丁酸钠对人胃癌和食道癌细胞的生物学效应

5mM丁酸钠可使人胃癌MGc803细胞形态发生改变,细胞变长,出现胞浆突起,趋向于成纤维细胞形态的变化,使食道癌ECa109细胞的核/质比下降。同时能抑制细胞增殖,使细胞生长率下降,丁酸钠对细胞增殖的抑制作用是随其浓度的增加而增强的,具有剂量依赖关系。丁酸钠可促进人胃癌MGc803细胞胞质中微管和食道癌ECa109细胞内中等纤维的组装,这种变化对丁酸钠处理后细胞形态的改变有关。丁酸钠可使细胞阻断于G_1期。??对3’,5’-cAMP—PDE(cAMP-磷酸二酯酶)活力具有强的抑制作用,并提高细胞内cAMP水平,从而抑制细胞增殖。这些结果表明丁酸钠对人胃癌MGc803和食道癌ECa109细胞具有一定的诱导分化作用。     

siRNA干扰PDGFRβ促进胃癌MGC-803/VCR细胞的凋亡

为研究血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)在胃癌组织和长春新碱(vincristine, VCR)耐药胃癌细胞MGC-803/VCR中的表达,并探讨PDGFRβ沉默对MGC-803/VCR细胞增殖和凋亡的影响,本研究分别通过免疫组化和蛋白质印迹法(Western blotting)检测PDGFRβ蛋白在胃癌组织和耐药细胞株中的表达水平。通过Lipofectamine 2000将PDGFRβ小干扰RNA (si-PDGFRβ)转染到MGC-803/VCR细胞,Western blotting检测转染后PDGFRβ蛋白表达水平,Cell Counting Kit-8 (CCK-8)和流式细胞术分别检测si-PDGFRβ对VCR诱导人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。研究结果显示:PDGFRβ蛋白在胃癌组织中的表达显著高于正常胃组织;PDGFRβ蛋白在MGC-803/VCR细胞中的表达极显著高于MGC-803细胞,并且转染si-PDGFRβ后MGC-803/VCR细胞的PDGFRβ蛋白表达水平显著降低;1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L的VCR诱导MGC-803/VCR细胞后,si-PDGFRβ组细胞增殖抑制率分别为(21.97±0.84)%、(37.63±1.32)%、(55.77±1.39)%和(72.17±1.16)%,与对照组的(13.60±0.49)%、(22.33±1.01)%、(38.30±1.56)%和(52.90±1.08)%分别比较有极显著的差异(p<0.01);流式检测结果显示,与对照组的细胞凋亡率(13.61±0.49)%比较,发现si-PDGFRβ组胃癌MGC-803/VCR细胞凋亡率为(29.80±0.64)%,说明两者差异极显著(p<0.01)。本研究初步结论表明,si RNA干扰PDGFRβ能够促进VCR诱导的胃癌MGC-803/VCR细胞凋亡。     

IgY—Ricin A诱导癌细胞程序化死亡的研究

研究了抗癌导向药物IgY-Ricin A杀伤癌细胞的作用机理。人胃低分化粘液腺癌MGC-803细胞经IgY-Ricin A处理,细胞的增殖明显受到抑制,而同样处理的人胚正常肺细胞2BS,其生长不受这种药物的影响。FCM实验结果表明,IgY-Ricin A处理的MGC-803细胞,在8h开始出现细胞程序化死亡峰Apo,同样处理的2BS细胞则无Apo峰出现。经lgY-Ricin A处理的MGC-803细胞核由均一状态变为浓缩凝集状,经激光共聚焦显微镜进行光切片和三维重组,发现MGC-803细胞核由原来的球形变成高度浓缩凝集的点状结构。DNA凝胶电泳分析显示,IgY-Ricin A处理的MGC-803细胞DNA被降解,呈现梯状电泳条带这一典型的细胞程序化死亡指标。研究结果表明,IgY-Ricin A通过诱导细胞程序化死亡来控制MGC-803细胞的增殖,最终杀死癌细胞。     

下调CDH17基因对那可丁耐药性人胃癌细胞作用的分析

探讨下调肝肠钙黏连蛋白(CDH17)基因对抑制那可丁耐药性人胃癌MGC-803细胞增殖的分子机制,为临床治疗胃癌提供新的治疗手段。本研究以人胃癌MGC-803细胞为研究材料,通过体外MTT实验检测细胞活力、流式细胞术观察细胞增殖与凋亡情况,蛋白免疫印迹检测凋亡通路相关蛋白的表达水平变化。那可丁药物处理实验和MTT实验表明,下调CDH17可以提高人胃癌MGC-803细胞对那可丁的敏感性;流式细胞术观察结果表明,下调CDH17基因促进引起细胞凋亡;蛋白免疫印迹实验表明线粒体途径参与那可丁诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的过程。综上所述,下调CDH17基因通过提高人胃癌MGC-803细胞对那可丁的敏感性,引起线粒体途径相关蛋白功能障碍促进细胞凋亡,从而抑制胃癌细胞的增殖。     

miR-29b2c重组腺病毒的构建及对胃癌细胞增殖和迁移的影响

构建了miR-29b2c重组腺病毒Ad-miR-29b2c,考察了其对HGC-27、MGC-803胃癌细胞增殖及迁移的抑制作用。采用PCR从基因组扩增miR-29b2c片段,并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdT-29b2c,经酶切及测序鉴定。穿梭质粒经PmeⅠ线性化后与腺病毒骨架载体共转化BJ5183感受态,产生重组腺病毒质粒Ad-miR-29b2c,再经PacⅠ线性化后转染293A细胞进行包装。重组腺病毒扩增后感染HGC-27细胞,通过MTT及细胞迁移实验观察Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞增殖及迁移的影响。采用Western blotting检测Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达的影响。酶切、测序及荧光定量PCR结果表明重组腺病毒构建成功,miR-29b及miR-29c在HGC-27细胞过表达。MTT实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞增殖。细胞迁移实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞迁移。此外,Ad-miR-29b2c能显著降低HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达水平。综上所述,构建了miR-29b2c的重组腺病毒,并发现其可以抑制胃癌细胞HGC-27和MGC-803的增殖及迁移,该作用可能与miR-29抑制HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达有关。     

不同浓度桦木酸对人胃癌MGC-803细胞自噬的影响

目的: 本研究利用不同浓度桦木酸处理人胃癌MGC-803细胞,以探究其对细胞自噬的影响。方法: 将人胃癌MGC-803细胞分为4组,每组3个复孔,对照组不加桦木酸处理,其余三组分别加入终浓度为10、20、30 mg/L桦木酸。桦木酸处理细胞48 h后,qRT-PCR检测桦木酸对人胃癌MGC-803细胞自噬相关基因mRNA表达的影响。Western blot检测药物处理细胞自噬相关基因的蛋白表达。利用免疫荧光检测药物处理后MGC-803细胞内LC3蛋白的胞内定位及表达。结果: 与对照组相比,在10～30 mg/L浓度范围内,桦木酸处理的人胃癌MGC-803细胞LC3、Beclin-1 mRNA的表达明显升高(P＜0.05),Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达显著升高(P＜0.05),LC3-Ⅰ蛋白的表达明显降低(P＜0.05),其中30 mg/L处理组表现最佳。此外,桦木酸还可诱导MGC-803细胞LC3蛋白在细胞质内形成点状聚集。结论: 在10～30 mg/L浓度范围内,桦木酸能诱导人胃癌MGC-803细胞发生自噬。     

长链非编码RNA Linc00673过表达对胃癌MGC-803细胞增殖与凋亡的影响*

目的: 探讨长链非编码RNA Linc00673过表达对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法: 将重组慢病毒表达质粒pLVX-Linc00673和对照空载体质粒pLVX-NC在293T细胞中进行慢病毒包装与扩增,将重组慢病毒转染胃癌细胞MGC-803建立稳定过表达 Linc00673的细胞系,实时荧光定量PCR方法检测Linc00673基因的表达; MTT实验和克隆形成实验观察细胞的生长增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;qPCR检测细胞周期相关调控基因表达;免疫印迹法检测PI3K/Akt信号通路关键分子及肿瘤增殖相关蛋白的表达。结果: Linc00673在胃癌细胞系MGC-803、BGC-823和AGS中的表达量显著高于正常胃粘膜细胞GES-1(P＜0.05)。建立了稳定过表达Linc00673的MGC-803细胞系,Linc00673的表达量比对照空载体组高200倍。Linc00673过表达促进MGC-803细胞增殖和克隆形成(P＜0.05),抑制细胞凋亡并影响细胞周期G1→S期进程(P＜0.01);Linc00673过表达可影响MGC-803细胞周期调节基因CCNG2、p19和CDK1的表达;免疫印迹结果显示,Linc00673过表达不仅促进PI3K/Akt信号通路关键分子pAKT及其下游靶点NF-κB和Bcl-2蛋白的表达,而且上调肿瘤相关因子β-catenin和EZH2蛋白的表达。结论: Linc00673过表达可能通过PI3K/Akt信号通路促进MGC-803细胞增殖、抑制凋亡。     

miR-125b靶向MCL1抑制胃癌 MGC-803细胞增殖

探讨mi R-125b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响及机制,为阐明胃癌发病的分子机制提供实验依据.采用q RT-PCR和原位杂交,检测mi R-125b在正常胃黏膜(NGM)和胃癌(GAC)组织中的表达.将mi R-125b导入胃癌MGC-803细胞,观察mi R-125b高表达对MGC-803细胞增殖的影响.利用Targetscan 6.2软件及荧光素酶报告基因检测,分析mi R-125b对MCL1基因的靶向性作用.构建MCL1干扰载体,观察干扰MCL1基因表达对MGC-803细胞增殖的影响.结果发现,mi R-125b在胃癌组织中低表达,其表达与胃癌的分化程度及患者预后呈正相关,与TNM分期、淋巴结转移呈负相关(P0.01).mi R-125b高表达后MGC-803细胞的增殖降低、凋亡率增加、裂解caspase-3与裂解PARP表达增加(P0.01);mi R-125b与MCL1基因的3′UTR(2 613~2 620)结合,抑制MCL1的m RNA及蛋白质表达(P0.01);沉默MCL1基因表达后MGC-803细胞的增殖降低、凋亡率增加、裂解caspase-3与裂解PARP表达增加(P0.01).从而得出结论,mi R-125b在胃癌组织中低表达,其表达与胃癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移及患者预后密切相关;mi R-125b靶向抑制MCL1基因表达,活化caspase-3信号通路,抑制MGC-803细胞增殖.     

不同浓度桦木酸对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响

目的: 以人胃癌MCG-803细胞为实验材料,探讨不同浓度桦木酸(BA)对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,为其临床应用提供依据。方法: 将人胃癌MGC-803细胞分成 4 组,每组设置 3 个复孔,对照组为未加入桦木酸的 MGC-803 细胞,3 组实验组分别加入终浓度为10、20、30 μg/ml桦木酸处理细胞48 h后,通过激光共聚焦显微镜观察各组细胞形态变化;检测桦木酸对细胞Caspase-3和Caspase-9活性的影响;利用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化;qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9和Cytochrome C(Cyt c)mRNA及蛋白水平的表达变化。结果: 与对照组比较, 各处理组Caspase-3和Caspase-9活性显著升高(P＜0.01),线粒体膜电位显著下降(P＜0.01),Caspase-3、Caspase-9和Cyt c mRNA及蛋白表达均显著上调(P＜0.01)。结论: 在终浓度为10 ~30 μg/ml浓度范围内,桦木酸通过调节Caspase-3、Caspase-9和Cyt c的表达诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡。     

汉黄芩素通过调控上皮间质转化抑制胃癌细胞的侵袭转移

目的:汉黄芩素是中药黄芩中的一种黄酮,具有体内外抗癌活性。然而,汉黄芩素对人胃癌细胞的作用尚不十分清楚。本研究拟探讨汉黄芩素对人胃癌细胞MGC-803侵袭转移能力的影响及其对上皮间质转化(Epithelial to Mesenchymal Transition,EMT)的作用机制。方法:采用MTT法测定汉黄芩素对人胃癌细胞MGC-803增殖能力的影响,通过划痕实验、Transwell试验检测汉黄芩素对人胃癌细胞MGC-803迁移、侵袭能力的影响。通过免疫印迹法和免疫荧光法分析汉黄芩素对EMT的影响。结果:20μM以上浓度的汉黄芩素能抑制人胃癌细胞MGC-803的增殖,不同浓度的汉黄芩素能抑制人胃癌细胞MGC-803的迁移和侵袭,且呈浓度依赖性。此外,汉黄芩素能抑制间质标记蛋白波形蛋白(Vimentin)和锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1(ZEB1)的表达,促进上皮标记蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结论:汉黄芩素能抑制胃癌细胞的侵袭和迁移,这一作用可能与其抑制EMT的发生有关。     

ATP抑制人胃腺癌(MGC-803)细胞增殖的机理研究(简报)

ATP已是临床治疗心血管疾病的常用药,目前国内外对ATP的抗癌作用也十分重视。我们曾报道过ATP对人胃癌细胞(SGC-7901、MGC-803)增殖的抑制效应,Rapaport和Fang等也相继报道ATP对小鼠结肠移植癌及人前列腺癌的增殖有抑制作用,但对ATP抗癌作用的机理除了报道膜上嘌呤受体的改变和cAMP第二信使调节作用外,其他方面未见报道。本实验研究了ATP抑制MGC-803细胞增殖与细胞周期时相分布、间隙连接通讯功能、c-Ha-ras基因表达之间的关系,为临床应用ATP治疗癌症提供了实验依据。     

丁酸钠对人胃腺癌SGC-7901细胞的生物学效应

应用兔抗纤维粘(连)蛋白(FN)抗体和兔抗3t,5,环腺苷酸(cAMP)特异性抗体,并用羊抗兔IgG荧光抗体,在荧光显微镜下观察丁酸钠对人胃腺癌SGC一7901细胞系的纤维粘(连)蛋白(FN)和cAMP水平的变化。实验结果表明丁酸钠有增强SGC一7901细胞内纤维粘(连)蛋白(FN)和c.~MP水平的作用;应用电镜细胞化学和扫描电镜的技术方法,观察到人胃腺癌SGC一7901细胞在丁酸钠作用下膜表而(Na 一K )一ATP酶活性明显下降;微绒毛明显减退,膜表面较光滑。这可能说明丁酸钠通过抑制(Na~一K )一ATP酶活性,提高了细咆内cAMP水平,调控细胞的增殖和分化。     

黄瓜根尖分生组织细胞核仁超微结构类型及缺硼时的变化

硼是植物必需的一种微量元素,缺乏时植物根的生长被抑制。黄瓜根尖分生组织细胞核中核仁有四种类型。不缺硼的核仁中,丝状成分、粒状成分、丝状中心及核仁液泡能够明显地看到。缺硼的核仁中,丝状成分萎缩,变得粗短。看不见丝状中心、核仁液泡等。环形核仁中的中央大液泡变小。     

钙调蛋白拮抗剂对人胃癌细胞效应机理的研究——钙调蛋白与磷酸二酯酶活性测定分析

我们曾经证明钙调蛋白(Calmodulin,CaM)拮抗剂三氟拉嗪(Trifluoperazine,TFP)有抑制人胃癌细胞增殖和诱导细胞形态向正常分化的效应。本文用CaM活性测定箱方法测定了TFP处理的人胃癌MGC-803细胞胞质内的CaM活性。同时也测定了磷酸二酯酶(Phosphodiesterase.PDE)活性的变化。结果表明TFP选择性抑制胞质内依赖Ca²⁺/CaM的PDE活性。氨茶碱有抑制CaM活化PDE的作用。本文对TFP作用机理及在调控癌细胞增殖及分化中的意义进行讨论。     

钙调蛋白拮抗剂对人胃癌细胞效应机理的研究——钙调蛋白与磷酸二酯酶活性测定分析*

我们曾经证明钙调蛋白(Calmodulin,CaM)拮抗剂三氟拉嗪(Trifluoperazine,TFP)有抑制人胃癌细胞增殖和诱导细胞形态向正常分化的效应。本文用CaM活性测定箱方法测定了TFP处理的人胃癌MGC-803细胞胞质内的CaM活性。同时也测定了磷酸二酯酶(Phosphodiesterase.PDE)活性的变化。结果表明TFP选择性抑制胞质内依赖Ca~(2+)/CaM的PDE活性。氨茶碱有抑制CaM活化PDE的作用。本文对TFP作用机理及在调控癌细胞增殖及分化中的意义进行讨论。     

Ultrastructure and behavior of the nucleoli and fibrillar centers during cell differentiation of liver erythroblasts of 12-day-old mouse embryos

The transformation of nucleolus and its structural components in the main groups of erythroid cells (from pronormoblasts to reticulocytes and dividing ones) has been studied. It is shown that during inactivation of the nucleolus, the granular component is reduced, and the degree of chromatin condensation increases. Enlargement and "naking" of fibrillar centres are also observed. At the stage of basophilic and polychromatophilic erythroblasts, the nucleolus has a mushroom-like shape with well developed fibrillar centres, which lie at the border of the nucleolus. Nucleolar RNP components consist predominantly of a fibrillar component and forms "caps" of these mushroom-like structures. Therefore, at this stage "free" fibrillar centres are found on ultrathin sections, if the section plane runs only through the fibrillar centre, or through ring-shaped nucleoli, i.e. the fibrillar centre surrounded by sheet of nucleolar RNP fibrilles, when the mushroom-like nucleolus is cut tangentially. Using serial section technique, small round nucleoli with an extremely weakly developed RNP material or free fibrillar centres, resembling those in telophase nuclei, are shown on the terminal stage of nucleolus transformation. It is noted that the main groups of erythroid cells differ from each other not only in the chromatin condensation degree, but also in the development of nucleolus material and in the size of fibrillar centres. However, such differences exist in either cell group. Consequently, we can distinguish between cell populations being on different stages of maturation. On this basis, we described on intermediate population of cells, which possess signs of pronormoblasts and basophilic erythroblasts. In all the cases, strands of electron opaque material bound with the condensed chromatin are present in fibrillar centres.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)