生物破乳剂产生菌的筛选及其方法研究

针对生物破乳剂产生菌筛选难的问题,采用显色法、溶血细胞测试法、表面张力测定法和排油圈法从6种不同菌源对生物破乳菌产生茵进行了筛选.通过试验筛选得到了17株生物破乳剂产生茵,其中24h内破乳率高于70%的破乳菌有5株;油田含油污泥、采油废水生物处理污泥和污水处理厂剩余污泥是筛选破乳菌的较好的菌源:显色法、溶血圈法存在检测范围的局限性;表面张力测定法和排油圈法是最为简易和准确的生物表面活性剂产生茵的筛选方法,采用模型乳状液对生物破乳剂产生菌进行筛选最为直接和准确,但工作量大、所需时间长,因此在筛选高效破乳菌时,建议采用表面张力、排油圈法进行初筛,而后通过模型乳状液破乳进行验证.     

生物破乳菌的筛选及发酵条件的优化

生物破乳剂的开发可以降低油田乳状液对石油工业和生态环境的负面影响并减少化学破乳剂的使用量。本研究建立了一套高效、便捷的破乳菌筛选方法, 并对破乳菌的特性进行研究。利用大庆油田受石油污染土壤作为菌种来源, 将Tween 60-water(0.072%, V/V)和Span 60-oil (0.028%, V/V)以6.5:3.5体积比配置出可以稳定200 h以上的O/W型乳状液, 用于破乳菌破乳效能的评价。经过分离纯化、血平板试验、排油试验和破乳试验最终筛选出2株24 h平均排油率在80%以上的优势破乳菌, 初步鉴定为芽孢杆菌属(Bascillus)。通过该破乳菌发酵条的件优化得到, 当温度为25°C, 摇床转数为160 r/min, pH值为9, 接菌量为20%时对该破乳菌生长速率最快, 积累发酵产物的量最多; 当温度为35°C, 摇床转数为120 r/min, pH值为9, 接菌量为2%时该破乳菌代谢产物的破乳活性最高。     

生物破乳剂产生菌混合培养及其发酵条件的优化

【目的】对菌株L1和XH1的混合发酵条件进行优化,为混合菌发酵生物破乳剂的实际生产和应用提供理论依据。【方法】利用响应面实验(RSM)的中心组合旋转设计方法(CCRD)针对混合菌的发酵条件进行优化,通过对模型乳状液进行破乳实验,以排油率作为发酵液破乳效能的评价标准。【结果】经模型的分析与验证,确定最佳发酵条件为：种子液比例(L1:XH1)为3:2,葡萄糖投加时间为第4天,投加葡萄糖后再培养21 h,液体石蜡含量3.6% (体积比)。【结论】与破乳菌XH1和L1单独培养相比,经混合培养后获得复合生物破乳剂具有投加量少、破乳接触时间短的优势。同时双株破乳菌复配培养有效地提高了培养基中主要营养物质的利用率,减少了对底物的浪费。     

泽普油田生物表面活性剂产生菌的筛选

目的:对泽普油田的9个原油样品进行生物表面活性剂产生菌株的筛选.方法:富集培养、血平板分离、摇瓶培养和排油圈测定.结果:7个样品都可溶血和排油圈,即有表面活性剂产生.结论:泽普油田有生物表面活性剂产生菌株,而且该产品具有重要的开发价值.     

Dietzia sp.S-JS-1利用煎炸废油生产生物破乳剂及其性能研究

以前期研究中筛选得到的破乳剂产生菌Dietzia sp.S-JS-1为研究对象,采用煎炸废油为培养碳源,考察菌株的生物量和表面张力,研究处理方式、温度、乳状液pH对破乳剂在两种模型乳状液W/O型(water in oil)和O/W型(oilin water)中破乳性能的影响,并初步分析生物破乳剂成分。结果表明:菌株最大生物量为2.6 g/L,其产生的破乳剂能够将纯水表面张力从72.0 mN/m降低到32.5 mN/m。冻融对破乳剂效果的影响小于高温灭菌;破乳剂经冷冻干燥处理后的破乳效果明显好于烘干处理;破乳剂在35℃～75℃时具有较好的破乳效果,脱水率均在75%以上;破乳剂在W/O型乳状液中的效果随着pH变大而逐渐增加,pH=10时的脱水率高达99.8%,而在O/W型乳状液中,pH=7时的脱水率最高,为90%左右。薄层色谱结果表明S-JS-1利用煎炸油生产的生物破乳剂可能含有5种脂肽类物质。     

高效生物表面活性剂产生菌筛选及其性质研究

目的:获得产高效生物表面活性剂的菌株并获得优化培养基。方法:通过从山东文登某加油站附近长期污染富含油质的土壤中逐步采用富集培养基和平板筛选培养基分离筛选菌株并进行优化培养寻找最优生长培养和高产生物表面活性剂的条件。结果:筛选出产表面活性剂的微生物12株,分别命名为BSF1#-BSF12#,从中筛选出1株高效表面活性剂产生菌BSF8#,优化培养结果表明BSF8#的最佳生长pH在7.5左右,最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为蛋白胨,BSF8#培养基中最佳NaCl浓度为2g/L。BSF8#菌株可将发酵液的表面张力由最初的48.29mN/m降到27.79 mN/m,上层乳化状发酵液的排油圈最大直径超过7.5cm,并经红外光谱分析确定其生物表面活性剂为1个糖肽类化合物。结论:BSF8#菌株产生的生物表面活性剂活性突出,有较大的开发潜力。     

Dietzia sp. S-JS-1利用废弃油脂生产生物破乳剂的研究

生物破乳剂是近期开发出来的用于油水分离的新型破乳剂。本研究利用从受石油污染的土壤中筛选得到、并采用16S rRNA鉴定为Dietzia sp.的一株破乳剂产生菌, 在以废弃油脂MWFO、SWFO为碳源培养下, 得到的生物破乳剂的粗重为4 g/L、3.5 g/L; 对于W/O、O/W模型乳状液的破乳效果均可超过以液体石蜡产生的破乳剂, 且以SWFO废弃油脂培养得到的生物破乳剂可以同时应用于两种模型乳状液的使用。对于碳源利用方面Dietzia sp.在利用两种废弃油脂脂肪酸的过程中, 都是优先利用C16和C18的脂肪酸, 但对于两种废弃油脂的利用率上存在一定差异。采用TLC和FTIR分析发现, 3种碳源培养得到的生物破乳剂均为脂肽类生物破乳剂, 其破乳剂的化学结构还有待进一步研究。     

生物表面活性剂产生菌的筛选及表面活性剂稳定性研究

大庆油田油泥样品经富集培养,平板分离,获得52株菌。排油性实验和表面张力测定表明,菌株B22、B24、B2s产生的表面活性剂表面活性稳定,表面张力较低。温度、pH和NaCl浓度实验证实,细菌B22,产生的生物表面活性剂可耐受120℃高温,另2种生物表面活性剂可耐受80℃;3种细菌生物表面活性剂对pH有广泛适应性,1322pH适应范围为4．0～13．0,B24、B25的pH适应范围为2．0～13．0;NaCl浓度对表面活性剂的生物活性影响不大。将3株菌的生物表面活性剂用于室内油泥处理实验,72h石油去除率达70％以上。     

响应面法优化Alcaligenes sp.产脂肽生物破乳剂培养基的研究

生物破乳刺是应用于石油开采业中的新型破乳剂之一,本研究对筛选得到的一株破乳剂产生菌(鉴定为Alcdigenes sp.)产生的脂肽类生物破乳剂进行了发酵培养基的优化,采用SAS软件的响应面回归方法对培养基中主要因素进行了研究,试验结果表明,在碳源石蜡为4.76%、氮源牛肉膏为0.12%、磷源K2HPO4/KH2PO4为0.53/0.8%时,破乳剂的产生量为最大,比优化前提高了近一倍.     

pH对兼性嗜碱菌Alcaligenes sp.XJ-T-1产生物破乳剂性能的影响

从受石油污染土壤中筛选出一株生物破乳剂产生菌Alcaligenes sp.XJ-T-1,生长的最适初始pH范围为9.0～11.0,为兼性嗜碱菌,能在初始pH 6.0～pH 11.0生长并产生生物破乳剂,但只有在碱性环境下才产生胞外产物。XJ-T-1菌悬液和胞外产物溶液可将蒸馏水表面张力分别降低到30 mN/m左右和35 mN/m左右。经过TLC分析,初步推测XJ-T-1产生的胞外产物为脂肽类和糖脂类的混合物。XJ-T-1菌悬液主要针对O/W型乳状液破乳,胞外产物主要针对W/O型乳状液破乳,初始pH 9.0培养下的菌悬液和胞外产物破乳效果最好。投加210 mg/L菌悬液可使O/W型乳状液在24 h的破乳率达77.5%,投加40 mg/L胞外粗产物溶液可使W/O型乳状液在24 h的破乳率达90.0%。通过透射电镜照片推测,随着培养pH提高到9.0以上,胞外产物的产生使XJ-T-1利用石蜡的过程发生变化。     

产果胶酶菌株的筛选

从不同来源的生物样品中分离到产果胶酶菌株,采用刚果红染色法和十六烷基三甲基溴化铵沉淀法进行初筛,通过摇瓶发酵试验进行复筛,最终获得2株果胶酶活力较高的细菌G16和G25,其酶活力分别达到6．37万U／mL和6．84万U／mL。     

5株生物合成GABA酵母菌株的分离、筛选和鉴定

从水果表皮、果园土、酒曲、泡菜等场所分离筛选到5株产生1-氨基丁酸（GABA）酵母菌菌株,其中4#酵母菌株的GABA产量最高,为3．653g／L。通过形态特征观察和生理生化特征测定,5株酵母菌株分别鉴定为3#属于酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,4#和LJ3属于葡萄汁酵母（Saccharomyces uvarum）,MQ属于红冬孢酵母（Rhodosporidium toruloides）,JQ属于红酵母（Rhodotorula glutinis）。     

从黑茶中分离和筛选产单宁酶菌株

茶叶中富含单宁化合物。从分离自黑茶的真菌菌株中,筛选高产单宁酶的菌株;进而分离纯化单宁酶,分析单宁酶对茶汤的转溶效果。从不同产地的3个黑茶样品中,共分离获得44个真菌分离物;经初步鉴定,这些真菌分离物以曲霉属（Aspergillus）、青霉属（Penicillium）和散囊菌属（Eurotium）的真菌居多。以单宁酸为底物的鉴别培养基初筛表明,其中26个真菌分离物在鉴别平板上产生透明圈,显示单宁水解酶活性;通过固体发酵复筛,筛选到1株产单宁酶活性较高的菌株,初步鉴定为青霉属（Penicillium）菌株,命名为青霉MP-24菌株。青霉MP-24可以以茶叶、茶梗和麸皮等农副产品作为原料固体发酵产生单宁酶。以麸皮为原料的发酵产物经过硫酸铵分级沉淀、DEAE阴离子交换层析和葡聚糖G-150凝胶层析等分离纯化步骤,得到分子量为70 kDa的单一蛋白质条带,单宁酶活力达到603.68 U/mg。纯化获得的单宁酶对茶汤有良好的转溶效果。研究结果表明,在黑茶相关微生物中含有丰富的产单宁酶菌株,是工业酶制剂的重要资源。     

粪便中大肠埃希菌分离方法的筛选

比较了滤膜法、涂布法和纸片法对粪便中大肠埃希菌的分离效果。通过对分离粪便大肠埃希菌的数量可知,纸片法与m—TEC培养基上滤膜法分离的大肠埃希菌数量结果基本一致。m—TEC培养基滤膜法分离的大肠埃希菌平均数量分别是伊红美蓝培养基涂布法分离大肠埃希菌平均数量的1．4倍、伊红美蓝培养基滤膜法分离大肠埃希菌平均数量的2．8倍、m—TEC培养基涂布法分离大肠埃希菌平均数量的2．25倍。分离粪便样品中大肠埃希菌选择滤膜法用m—TEC培齐基进行分离为最佳分离方法。     

产植酸酶菌株的分离筛选研究

研究了产植酸酶菌株分离筛选的方法 ,筛选得到分别适宜液态发酵和固态发酵的酶活力较高的黑曲霉XH和黑曲霉PA两菌株。在液态发酵KH2 PO4 对植酸酶产生有促进作用 ,其最佳用量为 8mg %;在固态发酵KH2 PO4 的添加对植酸酶的产生无明显促进作用。 2菌株所产植酸酶具有相似的酶学性质 ,最适作用温度为 5 5℃ ,当底物 pH为 3～ 5具有较高的酶活力。     

产菊粉酶酵母菌株的筛选及菌种鉴定

经过初筛、复筛,得到2株菊粉酶活力较高的酵母菌Y9和Y27,其发酵液酶活分别达到19.4 U/mL和14.1 U/mL,两者胞外菊粉酶分泌较少,主要分布在酵母菌菌体上。通过细胞形态、生理生化特征及Biolog微生物鉴定系统鉴定,将Y9确立为Cryptococcus albidus(浅白隐球酵母),Y27确立为Pichia guilliermondiiA(季也蒙毕赤氏酵母A)。     

蛋白酶产生菌的筛选和紫外诱变育种

目的:筛选水产品加工用蛋白酶产生菌,为酶的的分子改造和水产品加工提供材料基础.方法:通过在富含水产品蛋白的场所的针对性采样,菌落平板筛选结合发酵上清液平板验证以及Folin-酚试剂定量检测确认筛选结果,并通过紫外诱变提高产中性蛋白酶菌株的产酶能力.结果:从12份土样中分离187株具有明显蛋白酶活性的单菌落.在挑取的11株透明圈明显的蛋白酶产生菌中,菌株W9在所有菌株中可以稳定产生较高的蛋白酶酶活力,约为1 594U/ml.通过对其进行紫外诱变后,在突变株中筛选得到一株酶活约为1 845U/ml的 W9UV突变株,比野生菌株酶活提高了15.6%.结论:突变菌株W9UV可稳定产生较高的蛋白酶酶活力,发酵性能优良.     

产植酸酶菌株的筛选及产酶条件的研究

通过初筛和复筛,得到一株产植酸酶较高的黑曲霉AN00101菌株,并对该菌种的产酶条件进行了研究.结果表明:配制加水量为35%的麸皮固体培养基,在37℃培养114h,用3%CaCl2进行提取,每g固体发酵物酶活高达1.3×104IU.经L9(34)正交实验表明,硫酸铵和硫酸镁对产酶有显著的促进作用,适宜添加量分别为4%和0.3%.     

高产降胆固醇活性物质的红曲霉菌种选育研究

红曲霉出发菌株经紫外线 (UV)、硫酸二乙酯 (DES)、氯化锂 (LiCl)等诱变剂反复诱变处理 ,获得供试红曲霉菌株 10株。用薄层层析法初筛得到可能产MonacolinK的菌株 4株 ,再经高效液相色谱法对初筛菌株进一步进行检测 ,证实其中 3株具有较强的产MonacolinK能力 ,特别是诱变株M7的含量与出发菌株相比提高了 4 1倍