凹叶厚朴愈伤组织的超低温保存

采用单因子比较和均匀设计法。研究凹叶厚朴愈伤组织超低温的影响因素。结果表明：超低温保存的适宜材料是４周龄的愈伤组织。经４－６℃低温下预培养１２天的愈伤组织抗冻能力最强。     

脱水速率和降温速率对葡萄柚种子超低温保存的影响

以新鲜葡萄柚(Citrus paradise)种子为材料,使用3种脱水速率处理至约20%含水量,然后用饱和盐溶液平衡至10种不同的含水量,再进行简化的二步法超低温保存;同时,以经过15 ℃、50%相对湿度(RH)条件脱水至含水量约12%的葡萄柚种子为材料,使用程序降温仪进行5个降温速率和3个预冷温度的传统二步法超低温保存。结果表明,葡萄柚种子对脱水敏感,种子含水量越低,成苗率越低。而且,脱水速率越快,对种子的损伤越大,成苗率呈现75% RH>50% RH>15% RH;冷冻处理对种子有进一步的伤害,含水量6%～8%的种子超低温保存效果最佳,但脱水速率对超低温保存的种子成苗率的影响不明显。用传统二步法超低温保存葡萄柚种子,与预冷对照相比,经液氮冷冻的种子成苗率都有明显下降。在预冷对照组中,-2.5 ℃·min^-1降温速率的种子成苗率最高,在冷冻保存中-0.5 ℃·min^-1和-0.25 ℃·min^-1的降温速率最有利于超低温保存。预冷温度从-40 ℃降至-60 ℃,未超低温处理种子的发芽率降低,但超低温处理种子的发芽率提高。     

盐生杜氏藻和青岛大扁藻的超低温保存

采用两步法冷冻技术超低浊保存盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎｕ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）和青岛大扁藻（Ｐｌａｔｙｍｏｎａｓ ｈｅｌｇｏｌａｎｄｉｃａ Ｋｙｌｉｎ ｖａｒ．ｔｓｉｇｔａｏｅｎｓｉｓ）。当二甲基亚砚（ＤＭＳＯ）浓度分别为５％和２０％,平衡时间均为ｍｉｎ,预冻温度及保持时间分别为－４０℃,６０ｍｉｎ和－３０℃,３０ｍｉｎ;化冻后分别在０℃和到温下采用慢速稀释法去除ＤＭＳＯ时,     

仙客来愈伤组织的超低温保存

为了避免连续继代造成仙客来愈伤组织的变异, 对仙客来愈伤组织进行了超低温冷冻保存研究。以继代后处于对数生长期的愈伤组织为实验材料, 首先在含有不同蔗糖浓度的培养基上预培养不同时间, 转至不同的冰冻保护剂中直接液氮冷冻或-20oC预冷冻2 h, 然后液氮超冷冻保存, 37oC水浴迅速解冻, 并用相应蔗糖浓度的液体培养基洗涤, 以中性红染色测定细胞的存活率, SPSS13.0软件进行统计学分析。结果表明: 预培养基中蔗糖浓度、预培养时间、降温方式、冷冻保护剂等对解冻后材料相对存活率存在不同程度的影响, 筛选出4%蔗糖浓度预培养3 d、9号保护剂、0oC停留30 min后直接冷冻为超低温保存的最佳方案, 通过简单的方法获得了较好的愈伤组织保存效果。     

仙客来愈伤组织的超低温保存

为了避免连续继代造成仙客来愈伤组织的变异, 对仙客来愈伤组织进行了超低温冷冻保存研究。以继代后处于对数生长期的愈伤组织为实验材料, 首先在含有不同蔗糖浓度的培养基上预培养不同时间, 转至不同的冰冻保护剂中直接液氮冷冻或-20oC预冷冻2 h, 然后液氮超冷冻保存, 37oC水浴迅速解冻, 并用相应蔗糖浓度的液体培养基洗涤, 以中性红染色测定细胞的存活率, SPSS13.0软件进行统计学分析。结果表明: 预培养基中蔗糖浓度、预培养时间、降温方式、冷冻保护剂等对解冻后材料相对存活率存在不同程度的影响, 筛选出4%蔗糖浓度预培养3 d、9号保护剂、0oC停留30 min后直接冷冻为超低温保存的最佳方案, 通过简单的方法获得了较好的愈伤组织保存效果。     

中国红豆杉悬浮培养细胞的超低温保存

对中国红豆杉悬浮细胞超低温保存中几个主要因素进行多方面对比研究。结果表明,取培养16d的细胞进行超低温保存效果最好,10％DMSO＋8％葡萄糖作为冰冻保护剂对冷冻细胞起到最佳的保护效果;较好的降温程序是在0℃中预处理30min后移入－20℃中停留180min,然后转入－70℃中停留30min,最后投入－196℃液氮中保存。该实验还对保存后细胞的恢复性生长进行了验证。     

低温保存脐带和胎盘组织的效果研究

目的:建立脐带和胎盘组织的低温保存方法,为自体化基因治疗和细胞治疗提供丰富的细胞储备。方法:取离体的脐带和胎盘,冲洗干净,以体积比20kg/m~3、15kg/m~3、10kg/m~3、5kg/m~3共4组浓度的DMSO作为抗冻剂,采用程序降温,至-80℃后转入液氮中保存,采用细胞培养与电镜扫描进行效果评估。结果:10kg/m3组组织低温保存效果最好,15kg/m~3组次之,5kg/m~3组效果最差,培养所得的胎盘组织来源的基质样细胞具有间充质干细胞的某些生物学特性。结论:低温保存脐带和胎盘组织切实可行,为自体基因治疗和细胞治疗提供了细胞储备。     

低温保存脐带和胎盘组织的效果研究

目的：建立脐带和胎盘组织的低温保存方法,为自体化基因治疗和细胞治疗提供丰富的细胞储备。方法：取离体的脐带和胎盘,冲洗干净,以体积比20kg／m3、15kg／m3、10kg／m3,5kg／m3共4组浓度的DMSO作为抗冻剂,采用程序降温,至-80℃后转入液氮中保存,采用细胞培养与电镜扫描进行效果评估。结果：10kg／m3组组织低温保存效果最好,15kg／m3组次之,5kg／m3组效果最差,培养所得的胎盘组织来源的基质样细胞具有间充质干细胞某些生物学特性。结论：低温保存脐带和胎盘组织切实可行,为自体基因治疗和细胞治疗提供了细胞储备。     

小白菊内酯及降温速率对含水生菜种子抗冷性的影响

以生菜Lactuca sativa含水种子为试材,通过添加外源动物泛素E3连接酶激活剂小白菊内酯(Parthenolide),及不同降温速率的程序降温处理,研究Parthenolide对程序降温过程中生菜种子抗冷性的影响。结果表明,无论在快速(60 ℃·h-1)还是慢速(3 ℃·h-1)降温过程中,添加Parthenolide都会抑制生菜种子对低温的耐受性,而且发芽率明显比对照组低,这种降低程度在降温至-20 ℃时最为明显,说明在程序降温过程中,泛素化调控通路参与种子对冷冻的响应。通过实时定量荧光PCR对泛素化相关基因和ICE1基因的表达分析表明,Parthenolide抑制了慢速降温过程中环指型E3连接酶COP1和抗冻因子ICE1的mRNA表达水平。Parthenolide对SOD活性的影响进一步证明其影响种子在程序降温过程中的耐冻性机制。     

玻璃化法超低温保存对大叶藻种子活力的影响

通过设置玻璃化法超低温保存的3个关键要素,即冰冻保护液处理、玻璃化溶液脱水时间和冷冻处理,研究了玻璃化法超低温保存对大叶藻种子活力的影响.结果表明:冰冻保护液处理和玻璃化溶液脱水时间对大叶藻种子活力无显著影响;冷冻处理组种子活力显著低于对照组,而冰冻保护液和玻璃化脱水处理对冷冻后种子活力的影响不显著,表明冰冻保护液和玻璃化溶液未对种子起到明显的保护作用;未冰冻保护液处理组玻璃化溶液脱水4h时种子活力显著低于其他脱水时间,而冰冻保护液处理组脱水4h时与其他脱水时间无明显不同,表明较长时间的玻璃化溶液脱水处理需使用冰冻保护液进行预处理.研究结果为超低温保存大叶藻种子提供了参考.     

全生物化组织工程血管SMA、PDGF-AA及MMP-2的表达

目的探讨血管平滑肌细胞的α-actin(SMA)、血小板源性生长因子-AA(PDGF-AA)及金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达情况。方法采用以酶消化为主的方法制备猪颈总动脉脱细胞支架,再种植犬胸主动脉的平滑肌细胞,培养4周,分别于2周和4周取材作形态学观察和SMA、MMP-2及PDGF-AA的免疫组化染色及图象分析,并以幼年犬和成年犬的胸主动脉作对照。结果组织工程血管培养2周和4周,α-actin的表达高于幼年犬,但明显低于成年犬;PDGF-AA表达低于幼年犬,但明显高于成年犬;MMP-2高于成年犬,培养4周时MMP-2的表达接近幼年犬。结论全生物化组织工程血管体外构建中VSMC的PDGF-AA和ECM的表达逐渐增多,SMA的表达逐渐减少,VSMC由收缩表型逐渐转变为合成表型,VSMC大量增殖,伴有新的细胞外基质产生,同时MMP-2分泌增加,促进种植细胞的迁移,重建了组织工程血管的管壁结构。     

喹乙醇在鲤体内的药物代谢动力学及组织浓度

采用高效液相色谱法测定了鲤血浆及组织中喹乙醇的浓度。该法采用C18色谱柱,流动相为甲醇-三蒸水(15：85),检测波长为372nm,样品用15％的三氯乙酸沉淀蛋白,离心取上清液进样。该法灵敏、简便、准确、喹乙醇在0．2—25．6μg／mL浓度范围内线性关系良好,检测限为0．04μg／g,平均回收率为85．93％-100．2％,不同浓度水平的日内和日间精密度测定结果均小于10％。以30mg／kg鱼体重的剂量口灌给药,通过对喹乙醇在鲤体内的血药浓度经时曲线过程分析,发现其符合-级吸收-室开放模型,主要动力学参数如下：消除相半衰期T1／2k5．876h,吸收相半衰期T1／2h1．466h,达峰时间Tp3．913h,达峰浓度Cmax30．25ug／／mL,血药浓度-时间曲线下面积AuC406．92mg／L．h;并对用药后组织药物浓度和单次、多次灌药后肌肉中喹乙醇的残留量及以原型排出体外的喹乙醇进行了测定,获得了单次灌药后鲤肌肉、肝脏、肾脏和多次灌药后鲤肌肉中喹乙醇的代谢规律,测得原型药物排出体外的量占总灌药量的6．9％。该项研究全面了解了喹乙醇在鱼体内的药动学特征,对确定合理的临床用药方案以及无公害水产品中药物残留监测提供了可靠的理论依据。     

人胎儿真皮乳头和皮纹发生的研究

本文用扫描电镜法研究了入胎儿的皮纹发生过程,包括初级真皮嵴、次级真皮嵴、真皮乳头和表皮隆线的发生。为研究人皮纹的发生和皮肤的异常提供了皮肤正常发育的形态学依据。共观察111例从第6周到第9个月胎儿的皮纹区皮肤,表明第3个月末胎儿开始形成初级真皮嵴,以后逐渐加深,至第16周嵴的顶端中央产生纵沟形成两条平行的次级真皮嵴;自19周后,次级真皮嵴局部隆起,由波浪形逐渐形成乳头。至30周乳头呈犬牙状。表皮隆线于第4—5月形成,随真皮乳头的增高而渐趋明显。至第6个月,全部皮纹图样已可辨认。本文还讨论了真皮乳头发生的过程。     

人柠檬酸合成酶cDNA的克隆及其表达谱分析

在动物、植物、微生物细胞中普遍存在的三羧酸循环(TCA循环)是产生ATP的主要途径,它不仅参与糖的分解代谢,也参与蛋白质和脂肪的分解代谢。柠檬酸合成酶在TCA循环中起着关键的调节作用,它通过催化乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合成柠檬酸。本文用基因组信息学方法获得的一个长1636bp的EST重叠群序列,它与猪柠檬酸合成酶cDNA序列高度同源。从这一序列出发,又用PCR方法从人的睾丸组织和骨胳肌组织的cDNA分子库中,分别克隆到一个1492bp的cDNA片段,在其序列中含有一个长1401bp的可读框,该可读框推导的编码蛋白由466个氨基酸组成,它与猪柠檬酸合成酶、鸡柠檬酸合成酶及酵母柠檬酸合成酶的同源度分别达95．9％,92％和60．9％,故认为该cDNA序列可能就是来自人类柠檬酸合成酶基因的转录本。Northern分析表明人类柠檬酸合成酶在心脏和骨胳肌中呈高表达,在脑、肾和胰腺组织中度表达,在小肠和胸腺中未能检出表达,而在其他9种被检测的组织中仅有低表达。     

EFFECTS OF CALCIUM ION CONCENTRATION ON THE DEGENERATION OF AMPUTATED AXONS IN TISSUE CULTURE

Light and electron microscope studies were conducted on the nature of the degenerative changes in amputated nerve fibers of cultured rat sensory ganglia and on the effects of media with differing calcium concentrations upon these changes. With glucose-enriched Eagle's media (MEM) containing 1.6 mM calcium, the amputated myelinated and unmyelinated axons undergo a progressive granular disintegration of their axoplasm with collapse and fragmentation of myelin sheaths between 6 and 24 h after transection. With MEM containing only 25–50 µM calcium, the granular axoplasmic degeneration does not occur in transected fibers and they retain their longitudinal continuity and segmental myelin ensheathment for at least 48 h. Addition of 6 mM EGTA to MEM (reducing the estimated Ca⁺⁺ below 0.3 µM) results in the structural preservation of both microtubules and neurofilaments within transected axons. A transient focal swelling of amputated axons occurs, however, in cultures with normal and reduced calcium. These observations suggest that an alteration in the permeability of the axolemma is a crucial initiating event leading to axonal degenerative changes distal to nerve transection. The loss of microtubules and neurofilaments and the associated granular alterations of the axoplasm in transected fibers appears to result from the influx of calcium into the axoplasm.     

线性和指数回归方法对土壤呼吸CO2扩散速率估算的影响

 理论上,土壤呼吸通量的量值可以通过观测土壤呼吸CO₂扩散速率(əc/ət)计算得到。但是为获得əc/ət,通常须允许土壤呼吸箱内CO₂浓度升高,因此,如何估算外界大气CO₂浓度条件下的əc/ət是土壤呼吸观测技术的关键,关系到观测结果的准确性。通常əc/ət的估算会受土壤表层大气CO₂扩散梯度(即土壤呼吸箱内CO₂扩散梯度和大气CO₂浓度昼夜变化)的影响。目前,线性回归方法是土壤呼吸观测中估算əc/ət的基本方法。然而,常用的线性回 归方法会低估əc/ət,而指数回归方法则可以准确地估算əc/ət。夜间əc/ət的变化与大气CO₂ 浓度之间存在非常明显的负相关关系。夜间土壤表层大气CO₂扩散梯度的减小导致线性回归方法明显低估əc/ət。əc/ət的昼夜变化过程存在明显的非对称性现象,而指数回归方法可以更好地描述əc/ət昼夜变化的非对称性响应。     

小麦幼穗的组织培养及愈伤组织的分化研究

对普通小麦“津丰-55”的幼穗进行了组织培养,并跟踪研究了培养基中生长素、细胞分裂素、蔗糖、Ag~+以及一些维生素等附加成分对愈伤组织的生长、根苗分化的影响。对愈伤组织再生植株的途径也进行了研究。     

脉冲电场对真皮成纤维细胞生长和膜流动性的影响

采用MTT比色分析法检测脉冲电场(f=50Hz,t=20μs,Epp=1V/m),对真皮成纤维细胞增殖的影响,结果表明,电场作用1分钟和5分钟,均产生促进细胞增殖的效果(P<0.05和P<0.001),而较长时间(t≥10分钟)的电场作用则显著抑制细胞的正常增殖(P<0.001)。 采用荧光偏振法研究了脉冲电场对真皮成纤维细胞膜流动性的影响。结果表明,电场作用5分钟后即刻引起膜流动性的显著增加。而电场作用45分钟后,需经过一段时间的温育(30 分钟),才表现出膜流动性的降低。说明不同作用时间的电场可以造成膜流动性的增加或降低,而且对膜流动性的影响是可逆的。我们认为,脉冲电场所引起的膜流动性改变是细胞分裂能力发生变化的原因之一。