将体外培养的同种异体肌卫星细胞悬液0．2mL缓慢注射到失神经腓肠肌内、外侧头中;对照组：则缓慢注射等量的生理盐水于相同部位。术后第4周,采用肌湿重、肌纤维横截面积形态学观测的方法,检测失神经骨骼肌的萎缩变化情况。结果成功地对成年大鼠肌卫星细胞进行了分离、纯化、鉴定、培养和移植。发现实验组与对照组相比,失神经腓肠肌湿重残存率（由手术侧与自身健侧的肌湿重测定值之比得出）：实验组为0．48±0．050,对照组为0．33±0．059,二者存在显著性差异（P〈0．01）;腓肠肌纤维横截面积残存率（由手术侧与自身健侧的肌纤维横截面积测定值之比得出）：实验组为0．58±0．011,对照组为0．50±0．018,二者存在显著性差异（P〈0．01）。结论本实验表明将肌卫星细胞异体移植到失神经骨骼肌内可明显延缓骨骼肌的萎缩进程,为再生神经到达靶器官提供较多的时间,进而为解决再生神经延伸到靶器官前,靶器官已发生不可逆性萎缩,严重制约再生神经效果的临床难题提供一个新的研究思路。     

食蟹猴经股静脉导管长期给药方法的建立

目的建立一种可靠的食蟹猴经股静脉导管长期给药的方法.方法选取20只雄性食蟹猴,麻醉后经股静脉造口,插入静脉导管,将植入式通道与导管连接并将其埋植于背部皮下,通过与植入式通道相连的输液泵进行给药.分别于术前1周、术后1周及术后2周测定血常规、血凝、生化等值.结果全部动物都能完成为期3个月的给药,手术感染率、导管堵塞率较低,分别为10%和5%.术后两周89.5%的生理指标与术前相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论该实验采用的食蟹猴经股静脉插管并通过输液泵进行长期给药是一种安全、有效的方法,可广泛用于药理学及毒理学实验.     

SARS动物模型的研究

利用分离的SARS CoV毒株BJ 0 1,经滴鼻等途径感染大鼠、豚鼠、黑线仓鼠、白化仓鼠和雏鸡等 5个种属的动物 ,筛选对SARS易感的小动物。在此基础上 ,选择食蟹猴和恒河猴进行SARS的人工感染实验 ,评价其作为SARS动物模型的可能性。结果表明 ,大鼠、豚鼠、黑线仓鼠、白化仓鼠和雏鸡等动物对SARS均不易感 ,感染后未观察到任何的临床及病理学改变 ,不过从感染 2周后的大鼠和豚鼠的肺和咽等组织样本中检测到了的特异的核酸 ,提示SARS CoV能够在这两种动物的体内复制。从感染猴子的分泌物和脏器中分离出了病毒 ,证明SARS CoV也能够在猴子体内复制。临床和病理组织学检查结果显示 ,SARS病毒接种食蟹猴和恒河猴后 ,可以引起所有实验猴发生间质性肺炎 ,其病理学改变与人类感染SARS病毒后肺部病变近似 ,但病变的严重程度比较人类的轻得多 ,除此之外无任何其它的明显的临床表现及组织病理学改变 ,按照动物模型的指标判断食蟹猴和恒河猴并不是SARS的理想动物模型 ,不过在目前尚没有更理想的动物模型情况下 ,以间质性肺炎为病理学检查指标 ,恒河猴和食蟹猴可以作为评价抗SARS药物和疫苗的模型动物     

环境丰容对长期单笼圈养食蟹猴行为的影响

目的观察环境丰容对长期单笼圈养食蟹猴行为学的影响。方法 30只食蟹猴(雌雄各半)随机均分为对照组(A组,n=15)和环境丰容组(B组,n=15),分别圈养在规格为0.7 m×0.8 m×0.9 m(宽×长×高)的单笼内。对照组单笼内仅设有食槽和饮水器,面向墙壁;环境丰容组置于另一个房间,单笼内除设有食槽和饮水器外,还有吊环、不锈钢球以及增加采食难度的小石块和塑料瓶,单笼对面设有镜子(猴子能看到自己和邻近的同类),同时间隔播放模拟海水声、雷鸣雨声及鸟叫声等自然音响。实验周期3个月,期间由固定观察员于上午和下午各观察记录一次食蟹猴出现的异常行为,如吸指(趾)、吮生殖器、刻板转圈、踱步、自伤、拔毛癖、嗜粪癖等。结果随着时间的延长,2组单笼圈养食蟹猴均出现不同程度的异常行为,其中对照组的异常行为发生率明显高于环境丰容组(P0.05)。结论环境丰容对降低长期单笼圈养食蟹猴异常行为有显著影响。     

一种改进的非人灵长类神经功能缺损评价方法

目的对文献中的量表进行修改和细化后用于实验猴的神经功能动态量化观察,使其更适于灵长类脑卒中神经功能缺损的评价。方法成年食蟹猴12只,用自体股动脉抗凝血脑内立体注射的方法建立脑出血模型,造模后1周将动物随机分为对照组、干细胞治疗高剂量组和低剂量组,分别在出血灶周围注射生理盐水、脊髓间充质干细胞5×106/只和1×106/只,造模6h,1d,3 d,1w后及干细胞注射后1d,3d,1w,2w,3w,4w在每天的固定时间使用文献中的表格和/或改进的表格进行评分,比较造模前后和干细胞注射前后动物受损伤侧上肢神经功能缺损情况评价造模和干细胞治疗效果。结果造模手术前,所有动物的行为表现均正常,神经功能评分为0。造模手术后6h,用修改前后的表格评分均为31分左右。但从术后3d开始出现评分上的差异。用修改后的表格对动物的神经功能进行评分结果显示干细胞注射后1周开始到动物被安乐时,剂量组与对照组之间的神经功能评分出现显著性差异（P〈0.05）。高、低剂量组间未见显著性差异。结论改进的表格克服了旧表格中分差大,评价标准模糊的缺点,提高了量表评价的敏感性,具有良好的临床相似性和可操作性。为建立标准化神经功能评价量表进行了有益尝试。     

中华绒螯蟹蜕壳过程中肌肉的组织学、超微结构及主要蛋白质含量的变化

为探讨中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)蜕壳前后肌肉组织的形态特征变化, 采用石蜡切片、电镜及生物化学方法, 研究了中华绒螯蟹蜕皮过程中步行足和腹部肌肉的组织学、超微结构及主要蛋白质含量的变化。结果显示: 相对于蜕皮间期, 步行足在蜕皮前后组织学形态特征无明显变化; 超微结构在蜕皮前无明显变化, 蜕皮后可见肌原纤维纵裂及肌小节横裂现象, 表明蜕皮后外骨骼硬化的过程伴随着肌肉的生长。相对于蜕皮间期, 腹部肌肉在蜕皮前后组织学特征变化明显: 蜕皮前肌束间隙增大, 蜕皮后肌束内肌纤维间隙增大。电子显微镜观察显示, 蜕皮前肌原纤维在内部降解, 出现空洞, 肌原纤维边缘降解, 导致肌原纤维间隙增大; 蜕皮后肌原纤维重新组装、重建, 恢复到间期正常形态。生物化学研究发现, 蜕皮前后步行足和腹部肌肉中肌原纤维蛋白和可溶性蛋白含量的变化同其结构特征的变化相一致。以上研究结果表明, 中华绒螯蟹肌肉组织的结构特征同蜕皮周期密切相关。     

强直性脊柱炎食蟹猴膝关节及肠道组织病理变化分析

目的 强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)是一种免疫介导的累及中轴关节、周围关节和肠道的慢性疾病,但外周膝关节和肠道的病因病机未明。本研究旨在研究AS食蟹猴膝关节和肠道主要病理变化及机制。方法 通过组织形态学分析及免疫组化实验,研究AS外周膝关节及肠道组织的关键特征并初步分析其发病机制。结果 AS食蟹猴外周膝关节病理特征在早期主要表现为关节表面软骨侵蚀、软骨下骨暴露、关节表面呈锯齿状;晚期主要表现为软骨表层肥大软骨细胞异位增生,通过软骨成骨和纤维成骨形成骨赘,软骨基本丢失。软骨和血管中MMP-3的表达上调,引起软骨破坏并刺激血管增生。AS食蟹猴小肠绒毛严重萎缩且隐窝增生明显,空肠和回肠的黏膜肠腺中可见大量γδT细胞。结论 本研究通过对AS食蟹猴膝关节和肠道的病理分析,获得了该自发模型膝关节与肠道组织的关键特征,并提出可能的发病机制。为探讨AS的骨骼病变与外周疾病间的潜在关联,以及AS的治疗提供新的见解。     

六个肥胖相关基因在食蟹猴2型糖尿病不同发病时期的差异表达

2型糖尿病(T2DM)是一种与基因密切相关的高发性代谢性疾病。采用高脂饮食(其中含15%猪油)喂养25只中老年雄性食蟹猴的方法,制备T2DM模型,通过检测血糖与血脂水平确定疾病发展进程,并利用实时PCR对外周血白细胞中的6个肥胖相关基因mRNA表达量进行测定。食蟹猴T2DM在临床前期和临床期口服糖耐量实验(OGTT)2-h血糖值分别为(11.06±6.05)mmol/L和(13.12±2.89)mmol/L,显著高于正常组;空腹血糖在临床期达到最大值,为(7.58±1.56)mmol/L(P<0.01),说明其T2DM模型被成功诱导。但所检测的6个糖尿病肥胖相关基因中只有CDKN2B、IGF2BP2和FTOmRNA表达量与糖尿病发病进程呈正相关,且临床期IGF2BP2和FTO的表达量分别是对照组的65.92倍和4.30倍,差异极显著(P<0.01)。因此,基因CDKN2B、IGF2BP2和FTO可作为食蟹猴糖尿病早期诊断及预后评价的参考指标。     

IL-10在人骨髓间充质干细胞移植治疗食蟹猴脑缺血中的作用

目的探讨食蟹猴脑缺血模型在人骨髓间充质干细胞（human bone marrow-derived mesenchymal stem cells,hBMSCs）移植后IL-10的表达及其对脑缺血损伤的保护作用。方法食蟹猴8只,在脑定位仪定位下,应用光化学法构建食蟹猴脑缺血模型,并将其随机分为高剂量治疗组、低剂量治疗组和模型组,分别在脑缺血部位附近注射高、低密度的hBMSCs和生理盐水。手术后,通过影像学、神经功能评分及组织病理学观察对hBMSC的治疗效果进行评价。并应用原位细胞凋亡检测的方法观察脑缺血周围神经细胞的凋亡情况。应用免疫组织化学、RT-PCR以及real-time PCR法检测检测脑损伤周围IL-10的表达水平。结果与模型组相比,hBMSC治疗组损伤部位周围细胞凋亡明显减少,免疫组织化学显示[L-IO阳性细胞的数量及染色强度均较模型组明显升高,IL-10在mRNA水平表达也明显升高。结论hBMSCs对食蟹猴脑缺血模型具有修复作用,其治疗机制可能与促进炎症抑制因子IL-10的表达有关。     

MHC-Ⅰ在特发性炎性肌病患者肌肉组织中表达的研究

目的:探讨MHC-Ⅰ在IIM发生发展中的作用和机制.方法:对收集的15例IIM患者进行肌肉活检,观察其病理结构的改变、MHC-Ⅰ在患者肌肉组织中的分布表达情况,并与非炎症性肌病患者作对照.结果:1.在IIM患者肌肉组织中明确有MHC-Ⅰ类分子的表达,其阳性率为100%;2.虽有6例IIM患者肌纤维中没有明显的炎性细胞浸润,但患者还是出现了临床症状且肌酶异常;3.MHC-Ⅰ在IIM肌肉组织中的表达强弱程度与病人肌酶呈正相关性,且具有统计学意义(P＜0.05).结论:MHC-Ⅰ类分子可以作为IIM早期诊断的指标之一,其表达强弱与患者病情程度有相关性.     

H5N1接种恒河猴和食蟹猴后外周血细胞变化的分析

目的测定H5N1型禽流感病毒感染恒河猴、食蟹猴后,其外周血细胞的变化,为H5N1模型猴提供基础数据及研究参考。方法健康合格食蟹猴、恒河猴各4只,经滴鼻方式接种H5N1病毒107TCID50,确认发病后,在不同时间点进行血细胞及T淋巴细亚群的分析。结果与接种H5N1病毒前比较,接种后白细胞总数（WBC）在第6天时有所降低,至第9天时回升;红细胞总数（RBC）在第3天有所降低,之后回升;淋巴细胞比例及数量分别在第6天、第9天升高并达到最高值。至第9天时,CD4^＋T细胞数明显高于接种前,CD8^＋T细胞数上升显著,导致CD4^＋/CD8^＋T细胞比例下降,甚至在2只食蟹猴出现了比例倒置。结论实验用猴感染H5N1后,可导致WBC,CD4^＋,CD8^＋T等血液细胞的变化,应作为H5N1模型动物的检测指标。