马齿苋多糖对细胞存活率的影响及其毒性测定方法的比较研究

本文采用三种常用的细胞毒性试验方法(四甲基偶氮唑盐方法、中性红染料摄取法和乳酸脱氢酶释放法)评价马齿苋多糖抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖的敏感性。结果显示,在一定浓度(0.01~0.50 mg/m L)和时间(1~5 d)范围内,马齿苋多糖具有抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖作用,且呈浓度和时间依存关系。MTT法和LDH法在马齿苋多糖(0.01 mg/m L)处理3T3-L1细胞1 d时,细胞增殖率明显低于对照组(P0.01),NRU法在马齿苋多糖处理3 d时,细胞增殖率明显低于对照组(P0.05)。但当马齿苋浓度增加到0.5 mg/m L、处理时间延长至5 d时,细胞出现明显的固缩、漂浮和裂解等毒性作用。MTT法和LDH法较NRU法更为敏感,马齿苋多糖主要影响3T3-L1前脂肪细胞的膜完整性和线粒体功能。     

灵芝胞外多糖的分离纯化及生物活性

目前,灵芝多糖的抗肿瘤及免疫活性已得到人们的广泛关注[1]。灵芝子实体多糖和发酵过程中产生的胞内和胞外多糖已被国内外的研究者证实都是有效多糖[2]。因此利用深层发酵来大规模地生产生物活性多糖是目前灵芝开发利用技术的热点。国内对灵芝培养基的组成、培养方法等已?..     

小檗碱对游离脂肪酸损伤的胰岛betaTC3 细胞的保护作用*

目的：观察小檗碱对棕榈酸损伤的胰岛betaTC3 细胞是否具有保护作用,并筛查出小檗碱起保护作用的有效浓度及合适的作 用时间。方法：以胰岛betaTC3 细胞为研究对象,用棕榈酸构建脂毒性模型,MTT 法筛选小檗碱起保护作用的有效浓度及时间;流式 细胞技术检测胰岛betaTC3 细胞凋亡情况。结果：①0.001-1 umol/L小檗碱作用茁TC3细胞24、48、72 h,对细胞增殖有不同程度促进 作用（与对照组比较P＜ 0.05）;随着作用时间的延长,低浓度小檗碱对betaTC3细胞的保护作用增加,而1 umol/L浓度保护作用下 降,10 umol/L及以上浓度出现细胞毒性作用（与对照组相比P＜0.01）,并呈浓度依赖性。②棕榈酸（0.2 -1.0 mmol/L)对betaTC3细胞 的损伤作用具有浓度及时间依赖性（与对照组比较P＜0.05）。③棕榈酸处理betaTC3细胞不同时间后,小檗碱治疗组较模型组的细 胞凋亡率显著降低（P<0.01)。结论：小檗碱对脂毒性损伤的胰岛betaTC3 细胞具有保护作用,且脂毒性作用时间越短,小檗碱的保护 作用越好,随着脂毒性作用时间的延长,小檗碱的保护作用明显减弱。因此,建议临床上在脂代谢紊乱早期给予小檗碱干预以减 轻甚至逆转游离脂肪酸导致的胰岛茁细胞凋亡。     

氨磷汀对氧糖剥夺引起的PC12 细胞缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的:研究氨磷汀对体外培养的神经元样细胞的缺血再灌注损伤的保护作用,为其最终用于临床脑缺血的治疗打下基础。方法:体外培养的PC12细胞氧糖剥夺4h后复氧复糖,给予不同浓度的氨磷汀处理,20h后镜下观察细胞形态学变化,用MTT和LDH检测细胞活力和损伤情况,免疫荧光染色观察凋亡细胞,流式细胞仪计数凋亡细胞的比例。结果:高浓度氨磷汀对正常PC12细胞活力有抑制作用(P<0.05),而低浓度则无。氨磷汀可以提高缺血再灌注损伤PC12细胞活力(P<0.05),减少LDH释放(P<0.05),保护细胞正常形态,抑制细胞凋亡(P<0.05)。结论:氨磷汀对氧糖剥夺引起的神经元样细胞的缺血再灌注损伤具有保护作用。     

氨磷汀对氧糖剥夺引起的PC12细胞缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的：研究氨磷汀对体外培养的神经元样细胞的缺血再灌注损伤的保护作用,为其最终用于临床脑缺血的治疗打下基础。方法：体外培养的PC12细胞氧糖剥夺4h后复氧复糖,给予不同浓度的氨磷汀处理,20h后镜下观察细胞形态学变化,用MTT和LDH检测细胞活力和损伤情况,免疫荧光染色观察凋亡细胞,流式细胞仪计数凋亡细胞的比例。结果：高浓度氨磷汀对正常PC12细胞活力有抑制作用（P〈0.05）,而低浓度则无。氨磷汀可以提高缺血再灌注损伤PC12细胞活力（P〈0.05）,减少LDH释放（P〈0.05）,保护细胞正常形态,抑制细胞凋亡（P〈0.05）。结论：氨磷汀对氧糖剥夺引起的神经元样细胞的缺血再灌注损伤具有保护作用。     

BDNF RNA干扰在多巴胺能PC12细胞凋亡中的作用研究

目的：探讨脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）在PC12细胞凋亡中的作用。方法：设计并合成针对BDNF mRNA序列的小片段干扰RNA（siRNA）,利用lipofectamine 2000将siRNA转染入PC12细胞中或给与6-OHDA损伤,给与/不给予BDNF蛋白保护,采用定量PCR和免疫荧光法检测BDNF mRNA和蛋白表达水平;采用上清液乳酸脱氢酶（LDH）释放量测定和流式细胞仪法检测siRNA对细胞凋亡的影响。结果：转染siRNA的细胞的BDNF mRNA的表达量比正常组细胞减少73%,而转染作为对照的scrambled siRNA的细胞的BDNF mRNA的表达没有明显变化。BDNF RNA干扰与6-OHDA神经毒性一样可诱导PC12细胞的LDH释放和细胞凋亡。给予BDNF蛋白保护后细胞毒性减轻。结论：BDNF基因下调可以导致PC12细胞的凋亡,BDNF蛋白对PC12细胞有保护作用,为进一步进行动物体内研究奠定了基础。     

蝉虫草菌丝体胞内和胞外多糖抗肝细胞氧化损伤比较研究

蝉虫草（蝉花）作为我国传统的中药材,是一种药食两用的虫生真菌,因含有丰富的活性物质而具有广泛的医疗保健价值。本研究以自由基清除率为指标分析蝉虫草胞内和胞外多糖的化学抗氧化活性,再以H₂O₂诱导的人肝LO2细胞氧化损伤为模型,进而分析比较二者对肝细胞氧化应激损伤的改善作用。结果表明,在化学抗氧化能力比较上,蝉虫草菌丝体胞外多糖有效清除?OH自由基、ABTS自由基和DPPH自由基的EC₅₀值分别为1.06mg/mL、0.96mg/mL和0.63mg/mL,而胞内多糖的EC₅₀值分别为3.71mg/mL、2.83mg/mL和1.70mg/mL,表明蝉虫草胞外多糖的化学抗氧化能力更强;在改善细胞氧化应激损伤比较上,与模型组对比,二者均能随着浓度递增而显著地提高细胞存活率,但胞外多糖比胞内多糖更强,当多糖浓度为5mg/mL时,胞外多糖细胞存活率达到92.36%,胞内多糖只达到82.07%;在调节细胞抗氧化酶清除ROS的机制上,与模型组对比,胞外多糖分别上调SOD酶活力2.51倍和CAT酶活力2.91倍,极显著地降低了细胞ROS水平（P<0.01）来改善细胞的氧化应激损伤作用。相应地,胞内多糖只上调了1.85倍和2.33倍,显著性地清除了ROS（P<0.05）,表明蝉虫草菌丝体胞外多糖具有更显著的抗肝细胞氧化损伤作用。本研究结果显示蝉虫草菌丝体胞外和胞内多糖均具有良好的抗肝氧化损伤活性,且胞外多糖比胞内多糖活性更好,为蝉虫草菌丝体多糖在保肝产品中的开发和应用提供了科学依据。     

肌肽对低氧所致大鼠血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：研究肌肽对低氧所致大鼠血管内皮细胞损伤的影响。方法：建立低氧条件下大鼠血管内皮细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对低氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞培养基中LDH活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观测其细胞结构。结果：浓度为10mmol/L～20mmol/L肌肽孵育血管内皮细胞6h后,可以抑制缺氧12h和24h引起的血管内皮细胞活性下降,同时减少LDH的释放,保持细胞骨架完整。结论：肌肽对低氧所致的血管内皮细胞损伤具有保护作用。     

枸杞多糖对乙醇诱导肝细胞损伤的保护作用研究

为探讨枸杞多糖(LBPs)对乙醇诱导肝细胞损伤的保护作用。枸杞样品经提取分离得到粗多糖(LBPs0)和不同分子量范围LBPs(LBPs1～LBPs4),利用人正常肝细胞(L-02细胞)评价LBPs对乙醇诱导肝细胞损伤的保护活性:MTT法测定细胞活力,比色法测定细胞培养液中ALT、AST和LDH的释放,DCFH-DA法测定细胞内活性氧(ROS)水平。结果显示,LBPs在0～200μg/mL间对细胞增殖无抑制或促进作用,其可通过提高细胞活力、降低ALT、AST、LDH的释放和抑制细胞内ROS的产生而发挥对乙醇诱导肝细胞损伤的保护作用。不同分子量范围LBPs的活性不同,LBPs3最强,其次为LBPs4和LBPs2,LBPs1最弱。综上,LBPs可保护乙醇诱导的肝细胞损伤,分子量范围为5～10 kDa的LBPs3的活性最高,本实验结果可为LBPs保护肝损伤功能食品及药物的应用开发提供实验基础和理论指导。     

一株产胞外多糖海洋弧菌的分离鉴定及其多糖抗肿瘤活性初步研究

为初步探究广西北部湾海洋细菌所产胞外多糖(Extracellular polysaccharide,EPS)的生物学活性,通过LB-苯胺蓝培养基分离产EPS的海洋细菌,苯酚-硫酸法测定EPS产量,16S r DNA法鉴定多糖产量较高的菌株,通过凝胶渗透色谱测定多糖分子量,红外光谱分析该多糖的结构;最后运用MTT(噻唑蓝)法测定该EPS对Vero细胞的毒性,以及对He La细胞的抑制作用。结果显示,从海水及红树林泥样中共分离获得167株产EPS的海洋细菌,其中一株BHc-09 EPS产量较高,达0.306 mg/m L,通过16S r DNA序列分析鉴定BHc-09为弧菌属,其EPS分子量约为184.5 k D,结构中含有糖醛酸;该胞外多糖对正常Vero细胞无毒性而对肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用。     

唐古特大黄多糖对过氧化氢所致肠上皮细胞损伤的保护作用

目的:观察唐古特大黄多糖(Rheumtanguticum polysaecharide,RTP)对过氧化氢所致正常人肠上皮细胞损伤的保护作用.方法:以过氧化氢(100μmol/L)诱导正常人肠上皮细胞损伤,损伤前用RTP(30,100,300 μg/ml)预处理细胞.采用MTT比色法测定细胞活力并进行形态学观察;吖啶橙染色法及流式细胞术观察细胞凋亡情况,采用分光光度法,用相应试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果:加入过氧化氢后,细胞活力及SOD活性均降低,而MDA含量、LDH释放量及细胞凋亡数量均增高,与正常组比较具显著性差异(P＜0.05或0.01);以RTP预处理细胞后发现,细胞活力明显增高,且SOD活性增强,同时,MDA水平、LDH活性均降低并可使凋亡细胞数减少.结论:RTP对过氧化氢所致的肠上皮细胞损伤具保护作用,且能抑制细胞凋亡及坏死,表明其具有一定的抗氧化损伤作用.     

镉诱发肝细胞毒性和胞内Ca2+变化及硒的保护作用研究

本文通过研究镉诱发鼠肝细胞毒性和胞内游离Ca2 变化及硒的干预效应,探讨镉致肝细胞损伤机制及硒的保护作用。分离培养新生鼠原代肝细胞,随机分为正常对照组、4个5、25、100和250μmol/LCdCl2组、2个10和20μmol/LNa2SeO3组和8个用10和20μmol/LNa2SeO3分别与5、25、100和250μmol/LCdCl2联合作用组。在实验后第12h检测肝细胞存活及其MDA含量和培养液中LDH活性,激光共聚焦显微镜分析肝细胞内游离Ca2 水平([Ca2 ]i)。结果显示,镉处理的肝细胞存活随镉浓度增加明显下降,硒处理组与对照组差异不明显;硒提高或明显提高镉染毒肝细胞存活。肝细胞培养上清液LDH活性随镉浓度增加而逐渐升高,且100和250μmol/LCdCl2组显著高于对照组,而硒处理组未见明显变化;给予硒的25、100和250μmol/LCdCl2处理组LDH活性下降或明显下降。不同浓度镉均诱发肝细胞MDA含量显著升高,而硒处理组未见类似表现;10和20μmol/LNa2SeO3抑制或显著地降低25、100和250μmol/LCdCl2诱发的MDA的生成。经镉处理的肝细胞[Ca2 ]i荧光强度明显高于对照组,且随镉浓度的增加而上升,而给予硒的肝细胞[Ca2 ]i荧光强度未见升高,与对照组相近;加入硒的镉染毒肝细胞[Ca2 ]i均比各对应浓度的镉处理组有较大幅度地下降,其中给予硒的25μmol/LCdCl2处理组差异显著,且接近对照组的水平。结果提示,镉诱发肝细胞毒性和损伤以及肝细胞[Ca2 ]i升高;硒可能通过干预肝损伤细胞脂质过氧化反应,改善和保护肝细胞[Ca2 ]i稳态而减轻镉诱发的细胞毒性和损伤过程。     

曲妥珠单抗修饰的阿霉素免疫脂质体的制备及体外性质研究

目的:制备表面键合曲妥珠单抗(trastuzumab,TMAB)的阿霉素免疫脂质(Doxorubicin-loadedimmunoliposome,DOX-IML),并对其体外性质进行研究。方法:将磷脂酰胆碱、胆固醇、阿霉素、DSPE-MPEG2000以一定比例混合,采用薄膜超声分散法制备阿霉素脂质体,将聚乙二醇衍生物(1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[succinimidyl(polyethylene glycol)-3400]、DSPE-PEG3400-NHS)连接到TMAB;再与阿霉素脂质体连接得到DOX-IML。研究不同浓度的TMAB对DOX-IML入胞能力及细胞毒性的影响;测定免疫脂质体的包封率、载药率、粒径、电荷及稳定性等性质;动态透析法模拟体外释药特性,激光共聚焦观察免疫脂质体对AU565细胞抗体介导的入胞作用;MTT法研究DOX-IML抑制肿瘤细胞的生长。结果:成功制备了表面键合TMAB的阿霉素免疫脂质体,配体载入率分别是53%、75.5%、84%;每毫克DOX-IML中抗体的含量分别是37、83、108μg·mg-1;阿霉素的包封率为76.85%、载药量为8.03%;粒径131.8nm;表面电荷-27mV。抗体含量83μg·mg-1的DOX-IML组的细胞存活率最低,细胞内荧光强度最高,且该免疫脂质体稳定性良好,具有一定缓释作用。DOX-IML具有较强的特异性靶向作用,其入胞能力和细胞毒性均高于阿霉素脂质体。结论:DOX-IML具有较强的特异性靶向作用,其入胞能力和细胞毒性均高于阿霉素脂质体,抗体含量适中时其入胞能力和细胞毒性最强。     

小檗碱对游离脂肪酸损伤的胰岛βTC3细胞的保护作用

目的:观察小檗碱对棕榈酸损伤的胰岛βTC3细胞是否具有保护作用,并筛查出小檗碱起保护作用的有效浓度及合适的作用时间。方法:以胰岛βTC3细胞为研究对象,用棕榈酸构建脂毒性模型,MTT法筛选小檗碱起保护作用的有效浓度及时间;流式细胞技术检测胰岛βTC3细胞凋亡情况。结果:10.001-1μmol/L小檗碱作用βTC3细胞24、48、72 h,对细胞增殖有不同程度促进作用(与对照组比较P0.05);随着作用时间的延长,低浓度小檗碱对βTC3细胞的保护作用增加,而1μmol/L浓度保护作用下降,10μmol/L及以上浓度出现细胞毒性作用(与对照组相比P0.01),并呈浓度依赖性。2棕榈酸(0.2-1.0 mmol/L)对βTC3细胞的损伤作用具有浓度及时间依赖性(与对照组比较P0.05)。3棕榈酸处理βTC3细胞不同时间后,小檗碱治疗组较模型组的细胞凋亡率显著降低(P0.01)。结论:小檗碱对脂毒性损伤的胰岛βTC3细胞具有保护作用,且脂毒性作用时间越短,小檗碱的保护作用越好,随着脂毒性作用时间的延长,小檗碱的保护作用明显减弱。因此,建议临床上在脂代谢紊乱早期给予小檗碱干预以减轻甚至逆转游离脂肪酸导致的胰岛β细胞凋亡。     

芜菁中性多糖对PC12细胞氧化损伤保护作用机制的初步研究CSCD

以H_(2)O_(2)诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,研究芜菁中性多糖(neutral polysaccharide from Brassica rapa L.,BRNP)对PC12细胞氧化损伤保护及初步作用机制。采用CCK-8法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)检测H_(2)O_(2)对PC12细胞氧化损伤的保护作用;JC-1法检测BRNP对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞线粒体膜电位的影响;Western blot法检测BRNP对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平。结果表明,BRNP对PC12细胞无明显细胞毒性;H_(2)O_(2)的造模浓度和时间分别为300μmol/L、4 h;BRNP在一定程度上可减轻H_(2)O_(2)对PC12细胞的氧化损伤;BRNP可降低H_(2)O_(2)对PC12细胞线粒体膜电位的损伤;以不同剂量BRNP干预PC12细胞后,Bax、Caspase-3蛋白表达水平均有显著降低(P<0.05);而Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。综上所述,BRNP能够改善H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞氧化应激损伤及保护其细胞功能,其作用机制可能与抑制细胞内LDH生成、提高抗氧化酶活性及其凋亡蛋白表达水平有关。     

灵芝胞外多糖分批发酵动力学模型

利用分批发酵研究了灵芝(Ganoderma lucidum)胞外多糖的合成特性,结果表明Ganodermalucidum多糖合成和菌体生长呈部分生长关联型。菌体干重、胞外多糖分别达到15.56g·L-1、3.02g·L-1,胞外多糖对细胞干重得率系数(Yp/x)为0.19。根据分批发酵试验结果采用Logistic方程、Luedeking-Piret方程和类似Luedeking-Piret方程,得到了描述灵芝生长、胞外多糖以及葡萄糖底物消耗分批发酵动力学模型。同时在初始葡萄糖变化较大范围内,试验数据与模型预测值进行了比较拟合,平均相对误差小于5%,表现出很好的适用性。表明该动力学模型对指导灵芝胞外多糖的发酵生产具有实际意义。     

银杏叶提取物对过氧化氢诱导的星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究银杏叶提取物（EGb761）对H2O2所致星形胶质细胞氧化损伤的保护作用。方法 用不同浓度的EGb761预处理细胞,再加入H2O2,通过噻唑蓝（MTT）实验、线粒体跨膜电位（△ψm）及细胞色素C释放实验、DNA损伤实验及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）活性测定,观察EGb761对细胞存活率、线粒体膜通透性、DNA氧化损伤及Caspase-3活性的影响。结果 EGb761能明显降低Hz02对星形胶质细胞的氧化损伤,提高细胞的存活率;维持线粒体膜的完整性,抑制跨膜电位的耗散和细胞色素C的释放;抑制Caspase-3的活化和DNA的降解。结论 EGb761具有清除活性氧,减轻H2O2所致星形胶质细胞的氧化损伤,对星形胶质细胞有保护作用。     

籽瓜多糖对H_2O_2致PC12细胞氧化损伤的保护作用

本文研究了籽瓜多糖(SWP)对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的影响及其机制。通过建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型,CCK-8法测定细胞存活率;硫辛酰胺脱氢酶催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量,DCFH-DA检测细胞内ROS;ELISA法检测8-OHd G;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位;利用caspase-3可以催化底物Ac-DEVD-p NA的反应检测caspase-3活性;应用caspase-9催化特异性底物Ac-LEHDp NA检测caspase-9活性。结果显示:过氧化氢组与对照组相比,终浓度为500μmol/L H2O2作用细胞24 h后,细胞活力显著下降(P0.01);LDH释放量和细胞内ROS增加(P0.01);8-OHd G含量上升(P0.01);线粒体膜电位下降(P0.01);caspase-3和caspase-9活性增强(P0.01)。与H2O2损伤组相比,不同剂量的SWP预处理后,能显著改善H2O2引起的上述指标的变化(P0.05)。由此得出:SWP对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有一定的保护作用。     

尖顶羊肚菌胞外多糖提取物对皮肤成纤维细胞增殖和衰老的影响

不同浓度尖顶羊肚菌胞外多糖提取物作用人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）,检测对HSF细胞形态、细胞增殖、衰老相关β-半乳糖苷酶活性、羟脯氨酸含量的影响,探究尖顶羊肚菌胞外多糖提取物对HSF增殖和衰老的影响。结果显示,125μg/mL尖顶羊肚菌胞外多糖提取物使HSF细胞活力增加了25.2%,羟脯氨酸含量增加了12.1%,β-半乳糖苷酶活性降低了48.1%。说明适宜浓度尖顶羊肚菌胞外多糖提取物具有促进HSF细胞增殖、胶原蛋白合成,延缓细胞衰老的作用。     

羊肚菌胞外多糖提取工艺研究

[目的]探究从羊肚菌发酵液中提取胞外多糖的最佳工艺。[方法]实验原料为羊肚菌发酵液,采用单因素实验的方法探究在不同醇沉浓度、醇沉温度、醇沉时间、醇沉p H的条件下,运用正交实验分析从羊肚菌发酵液中提取多糖的最佳工艺条件;根据实验结果,提取7 d中羊肚菌胞外多糖,分别绘制多糖变化曲线和菌丝体生物量曲线。[结果]通过对羊肚菌胞外多糖提取的研究得到最佳工艺条件为:醇沉浓度95%,醇沉温度-25℃,醇沉时间24 h,醇沉p H 7。[结论]利用优化后的实验条件得出,羊肚菌胞外多糖含量最高为0. 874 g/L,在一定程度上为羊肚菌胞外多糖的研究提供了依据,具有十分重要的意义。