不同的抗原修复方法和染色条件对P53蛋白免疫组织化学方法结果的影响

用免疫组织化学技术检测肿瘤组织中Ｐ53 基因蛋白产物的表达 ,是探讨Ｐ53 基因与多种肿瘤的相关性研究的主要手段之一。在免疫组织化学检测中 ,不同的抗原修复方法对Ｐ53 蛋白检测结果的阳性率和染色强度有不同的影响。本文在免疫组织化学检测Ｐ53 蛋白时对不同的抗原修复方法和染色条件进行了探讨 ,摸索出能较佳地显示Ｐ53 蛋白的免疫组织化学方法条件。介绍如下 :1.材料和方法1 1材料 :经临床病理诊断为恶性肿瘤如肺癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌和大肠癌等福尔马林固定、石蜡包埋的组织 ;单克隆抗体Ｐ53 ＤＯ - 7和ＬＳＡＢ试剂盒为ＤＡＫ…     

光波/微波组合-EDTA修复COX-2抗原及其在乳腺癌的表达及意义

目的观察不同抗原修复方法及修复液对COX-2抗原表达的影响及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法用光波/微波、高压锅结合枸椽酸缓冲液、EDTA作抗原修复处理,分别用即用型和浓缩型COX-2单克隆抗体对70例乳腺癌石蜡切片进行免疫组织化学染色。结果①光波/微波组合-EDTA、CA修复浓缩型COX-2的阳性率均比即用型COX-2的阳性率高(P0.01)。②高压锅抗原修复处理切片的免疫组化染色阳性率略比光波/微波的免疫组化染色阳性率高,但无统计学意义(P0.05);高压锅抗原修复处理的切片组织结构破坏程度和掉片情况均比光波/微波处理的重;③EDTA修复处理切片的免疫组化染色阳性率明显比用CA修复处理切片的免疫组化染色阳性率高(P0.01)。④COX-2表达水平与淋巴结转移有显著关系(χ2=5.24,P0.05);与年龄、肿瘤大小、组织学类型和分级之间无明显关系(P0.05)。结论用光波/微波-EDTA修复COX-2抗原,浓缩型COX-2抗体标记可明显提高免疫组织化学染色的敏感性,具有定位准确、阳性率高、操作简单、安全、组织结构保存好、不易掉片等优点;COX-2的表达与淋巴结转移显著相关,可作为乳腺癌的预后指标。     

免疫组织化学中的抗原修复技术

概述了免疫组织化学中固定对组织抗原性的影响,综述了抗原修复的方法及其原理。组织块的大小、固定液的种类、浓度及固定时间的长度都影响组织的抗原性。免疫组织化学实践中常用酶消化法、酸水解法、微波金属盐法、高压锅加热法等修复组织的抗原性。     

抗原修复技术在免疫组织化学中的作用

免疫组织化学是一门免疫学与病理形态学相结合的新兴学科 ,是现代生物医学的一项重要方法学 ,具有操作简单、敏感性高、特异性强等特点 ,已经广泛应用于临床病理及其相关学科的研究之中 [1,2 ] 。目前采用甲醛为常规标本固定剂 ,醛基与组织蛋白质中的氨基形成交联使抗原决定簇被遮蔽 ,从而影响免疫组织化学结果 ,而且这种作用随着固定时间增长而加重 [3 ]。抗原修复技术的出现 ,使得原来许多只能在冰冻切片作免疫组织化学得以在石蜡切片上实现 ,抗原修复技术在免疫组织化学中的作用愈加明显 ,并且对免疫组织化学方法的敏感性起着决定性作用[…     

各种癌基因蛋白微波抗原修复免疫组织化学检测的研究

本研究对1555例各种肿瘤组织标本进行微波辐射(MWI)抗原修复免疫组织化学染色,检测了14种癌基因蛋白产物.并同时选择部分标本分别作冰冻切片,常规石蜡切片进行抗原修复与不修复的对比研究.结果,经MWI抗原修复后p53(PAb1801,PAb-240,PAb-420,DO-7),p185,Rb,C-fos,C-myc,Ki-67(R),EGF,EGFr,TGFβ和Bcl-2阳性检测率明显提高(P≤0 05),而p53(CM-1),PcNA p21和nm23/NDPK经MWI抗原修复与不修复结果一致,说明有部分抗原不用修复和其他处理.另一部分抗原仅表达在冰冻切片上,如Ki-67和Ki-1单克隆抗体,经修复也无阳性表达.本文中对消化、消化与抗原修复相结合及高压处理切片的IH染色也进行了对比研究,对他们处理切片存在的优缺点也一一作了详说.     

真空负压、微波辐射和电炉三种不同处理方法对抗原修复的比较研究

利用免疫组织化学方法显示抗原抗体,达到抗原抗体的定性和定位。但是,由于按照常规免疫染色程序,却难以将癌基因和抗癌基因产物等显示出来。应用高温进行抗原修复（Ａｎｔｉｇｅｎｒｅｔｒｉｅｖａｌ,ＡＲ）后,可有效地充分暴露抗原决定簇,从而使抗原抗体反应能顺利...     

微波-表面活性剂恢复陈旧性石蜡切片抗原性的定量研究

由于甲醛固定剂中的醛基与蛋白质中的氨基发生广泛的交联而使抗原决定簇受到不同程度的掩盖．影响抗体与相应抗原决定簇结合,因此,免疫组织化学染色（ICS）前需用蛋白酶、尿素处理或其它的抗原修复技术来暴露抗原、恢复抗原性,但酶消化易掉片、对某些抗原性存在不良影响。为了克服上述缺点,我们对微波（Microwave,MW）一去污剂TritonX－100（DET）恢复陈旧性石蜡切片抗原性的作用进行了研究,并与胰蛋白酶（Try）、MW-硫氰酸铅（Lead）等恢复抗原性的方法进行了对比。材料和方法1．材料选用我科存档的胃腺癌、乳腺癌、食道鳞癌、…     

一种改良的BrdU免疫组织化学染色抗原热修复技术

目的：探索一种简单有效的行BrdU免疫组织化学染色抗原热修复的方法。方法：本实验探索了三种抗原热修复方法：1）漂片煮沸法,2）贴片煮沸法,3）贴片改良法。将贴有冰冻组织切片的玻片置于恒温封闭体系中进行热修复。之后行BrdU免疫组化染色,栗集图像对这三种热修复方法进行比较。针对贴片改良法行BrdU与NeuN、P。CERB和DCX的荧光双标,采集图像以观察该方法在免疫荧光甄标实验中应用的可行性。结果：1）漂片煮沸法脑组织切片在经过热修复处理后,切片卷起皱缩,不能进行后续实验步骤;2）贴片煮沸法可见少量BrdU阳性细胞,但背景深,且少数脑片起泡,假阳性现象严重;3）贴片改良法B-U免疫组化及与NeuN、P-CERB和DCX的免疫荧光双标染色背景浅,阳性细胞明显。结论：采用改良的热修复法能充分暴露BrdU抗原,DAB显色及免疫荧光染色结果理想。此方法为一种较好的行BrdU免疫组织化学染色抗原热修复方法。     

不同抗原修复条件对肠癌MMR蛋白免疫组织化学染色效果的影响

目的 采用3种不同的抗原修复条件对肠癌错配修复(mismatch repair MMR)蛋白进行免疫组织化学染色,从而找到适合本科室的最佳修复条件.方法 回顾性分析近两年工作中遇到的肠癌病例,从中抽取50例,分别进行柠檬酸缓冲液高温高压修复、EDTA缓冲液高温高压修复和CC1缓冲液BenchMark XT机器修复后染色...     

免疫组织化学中抗原修复的研究进展

组织中抗原性的妥善保存和抗原修复技术与免疫组织化学染色的成败有着十分密切的关系 ,因此如何妥善保存抗原以达到最大限度保留组织的抗原性及如何对抗原加以修复成为做好免疫组化染色的重要步骤。免疫组织化学 (ｉｍｍｕｎｏ ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ) ,简称免疫组化 ,是免疫学与分子生物学技术和形态学相结合的一门学科 ,是用已知抗体 (或抗原 )检测组织细胞中的未知抗原 (或抗体 )的技术 ,具有操作简单、敏感性高、特异性强等优点 ,已广泛用于病理诊断、鉴别诊断及胚胎发育、神经解剖等相关学科的研究。大量实践证明组织中抗原性的…     

Livin蛋白在乳腺癌中的表达及与Bcl-2的关系

目的 探讨凋亡抑制基因Livin和Bel-2蛋白在乳腺癌组织中表达及与临床病理参数的关系。方法应用western blot和免疫组织化学SP法检测90例乳腺癌、30例乳腺良性病变和15例乳腺癌旁组织中Livin和Bcl-2蛋白的表达情况,分析两种蛋白表达的相关性。结果Livin蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率及蛋白表达量明显高于癌旁组织和乳腺良性病变,差异有显著性（P〈0．05）。Livin蛋白在乳腺癌中的阳性表达与肿瘤大小,组织学类型,组织学分级及淋巴结转移无关（P〉0．05）,但随临床分期的增加而升高（P〈0．05）;Livin和Bel-2蛋白在乳腺癌组织中的表达显著相关（P〈0．05）。结论Livin蛋白在乳腺癌组织中表达上调,且与病理分期有关,提示Livin蛋白可通过抑制细胞凋亡促进乳腺癌的发生、发展,Livin与Bel-2蛋白可能在乳腺癌的演进中起着协同作用。     

微波处理修复抗原后免疫组织化学方法效果的比较研究

冰冻切片经微波处理进行抗原修复后,免疫组织化学方法的敏感性明显提高,显色效果明显增强。提出了冰冻切片在免疫组织化学显色前进行抗原修复的必要性     

有关抗原修复若干问题的探讨

在免疫组织化学反应过程中 ,组织由于固定等方面的问题常导致表达不佳 ,或者假性。为了解决这些问题 ,需要做抗原修复。目前抗原修复的方法较多 ,有真空负压抗原修复法 ,微波辐射抗原修复法 ,高压抗原修复法 ,隔水热抗原修复法和电炉加热抗原修复法。本文根据上述各种方法 ,在实际操作中常可发生的一些问题如 p H的应用范围的选择 ;抗原修复最佳温度的选择 ;有效温度所需要持续的时间 ;抗原修复液必须遵循自然降温的规律 ,否则将达不到抗原修复的目的 ;尽量使用足量的抗原修复液 ;切片必须附贴牢固等。并详细介绍了各种方法的使用过程。在…     

不同抗原修复液对免疫组化结果的影响

以热处理来修复抗原是免疫组化(Immuno-histochemistry,IHC)染色中常用的手段,但使用哪种修复液却存在不同的看法,在长期工作实践中,我们发现不同的修复液对有些抗体表达的阳性强度及数量有差异。为此,本实验采用几种不同抗原修复液处理切片进行比较,观察其对IHC染色结果的影响。材料和方法1.材料选择我院外科手术病检乳腺癌标本5例,所有标本均经15%缓冲甲醛液固定,石蜡包埋切片。相同病例的标本切片9张,分别用于三种不同抗原修复液进行ER、PR、BRCA1标记。2.试剂抗体ER、PR、BRCA1及SP试剂盒均为Dako公司产品。3.修复液柠檬酸缓…     

HDAC1蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义及与ER、PR的关系

目的：探讨乳腺癌组织中组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测78例乳腺癌组织和20例癌旁组织中HDAC1蛋白的表达情况并分析其与ER、PR之间的关系。结果：（1）HDAC1蛋白在78例乳腺癌中的阳性表达率为78.2%（61/78）,在癌旁组织中的阳性表达率为5%（1/20）,两组差异有统计学意义（P〈0.01）（2）乳腺癌组织中的HDAC1蛋白在ER或PR阴性乳腺癌组织中的表达分别高于其在ER或PR阳性乳腺癌组织中的表达（P〈0.01）结论：乳腺癌组织中的HDAC1蛋白过度表达与肿瘤发生发展密切相关。     

Cyclin D1在人皮肤血管瘤不同时期的表达

目的　探讨cyclinD1蛋白在血管瘤发生、发展及退化过程中的表达状况及其意义。方法　采用免疫组织化学方法 (S P法 )检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中cyclinD1的表达水平 ,并结合第Ⅷ因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达cyclinD1的细胞是血管内皮细胞。利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织cyclinD1表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果　增生期血管瘤内皮细胞cyclinD1表达水平高于退化期 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,退化期血管瘤内皮细胞cyclinD1表达水平与正常皮肤组织相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　cyclinD1通过促进血管瘤内皮细胞增殖和血管生成而在血管瘤的形成过程中起重要作用。     

免疫组织化学技术检测石蜡切片组织中BCG抗原的体会

为了进一步提高免疫组织化学技术在检测结核杆菌感染的组织中免疫牛型分枝杆菌 (ＢＣＧ)抗原的表达 ,我们收集了2 0例结核病变的组织标本。用不同的抗原修复方法比较和摸索 ,并采用抗酸染色做对照 ,比较抗酸与ＢＣＧ的结果及如何制作出较令人满意的免疫组织化学染色结果得出一点体会 :1 材料和方法1 1　病例 :收集我院手术切除的经病理组织学确诊的结核病变标本 2 0例 ,均经 10 %福尔马林液固定 ,石蜡包埋的组织标本。1 2　使用ＤＡＫＯ ,ＥｎｖｉｓｏｎＳｙｓｔｅｍ二步法试剂盒 ,兔抗牛型分支杆菌 (ＢＣＧ)多克隆抗体。1 3　不同的抗原修…     

TPST1表达在CXCR4诱导的乳腺癌细胞侵袭中的作用研究

C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)是乳腺癌细胞运动的关键调节因子。CXCR4的功能性表达与乳腺癌的恶性进展密切相关。酪氨酸硫酸化转移酶1(tyrosylprotein sulfotransferase 1,TPST1)是CXCR4蛋白翻译后酪氨酸硫酸化修饰的一个关键酶。本研究将探索TPST1在CXCR4调节乳腺癌细胞侵袭过程中的作用机制。利用定量PCR,免疫组织化学和蛋白质免疫印迹等试验技术检测乳腺癌组织和细胞系中CXCR4和TPST1的mRNA和蛋白表达水平。RNA干扰,趋化试验和侵袭试验用于检测TPST1对于CXCR4诱导的乳腺癌细胞侵袭的影响。研究发现CXCR4蛋白在乳腺癌转移淋巴结组织中呈高表达(P=0. 0016)。CXCR4在乳腺癌转移淋巴结组织中的高表达与肿瘤浸润深度密切相关(P=0. 026)。TPST1与CXCR4蛋白表达在乳腺癌原发组织和配对转移淋巴结组织中均呈显著正相关(P=0. 009; P=0. 006)。TPST1在高度恶性乳腺癌MDA-MB-231细胞中呈高表达,在低度恶性乳腺癌MCF-7细胞中弱表达,而两者CXCR4表达基本相同。小RNA干扰降低TPST1的表达后,下调了乳腺癌MDA-MB-231细胞对于CXCR4配体即基质细胞衍生因子1α(stromal cell-derived factor 1 alpha,SDF-1α)的运动反应性,进而降低CXCR4诱导的MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力。综上,在CXCR4诱导的乳腺癌细胞侵袭过程中,TPST1表达对于CXCR4功能性活化至关重要,TPST1可能作为潜在的抗CXCR4药物治疗乳腺癌恶性进展的联合靶点。     

胃癌HER2蛋白表达及基因拷贝分析

目的：探讨胃癌组织HER2蛋白表达和基因拷贝数增加频率,以及蛋白表达与基因拷贝数之间的相关性。方法：分别采用免疫组织化学（1HC）和显色原位杂交（ClSH）方法,检测80例青岛人胃癌组织中HER2蛋白表达和基因扩增情况。结果：HER2免疫组织化学0者51例、1＋者12例、2＋者12例、3＋者5例。通过CISH分析：这组患者中HER2基因拷贝数扩增者共7例（8．8％）,其中包括基因临界扩增3例（3．8％）。HER2的蛋白表达与基因拷贝数增加相关（P〈0．05）,这两个指标与肿瘤分化程度相关。HER2免疫组织化学3＋和基因扩增结果一致,与乳腺癌相似。结论：这组患者中,具有较高的HER2蛋白表达和基因拷贝数增加的比率,基因扩增可能是其蛋白过表达的主要分子机制。     

Livin蛋白在乳腺癌中的表达及与Bcl-2关系

目的 探讨凋亡抑制基因Livin和Bcl-2蛋白在乳腺癌组织中表达及与临床病理参数的关系.方法 应用western blot和免疫组织化学SP法检测90例乳腺癌、30例乳腺良性病变和15例乳腺癌旁组织中Livin和Bel-2蛋白的表达情况,分析两种蛋白表达的相关性.结果 Livin蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率及蛋白表达量明显高于癌旁组织和乳腺良性病变,差异有显著性(P＜0.05).Livin蛋白在乳腺癌中的阳性表达与肿瘤大小,组织学类型,组织学分级及淋巴结转移无关(P＞0.05),但随临床分期的增加而升高(P＜0.05);Livin和BcI-2蛋白在乳腺癌组织中的表达显著相关(P＜0.05).结论 Livin蛋白在乳腺癌组织巾表达上调,且与病理分期有关,提示Livin蛋白可通过抑制细胞凋亡促进乳腺癌的发生、发展,Livin与Bel-2蛋白可能在乳腺癌的演进中起着协同作用.