联合检测PAIg与CD41+淋巴样小巨核对ITP及MDS鉴别诊断的意义

目的:探讨血小板相关抗体(PAIg)及CD41+淋巴样小巨核在特发性血小板减少性紫癜(ITP)中的诊断价值,以及对ITP与骨髓增生异常综合征(MDS)的鉴别诊断价值.方法:研究血小板相关抗体的样本取自两组患者.一组为ITP患者,另一组为MDS患者.在CD41患者检测中,ITP患者组与MDS患者组进行了比较.ELISA方法用来检测血小板相关抗体的表达,包括PAIgA、PAIgM和PAIgG.CD41阳性淋巴样小巨核的检测采用生物素酶连亲和-碱性磷酸酶标法.抗CD41抗体是单克隆抗体.数据统计分析使用卡方检验.结果:血小板相关抗体检测中,ITP组49例患者的PAIg检出阳性率为81.6%,MDS组9例患者PAIg阳性率为33.3%,二者比较有显著差异,结果具有统计学意义.酶联免疫细胞化学检测ITP组和MDS组淋巴样小巨核CD41阳性表达显示,ITP组阳性率为5%(1/20),而MDS组阳性率为58.3%(21/36).结论:血小板相关抗体(PAIg)及CD41+淋巴样小巨核的表达可作为一项有价值的指标帮助诊断和鉴别诊断ITP患者;同时对判断ITP患者的效果及预后,以及提高ITP的诊断率具有重要的价值.并且CD41+淋巴样小巨核可作为ITP与MDS的鉴别诊断依据.     

改良PAS染色法在急性肝损伤中的应用

目的：观察改良肝脏糖原PAS染色法,并观察肝脏糖原染色在急性肝损伤中的应用。方法：复制CCl4急性肝损伤模型,首次100％CCl43 mL／kg皮下注射,此后50％CCl4橄榄油溶液2 mL／kg每周2次共4次皮下注射,诱导大鼠急性肝损伤模型。计算大鼠肝体比;HE染色观察肝组织炎症病理;试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBil）、白蛋白（Alb）。肝脏常规PAS染色与改良PAS染色观察肝糖原染色。结果：与正常组相比,模型组ALT、AST活性与TBil含量明显升高（P＜0．05）,Alb含量明显降低（P＜0．05）;HE染色示,模型组肝小叶结构排列紊乱,肝细胞脂肪变、气球样变明显。常规PAS染色,正常组肝组织PAS染色阳性占肝脏面积为32．38％±5．50％;与正常组相比,模型组肝组织PAS阳性染色明显减少（P＜0．01）,占肝脏面积为8．60％±3．34％。改良PAS染色提示,正常组肝脏可见大量PAS阳性染色,占肝脏面积为75．50％±9．02％;与正常组相比,模型组肝组织PAS阳性染色明显减少（P＜0．01）,占肝脏面积为17．61％±3．53％。在空白对照组与模型肝组织中,肝糖原改良PAS染色阳性率明显高于常规PAS染色法（P＜0．01）。改良PAS染色肝糖原阳性染色面积更真实反映急性肝损伤程度。结论：改良肝脏糖原PAS染色法有助于急性肝损伤程度评估。     

胰岛素对大鼠急性肺损伤的肺血管内皮细胞核因子-κB和细胞间粘附分子-1表达的影响

目的 探讨胰岛素对急性肺损伤(ALI)大鼠肺血管内皮细胞核因子-kB(NF-kB)和细胞问粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法 24只健康雄性SD大鼠(190-210g),随机分为正常对照组、All模型组、胰岛素干预组.观察肺组织病理形态,采用原位杂交技术半定最法和免疫组织化学染色检测肺血管内皮细胞的细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA和核因子-kB(NF-kB)蛋白的表达.结果 (1)肺病理组织学结果显示胰岛素干预组肺病变局限且程度减轻;(2)ALI模型组肺血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达(0.456±0.018)和NF-kB核染色阳性细胞百分比(0.542±0.009)与正常对照组(0.274±0.014,0.308±0.017)比较显著升高(均P＜0.05);(3)胰岛素干预组ICAM-1mRNA表达(0.357±0.024)和NF-KB核染色阳性细胞了百分比(0.427±0.018)比模型组明显减低(均P＜0.05),但与正常对照组比较仍较高(均P＜0.05).结论 ICAM-1和NF-kB在ALI显著增加,胰岛素可以抑制NF-kB和ICAM-ImRNA的表达,可能足其对抗ALI的作用机制之一.     

p63 IHC染色2+截断值可作为骨巨细胞瘤的诊断标记

为评估骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone, GCTOB)中p63表达在鉴别骨巨细胞瘤(GCTOB)中的作用,本研究采用横断面研究,检测50个巨细胞丰富的骨病变中p63的免疫组织化学表达,并评价p63在各肿瘤中的染色强度和程度。免疫组织化学分析显示,94.12%的骨巨细胞瘤(GCTOB)、14.29%的骨肉瘤(osteosarcoma, OSA)、60.00%的非骨化性纤维瘤(non-ossifyingfibroma, NOF)、25.00%的动脉瘤样骨囊肿(aneurysmal bone cyst, ABC)、71.43%的软骨母细胞瘤(chondroblastoma, CB)、66.67%的棕色瘤(Brown tumor)为阳性,而腱鞘巨细胞瘤(giant cell tumor of the tendon sheath, GCTTS)中未检测出p63阳性。对于p63的染色强度,可以观察到58.82%的骨巨细胞瘤(GCTOB)、28.57%的软骨母细胞瘤(CB)和20.00%的非骨化性纤维瘤(NOF)呈现强染色。对于p63的染色程度:观察到58.82%的骨巨细胞瘤(GCTOB)、28.57%的软骨母细胞瘤(CB)和14.29%的骨肉瘤(OSA)尾弥漫性染色,而中等染色在骨巨细胞瘤(GCTOB)中为17.65%,非骨化性纤维瘤(NOF)为20.00%,棕色瘤(Brown tumor)为33.33%。大量骨巨细胞瘤(94.12%)为p63阳性,这比任何其他巨细胞丰富的病变多得多。然而,p63的阳性染色并不是骨巨细胞瘤(GCTOB)特异性的。本研究结论初步表明,p63是鉴别骨巨细胞瘤(GCTOB)与其他骨巨细胞瘤的一种敏感的(97.6%)和相对特异的标志物。考虑到反应的强度和程度,本研究建议采用综合评分方法对p63 IHC染色判读富含巨细胞的病灶,并将2+截断值作为骨巨细胞瘤(GCTOB)的诊断标记。     

退变腰椎间盘组织细胞凋亡相关蛋白酶Caspase-10 的表达研究

目的:探讨凋亡相关蛋白酶Caspase-10在腰椎间盘退变中的表达。方法:45例腰椎间盘突出症病人按年龄分为青年、中年和老年患者组,5例青少年型特发性脊柱侧弯病人作为对照组。患者组标本均为术中所取出L4/5新鲜椎间盘髓核组织,对照组标本均为术中所取出L2/3新鲜椎间盘髓核组织。采用TUNEL法和免疫组织化学S-P法,分别检测腰椎间盘髓核中的凋亡阳性细胞率及Caspase-10的表达情况。结果:对照组髓核内TUNEL阳性细胞率为(17.80±0.62)%。青年、中年、老年患者组髓核内TUNEL阳性细胞率分别为(45.71±2.05)%、(53.65±2.93)%和(68.39±4.33)%。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组髓核内Caspase-10染色阳性细胞率为(32.60士1.64)%。青年、中年、老年患者组髓核内Caspase-10染色阳性细胞率分别为(50.67士2.89)%、(63.12士4.61)%和(75.28士4.26)%。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。髓核内Caspase-10染色阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率和年龄之间均呈正相关(P<0.01)。结论:退行性变腰椎间盘组织中凋亡细胞率以及Caspase-10的表达均高于正常椎间盘组织,年龄是细胞凋亡的重要影响因素,细胞凋亡以及Caspase-10的表达上调可能在腰椎间盘退行性变的发生和发展中发挥重要作用。     

益髓灵初提物对白血病巨核细胞系HI－Meg增殖与分化影响的研究

本工作研究了一组具有益气养阴,清热化瘀作用的中药益髓灵初提物（ＹＳＬ）对人类白血病巨核细胞系ＨＩ－Ｍｅｇ增殖与分化的影响。结果表明,ＹＳＬ有明显抑制ＨＩ－Ｍｅｇ细胞的增殖和促使其向成熟巨核细胞分化的双重作用,其有效浓度为１：１０００。     

人源性神经营养素-6对大鼠面运动神经元逆行溃变的保护作用

目的:探讨人源性神经营养素-6对受损伤神经元的保护作用,为全面了解人源性NT-6的神经生物学特性以及为临床上退行性神经病变的治疗提供实验依据.方法:将健康成年SD大鼠随机分为两组,即不做任何处理的正常对照组和切断一侧面神经后引起面运动神经元逆行溃变的实验组;实验组又根据面肌内注射物的不同分为空白对照组、人源性NT-6实验组和生理盐水对照组.动物饲养两周后,取脑干切片,行尼氏染色和胆碱乙酰基转移酶免疫组化染色,观察人源性NT-6对逆行溃变的面运动神经元的保护作用.结果:与空白对照组和生理盐水对照组相比,NT-6实验组面神经核尼氏染色的强度值和面神经核内ChAT阳性神经元数目显著增加.结论:人源性NT-6对由于轴突损伤引起逆行溃变的神经元具有保护作用.     

Sox9治疗兔椎间盘退变的效果及机制研究

目的:探究Sox9用于治疗椎间盘退变的效果及调控机制。方法:将Ad-sox9和Ad-GFP各20μL分别转染至椎间盘退变兔的髓核组织中,转染后3、7、30、60天取材,采用免疫组化、免疫荧光和MRI等研究方法检测椎间盘髓核组织中II型胶原、蛋白多糖的表达情况,并分析对椎间盘退变的改善情况。结果:免疫组化染色显示sox9组中椎间盘髓核组织中II型胶原、蛋白多糖的表达明显升高,MRI显示sox9组椎间盘T2像信号有明显改善(P<0.05)。结论:体内转染腺病毒介导的sox9基因能够增加椎间盘内II型胶原和蛋白多糖的表达,并抑制椎间盘的退变进程。     

胆红素对急性肺损伤大鼠肺血管内皮细胞核因子κB,细胞间粘附分子1表达的影响

目的探讨胆红素对急性肺损伤(ALI)的对抗作用及其对肺血管内皮细胞核因子-κB和细胞间粘附分子1表达的影响.方法用雄性Wistar大鼠(200-250g)30只,随机分为正常对照组、ALI动物模型组(用内毒素制造模型)、胆红素干预组.采用原位杂交技术半定量法和免疫组织化学染色测定肺血管内皮细胞中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA和核因子κB (NF-κB)蛋白的表达.结果 (1)ALI模型组肺血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达和NF-κB核染色阳性细胞百分比与正常对照组比较显著升高,(P<0.001);(2)胆红素干预组ICAM-1mRNA表达和NF-κB染色阳性细胞百分比与模型组相比明显减低,(P<0.001、P<0.01),但与正常对照组比较仍较高(P<0.05).结论 ICAM-1和NF-κB在ALI显著增加,胆红素可以抑制ALI动物NF-κB和ICAM-1mRNA的表达,可能是其对抗急性肺损伤的作用机制之一.     

小鼠皮肤癌变过程中GST—π免疫组化染色观察

为探讨谷胱甘肽s-转移酶(GSTs)在小鼠皮肤癌变中的作用,本实验利用GST-π抗体和免疫组织化学方法,观察GST-π在小鼠正常皮肤(n=6)、良性增生(n=8)、异性增生(n=12)、鳞状细胞癌(n=9)中的表达和作用部位.结果表明,在正常皮肤标本中GST-π几乎没有表达;在良性增生中,细胞质染色为50%,细胞核周染色为12.5%;在异性增生中细胞质染色为83.3%,细胞核周染色为75%;在鳞状细胞癌细胞质染色为100%,细胞核周染色为88.9%.GST-π在小鼠皮肤癌变过程中含量明显增高,尤其GST-π在皮肤角化层和核周的表达,可以作为诊断癌症的一种标志.     

显示AgNOR的改良染色效应在实验动物肿瘤中的应用

本文报道的ＡｇＮＯＲ组化反应，是我们经过反复实验，得新建立的染色逍度，染色时间和温度的系列程序，其结果表明不所显示ＡｇＮＯＲ成分的对比清晰度较强，而适用于实验动物肿瘤组织的形态学观察，图象分析系统的定量研究和诊断的价值。     

胰岛素对大鼠急性肺损伤的肺血管内皮细胞核因子-kB和细胞间粘附分子-1表达的影响

目的 探讨胰岛素对急性肺损伤（ALI）大鼠肺血管内皮细胞核因子-kB（NF-kB）和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法24只健康雄性SD大鼠（190-210g）,随机分为正常对照组、ALI模型组、胰岛素干预组。观察肺组织病理形态,采用原位杂交技术半定量法和免疫组织化学染色检测肺血管内皮细胞的细胞间粘附分子-1（ICAM-1）mRNA和核因子-kB（NF-kB）蛋白的表达。结果（1）肺病理组织学结果显示胰岛素干预组肺病变局限且程度减轻;（2）ALI模型组肺血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达（O．456±0．018）和NF-kB核染色阳性细胞百分比（0．542±0．009）与正常对照组（o．274土0．014,0．308±0．017）比较显著升高（均P〈0．05）;（3）胰岛素干预组ICAM-1mRNA表达（0．357±0．024）和NF-kB核染色阳性细胞百分比（0．427±0．018）比模型组明显减低（均P〈0．05）,但与正常对照组比较仍较高（均P＜0．05）。结论ICAM-1和NF-kB在ALI显著增加,胰岛素可以抑制NF-kB和ICAM-1mRNA的表达,可能是其对抗ALI的作用机制之一。     

肝素促进脐血巨核祖细胞体外扩增

目的 :探索肝素在脐带血CD34⁺ 细胞定向扩增巨核祖细胞中的作用。方法采用免疫磁珠法 (MACS)分选CD34⁺ 细胞 ,在TPO ,IL 1 1的扩增体系中加入肝素 ,巨核祖细胞集落分析 (CFU MK)测定巨核祖细胞扩增倍数 ,流式细胞仪检测巨核祖细胞分化过程中的特异性标记 (CD34⁺ ,CD41a⁺ ,CD61⁺ ,CD34⁺ CD41a⁺ ,CD41a⁺ CD61 ⁺ ) ,巨核细胞特异性抗体 (CD41a)免疫组化染色和透射电镜观察鉴定巨核细胞形态及超微结构 ,血小板体外活化实验及NOD/SCID小鼠异种体内移植实验评价扩增的巨核祖细胞的功能。结果 :TPO( 5 0ng/ml)与IL-1 1 ( 5 0ng/ml)双因子联合应用 ,7天巨核祖细胞克隆扩增倍数为 83 1 7± 39 41倍 ,1 0天为 2 0 5 0 6± 74 2 6倍 ,流式细胞仪分析显示 7天CD34⁺ CD41a+ 细胞扩增 1 0 5 1± 4 79倍 ,0天加入肝素后 ,7天巨核祖细胞克隆扩增倍数为 1 0 8 2 5± 32 67倍 ,1 0天为 333 0 6± 2 7 5 4倍 ,7天CD34⁺ CD41a⁺ 细胞扩增到 2 9 93± 6 39倍 ,为无肝素组的 2.85倍 ,与双因子组相比有统计学差异 (P <0.0 1 ) ,肝素在第 5天及第 7天加入没有增加巨核祖细胞扩增效果。经全身照射预处理的NOD/SCID小鼠静脉输注扩增第 7天的巨核细胞 (TPO、IL-11、肝素联合 ) ,可明显加速其血小板及白细胞计数的恢复并提高生存率 ;同时 ,体外血小板活化实验证实扩增的巨核细胞在体外可产生血小板 ,有正常巨核细胞功能。结论 :TPO、IL-11组合的扩增体系中加入肝素可进一步改善脐带血巨核祖细胞的扩增效果 ,优化体外扩增体系。     

Cathepsin L与MMP-3在兔椎间盘退变中相关性研究

目的:探讨组织蛋白醇L(Cathepsin L)与基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在兔椎间盘退变中的相关性.方法:健康大白兔60只随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,实验组分为三个亚组,椎间盘内注射3种不同浓度的Cathepsin L,阴性对照组中在椎间盘内注射生理盐水,空白对照组不做任何处理.采用HE粢色组织学观察椎间盘的退变特征,免疫组织化学S-P法检测椎间盘组织中MMP-3的表达.结果:HE染色组织学观察6周时在实验组椎间盘中,组织学观察到不同程度的椎间盘退变特征:□核脊索细胞逐渐减少,并逐渐被纤维软骨组织替代,纤维环与髓核之间失去明显的界限.免疫组织化学染色结果,3周、6周时实验组MMP-3的阳性率均高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05).结论:Cathepsin L与MMP-3共同参与了兔椎间盘的退变,Cathepsin L可能促进MMP-3在椎间盘内的生成,从而导致椎间盘的退变.     

胰岛素诱导的低血糖大鼠下丘脑增食欲素-A的表达

目的：探讨急性低血糖应激对大鼠下丘脑增食欲素-A（orexin—A）的表达影响。方法：胰岛素皮下注射建立急性低血糖大鼠模型,检测外周血中葡萄糖和胰岛素水平的变化。采用免疫组织化学染色观察下丘脑orexin-A表达的改变和灰度值测量,观察其染色强度。结果：低血糖禁食组大鼠下丘脑orexin-A的表达明显增加（P〈0．05）,而低血糖进食组orexin-A表达无明显改变。灰度分析显示低血糖禁食组染色强度最高,与对照组比较有明显统计学差异（P〈0．05）。结论：急性血糖的降低可以增强大鼠下丘脑orexin-A的表达,而摄食行为可抑制此效应。     

生长因子诱导下人脐血单个核细胞向肝细胞的分化

目的：探讨在体外培养条件下人脐血单个核细胞向肝细胞的分化。方法：用FGF4、HGF诱导新鲜分离的脐血单个核细胞,并于培养16d通过RT—PCR、免疫细胞化学染色方法等方法检测肝细胞标志物的表达情况。结果：培养16d后。生长因子组贴壁的脐血MNCs中出现细胞体积增大、胞质丰富的双核细胞,RT—PCR和免疫细胞化学染色显示有肝细胞标志物的阳性表达（P〈0．05）。结论：在生长因子诱导下。脐血单个核细胞能够分化为类肝细胞。     

大鼠尾壳核衰老变化定量分析：Ⅰ,乙酰胆碱（Ach）系统

应用二异丙基氟磷酸(DFP)控制的乙酰胆碱酯酶(AChE)药物组化染色显示大鼠尾壳核AChE。图像分析系统测定结果表明:老年大鼠(26—27月龄)尾壳核内胆碱能神经元面积、数目及AChE合成速率均较成年大鼠(3—4月龄)减小。这些现象可能是衰老大鼠尾壳核胆碱能神经元功能障碍的生物学基础。     

巨核细胞系统生成的调控

巨核系是髓系造血的一部分,来自造血干细胞的巨核祖细胞,经增殖分化成为成熟的巨核细胞,最后生成血小板。巨核集落刺激因子主要作用于巨核祖细胞,使其增殖分化,并在体外增加巨核集落生成率。血小板生成索是肾脏等器官产生的糖蛋白,其血中含量受血小板数反馈调节,它的主要作用是促进巨核细胞DNA 合成、胞浆成熟和血小板生成。     

盐酸酸化可改善核抗原免疫荧光染色

免疫荧光染色(immunofluorescent staining, IF)技术广泛用于细胞或组织内抗原定性、定量或定位检测。然而,依常规染色步骤操作,在有些胞核抗原的检测中很难得到令人满意的结果。有研究者采用盐酸酸化预处理用于细胞增殖标记物5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)的荧光染色并获得良好效果。但此方法是否也适用于其他类型的胞核抗原,尚不清楚。为系统全面分析盐酸酸化在胞核抗原免疫荧光染色中的作用,本文以成年C57BL小鼠主要嗅觉表皮(MOE)为材料,分别对Ki-67、5-甲基胞嘧啶(5mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)三种不同类型的胞核抗原进行盐酸酸化处理免疫荧光染色。结果显示,当血清封闭和抗体浓度等条件一致时,室温下盐酸酸化2 h,Ki-67的染色效果最佳,而阴性对照与未酸化组均未出现阳性信号;同样经过盐酸处理2 h,5mC和5hmC染色也呈现较强的阳性信号。该研究表明,在一些胞核抗原免疫荧光染色中,使用盐酸酸化处理可显著提高染色效果。     

急性胰腺炎患者的CT、MRI影像学表现及其诊断价值对比研究

摘要 目的：比较急性胰腺炎患者的电子计算机断层扫描（CT）、磁共振成像（MRI）影像学表现及其诊断价值。方法：选择2018年1月-2019年12月我院收治并初步诊断为急性胰腺炎的患者124例，所有患者均同时行CT和MRI检查，并比较两种检查方式诊断急性胰腺炎的影像学表现，以临床最终诊断结果作为参考，比较两种检查方式诊断急性胰腺炎的价值。结果：124例患者，经临床最终诊断为急性胰腺炎96例，28例为非急性胰腺炎，以临床最终诊断结果为"金标准"，CT诊断急性胰腺炎的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为84.38%、75.00%、92.05%、58.33%、82.26%，MRI诊断急性胰腺炎的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为95.83%、78.57%、93.88%、84.62%、91.94%，MRI诊断急性胰腺炎的灵敏度、阴性预测值和准确度显著高于CT（P<0.05），两种检查方式诊断急性胰腺炎的特异度、阳性预测值比较无统计学差异（P>0.05）。结论：CT和MRI影像学表现有利于急性胰腺炎的诊断，两者对急性胰腺炎诊断均具有较高的灵敏度、特异度和准确度， 但MRI诊断急性胰腺炎的灵敏度、准确度优于CT。