面包树果实凝集素的提取纯化及理化性质分析

建立面包树果实凝集素(frutalin,FTL)的提取纯化方案,并对FTL纯品进行部分理化性质分析。本试验以新鲜的面包树果实籽为材料,经Tris-HCl缓冲液浸提、过滤、硫酸铵沉淀和阳离子交换层析后超滤浓缩得FTL纯品,最后用纯品开展了糖抑制,热稳定性,pH稳定性和金属离子耐受性等试验。提取优化得到的最佳条件为:料液比1∶2(g:m L),浸提时间2 h,浸提温度50℃,硫酸铵饱和度70%,沉淀时间4 h。经阳离子交换层析后FTL回收率为22%。研究结果表明,FTL是一种热稳定性凝集素,在温度不超过60℃时,其凝血活性不受影响,并且不依赖于金属离子来发挥其凝血活性。本研究建立了一个简单高效的FTL分离纯化方案,并对FTL纯品做了部分理化性质研究,为FTL可能的生物医学应用提供研究基础。     

正红菇菌丝体凝集素的分离纯化及生化特性

正红菇菌丝体经磷酸缓冲液浸提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析纯化得到红菇凝集素（Russula vinosa Lectin,RVL）。经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,其亚基相对分子质量为55kDa,Sephadex G-100凝胶过滤测得相对分子质量为55.25kDa,提示RVL分子只有一个亚基。RVL中性糖含量为3.87%,经酸水解测定含15种氨基酸。温度在20–60℃、pH在5–9的范围内,凝集活性保持相对的稳定。RVL的凝血活性受Mn2+、Zn2+、Ca2+的影响。糖抑制实验表明,在供试的11种糖中,D-甘露糖强烈抑制RVL的凝血活性。抑菌实验显示,RVL对供试的细菌没有抑制作用,对稻瘟病菌、绿色木霉、红色链包霉、黑曲霉菌丝生长有显著的抑制作用。     

大黑花芸豆凝集素的分离纯化及温度、pH、色氨酸修饰对其活性的影响

大黑花芸豆(Phaseolus multiflorus.Wiud)种子经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析(DEAE-Sepharose)、阳离子交换层析(CM-Sepharose)和Sepllacryl S-200分子筛层析得到凝集素样品(PML).经SDS-PAGE检测为一分子量约为28k的单一条带,Sephacryl S-100凝胶过滤测得其表观分子量约为56 kD表明PML是由两个相同亚基组成的蛋白.温度低于60℃时,PML较为稳定,当温度达80℃时,其凝血活性完全丧失;pH为5.6～9对活性影响不大,pH为12时,活性大部分丧失;高温和强碱对荧光光谱有较大影响.NBS修饰Trp结果表明,在天然状态下有3个色氨酸分子被修饰,其中第二和第三个色氨酸分子对其活性至关重要.     

酪氨酸的不同化学修饰对黄精凝集素生物学活性的影响

凝集素作为一类非免疫原的糖结合蛋白,在与细胞的识别和结合中介导了一系列事件的发生,如促淋巴细胞有丝分裂、对肿瘤细胞的特异凝集、抑制病原微生物的生长等[1].凝集素的特性主要归因于其特异的糖结合活性,而特殊氨基酸对它保持这种结合活性是必需的.故确定这些特异的氨基酸是研究凝集素结构与功能关系的基础.化学修饰可以鉴别哪些氨基酸位于功能区[2].黄精凝集素(Polyg-onatumcyrtonemaHua.lectin,PCL)是具有多种生物学活性的糖蛋白,二硫键、巯基、色氨酸、金属离子并不影响其兔红细胞凝集活性[3].本文报道用不同试剂修饰酪氨酸,以研究…     

鸡凝集素的分离纯化与性质研究

鸡菌丝体浸取液依次经硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析3个主要步骤纯化得到一种凝集素(Termitomyces albu-minosus lectin,简称TAL)。纯化的TAL在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示一条蛋白质着色带。TAL的分子量为89.4kD,亚基分子量为38kD和51kD,提示TAL分子由两个不同亚基组成。TAL具有供血动物种属专一性,使Wistar大鼠红细胞凝集所需TAL最低的浓度为0.49μg/ml。糖抑制试验表明,鸡卵粘蛋白明显抑制TAL的凝血活性。TAL对热不稳定,60℃保温15min活力完全丧失。钙、镁或锰离子对TAL无激活作用。TAL不含不性糖,Glu和Asp含量较高,His和Met含量较低。     

常山凝集素的分离纯化及其性质研究

 本文采用分子筛层析和离子交换技术,从植物常山(Dichroa febrifuga Lour)的鲜叶中,分离纯化出一种新的凝集素,定名为常山凝集素(DFL)。并对其理化性质进行了鉴定:测得其亚基分子量为37,000道尔顿;等电点为4.2。DFL是一种糖蛋白,糖含量为2.8％。DNS-CI法测得其肽链的N-末端为L-缬氨酸。本文还对其糖专一性、不同动物红细胞的凝集专一性,以及对猪精子和某些肿瘤细胞的凝集活性等生物学性质进行了研究。     

扇叶铁线蕨凝集素的糖蛋白特性

扇叶铁线蕨叶片组织经磷酸盐缓冲液浸提,硫酸铵沉淀,再经过DEAE-Sepharose—FF和Sephadex G-100层析纯化,得到扇叶铁线蕨凝集素(AFL)。其凝集活性依赖于Ca^2 和Mn^2 ,经测定AFL,是一种分子质量为22000—22500的糖蛋白,分子中含有4．0％的中性糖,具有很高的耐热性,浓度为37．5μg ml^-1的AFL凝血活性可被甘露糖抑制,卵粘蛋白可完全抑制AFL的凝血活性。浓度为2．34μg ml^-1时引起兔血细胞凝集,并能凝集人的A、B或O型血细胞,对鳖的血细胞没有凝集作用。AFL能凝集藻类细胞、酿酒酵母细胞及经过热处理的枯草芽孢杆菌。在AFL的氨基酸组成中不含Tyr。研究结果表明,该凝集素具有糖蛋白的特性。     

长白山药用真菌树舌凝集素的纯化及生化特性

用硫酸铵分级沉淀、离子交换和HPLC层析等方法,从长白山药用真菌树舌的菌丝体中分离纯化了一种凝集素(Ganoderma applanatum lectin,简称GAL),SDS-PAGE检测其为单一蛋白条带。经过SDS-PAGE测得其亚基分子量为15kDa左右,HPLC分析分子量为58kDa左右,表明GAL由4个亚基组成。氨基酸组成分析表明,GAL中甘氨酸含量较高,不含蛋氨酸和色氨酸,中性糖含量约11.2%。圆二色CD谱显示其含有3.6%的α螺旋、46.8%的β转角和49.6%无规则卷曲,不含有β折叠。GAL可以凝集供试的2种动物血和3种血型人血的血红细胞,但对不同来源的血红细胞凝集滴度不同。糖抑制实验表明,只有棉籽糖和D-松三糖部分抑制GAL的凝血活性。GAL具有较好的热稳定性且其凝血活性不受Ca²⁺、Mg²⁺和Zn²⁺等二价阳离子的影响。     

棕尾别麻蝇(Sarcophaga peregrina)幼虫与蛹血淋巴凝集素的纯化与特性

用亲和层析法纯化了棕尾别麻蝇幼虫和蛹血淋巴凝集素。以兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗体、球球蛋白和甲状腺蛋白等三种亲和层析吸附剂纯化得到的幼虫凝集素是相同的,其分子量73kD左右。用甲状腺球蛋白为亲和配基纯化的蛹血淋巴凝集素由二种亚基组成,其分子量分别为30和32kD。幼虫和蛹血淋巴凝集素活性的抑制糖明显不同：乳糖、岩藻糖和N－乙酰半乳糖胺对幼虫血淋巴凝集素活性有抑制作用;而甘露糖胺、半乳糖胺和葡萄糖胺则对蛹血淋巴集素有一定抑制。而且,用兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗血清对蛹的凝集素活性无交叉反应,表明这两种凝集素是不相同的。虽然本文所纯化的麻蝇蛹血淋巴凝集素的分子量和Komano等报道的麻蝇蛹以及幼虫体壁 伤害诱导的凝集素SPL相同,但其糖的抑制特性有明显差异。     

桑黄发酵液中凝集素SHL24的分离与生物活性研究

【背景】桑黄是一种具有很高药用价值及广泛应用前景的药用真菌,其主要有效成分为多糖。凝集素则是桑黄所含的另一类生物活性物质,具有免疫调节、抗肿瘤及抗菌等作用。【目的】从药用真菌桑黄发酵液中分离纯化凝集素SHL24,并对其生物活性进行初步探究。【方法】通过冷冻干燥、Sephadex G-50、DEAE Sephadex A-25、MPLC-MonoQ和LPLC-Sephadex G-75等方法,从药用真菌桑黄的发酵液中进行分离纯化;利用LPLC-Sephadex G-75和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定其分子质量;检测不同pH、金属离子、糖、发酵时间、血红细胞、温度对其凝血活性的影响。【结果】从药用真菌桑黄发酵液中分离到单一蛋白条带,SDS-PAGE凝胶电泳检测其分子质量约为24 kD,与分子筛层析法分析的分子质量一致,表明该凝集素为单亚基蛋白。SHL24可以凝集供试的小鼠血红细胞和4种血型人血的血红细胞,但对不同来源的血红细胞凝集程度不同。糖抑制试验表明,SHL24不被D-甘露糖、D-麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、树胶醛糖、D-乳糖以及L-鼠李糖所抑制。热稳定性试验和金属离子对SHL24凝血活性影响试验表明SHL24具有较好的热稳定性且其凝血活性不受Ca~(2+)、Mg~(2+)和Zn~(2+)等二价阳离子的影响。【结论】SHL24具有的稳定理化性质和生物活性,有作为蛋白质药物的潜质。     

免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇(Sarcophagaperegrina)幼虫血淋巴凝集素

 报道了利用免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇幼虫血淋巴凝集素的结果．哺乳动物红细胞能够特异地吸附凝集素．用兔红细胞与麻蝇幼虫血淋巴凝集素形成的复合体免疫供血家兔,得到麻蝇幼虫血淋巴凝集素的抗体．再利用抗体制备亲和吸附柱,通过免疫亲和层析一次性纯化了麻蝇幼虫血淋巴凝集素． Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ结果显示,该凝集素的分子量约为７３ ｋ Ｄ．这一结果,与用对麻蝇幼虫血淋巴凝集素有抑制作用的糖蛋白—胎球蛋白和甲状腺球蛋白为配基,亲和层析纯化的结果完全相同,表明用这种免疫亲和层析法纯化凝集素是可行的．为不清楚专一性识别糖或专一性识别糖不典型,难于用普通亲和层析纯化的凝集素,提供了一种有效的纯化方法．     

3种海藻凝集素组分及糖抑制作用的初步研究

从 3种海藻 (铁钉菜IshigeokamuraeYenda、坛紫菜PorphyrahaitanensisChangetZheng和脆江蓠Gracilariabursa pastorisSilva)中分离纯化得到铁钉菜凝集素 (IOL)、坛紫菜凝集素 (PHL)及脆江蓠凝集素 (GBL)。经测定 ,它们分别含有 7%、14 %和 11%的中性糖。氨基酸组成中 ,苯丙氨酸含量最高 ,蛋氨酸和精氨酸次之。 3种海藻凝集素的凝血活性均可被单糖或双糖所抑制 ,在所测试的 13种糖类中 ,能够抑制GBL活性的糖类最多 ,达 5种 ,抑制IOL的糖类最少 ,仅 2种。 3种糖蛋白 (胃粘蛋白、卵粘蛋白和甲状腺球蛋白 )对IOL没有抑制作用 ,而卵粘蛋白能够抑制PHL和GBL的凝血活性     

半夏凝集素的糖结合活性研究

半夏凝集素可与甘露聚糖结合。本文以ＰＴＬ与＾１２５Ｉ标记的甘露聚糖的结合活性为指标,观察了一些金属离子对ＰＴＬ的糖结合活性的影响,并对ＰＴＬ的糖结合专一性作了较系统的研究。结果表明常见的金属离子或ＥＤＴＡ对其糖结合活性无显著影响,但Ｋ＾＋可明显增加ＰＴＬ的糖结合活性。大多数单糖,二糖不抑制ＰＴＬ与甘露聚糖的结合,但一些疏水配基形成的糖苷可产生显著的抑制效应。ＰＴＬ专一与高甘露糖型糖链结合。     

中国鲎凝集素的分离纯化及性质研究

 经N-乙酰氨基葡萄糖交联琼脂糖亲和层析及以交联琼脂糖介质的高效液相分子筛层析,从中国鲎细胞溶解物中分离纯化了一种凝集素,其活性比原料鲎试剂提高128倍。鲎凝集素SDS电泳时表现出分子量为69000,和72000的二个亚基。N-乙酰氨基葡萄糖、D-半乳糖,D-甘露糖及岩藻糖等对鲎凝集素凝集鸡红细胞的活性有显著抑制作用,加热60℃,10分钟可使凝集素活性基本丧失。CaCl_2为凝集素活性所必需。鲎凝集素与肺炎球菌C多糖有沉淀反应。     

蛋白核小球藻凝集素的分离纯化及部分性质研究

蛋白核小球藻藻粉的PBS抽提液经硫酸铵二步分级沉淀 ,再经DEAE Sepharose和SephadexG 10 0层析 ,从中分离纯化得到蛋白核小球藻凝集素 (CPL)。经测定 ,该凝集素为单个亚基的蛋白质 ,相对亚基分子量为 1 4× 10 4 — 1 5× 10 4 ,分子中不含糖。在氨基酸组成中 ,苯丙氨酸 (Phe)的含量最高 ,其次是天冬氨酸 (Asp)和谷氨酸 (Glu) ,不含组氨酸 (His)。CPL能够凝集兔、绵羊及鸽子红细胞 ,其中对兔红细胞的凝集活性最大 ,最低浓度为 6 88μg/mL ,对鸡、鸭及人红细胞 (A型、O型及B型 )无凝集活性。卵黏蛋白和 7种单糖对CPL的凝血活性具有抑制作用。CPL具有很好的热稳定性 ,在 90℃处理 10min不失活。     

半夏凝集素的糖结合活性研究

半夏凝集素(PTL)可与甘露聚糖结合。本文以PTL与~(125)I标记的甘露聚糖的结合活性为指标,观察了一些金属离子对PTL的糖结合活性的影响,井对PTL的糖结合专一性作了较系统的研究。结果表明常见的金属离子或EDTA对其糖结合活性无显著影响,但K~+可明显增加PTL的糖结合活性。大多数单糖,二糖不抑制PTL与甘露聚糖的结合,但一些疏水配基形成的糖苷可产生显著的抑制效应。PTL专一与高甘露糖型糖链结合。     

南鹤虱凝集素的研究

本文对伞形科16种植物(药用部分)是否存在凝集素进行了筛选。发现野胡萝卜果实与芹菜果实中有凝集素。野胡萝卜果实(中药名称南鹤虱)抽提液的凝血活性较芹菜强。 采用CM-纤维素及DEAE-纤维素对南鹤虱凝集素进行分离纯化。用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定亚基分子量为32600。 此凝集素对热及酸较稳定,对碱略差。对人的A、B、O血型无专一性。能凝集兎、小鼠、牛及鸡的血,但不凝集蟾蜍的血。 此凝集素的凝血活性能被D-木糖及N-乙酰葡萄糖胺轻微地抑制。 经shiff试剂检测表明南鹤虱凝集素为一糖蛋白。糖含量为3.4％。此凝集素分子中的谷氨酸门冬氨酸、精氨酸及絲氨酸的含量较高。     

鳞翅目昆虫内外凝集素的研究概况

凝集素是一类能够识别特异性糖并与之非共价结合的蛋白或糖蛋白,因其具有特定的识别受体,在免疫系统和发育过程中发挥了重要的作用。鳞翅目昆虫凝集素的相对分子质量一般都相对较小,且活性在该类昆虫的不同发育时期各不相同,说明凝集素活性的诱导机制较为复杂。本文分析了目前国内外初步探索的几种鳞翅目昆虫凝集素及其相关的外源凝集素。     

蛇毒C-型凝集素研究进展

蛇毒中含有丰富的非酶活性C－型凝集素蛋白,根据其结构及功能的差异,该类蛋白可分为Ca^2 依赖的有糖基识别活性的C－型真凝集素及无糖基识别活性的C－型凝集素样蛋白。C－型真凝集素的结构相似度高,而功能却较为单一,具有特异性糖结合活性;C－型凝集样蛋白的结构变异度大,活性亦具有多样性。后者能通过特异性的蛋白质－蛋白质相互作用而作用于血液凝固系统及血小板,从而发挥抗凝或促凝的生理功能。     

植物凝集素固相亲和层析分离胚胎抗原

在细胞生物学,研究中固相化的植物凝集素是一种较有用的亲和吸附剂。植物凝集素能够识别并结合多糖、糖蛋白或糖脂,类似于酶与底物、抗体与抗原的识别和结合原理。然而,凝集素与它识别的糖以非共价结合,结合力弱且可逆。因此,利用凝集素识别一定顺序的糖链,并与之专一地结合的特性,可用于分离和纯化含糖大分子物质。前几年,我们证明了人体肝癌细胞表面存在着与3—5个月龄胎人体肝细胞起交叉反应的膜抗原,并用3MKCl