组织灌流与贴壁法体外培养奶牛乳腺组织的比较研究

采用组织灌流和组织块贴壁法体外培养奶牛乳腺组织,通过LDH活力测定、台盼蓝染色、琼脂糖凝胶电泳、透射电镜技术比较两种培养方法对奶牛乳腺组织活性及组织超微结构的影响,建立奶牛乳腺组织的培养体系。结果表明,以1mL/h的速度灌流培养的奶牛乳腺组织在DMEM 10%小牛血清培养基中12～60h内保持良好的组织活性和超微结构,贴壁培养的奶牛乳腺组织在DMEM 10%小牛血清的培养基中60～108h内保持良好的组织活性和超微结构,两种培养方法各有优缺点。     

微重力组织工程的产生与发展

概述了微重力组织工程的产生与发展趋势。动物细胞培养技术为研究细胞的形态、结构、功能与遗传特性 ,揭示细胞分裂、组织分化、器官组织形成等生命科学领域的基本问题发挥了巨大作用 ;大规模动物细胞培养技术已广泛应用于生物制药、生产疫苗以及生物学诊断试剂。但是 ,常规培养技术无法实现由细胞重建组织这一构想。微重力组织工程利用旋转培养器产生的微重力环境与动物细胞培养技术相结合 ,使组织重建成为可能 ,成为生命科学发展史上的一个新的里程碑。     

ICR胎鼠成纤维细胞培养方法的优化

目的确定胎鼠成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts,MEF）最优制备方法,为MEF的制备节省时间与原材料。方法取胎鼠组织,采用组织块培养法、胰酶消化培养法、胰酶消后组织块培养法进行分离培养MEF,比较观察MEF纯度、生长速度、细胞形态等指标,筛选最节省时间与原料的一种培养方法。结果组织块培养法所得MEF生长速度慢,细胞体积小,杂细胞少,纯化所需传代次数少。胰酶消化培养法的MEF生长速度快,体积较大,杂细胞数量多,纯化所需传代次数较多。胰酶消化后组织块培养法的消化后组织块的成纤维细胞生长速度介于前两种方法之间,细胞体积和形态与组织块法培养结果相似,杂细胞数量较少,纯化所需传代次数少。结论胰酶消化结合组织块培养法能最大限度的利用材料,在短时间内可制备大量MEF,满足核移植试验与作为饲养层细胞的需求。因此,胰酶消化结合组织块培养法是MEF最优培养方法。     

食管鳞状细胞癌组织体外3D培养

该文将新鲜的食管鳞状细胞癌组织剪成细小的碎块,和基质胶(matrigel)混合在96孔板中进行培养。在培养2、4、6、8、10、12、14、16、18天时取出并固定、石蜡包埋、切片,进行HE染色和Ki-67、P63、P40、细胞角蛋白5/6免疫组织化学实验。HE染色显示,培养的肿瘤组织与原组织基本相同。随着培养时间的延长,组织块变得小,且肿瘤组织有萎缩和退化的现象。随体外培养时间的增加, P40和P63蛋白在肿瘤细胞中的表达变少。Ki-67蛋白在肿瘤组织中表达的强度和比率都随着培养时间的延长而减弱。综上所述,食管鳞状细胞癌的一部分特性会随着体外培养时间的延长而发生变化,所以体外培养天数越短越好。     

翅果油树茎段愈伤组织和芽发生的组织学研究

本文对翅果油树大宫灯型茎段培养在ＭＳ附加６－ＢＡ较高、ＮＡＡ较低浓度的培养基上培养０～３０ｄ的组织学变化进行了研究。创伤对其愈伤组织的形成有明显的刺激作用,培养３～４ｄ切口处的皮层细胞、形成层细胞、韧皮部薄壁细胞以及髓组织细胞,甚至表皮细胞均脱分化开始分裂;培养８～１１ｄ,切口明显膨大,起源于髓及维管组织周围薄壁细胞的愈伤组织突起大;培养１２～２０ｄ愈伤组织块中出现了分生组织和维管组织结节;培养２１～３０ｄ,愈伤组织表层和近表层细胞分化出芽原基,但与维管组织结节无直接联系。     

猪十二指肠组织灌流培养与静态培养比较

组织灌流培养和静态培养是肠道组织体外培养最常见的两种方法,但目前尚不清楚这两种培养方法哪种更适合用于体外胃肠激素分泌的研究.以猪十二指肠组织为研究对象,首先比较L-精氨酸下两种体外培养方法对组织胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)分泌和组织活性乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LD...     

大豆原生质体培养再生植株

大豆原生质体培养诱导再生植株一直为国内外学者所关注。70年代初,Kao等、Miller等即由悬浮培养的大豆细胞分离原生质体,经培养获得了愈伤组织,但在以后的很多年中进展不大。近年来,虽然一些学者直接从大豆植株的不同器官或部位,如荚果组织、幼苗根、叶肉组织、子叶和下胚轴悬浮培养细胞游离和培     

草麻黄细胞悬浮培养体系的建立

目的:建立草麻黄悬浮培养体系.方法:采用组织培养的方法探讨了水解酪蛋白(CH)、基本培养基、取材时间、和摇床转速对麻黄愈伤组织悬浮培养的影响.结果:MS基本培养基、300mg/l水解酪蛋白、继代25d的愈伤组织、转速110r/min是愈伤组织悬浮培养的适宜条件,愈伤组织细胞增殖量分别为0.76g、0.80g、0.80g、0.80g.结论:初步选择出草麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养条件,为麻黄细胞扩大培养及有效成分提取奠定基础.     

杜仲的组织培养

本文采用植物组织培养的方法完成了杜仲种子培养和杜仲愈伤组织的诱导、初代培养、继代培养、生根培养。研究了生长素奈乙酸(NAA)和细胞分裂素6-苄基嘌呤(6-BA)对杜仲愈伤组织诱导、初代培养、生根培养的影响,并确定了不同阶段这两种必要激素的最佳浓度。     

三七.人参和西洋参细胞悬浮培养的比较研究

用薄层层析对三七、人参和西洋参愈伤组织进行的初步鉴定表明,三种愈伤组织都含有皂甙和主要皂甙成分Rb_1、Rg_1,三七愈伤组织还含有一种抗癌皂甙Rh_1。对愈伤组织的生长,三七低于人参高于西洋参;对愈伤组织中总皂甙含量,三七均高于人参和西洋参。三种植物细胞悬浮培养结果类似于他们的愈伤组织培养,但生长又进一步提高。三七细胞悬浮培养中皂甙产生的时间进程几乎与生长平行,合适的收获期为培养30天。寡糖素不仅增强三七培养细胞的皂甙形成而且促进细胞生长,较合适的浓度为1.25 ppm。通过以上研究,使三七悬浮培养细胞的生长(干重增加178毫克)为最初培养愈伤组织的4倍以上,总皂甙产率高达20.6毫克,为最初培养愈伤组织的8.5倍。     

人胎儿卵巢异种移植的组织学研究

目的探讨人胎儿卵巢组织异体移植的最佳条件。方法观察胎儿卵巢进行异种移植后的组织学变化,并计算各组移植卵巢内各期卵泡的发育情况及卵泡构成比。结果新鲜的卵巢组织、体外培养的卵巢组织以及冷冻复苏后经体外培养的卵巢组织移植后,其内有原始卵泡发育,而且可见丰富的血管网;未见明显的淋巴细胞浸润现象。结论人胎儿卵巢组织(包括新鲜的卵巢组织、体外培养的卵巢组织以及冷冻复苏后经体外培养的卵巢组织)异种移植后原始卵泡在受体体内能进一步发育,生长卵泡分泌的雌激素有调节子宫内膜周期性变化的作用。     

施氏鲟不同组织来源细胞离体培养的初步研究

采用组织块移植培养技术,对来源于施氏鲟(Amursturgeon,Acipenser schrencki Brandt)肝脏、脾脏、肾脏、鳍条和心脏组织的细胞进行了原代培养,2～3天左右可见组织块周围有成纤维样细胞迁出,10天左右组织块周围形成单层细胞。对原代培养的单层细胞用胰蛋白酶-EDTA消化后传代培养,建立了可连续传代的施氏鲟肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织细胞系。初步确立施氏鲟细胞培养的条件,培养基为MEME,培养温度为25℃,血清浓度为20%。对传代培养细胞以二甲基亚砜为保护剂在液氮冷冻保存,细胞复苏后可连续传代培养。施氏鲟细胞离体培养为开展鲟鱼病毒病和遗传资源保存研究提供了重要试验材料。     

影响谷子原生质体看护培养的一些因素

研究了谷子原生质体看护培养中一些问题。结果表明：不同种植物愈伤组织做看护细胞对谷子原生质体培养植板率有不同的影响。用光头稗草愈伤组织对谷子胚性、非胚性或中间型愈伤组织的原生质体进行看护培养,以对胚性愈伤组织原生质体的效果最好。看护培养主要是作用于原生质体形成完整细胞后的生长发育,试验没有观察到明显的看护细胞数量效应。     

影响谷子原生质体看护培养的一些因素

研究了谷子原生质体看护培养中的一些问题。结果表明：不同种植物愈伤组织做看护细胞对谷子原生质体培养植板率有不同的影响。用光头种草愈伤组织对谷子胚性、非胚性或中间型意伤组织的原生质体进行看护培养,以对胚性意伤组织原生质体的效果最好。看护培养主要是作用于原生质体形成完整细胞后的生长发育。试验没有观察到明显的看护细胞数量效应。     

小麦愈伤组织的悬浮培养

京冬1号、科冬58等十多个品种小麦的幼穗、幼胚的愈伤组织经一年多的继代培养,从中挑选出胚性强,分散性好的组织块进行扩增。在这个过程中我们发现不同品种在同一培养基上培养形成胚性愈伤组织的效量和时间是不同的。AgNO_3、弱散射光和脯氨酸对某些品种形成胚性愈伤组织有效。这说明改变培养条件能克服品种问的差异。用 MS、改良 AA、B_5等培养基作为基本培养基,附加2,4-D,椰乳等成份进行悬浮培养发现不同品种愈伤组织对不     

细枝木麻黄离体培养过程中愈伤组织和再生芽的细胞组织学观察

为探讨细枝木麻黄(Casuarina cunninghamianaMiq.)愈伤组织分化过程的细胞组织学,对离体培养条件下的愈伤组织进行扫描电子显微镜和石蜡切片观察,分析愈伤组织的细胞分裂、分化以及芽再生的发生过程。结果表明,新鲜外植体培养于愈伤组织诱导培养基上,伤口处的薄壁细胞开始脱分化,培养1周后形成明显的愈伤组织;继续培养2周后,胚性愈伤组织形成,且表层细胞启动分化形成芽原基;培养4周,可肉眼观察到胚性芽原基,数量增多并逐渐分化形成不定芽;培养至第6周,生成不定芽,并大量增殖和分化。因此,细枝木麻黄是通过愈伤组织分化形成胚状体的途径进行植株再生的,为建立细枝木麻黄组织培养高效再生体系提供了理论依据。     

血管内皮细胞和心脏组织块的立体培养

本文旨在对比研究二维平面与三维立体培养模式下,内皮细胞和心脏组织形态学的差异。采用胶内、胶上、三明治模式、玻片培养小室模型等多种I型胶原立体培养模型,通过免疫荧光技术及显微形态学观察组织和细胞的生长情况。在二维平面培养中,原代心脏血管内皮细胞呈铺路石样排列;而在三维胶原培养模式中,内皮细胞呈长梭状形态,并迁入胶原培养介质中,和体内血管新生及血管生成过程中的内皮细胞活化表型相似。加入血管内皮生长因子(vascular endo- thelial growth factor VEGF)能增强内皮细胞管状结构的形成。在三维胶原中,心脏组织块生长良好,迁出的细胞将相邻组织块连接起来,组织块有自发的搏动。本工作表明,改进的薄层胶原培养、玻片培养小室模型和动脉条模型是较好的研究血管生成和血管新生的工具。在三维培养的情况下,内皮细胞通过空间增殖、迁移和锚定,可形成管状结构,比二维平面培养更适合用于血管新生的研究。不同的立体培养模型可用于不同目的的研究。     

钙对黄瓜子叶愈伤组织中硝酸还原酶(NR)活性的影响

本文采用黄瓜子叶愈伤组织,研究了不同钙培养下,对愈伤组织生长、硝酸盐吸收,NR活性以及组织中钙、镁含量的影响。结果表明,缺钙后,愈伤组织生长、硝酸盐吸收、NR活性等都比正常钙培养下的愈伤组织降低。这与用整株植物所得结果基本一致,对此结果进行了讨论。     

前列腺基质细胞的原代培养方法

目的:建立一种操作简单、成功率高、重复性好的前列腺增生组织原代基质细胞(PSC)培养方法。方法:采用胶原酶消化法、组织块贴壁法和胰酶消化组织块贴壁法,从70岁及以上男性的良性前列腺增生组织中分离培养PSC,通过显微镜观察比较PSC的数量、形态、培养周期,用免疫荧光染色法鉴定PSC的纯度。结果:胶原酶消化法得到的贴壁细胞少,细胞体积较小且形态无法铺展,增殖能力较弱;组织块贴壁法培养72h后细胞会从组织边缘缓慢爬出,生长周期长;胰酶消化组织块贴壁法,细胞培养7d后基本融合,折光性强,细胞多呈长梭形,通过免疫荧光染色鉴定,基质细胞纯度在95%以上。结论:利用胰酶消化组织块贴壁法建立了一种易行、高效且重复性好的前列腺增生组织基质细胞培养方法。     

钙对黄瓜子叶愈伤组织中硝酸还原酶（NR）活性的影响

本文采用黄瓜叶愈伤组织,研究了不同钙培养下,对愈伤组织生长、硝酸盐吸收,NR活性以及组织中钙、镁含量的影响。结果表明,缺钙后,愈伤组织生长、硝酸盐吸收、NR活性等都比正常钙培养下的愈伤组织降低。这与用整株植物所得结果基本一致,对此结果进行了讨论。