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1.
《生物技术通报》1992,(12)
,石石泞‘汤.刁,,口.r..“924339杆状病毒至组体在受纳和非受纳昆虫细饱中的签娜表达〔会,英〕/Melntosh,A.H.…2 In vitro一1992,25(3),Pt .2一soA〔译自DBA,1992,11(11),92一06032〕 用携带在p10和多角体启动子控制下的声一半乳糖昔酶和荧光素酶基因的首蓓银纹夜蛾多核壳体核多角体病毒(Ac一Gal一Lu。)测定了报道基因在受纳和非受纳昆虫细胞中的表达。所用鳞翅目昆虫细胞系为粉纹夜蛾(Tn一CLI)、草地贪夜蛾(少-LB一Sf21)等6种,还用了鞘翅目棉铃象的细胞系(AGE)。将细胞与Ae一Gal一Lul以ioMOI的量一同在28℃下保温72小时,然后… 相似文献
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辽宁省农科院大连生物技术研究所张春发等人利用柞蚕核型多角体病毒(ApNpV)组建成转移载体,并以此载体携带外源基因(人白细胞介素-4、DE糖蛋白)在草地贪夜蛾Sf9昆虫细胞、柞蚕卵巢细胞以及柞蚕蛹活体中表达成功。实验表明,表达产物的确以非融合蛋白形式出现,从而建立了柞蚕NpV载体—柞蚕蛹活体宿主表达系统。这是继菌苜蓿纹夜蛾核多角体病毒(AcNpV)—Sf9细胞载体表达系统和家蚕核多角体病毒(BmNpV)——家蚕幼虫载体表达系统以后又一个昆虫杆状病毒载体达表系统。由于该系统是利用柞蚕蛹活体为宿主 相似文献
3.
促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)是一种与G-蛋白偶联的糖蛋白。本文报道了从大鼠卵巢cDNA库中筛选LH/hCG受体cDNA及其在昆虫细胞中的高效表达。LH/hCG受体cDNA全长2403bp,编码受体信号肽和成熟受体674个氨基酸。用多角体病毒表达载体pVL1393,LH/hCG受体cDNA在昆虫细胞中得到高效表达。在非还原和还原条件下的SDS-PAGE分析显示,用亲和层析分离纯化的受体表观分子量分别为120Kd和92Kd。经配基结合和Scatchard Plot分析表明,其与hCG反应的Kd为8.4×10~(-9)mol/L,与CHO细胞表达产物相似。 相似文献
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为了研究在昆虫细胞中表达重组人卵泡刺激素,我们以人胎盘组织提取的染色体DNA为模板,利用重叠PCR方法扩增出hFSHβ亚基的cDNA的编码区。将此cDNA克隆入核型多角体病毒(AcNPV)非融合蛋白基因表达载体pVL1393,我们得到了表达载体pVL1393-hFSHβ,然后与BaculoGold~(TM)线性杆状病毒DNA共转染昆虫细胞SF9,经多次扩增后获得高滴度的重组病毒AcNPV-hFSHβ。将此重组病毒感染昆虫细胞,我们得到了在胞浆中表达的hFSHβ亚基,Western blot显示分子量大约为21kDa。以重组病毒AcNPV-hFSHβ与AcNPV-hCGα一同感染昆虫细胞得到了具有分泌性的重组hFSH异二聚体,在非还原的条件下Western blot显示分子量大约为33kDa。 相似文献
5.
杆状病毒模式种苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)的orf78 (即Ac78)是最近被发现的杆状病毒核心基因,在杆状病毒的生活周期中具有重要功能.氨基酸序列分析表明,Ac78的C末端105～108位氨基酸区域在Group I NPVs旁系同源物中高度保守.为研究该保守区域在Ac78功能中的作用,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统成功构建了缺失该保守区域,并且携带绿色荧光蛋白基因和多角体蛋白基因的Ac78截短补回型重组病毒(vAc78:del105-108).荧光显微镜分析和病毒生长曲线测定结果表明,在vAc78:del105-108转染的Sf9细胞中,感染性的芽生型病毒粒子(budded virion,BV)产生量与Ac78全长补回型重组病毒(vAc78:HA)基本一致;电镜观察发现,在vAc78:del105-108转染的细胞中,呈现与vAc78:HA的现象一致的典型的杆状病毒感染特征,多粒包埋型病毒粒子(multiple nucleocapsid enveloped occlusion derived virion,M-ODV)以及包埋有M-ODV的包涵体均能正常形成;免疫荧光实验表明,在vAc78:del105-108感染的Sf9细胞中,从病毒感染细胞24 h时开始,Ac78专一定位于感染细胞的内核膜附近,与vAc78:HA的现象一致.上述结果表明,Ac78的C末端105～108位氨基酸保守区域对于BV和M-ODV的有效产生以及Ac78的亚细胞定位非必需. 相似文献
6.
人绒毛膜促性腺激素β亚基和绵羊垂体促性腺激素共有α亚基组成的单链多肽的生物合成 总被引：1，自引：0，他引：1
采用重叠PCR方法,将人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)cDNA3'端与绵羊垂体促性腺激素共有α亚基(oLHα)cDNA 5'端串联起来,构建了hCGβ-oLHα嵌合cDNA。将嵌合cDNA克隆入核型多角体病毒(AcNPV)表达载体pVL1393得到表达型质粒pVL1393-hCGβ-oLHα,并与BaculoGold~(TM)线性化AcNPV基因组DNA共转染昆虫细胞Sf9,筛选得到重组病毒AcNPV-hCGβ-oLHα。以扩增后的重组病毒感染昆虫细胞进行表达,并进一步经偶联抗hCGβ单抗亲和层析柱纯化得到hCGβ-oLHα单链多肽。SDS-PAGE银染和免疫印迹分析结果表明表达产物在非还原条件下表观分子量约40.5kD,还原条件下约为38.0kD,这说明表达产物具有链内二硫链及次级构象。竞争抑制~(125)I-hCGβ与抗体结合的检测结果表明其与hCGβ抗体结合活性较天然hCG弱,但较天然hCGβ略有增加。由此可见单链多肽作为抗hCG夏合抗原避孕疫苗的靶抗原,具有潜在的应用前景。 相似文献
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为了研究在昆虫细胞中表达重组人卵泡刺激素,我们以人胎盘组织提取的染色体DNA为模板,利用重叠PCR方法扩增出hFSHβ亚基的cDNA的编码区。将此cDNA克隆入核型多角体病毒(AcNPV)非融合蛋白基因表达载体pVLl393,我们得到了表达载体pVLl393-hFSHβ,然后与BaculoGold^TM线性杆状病毒DNA共转染昆虫细胞SF9,经多次扩增后获得高滴度的重组病毒AcNPV-hFSHβ。将此重组病毒感染昆虫细胞,我们得到了在胞浆中表达的hFSHβ亚基,Western blot显示分子量大约为21kDa。以重组病毒AcNPV-hFSHβ与AcNPV-hCGoL一同感染昆虫细胞得到了具有分泌性的重组hFSH异二聚体,在非还原的条件下Western blot显示分子量大约为33kDa。 相似文献
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924473从摇瓶到发酵镶:大规模昆虫细胞培养的挑战〔会,英〕/Belisle,B.W.…f In Vitro一1992,25(s),Pt.2。一43A〔译自DBA,1092,11 (11),92一06235〕 棒状病毒作为生防因子,要满足市场要求,还需克服成本高的问题。采用经调整的市售无血清培养基,研究了在5个鳞翅目细胞系中小规模、大规模生产胞外及包含体LdMNPV(舞毒蛾核多角体病毒)和AcMNPv(首稿银纹夜蛾核多角体病毒)。采用AeMNPV和草地夜蛾(S,o己。尹tera fr。夕玄-尹”己a) Sfg细胞作为模型系统,培养细胞,规模为100ml~401。细胞密度和存活率达到相当于所报道的含血清培养基的… 相似文献
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王行国 《Virologica Sinica》1990,(3)
用蓖麻蚕核型多角体病毒(PcrNPV)DNA转染草地贪夜蛾(SF)、家蚕(Bm)、斜纹夜蛾(SL)和菜粉蝶(Pr)四种昆虫细胞系,结果表明,PcrNPV DNA能在SF细胞内复制增殖并形成多角体,Pr细胞系对PcrNPV DNA转染不敏感;Bm和SL细胞出现病变症状,但在电镜下未观察到病毒粒子或多角体。 相似文献
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利用杆状病毒表达系统表达金鱼生长激素I基因 总被引：4，自引：1，他引：4
以不含起始密码ATG的质粒Psxivvi+X3为转移载体,将编码金鱼生长激素I的Cdna插入粉纹夜蛾核型多角体病毒(TnNPV)基因组中,构建了形成多角体的重组病毒株TnNPV—SX+gfGHl21a。该毒株能利用合成多角体XIV串联启动子,在重组病毒感染的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,Sf)昆虫细胞及银纹夜蛾幼虫中表达金鱼生长激素I基因。感染离体细胞及虫俸后的蛋白SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳表明．所表达的蛋白分子量为22．5kDa,与理论计算值相符。Westem印迹证实。金鱼生长激素特异蛋白得到表达。 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920931生物技术在研制动物皮苗中的应用〔英〕/Redm。-nd,M J.…了Genet。Eng.Bioteehnol。-1991,11(1)一14一21〔译自DBA,1991,10 (15),91一08572〕 本文综述了应用生物技术生产动物疫苗。讨论的题目有:工程疫苗(即经修饰的减毒重组活疫苗或重组的载体活疫苗如痘苗病毒载体或鼠伤寒沙门菌载体),亚单位重组疫苗(原核系统如大肠杆菌表达的蛋白)、和真核系统(如酿酒酵母菌表达的乙型肝炎病毒、CHO细胞表达的单纯疙疹病毒、携带首落银纹夜蛾核型多角体病毒载体的草地夜蛾昆虫细胞表达的流感病毒或人轮状病毒)表达的蛋白;合成肤疫苗;疫苗配… 相似文献
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与宿主昆虫液化相关的杆状病毒基因及其蛋白 总被引：4，自引：0，他引：4
昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象,这有利于病毒向周围环境扩散。目前在杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒NPV和GV中,发现与昆虫宿主液化相关的基因有组织蛋白酶基因V-cath基因和几丁质酶基因。V-cath基因表达产物在苜蓿银纹夜蛾多角体病毒(AcMNPV)中能特异性降解昆虫细胞内的肌动蛋白。几丁质酶不仅参与了虫体体表面几丁质的降解,同时还参与V-CATH蛋白前体的加工过程,起分子伴侣的作用。对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的研究表明其FP25K基因表达产物通过影响组织蛋白酶的释放与分泌而参与虫体液化。简要综述了此3种基因及其表达产物的结构、功能与特性,并讨论了它们在生产上的应用前景。 相似文献
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中山大学昆虫研究所王珣章博士(教授)和谢伟东博士(副教授)等近年来,在著名昆虫学家、中国科学院学部委员蒲蛰龙教授的支持下,开展对昆虫杆状病毒基因工程的研究工作,经过几年的艰苦努力,在杆状病毒载体系统的研究与开发上取得了重大突破,构建出了系列的高效、多功能的杆状病毒载体系统。建立了两个新的、高效的昆虫杆状病毒载体和表达系统,即粉纹夜蛾核型多角体病毒——草地夜蛾细胞和粉纹夜蛾幼虫系统以及粉纹夜蛾核型多 相似文献
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《生物技术通报》1993,(5)
951642重组杆病毒表达的牛疱疹病毒一1糖蛋白g,的结构,功能和免疫学特性[英]/Van Dr’unen Lntel—van den Hurk,S.…,Virology.一1992,190【1).一378～392["译自DBA,1992,11(23),92·12976"] 用重组苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒载体质粒pVLg B在草地夜蛾Sf 9细胞中高水平表达(36pg/10。细胞,感染后48～72小时)牛疱疹病毒一1(BHV一1)的主要糖蛋白复合物gI。重组gI的分子量为116,000,部分切割后,得到63kDa(glb)和52kDa(glc)亚基。在Sf 9细胞中加工步骤不如在MDBK细胞中充分,寡糖连接主要是内切糖苷酶一H敏感的连接,而在真正的gI中,则… 相似文献
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用杆状病毒表达载体系统表达小鼠Ｂｒｕｔｏｎ酪氨酸激酶（Ｂｒｕｔｏｎｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ,Ｂｔｋ）．构建重组转染载体时,于Ｂｔｋ起始码的上游插入了一段Ｈ９０２序列．用重组转染载体、苜蓿夜蛾核型多角体病毒线性ＤＮＡ和质脂体共转染Ｓｆ９昆虫细胞,经过对重组杆状病毒三轮扩增后,用Ｈ９０２抗体检测表明,昆虫细胞中Ｂｔｋ的表达已达最高水平．对表达后Ｂｔｋ自身磷酸化检测表明,该激酶具有自身磷酸化活性．从而证实Ｂｔｋ在昆虫细胞中的表达获得了成功 相似文献
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核型多角体病毒属杆状病毒科,主要感染鳞翅目、双翅目和膜翅目的昆虫,具有90～160kb长的双链,超螺旋DNA基因组。现已发现约500种核型多角体病毒,这些病毒之间有什么关系？它们的亲缘关系如何？我们以甘兰夜蛾核型多角体病毒（简称MbNPV）、甜菜夜蛾核型多角体病毒（简称SeNPV）和斜纹夜蛾核型多角体病毒（简称SINPV）为材料,用限制性内切酪和分子杂交技术对它们的基因组DNA进行比较研究,并对其中一种病毒MbMV多角体蛋白基因进行了定位,现将结果报道如下;材料和方法1材料甜菜夜蛾和斜纹夜蛾健康幼虫,病毒麦种MbNPV、SeN… 相似文献
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杆状病毒凋亡抑制基因 总被引：1，自引：0，他引：1
杆状病毒(baculoviruses)感染昆虫细胞会引发细胞凋亡,然而病毒为了确保自身的复制和繁殖会抑制宿主细胞的凋亡.杆状病毒在长期进化过程中获得了凋亡抑制基因,如苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica MNPV, AcMNPV)中的p35基因,棉铃虫核型多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus, HaSNPV)基因组中的IAP基因家族,以及莲纹夜蛾核形多角体病毒(Spodoptera littoralis multicapsid nucleopolyhedrovirus, SpliMNPV)的p49基因等.尽管这些基因都具有抑制细胞凋亡的功能,但是作用途径和方式却各有差异.对杆状病毒3种抗凋亡基因的结构和功能作一简单的介绍和评述. 相似文献
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《生物技术通报》1992,(1)
920202连续昆虫细胞生物反应器生产杆状病毒或盆组衍生物〔会,英〕/van Lier,F.L.J.一2 Ann.N .Y.Acad.Sci一2992,613一253~100〔译自DBA,1991,10(9),91一05063」 叙述了杆状病毒的分子生物学,以及如何生产用于昆虫生防的重组杆状病毒。此为连续操作系统,其中两个相连反应器的第一个用于培养昆虫细胞,在第二个反应器中,非封闭形首蓓银纹夜蛾(A“to夕ra夕无acal‘for。￡ca.)核多角体病毒 (AoNPV)侵染昆虫细胞。细胞裂解前完成侵染周期。在剪切力最小的饱罩塔中反应,此模型用于气提式生物反应器。4周后,在上述二步反应器中,草地夜蛾(… 相似文献
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