miR-29b对TNF—α诱导的人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的探索过表达miR-29b对TNF-α 诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖与凋亡的影响及初步作用机制。方法MTT 法筛选TNF—α诱导HUVECs的最佳浓度和时间,建立细胞凋亡模型;MTY法筛选miR-29bmimic转染HUVECs的最佳转染时间和浓度：MTr法检测过表达miR-29b对TNF-α诱导HUVECs增殖活力的影响;Hoechst33342荧光染色检测过表达miR-29b对TNF—α诱导HUVECs凋亡的影响：Western印迹技术检测过表达miR-29b对Akt磷酸化水平、Bcl-2蛋白表达的影响。结果TNF—α诱导的HUVECs凋亡的最佳浓度为10ng／ml,最佳时间是48h;miR-29bmimics转染HUVECs的最佳浓度为50nmol/L,最佳作用时间是48h;过表达miR-29b能显著降低TNF-α诱导的HUVECs的增殖活力（P〈0．001）;Heochst33342荧光染色结果显示。miR-29b过表达能促进TNF-α诱导的HUVECs的凋亡（P〈0．05）;过表达miR-29b能显著下调Akt磷酸化（p-Akt）与Bcl-2蛋白的表达（P〈0．001）。结论过表达miR-29b可降低TNF-α诱导的HUVECs的增殖活力并促进其凋亡,其机制可能与下调Akt磷酸化、Bd-2蛋白的表达相关。     

miR-30a和miR-30b靶向GW182的生物学功能研究

目的：通过证明miR-30a、miR-30b靶向GW182,探索HeLa细胞中miR-30a、miR-30b及GW182的生物学功能。方法：生物信息学预测分析表明GW182的3＇UTR区存在4个保守的miR-30a、miR-30b靶位点,将含有靶位点的序列片段构建到萤光素酶报告载体中,检测miR-30a、miR-30b与靶位点的结合情况;用阳离子脂质体转染GW182 siRNA和miR-30a、miR-30b mimics,检测GW182下游功能的变化。结果：miR-30a、miR-30b能够靶向GW182;qPCR及Western印迹证明miR-30a、miR-30b可以在mRNA与蛋白水平上降低GW182的表达,同时影响GW182所参与的miRNA/siRNA对靶基因的抑制作用。结论：GW182是miR-30a、miR-30b的靶基因,揭示了miR-30a、miR-30b通过靶向GW182影响miRNA/siRNA作用途径的新功能。     

miR-203在肝细胞肝癌中的表达及其对肿瘤细胞增殖及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-203在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者血浆中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:选择2013年5月-2015年7月在我院确诊为肝细胞肝癌的患者57例作为研究对象,另选取同期在我院接受健康体检的志愿者49例作为对照组。采用实时荧光定量RT-PCR法检测两组血浆中miR-203的表达水平;将过表达的miR-203转染至人肝癌细胞系Hep 3B和JHH-1;采用CCK-8法检测miR-203对肝癌细胞增殖能力的影响;采用transwell法检测miR-203对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:miR-203在肝癌患者血浆中的表达水平显著低于对照组,差异具有统计学意义(P0.01);与未转染的肝癌细胞比较,Hep 3B和JHH-1细胞转染miR-203mimic后,肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力受到明显抑制,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:miR-203在肝细胞肝癌中呈低表达,而过表达miR-203能够抑制肿瘤细胞的增殖及侵袭能力,提示miR-203可以作为一种新的肿瘤抑制性micro RNA。     

miR-125b在前列腺癌1E8细胞运动转移中的作用及其分子机制的初步探讨

目的 研究 miR-125b在前列腺癌高低转移潜能细胞中的表达差异及其对高转移细胞株1E8细胞的运动转移中的作用和可能的分子机制.方法 realtime PCR法检测前列腺癌高低转移潜能配对细胞系中 miR-125b的表达差异.通过划痕实验及transwell实验观察1E8细胞及转染 miR-125b 抑制剂及其阴性对照后该细胞运动转移能力的变化.结果 realtime PCR结果显示高转移潜能1E8细胞中miR-125b表达水明显高于低转移潜能2B4细胞;下调miR-125b会减弱1E8细胞的运动转移能力.结论 miR-125b可促进前列腺癌细胞的运动转移能力.     

miR-134在人垂体腺瘤组织中的表达及其意义(英文)

目的:探讨垂体腺瘤患者miR-134的表达及意义,分析其表达水平与无功能垂体腺瘤(non-functioningpituitaryadenomas,NFPA)增殖侵袭能力的相关性。方法:选择2010年6月至2013年7月本院收集垂体腺瘤标本104例以及8例尸检正常腺垂体的临床资料。采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学技术检测Ki-67、MEG3、miR-134等在NFPA组织中的表达水平,并分析数据。结果:miR-134在NFPA组织中表达水平显著低于正常腺垂体和其他类型垂体腺瘤(P0.01);miR-134的表达水平与NFPA患者肿瘤侵袭性、肿瘤细胞Ki-67阳性率及发病年龄呈负相关(P0.01)。结论:miR-134表达下调可能是NFPA肿瘤发生及肿瘤呈侵袭样生长的重要因素,miR-134可作为诊断和评估NFPA预后的参考指标。     

miR-145与肿瘤相关研究及其临床应用

microRNAs(miRs)是一类长约22核苷酸的内源性非编码单链RNA分子,对生长发育、细胞增殖、凋亡乃至肿瘤发生发展等生命过程具有重要作用.其中,miR-145是研究最多的miRs之一,研究发现其在多种肿瘤组织中表达下调.通过与多种靶分子,如OCT4、MUC1等相互作用,miR-145可影响肿瘤细胞的增殖、转移及凋亡等过程.在临床应用方面,多项研究发现,miR-145表达水平与肿瘤患者的诊断及预后具有良好的相关性.此外,其表达水平还与卵巢癌等多种肿瘤的化疗耐药性相关.本文就miR-145对肿瘤的发生发展的作用及影响,以及在临床上诊断、治疗和预后等方面的应用前景做一综述.     

miR-106b转基因小鼠的建立

目的:建立miR-106b转基因小鼠模型,探讨其在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)发病中的作用。方法:构建miR-106b表达载体,显微注射法建立miR-106b转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,real time RT-PCR检测miR-106b转基因小鼠脑组织中miR-106b的表达情况,Western blot检测miR-106b转基因小鼠脑组织中TGFBR2蛋白的表达。结果:构建了高表达miR-106b转基因小鼠;与对照相比,miR-106b转基因小鼠脑组织中TGFBR2蛋白的表达升高。结论:miR-106b转基因小鼠的建立为研究该microRNA在AD发病中的作用提供了工具。     

幽门螺杆菌相关性胃疾病中miR-551b和miR-124a的表达及意义CSCD

目的 检测miR-551b、miR-124a在慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)及胃癌(GC)患者胃黏膜组织中表达水平,探讨miR-551b、miR-124a与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系及在胃癌发生、发展中的作用。方法 选择2018年7月-2019年8月在本院肿瘤科与消化科住院的患者120例,其中CSG患者40例,CAG患者40例,GC患者40例。采用qRT-PCR法检测各研究对象胃黏膜组织中miR-551b、miR-124a表达水平,分析miR-551b、miR-124a水平与H.pylori感染及GC患者临床病理特征的关系。结果 GC组患者胃黏膜组织中miR-551b、miR-124a表达水平低于CSG组、CAG组(P<0.05),CSG、CAG组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);H.pylori阳性感染GC患者胃黏膜组织中miR-551b、miR-124a表达水平低于H.pylori阴性感染患者,差异有统计学意义(P<0.05);中低分化、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ、浸润深度为T3-T4、有淋巴结转移的GC患者胃黏膜组织中miR-551b、miR-124a表达量低于高分化、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ、浸润深度为T1-T2、无淋巴结转移的GC患者(P<0.05)。miR-551b、miR-124a表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。结论 miR-551b、miR-124a在GC患者胃黏膜组织中低表达,且在H.pylori阳性感染患者中低表达,检测miR-551b、miR-124a表达水平可能在H.pylori感染所致胃黏膜组织癌变过程中具有一定预测作用。     

miR-30b 的组织特异性研究

目的:研究miR-30b的组织特异性,检测其在心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中的表达情况。方法:选取C57BL/6J雄性小鼠6只,用real-time PCR方法检测小鼠心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中miR-30b的表达量。结果:miR-30b在小鼠肝脏中表达量最低,与肝相比,在心,脑,肾,脾和骨骼肌中的相对表达量分别为13.13±0.899,9.497±0.717,4.478±1.031,6.751±0.596,2.538±0.79。且与肝相比均具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-30b在各组织中的表达存在差异,在心脏中的表达量最高,提示miR-30b可能与心脏的发生发展密切相关,为深入探索miR-30b的功能奠定了基础。     

miR-135b promotes proliferation and metastasis by targeting APC in triple-negative breast cancer

Triple-negative breast cancer (TNBC) is the most aggressive breast cancer subtype. The aim of our study was to investigate the functional role of microRNA-135b (miR-135b) in TNBC. A real-time polymerase chain reaction assay was used to quantify miR-135b expression levels in 90 paired TNBC tissue and adjacent normal tissue samples. Wound-healing and transwell assays were performed to evaluate the effects of miR-135b expression on the migration and invasion of TNBC cells. Luciferase reporter and western blot analyses were used to verify whether the mRNA encoding APC is a major target of miR-135b. In the current study, we found that miR-135b was highly expressed in TNBC tissue and cells, and the expression levels were correlated with lymph node status and TNM stage. In TNBC cells, the ectopic expression of miR-135b promoted cell proliferation and invasion in vitro. In addition, our study proved that the overexpression of miR-135b significantly suppressed APC expression by targeting the 3′-untranslated region of APC, whereas enhanced APC expression could partially abrogate the miR-135b-mediated promotion of carcinogenic traits in TNBC cells. Taken together, our study demonstrated that miR-135b expression promoted the proliferation and invasion of TNBC by downregulating APC expression, indicating that miR-135b may serve as a promising target for the treatment of TNBC patients.     

Regulation of vascular endothelial growth factor signaling by miR-200b

Vascular endothelial growth factor (VEGF) signaling plays an important role in angiogenesis. In the VEGF signaling pathway, the key components are VEGF and its receptors, Flt-1 and KDR. In this study, we show that transfection of synthetic miR-200b reduced protein levels of VEGF, Flt-1, and KDR. In A549 cells, miR-200b targeted the predicted binding sites in the 3′-untranslated region (3′-UTR) of VEGF, Flt-1, and KDR as revealed by a luciferase reporter assay. When transfected with miR-200b, the ability of HUVECs to form a capillary tube on Matrigel and VEGF-induced phosphorylation of ERK1/2 were significantly reduced. Taken together, these results suggest that miR-200b negatively regulates VEGF signaling by targeting VEGF and its receptors and that miR-200b may have therapeutic potential as an angiogenesis inhibitor.     

The WEE1 regulators CPEB1 and miR-15b switch from inhibitor to activators at G2/M

MicroRNAs (miRNAs) in the AGO-containing RISC complex control messenger RNA (mRNA) translation by binding to mRNA 3′ untranslated region (3′UTR). The relationship between miRNAs and other regulatory factors that also bind to mRNA 3′UTR, such as CPEB1 (cytoplasmic polyadenylation element-binding protein), remains elusive. We found that both CPEB1 and miR-15b control the expression of WEE1, a key mammalian cell cycle regulator. Together, they repress WEE1 protein expression during G1 and S-phase. Interestingly, the 2 factors lose their inhibitory activity at the G2/M transition, at the time of the cell cycle when WEE1 expression is maximal, and, moreover, rather activate WEE1 translation in a synergistic manner. Our data show that translational regulation by RISC and CPEB1 is essential in cell cycle control and, most importantly, is coordinated, and can be switched from inhibition to activation during the cell cycle.     

MiR-15b can target insulin receptor to regulate hepatic insulin signaling in mice

Now diabetes is growing to be a health problems globally. However, its specific pathogenesis still needs further exploration. Here we showed that miR-15b was upregulated in the palmitate-induced HepG2 cells and livers of hyperglycemic mice. At the same time, we confirmed that the insulin receptor was a direct target of miR-15b. Then we found that the manipulation of miR-15b expression level could affect the insulin signaling pathway of HepG2 cells and the inhibition of miR-15b in liver of ob/ob mice can improve insulin sensitivity of mice. Furthermore, our study demonstrated that palmitate could upregulate the expression of miR-15b by activating PPARα. Our findings established PPARα-responsive miR-15b as a critical regulator of hepatic insulin signaling, thus serving as a new potential therapeutic target for diabetes.     

miR-125b慢病毒表达载体的构建及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移的影响

构建并鉴定miR-125b慢病毒过表达载体,研究miR-125b对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及其可能机制。将PcR扩增的rniR-125b前体序列与经过酶切后的GP—SupersilencingVector进行连接,产生miR-125b重组慢病毒表达载体。将重组慢病毒载体质粒、pGag／Pol、pRev和pVSV-G共转染293T细胞,包装产生慢病毒。使用收获的病毒颗粒感染卵巢癌SKOV3细胞,嘌呤霉素筛选稳定感染细胞株;实时荧光定量PCR（Real．timeqPCR）检测miR-125b在SKV03细胞中的表达;Westernblot检测其潜在靶基因HER-2的表达：MTT实验和Transwell侵袭实验分别观察miR-125b过表达后SKOV3细胞增殖和迁移能力的改变。该研究成功构建miR-125b陧病毒过表达载体,感染卵巢癌SKOV3细胞后,能够过表达miR-125b,并抑制SKOV3细胞的增殖及迁移,降低潜在靶基因HER-2的表达。该研究证叽miR-125b能够抑制SKOV3细胞的增殖及迁移,并可能通过降低潜在靶基因HER-2的表达而实现。     

miR-15a 和miR-16-1 模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607 凋亡 和增殖的影响

目的:探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法:将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a+miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物(hsa-miR-15a mimics)上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果:通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高(P<0.05);实验组的细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。结论:上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。     

miR-15a和miR-16-1模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响

目的：探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法：将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a＋miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物（hsa-miR-15a mimics）上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果：通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高（P〈0.05）;实验组的细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论：上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。     

miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤组织中的表达分析

目的:使用microRNAs基因芯片及实时定量PCR法测定骨肉瘤组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并与瘤旁组织对比,分析骨肉瘤细胞内miR-15a-5p和miR-16-5p的表达变化。方法:选取34例骨肉瘤组织蜡块样本,使用microRNAs基因芯片观察miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤和瘤旁组织内的表达差异;实时定量PCR法测定骨肉瘤组织和瘤旁组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并将两种结果对比分析。结果:microRNAs基因芯片结果显示,在骨肉瘤组织中,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低1.79倍,miR-16-5p较瘤旁组织低1.62倍。实时定量PCR实验结果表明,miR-15a-5p和miR-16-5p表达较瘤旁组织降低,差异有统计学意义(P0.05)。经过统计学计算,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低3.14倍,miR-16-5p较瘤旁组织低5.65倍。结论:在骨肉瘤中,miR-15a-5p和miR-16-5p表达含量降低,提示这两种microRNAs在骨肉瘤中可能做为抑癌因子存在。